聚合酶链反应在轮状病毒感染诊断和研究中的应用

聚合酶链反应在轮状病毒感染诊断和研究中的应用于化泓（南昌大学食品科学与工程系，南昌３３００４７）本文主要介绍聚合酶链反应（ＰＣＲ）的特点及其在轮状病毒（ＨＲＶ）感染诊断和研究中的应用情况。１ＰＣＲ的特点１．１敏感性高据Ｇｅｎｔｓｃｈ［１］报道，ＰＣＲ...     

聚合酶链反应产物微孔板杂交技术

聚合酶链反应产物微孔板杂交技术魏军张正聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法自１９８４年创建以来［１］，已经成为分子生物学领域的核心技术，广泛应用于遗传病诊断、微生物检测，法医学鉴定及人类学、考古学研究诸方面。ＰＣＲ产物的鉴定以及进一步分型主要是通过凝胶电泳...     

人类血小板抗原基因分型

本文介绍了５个对人类影响最大且已被国际上公认的血小板抗原系统的分子生物学研究结果及其分型方法，包括最早采用的血清学方法，近几年发展起来的分子生物学方法：ＤＮＡ序列分析、等位基因特异性寡核苷酸点杂交（ＰＣＲ－ＡＳＯ）、聚合酶链反应－限制性片断长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）及聚合酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ），其中重点介绍了ＰＣＲ－ＳＳＰ方法的可靠性及实用性。     

样品处理与临床PCR检测

样品处理与临床ＰＣＲ检测江凌晓综述冯永清审校（第一军医大学附属珠江医院分子生物学实验室，广州５１０２８２）关键词聚合酶链反应样品处理聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是检测特异性核酸片断的最敏感的方法之一。现已用于...     

国内儿科临床应用聚合酶链反应技术现状

国内儿科临床应用聚合酶链反应技术现状河南许昌市中心医院儿科（４６１０００）朱富生概述聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术是８０年代分子生物学上的一项创举，是目前医学领域早期、快速诊断疾病最有效的检验方法之一。ＰＣＲ具有敏感、特异、操作简便和能够自动化操作等优点...     

改进聚合酶链反应检测方法提高结核分枝杆菌检出率

改进聚合酶链反应检测方法提高结核分枝杆菌检出率张捷，李小英，寇丽筠各种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测临床标本的结核分枝杆菌（ＭＴＢ）已被国内外公认是一个快速可靠的检测方法。我们应用ＰＣＲ方法和杂交技术期间发现尚有许多问题有待探讨。如应用该法对临床１８２份...     

聚合酶链反应检测肿瘤细胞株的端粒酶活性

目的比较聚合酶链反应酶免法（ＰＣＲＥＬＩＳＡ）和聚合酶链反应聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＣＲＰＡＧＥ）方法检测白血病细胞端粒酶活性的临床应用价值。方法ＰＣＲＥＬＩＳＡ以地高辛标记对端粒重复片段特异的探针与ＰＣＲ变性产物杂交，通过ＥＬＩＳＡ系统检；ＰＣＲＰＡＧＥ方法直接用电泳法分离ＰＣＲ扩增端粒酶的合成产物，经溴乙啶染色，分析端粒酶活性。结果ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法能准确特异地检测白血病细胞的端粒酶活性，检测灵敏度可达１×１０２细胞数。经ＰＡＧＥ分离显示，端粒酶的ＰＣＲ产物有含５０ｂｐ等６条梯带。结论两种方法均可用于临床检测。ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法似更简单、方便一些。     

聚合酶链反应诊断伤寒的可靠性探讨

聚合酶链反应诊断伤寒的可靠性探讨石碧平陈一斌博罗县人民医院５１６１００为了探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测伤寒杆菌ＤＮＡ对伤寒诊断的可靠性，我们对８８例“发热待查”患者进行了ＰＣＲ检测，现将结果分析报道如下。１资料和方法１１病例选择８８例均为１９９６...     

问题解答2

问:何谓巢式聚合酶链反应?答:巢式聚合酶链反应(ｎｅｓｔｅｄｐｏｌｙｍｅａｒｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ,ｎＰＣＲ)也称套式ＰＣＲ。在这种技术中,首先用一对外引物进行第1轮ＰＣＲ,然后再使用第1对引物扩增的ＤＮＡ序列内部的一对引物再次扩增,所以称为巢式ＰＣＲ。由于使用了两对引物并且进行了两轮扩增反应,因此试验的敏感性和特异性均增强。在一定情况下,这种方法对减少ＰＣＲ后扩增产物的污染问题极为有用,但它增加了每次试验的复杂性。为了经济节约,可在第2轮扩增时采用半巢式,设计单条引物,另一条引物与第1轮扩增共用,效果也优…     

套式聚合酶链反应单管法检测单纯疱疹病毒

应用聚合酶链反应方法，套式ＰＣＲ双管法及套式ＰＣＲ单法分别检测１３０份散发性脑炎患者脑脊液中单纯疱疹病毒的ＤＮＡ，阳性率依次为１８．５％（２４／１３０）、２９．２％（３８／１３０）、２９．２％（３８／１３０）；６０份非中枢神经系统感当者ＣＳＦ标本的检测阳性率分别为０、３．３％（２／６０）、０。结果显示：套式ＰＣＲ虽然提高了检测的敏感性，但假阳性也大大增加。改良的套式ＰＣＲ单管法则大大减少了污染机会     

聚合酶链反应方法学进展及临床价值的评估

聚合酶链反应方法学进展及临床价值的评估张正聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法为１９８４年美国ｃｅｔｕｓ公司人类遗传研究室Ｍｕｌｌｉｓ等创建的ＤＮＡ体外扩增技术。次年，Ｓａｉｋｉ等将其完善成一套实验室技术￣［１］，３年后完成了自动操作检测。ＰＣＲ技术在遗传病诊...     

定量PCR技术的研究进展

定量ＰＣＲ技术的研究进展陈建魁综述牟兆钦审校（军事医学科学院附属医院，北京１０００３９）关键词定量ＰＣＲ核酸检测技术聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术建立以来，定性技术不断改进和完善，可以达到检测单个靶序列的水平。但实际工作中常需要定量检测标本中核酸，而不是...     

用重叠延伸聚合酶链反应制备鸭乙型肝炎病毒基因点突变

目的制备含鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）前核心区终止密码突变的基因片段，以对此基因突变作有关生物学研究。方法用重叠延伸聚合酶链反应（ＯＥ－ＰＣＲ）制备含此人工定向点突变的基因片段；用不对称聚合酶链反应（ａｓｙ－ＰＣＲ）制备单链ＤＮＡ模板作测序。结果凝胶电泳显示ＯＥ－ＰＣＲ产物与克隆ＤＨＢＶＤＮＡ酶切片段位置一致，测序证实该点突变存在。结论用ＯＥ－ＰＣＲ作人工定向基因突变，不需要克隆制备单链模板及筛选阳性克隆，２天内即可出结果，较传统方法简便、快速、有效。     

套式聚合酶链反应单管法检测单纯疱疹病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法、套式ＰＣＲ双管法及套式ＰＣＲ单管法分别检测１３０份散发性脑炎患者脑脊液（ＣＳＦ）中单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）的ＤＮＡ，阳性率依次为１８．５％（２４／１３０）、２９．２％（３８／１３０）、２９．２％（３８／１３０）；６０份非中枢神经系统感染者ＣＳＦ标本的检测阳性率分别为０、３．３％（２／６０）、０。结果显示：套式ＰＣＲ虽然提高了检测的敏感性，但假阳性也大大增加。改良的套式ＰＣＲ单管法则大大减少了污染机会，使操作更方便、省时，适于临床推广应用。     

一步反转录PCR法从组织及细胞中扩增HEK5

聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术诞生后不久即用于ＲＮＡ的扩增［１］。这种方法需要首先将ＲＮＡ逆转录（ＲＴ）为ｃＤＮＡ链后再进行常规ＰＣＲ扩增，程序较繁琐，且需逆转录酶及ＲＮＡ酶抑制剂等成本较高试剂。有研究表明Ｔａｑ聚合酶及ＴｔｈＤＮＡ聚合酶有逆转录功能，且...     

多重聚合酶链反应检测新生儿性别决定基因

为了提高聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测人类性别决定基因（ｓｅｘ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎｏｆｔｈｅＹ，ＳＲＹ）的检出阳性率，建立了多重ＰＣＲ检测方法，使其准确度提高。保证实验准确无误。     

用聚合酶链反应检测胸液结核杆菌的临床价值

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测５３例结核性胸液，并与涂片镜检及培养方法对比。ＰＣＲ检测胸液结核菌阳性率达６９．８％，明显高于涂片镜检７．５％及培养５．７％，Ｐ〈０．００５。表明ＰＣＲ是快速检测胸液结核菌的好方法。     

用聚合酶链反应技术进行甲型血友病基因诊断

用聚合酶链反应技术进行甲型血友病基因诊断吴竞生，潘理明，张明华，罗菊珍，湛秀兰，王祖贻，丁浩，徐华梅我们用多聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术及基因连锁分析限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）对９个甲型血友病家族共３７个成员进行携带者及产前基因诊断。材料和方法...     

结核杆菌DNA聚合酶链反应中Mg^2＋浓度的优化

结核杆菌ＤＮＡ聚合酶链反应中Ｍｇ~（２＋）浓度的优化王俊霞，孙树汉（河北医科大学分子生物学研究室，石家庄０５００１７）关键词结核杆菌，聚合酶链反应，镁离子在结核杆菌的多聚酶链反应（ＰＣＲ）中，通常影响扩增效果的是反应缓冲液中Ｍｇ２＋浓度，Ｍｇ２＋浓度?..     

尿液对PCR检测的影响

尿液对ＰＣＲ检测的影响长征医院实验诊断科（２００００３）黄涛，黄超，孔宪涛在以尿液为标本的聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测中尿液是否会抑制扩增，各家报道不一。本文以检测巨细胞病毒（ＣＭＶ）为模式，通过一系列实验，来分析尿液对ＰＣＲ扩增的影响。一、材料１．标...