Genistein对CAOV3细胞增殖的抑制作用

目的观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用,探讨其信号传导机制.方法以不同浓度的bFGF和genistein诱导CAOV3细胞,通过MTT比色法观察genistein对细胞增殖的抑制作用;利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法,液体闪烁测定TPK和蛋白激酶C(PKC)活性的变化.结果bFGF使该细胞株增殖比明显增加,细胞内TPK、PKC活性升高;genistein使细胞增殖比明显下降,抑制细胞内TPK、PKC活性,且genistein对bFGF诱导的TPK和PKC活性抑制更显著.结论bFGF可能通过TPK途径激活PKC来调控CAOV3细胞增殖,genistein可有效阻滞此传导途径,从而抑制细胞增殖.     

Genistein对CAOV3细胞增殖的抑制作用

目的 观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用，探讨其信号传导机制。方法 以不同浓度的bFGF和genistein诱导CAOV3细胞，通过MTT比色法观察genistein对细胞增殖的抑制作用；利用[γ-^32P]ATP掺入外源性底物的方法，液体闪烁测定TPK和蛋白激酶C(PKC)活性的变化。结果 bFGF使该细胞株增殖比明显增加，细胞内TPK、PKC活性升高；genistein使细胞增殖比明显下降，抑制细胞内TPK、PKC活性，且genistein对bFGF诱导的TPK和PKC活性抑制更显著。结论 bFGF可能通过TPK途径激活PKC来调控CAOV3细胞增殖，genistein可有效阻滞此传导途径，从而抑制细胞增殖。     

人血液酪氨酸蛋白激酶的研究——(Ⅱ)人外周血淋巴细胞膜酪氨酸蛋白激酶的鉴定与性质

以人工合成的多肽poly(Glu-Ala-Tyr)_(6:3:1)为底物测定了人外周血淋巴细胞膜酪氨酸蛋白激酶的活性,并对其性质进行了初步研究。发现Mg~(2+)对该酶的激活远远大于Mn~(2+),且Mg~(2+)最大激活浓度为50mmol/L左右。在5mg/ml的多肽底物浓度下,TPK达到最大反应速度,其Km值约为2.5mg/ml;对ATP、TPK的Km值大约为19μmol/L。多肽底物磷酸化氨基酸分析表明,仅有酪氨酸残基被磷酸化。     

黄芩素对人乳腺癌MCF-7细胞内酪氨酸蛋白激酶的抑制作用

目的观察黄芩素对MCF-7细胞内酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响.方法采用台盼蓝拒染法,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率.TPK活性通过测定转移到TPK底物上[γ-32P]ATP的32P放射性活度来检测.结果黄芩素能够显著地抑制MCF-7细胞内TPK的活性并呈剂量依赖性关系,其IC50为2.5μmol/L.结论黄芩素作为一种细胞内的TPK抑制剂具有潜在的抗乳腺癌应用价值.     

黄芩素对人乳腺癌MCF-7细胞内酪氨酸蛋白激酶的抑制作用

目的观察黄芩素对MCF-7细胞内酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响。方法采用台盼蓝拒染法,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率。TPK活性通过测定转移到TPK底物上[-32P]ATP的32P放射性活度来检测。结果黄芩素能够显著地抑制MCF-7细胞内TPK的活性并呈剂量依赖性关系,其IC50为2·5μmol/L。结论黄芩素作为一种细胞内的TPK抑制剂具有潜在的抗乳腺癌应用价值。     

核桃楸树皮不同成分对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的 观察核桃楸树皮提取物的不同有效成分对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖的影响.方法 采用层流分离法从核桃楸树皮提取物中分离出6种单体化合物,每种药物设4个不同浓度,以噻唑蓝比色方法检测6种核桃楸树皮化合物对胃癌细胞增殖的抑制作用,并以光学显微镜观察药物作用后的细胞形态学变化.结果 6种核桃楸树皮化合物均具有细胞毒作用,对人胃癌细胞SGC-7901具有抑制作用,其中化合物1、化合物2和化合物6对人胃癌细胞SGC-7901的抑制呈时效和量效关系,药物作用后细胞形态有明显变化.结论 体外实验显示三种核桃楸树皮提取物的有效成分对人胃癌细胞SGC-7901具有抑制作用,并呈时效和量效关系.     

Genistein和PD98059对aFGF及bFGF诱导的CAOV3细胞增殖的抑制作用

目的:探讨酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein和细胞外信号调节激酶(ERK)激酶MEK1抑制剂PD98059对酸性及碱性成纤维细胞生长因子(aFGF,bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用.方法:以不同浓度的aFGF或bFGF刺激CAOV3细胞,施加不同浓度的genistein或PD98059,通过MTT比色法观察genistein及PD98059对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定细胞各周期细胞百分数.结果:aFGF和bFGF使该细胞株增殖比明显增加,genistein和PD98059使增殖比明显下降,genistein的抑制作用强于PD98059.CAOV3细胞受到aFGF或bFGF刺激后,由GO G1期进入S和G2 M期的细胞明显增多,genistein或PD98059作用下则明显减少,并在一定浓度范围内成剂量依赖性,与对照组比较差异显著.结论:CAOV3细胞株中aFGF及bFGF受体有TPK活性,genistein对aFGF及bFGF引起的细胞增殖具有抑制作用,且aFGF及bFGF可能通过激活TPK受体从而激活Ras-Raf-ERK信号转导途径调控CAOV3细胞增殖,PD98059可有效阻滞此传导途径.     

土木香根中3种倍半萜内酯化合物抑制人肺肿瘤细胞增殖活性及其构效关系的研究

目的 通过检测土木香根中提取的3种倍半萜内酯化合物Eupatolide (化合物1)、 1,5-Diacetoxy-3, 4-epoxy-9(10)-germacrane-12,8α -olide (化合物2) 和1,5-Diacetoxy1-11,13-dihydrogen-3,9-germacradien -12,8α -olide (化合物3)抑制人肺肿瘤细胞增殖活性的影响,探讨这3种倍半萜化合物的体外抑制人肺肿瘤细胞增殖作用以及化合物结构与活性之间的构效关系.方法 应用噻唑蓝法测定3种倍半萜内酯化合物对体外培养人肺肿瘤细胞增殖的影响.结果 化合物1(泽兰内酯)对人非小细胞肺肿瘤细胞(A549和QG-56)的增殖抑制作用强于顺铂,对人小细胞肺肿瘤细胞(PC-6和QG-90) 的增殖抑制作用与顺铂相同;化合物2和3对各种实验用肿瘤细胞的增殖不显示抑制活性.结论 推测A-环上的6位游离羟基是该类倍半萜内酯的体外抑制肿瘤细胞增殖作用所必需的活性基团.     

角质细胞生长因子对人卵巢癌细胞系CAOV3酪氨酸蛋白激酶活性及表达的影响

目的观察角质细胞生长因子(KGF)对人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3增殖及酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性及表达的影响。方法培养人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3,用四甲基偶氮蓝(MTT)比色法测定不同浓度KGF对细胞增殖的影响;通过免疫沉淀法纯化蛋白并用TPK试剂盒测定TPK活性;免疫印迹法(Western-blot)测定TPK表达。结果实验组CAOV3细胞增殖率、TPK活性及表达均大于对照组(P<0·05)。结论KGF可以促使人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3增殖,机制与其增强TPK活性及表达有关。     

没药倍半萜成分的分离鉴定及抗肿瘤活性

目的从没药提取物中分离纯化倍半萜单体成分，并探讨其抑制肿瘤细胞增殖的生物活性。方法没药石油醚提取部分经硅胶柱层析分离得到二十多个倍半萜类化合物。其中化合物1和2的结晶分别经熔点测定、薄层层析、1H-NMR和13C-NMR数据分析以及与已知化合物比较，确定其化学结构。 利用MTT法检测化合物1和2对大肠癌细胞HT-29和激素非依赖型前列腺癌细胞PC-3、PC-3M、DU-145及正常肝的永生化细胞LO2细胞增殖的影响。结果经理化性质鉴定、波谱分析，确定化合物1的结构为［1(10)E,2R,4R]-2-甲氧基-8,12-环氧吉玛-1(10),7,11-三烯-6-酮；化合物2的结构为2-甲氧基-5-乙酰基-4-呋喃吉玛-1(10)-烯-6-酮，二者同属没药吉玛烷型倍半萜类化合物。MTT结果表明，化合物1和2对大肠癌细胞增殖的抑制作用较弱。而对三种激素非依赖型前列腺癌细胞的增殖有非常显著的抑制作用（P＜0.01），且呈剂量依赖性。另外，化合物对正常肝永生化细胞的增殖无明显影响。结论经分离纯化、理化性质鉴定和波谱分析，确定了没药吉玛型倍半萜化合物1和2的结构，该化合物对前列腺癌细胞的增殖有明显的抑制作用。     

酪氨酸蛋白激酶活性与2型糖尿病关系的研究

目的:探讨酪氨酸蛋白激酶(TPK) 的活性与2 型糖尿病之间的关系,并对影响TPK 活性的因素作初步研究。方法:以Poly(Glu,Tyr)4∶1 为底物,用放射性核素磷(32P)标记的方法来测定正常人及2型糖尿病患者淋巴细胞膜上TPK 的活性。结果:2 型糖尿病患者TPK活性有显著下降,Mn2 、Mg2 和ATP的加入均能提高正常人TPK活性。结论:2 型糖尿病的发生可能与TPK的缺陷有关     

乙双吗啉(AT—1727)亚急性毒性实验

乙双吗啉(AT—1727)是乙亚胺(ICRF—154)的衍生物,为一双内酰亚胺化合物。药理实验证明其对多种动物可移植性肿瘤具有较明显的抑制作用;对以溶血素为指标的体液免疫有抑制作用,但对以移植物抗宿主反应为指标的细胞免疫则无抑制作     

3,4—二甲氧基苯乙胺类衍生物构效关系研究

用Palygen软件包中的Charmn软件和集团坐标轮换法,对所合成的14个3,4-二甲氧基苯乙胺类衍生物的构象进行计算机模拟。根据所得各化合物的最低能量构象,计算其VDW、偶极距、N原子上的电荷密度等值,并利用化合物的生物活性1gl/IC_(50)(α_1)值,以逐步回归法建立回归方程:y=5.022—0.106X_6—0.0223X_7—0.7975X_8—2.3256X__(12),R=0.8681,F=6.8844>F(0.01)(4.14)。结果提示:方程相关性显著,该系列化合物体现的生物活性与理化参数之间的关系在于苯乙胺衍生物分子的整体作用。     

抑制人口腔癌细胞中细胞色素P450 181的新型甲氧基化黄酮

食用多酚类,包括黄酮类化合物,对癌症具有预防作用,其机制为抑制细胞色素P450(CYP)的转录和活化。通过乙氧基吩(口恶)嗪酮去乙基作用(EROD)实验、bDNA扩增技术研究了不同的甲氧基化黄酮(MF)化合物(共选用19个此类化合物)对细胞色素CYP1B1 mRNA表达的抑制作用。     

核磁共振法确定4，6—二甲基—5—氨甲基—1—氮二环[3．3．O]庚烷的结构

目的：确定4，6—二甲基—5—氨甲基—1—氮二环[3．3．0]庚烷的构造和构型。方法：核磁共振法，包括氢谱（^1H)，碳谱(^13C)，氢氢相关谱(2D-COSY)，异核多量子相关谱(HMQC)，异核多键相关谱(HMBC)及差谱(NOE)。结果：证实了所合成的4，6—二甲基—5—氨甲基—1—氮二环[3．3．0]庚烷的构造及顺反两种构型。结论：在无对照品的情况厂对新合成的化合物采用多种核磁波谱的方法确定其结构是可行的。     

三种冬凌草素和毛萼乙素体外对人血管生成的影响

目的 研究4种二萜化合物(冬凌草甲素、信阳冬凌草甲素、冬凌草乙素、毛萼乙素,分别简称为SH-A、SX-A、SH-B、ER-B)在体外对血管生成的影响,为发现新的抗肿瘤药物提供线索.方法 采用人脐静脉内皮细胞ECV304增殖、迁移试验及小管形成试验研究了4种化合物对血管生成的影响.结果 4种二萜化合物对ECV304(人脐静脉内皮细胞系)的增殖、迁移、小管形成具有不同程度的抑制作用,IC50值分别在1.47&#215;10-5～3.76&#215;10-5mol&#183;L-1(抑制作用SX-A＞SH-A＞SH-B＞ER-B)、8.01&#215;10-7～5.41&#215;10-6mol&#183;L-1(抑制作用SH-B最强,而SH-A、SX-A和ER-B相仿)和4.25&#215;10-7～2.80&#215;10-6mol&#183;L-1内(抑制作用SH-B＞SH-A＞SX-A＞ER-B),抑制血管迁移、小管形成的IC50值均低于抑制增殖的IC50.结论 4种二萜化合物在体外对人脐静脉内皮细胞系血管形成均有不同程度的抑制作用,值得作为抗肿瘤药物的候选物进一步深入研究.     

6-(4-取代苯基)哒嗪酮类化合物对血小板聚集的抑制作用

目的观察不同浓度的6-(4-取代苯基)哒嗪酮类化合物对二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集的抑制作用。方法将不同浓度的6-(4-取代苯基)哒嗪酮类化合物分别加入人富含血小板血浆(PRP)中,用多功能血小板聚集仪测定 ADP 诱导的血小板聚集作用。结果该哒嗪酮类化合物对 ADP 诱导血小板聚集有剂量依赖性抑制作用,其半数抑制浓度(IC_(50))分别为1.04μmol/L 和2.80μmol/L。结论新的6-(4-取代苯基)哒嗪酮类化合物具有较强的抑制 ADP 诱导的血小板聚集作用。     

茶种子中具有胃保护作用的新三萜皂苷

作者从茶Camellia sinensis(L.)O.Kuntze种子中分离出6个新的三萜皂苷类化合物,即theasaponin A1(1)、A2(2)、A3(3)、F1(4)、F2(5)和F3(6),并研究了这些化合物对乙醇诱导的小鼠胃黏膜损伤的抑制作用。该植物种子用正己烷脱脂后再用甲醇提取。甲醇提取液减压浓缩,加入乙醚沉淀。将沉淀物上Diaion HP-20柱进行色谱分离,依次用水、甲醇、氯仿洗脱,将甲醇部位再用HPLC分离,得出16个已知化合物与化合物1~6。6个新化合物均为无色微晶。化合物1分子式为C57H90O26,mp219.3~220.4℃,[α]D27 6.5°(c,2.50,MeOH);化合物2分子式为C59H92O27,…     

DHA复合物（AC-88）对癌细胞TPK、Ras、ERK作用研究

目的：本文是通过研究DHA复合物(或称AC-88)对癌细胞Ras—ERK信号传导通路中关键信号传导分子，如TPK活性与p—TF蛋白、Ras蛋白与ras-mRNA、ERK活性与ERK蛋白等影响，以探讨DHA复合物抗癌作用机制，方法:用Siow—KeeKon介绍的方法测定TPK活性、SchlessingerJ等文章记载的方法测定ERK活性、免疫组织化学方法测定p—Tyr蛋白和Ras蛋白含量、Westemblot方法测定ERK蛋白含量和RT—PCR法分析ras-mRNA含量。结果:癌细胞TPK和ERK活性显著升高，尤以质膜TPK活性升高最为明显，p—Tyr、Ras、ras-mRNA和ERK蛋白皆显著增加。表明癌细胞Ras—ERK信号传导通路发生了明显地异常改变，处于持久激活状态，连续不断地传导细胞分裂与增殖信号，导致癌细胞发生恶性增殖。用DHA复合物(AC-88)处理后，癌细胞TPK和ERK活性显著降低，p-Tys、Ras、ras-mRNA和ERK蛋白皆显著减少。结论:说明DHA复合物(AC-88)能有效地作用于癌细胞Ras—ERK信号传导通路，使Ras—ERK信号传导通路趋于正常水平，较为正常地传导细胞分裂与增殖信号，抑制了癌细胞的恶性增殖。     

酸性成纤维细胞生长因子在卵巢癌中的表达及其信号传导途径

目的　探讨酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)在卵巢癌发生发展中的作用及其信号传导机制。方法　应用逆转录 聚合酶链反应技术 (RT PCR)和Western印迹方法对 40例上皮性卵巢癌组织aFGF及其受体FGFR1的表达进行了分析 ;并以不同浓度的aFGF和酪氨酸蛋白激酶 (TPK)抑制剂 genistein诱导卵巢癌细胞株CAOV3细胞 ,利用 [γ 32 P]ATP掺入外源性底物的方法 ,液体闪烁测定蛋白激酶C(PKC)及细胞外信号调节激酶 (ERK)的活性。结果　aFGFmRNA和FGFR1mRNA在上皮性卵巢癌组织中的半定量检测结果分别为 0 981± 0 1 30和 1 0 4 7± 0 1 4 8,与正常卵巢、卵巢瘤样病变及卵巢良性肿瘤相比 ,差异有显著意义 (P <0 0 5) ,且在Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌中的表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期 (P <0 0 5) ;Western印迹检测见上皮性卵巢癌组织中aFGF和FGFR1条带均深于正常卵巢组织 ;随着aFGF浓度的增加 ,CAOV3细胞PKC及ERK活性随之升高 ,与aFGF浓度呈剂量依赖效应 ;Genistein抑制细胞内PKC及ERK活性 ,与 genistein浓度亦呈剂量依赖效应。 结论　aFGF与上皮性卵巢癌的发生、发展、浸润呈正相关 ,其受体具有TPK活性 ,TPK激活后可进一步激活PKC和ERK ,进一步证明PKC及ERK确是TPK的下游信号分子