丙泊酚对脑缺血大鼠海马区细胞凋亡的影响

本文利用目前对检测凋亡较为敏感的末端去氧核苷酸转移酶介导的原位末端标记法 (TUNEL)结合光镜对海马区进行细胞凋亡检测 ,观察丙泊酚 (异丙酚 )对大鼠脑缺血再灌注后海马区细胞凋亡的影响。 1　材料和方法1.1　动物　 SD雄性大鼠 ,体质量 2 80～ 32 0 g,购于上海西普耳—必凯实验动物中心。1.2　药物　丙泊酚 ,10 mg/ ml(英国捷利康公司 )。1.3　大鼠缺血模型　本研究采用四血管阻塞大鼠脑缺血模型。大鼠随机分为术后 1,2 ,3,4,5 ,7d6组 ,分别在缺血前和缺血后 10 m in给药 ,又按照给药剂量分为 2 .5 ,5和 10 mg/kg3组 ,每个时间点每剂…     

脑缺血后海马CA1区细胞凋亡现象的观察

观察大鼠完全性前脑缺血再灌注损伤过程中海马ＣＡ１区神经元死亡的另一种形式－细胞凋亡。采用琼酯糖凝胶电泳及原位缺口翻译法，观察海马ＣＡ１区神经元是否有凋亡特征性改变。结果；脑缺血损伤后５ｄ，从海马ＣＡ１区神经元提取ＤＮＡ，其琼酯糖凝胶电泳呈现典型梯状结构。而采用原位缺口翻译法，发现缺血损伤后３ｄ，海马ＣＡ１区开始出现胞核染色体阳性的凋亡细胞，缺血损伤后５ｄ，凋亡细胞达到高峰。结论：海马ＣＡ１区尽管     

三七皂苷对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的：研究三七皂苷（PNS）对脑缺血再灌注后大鼠脑海马和皮质形态学变化、Bcl-2、Bax蛋白表达及神经细胞凋亡的影响。方法：采用线栓改良法复制大鼠左侧大脑中动脉闭塞（MCAO）建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血2小时,再灌注24小时。将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、三七皂苷组、尼莫地平组和三七皂苷加尼莫地平组（联合用药组）,每组10只。分别采用HE染色检测大鼠脑组织皮质和海马区病理改变,TUNEL法检测各组脑内皮质和海马区细胞凋亡变化,免疫组化染色观察各组大鼠脑内皮质和海马区Bcl-2、Bax蛋白表达。结果：与模型组相比,三七皂苷组、尼莫地平组、联合用药组大鼠光镜下细胞损伤变性程度轻;细胞凋亡率下降（P均〈0．01）,三七皂苷组与尼莫地平组相比,细胞凋亡率无显著性差异（P〉0．05）,与联合用药组相比,有显著性差异（P〈0．01）;与模型组相比,三七皂苷组、尼莫地平组、联合用药组大鼠缺血区皮质和海马Bcl-2阳性细胞数均明显上升（P均〈0．01）,Bax阳性细胞数的表达在相同时间点减少（P均〈0.01）。结论：三七皂苷可抑制大鼠神经细胞凋亡,对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,其机制可能与Bcl-2表达增高,Bax表达降低有关。     

HPLC法测定不同产地酸枣仁中酸枣仁皂苷A的含量

目的：采用HPLC法测定不同产地酸枣仁中酸枣仁皂苷A的含量,并客观比较不同产地药材的质量。方法：用高效液相色谱法,使用Kromasil C18色谱柱（4．6mm×150mm,5μm）;流动相：乙腈-水（30：70）,检测波长204nm,流速0．8mL/min,柱温25℃。结果：6个产地酸枣仁中酸枣仁皂苷A含量为0．5372％-0．0731％,不同产地酸枣仁中酸枣仁皂苷A含量有差异。结论：6个不同产地酸枣仁中酸枣仁皂苷A含量均符合药典标准,其中陕西延安产区的酸枣仁药材质量较其他产地相比较好。     

酸枣仁皂苷A对脂多糖诱导星形胶质细胞C6氧化损伤的保护作用

目的 采用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导星形胶质细胞C6的氧化应激模型,以研究酸枣仁皂苷A（Jujuboside A,JuA）的抗氧化活性。方法 体外培养大鼠星形胶质细胞C6。采用MTT法检测各组细胞的存活率,采用Western blot法检测星形胶质细胞标记蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的活化情况,采用Griess还原法测定细胞上清液中一氧化氮（nitric oxide,NO）水平,采用流式细胞术检测各组细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,采用ELISA测定各组细胞内丙二醛（malondialdehyde,MDA）和谷胱甘肽（L-glutathione,GSH）水平以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性。结果 0.125～50 μmol/L JuA对C6细胞存活率无明显影响（P＞0.05）;1 μg/mL LPS可以明显升高C6细胞GFAP蛋白表达水平,显著升高细胞上清液中NO和细胞内ROS、MDA水平,降低细胞内GSH水平和SOD活性,差异均有统计学意义（P＜0.05）。与LPS组比较,12.5、25、50 μmol/L JuA可以明显抑制LPS诱导的GFAP表达,降低细胞上清液中NO水平,降低细胞内ROS、MDA水平,升高细胞内GSH水平和SOD活性,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 JuA对LPS诱导的星形胶质细胞氧化损伤具有一定的保护作用。     

环胞霉素A对局部脑缺血海马细胞外液氨基酸及微环境变化的影响

目的观察环胞霉素A(CsA)对局部脑缺血时海马细胞外液氨基酸及微环境的影响,并探讨可能的神经元保护机制。方法将实验动物(树鼩)分为3组:假手术组于舌下静脉注射孟加拉红生理盐水,不照射;脑缺血组注射孟加拉红生理盐水循环15 min后进行光化学反应形成局部脑缺血;实验治疗组于缺血后6 h一次性舌下静脉注射CsA(40 mg/kg),上述各组于24h时间点测量氨基酸及微环境指标。结果给CsA后,天冬氨酸、谷氨酸及甘氨酸均降低,而γ-氨基丁酸升高,与脑缺血组相比差异有统计学意义(P<0.01)。而pH、PO2及HCO3-均增高,与脑缺血组相比差异有统计学意义(P<0.05),PCO2变化不明显。脑缺血后,海马组织有明显的缺血坏死表现,给CsA后,缺血坏死明显减轻。结论选择缺血后6 h治疗时间窗注射CsA,可有效改善海马细胞外液兴奋性与抑制性氨基酸比例和微环境,保护神经元功能。     

脑缺血大鼠海马细胞外液氨基酸的动态变化

研究脑缺血时兴奋性氨基酸（ＥＡＡ）的动态变化，了解丹参注射液对ＥＡＡ的影响。方法采用Ｐｕｌｓｉｎｅｌｉ四动脉闭塞法并进行了改良，通过立体定向置于海马部位进行动态观察，并用荧光检测法测定脑海马细胞外液ＥＡＡ的变化。结果不完全脑缺血３０和６０分钟细胞外液谷氨酸为５．８８±１．４０和１１．２±１．５μｍｏｌ／Ｌ；天门冬氨酸为２．７２±０．２４和４．４±０．６μｍｏｌ／Ｌ；完全性脑缺血３０分钟和６０分钟谷氨酸为１５．１±１．６和１７．８±１．６μｍｏｌ／Ｌ；天门冬氨酸为８．２±１．０和１２．１±１．１μｍｏｌ／Ｌ；对照组谷氨酸和天门冬氨酸分别为１．８±０．９和０．２４±０．０９μｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜０．０１）。结论大鼠脑缺血后谷氨酸和天门冬氨酸分别比对照组明显升高，缺血越重ＥＡＡ释放越多；丹参注射液能减少缺血时脑细胞ＥＡＡ的释放，减少神经细胞的损伤而发挥对脑的保护作用。     

实验性大鼠脑缺血再灌流对海马氨基酸及钙的影响

近年实验研究表明,兴奋性氨基酸及钙参与缺血性脑损伤过程,但钙与兴奋性氨基酸的关系尚不清楚。本文作者测定了大鼠全脑缺血再灌流过程中海马组织线粒体钙及氨基酸含量的动态变化,并用NMDA(N-甲     

酸枣仁皂苷A对果蝇睡眠影响的量效关系与时效关系研究

目的 研究酸枣仁皂苷A对野生型CS品系果蝇睡眠作用影响的量效关系与时效关系.方法 选择野生型CS品系7d龄雄性果蝇为研究对象,采用液体给药的方式,利用果蝇活动监测系统,观察不同浓度酸枣仁皂苷A对果蝇睡眠影响的量效关系和时效关系.结果 1 mg/mL剂量为最佳给药浓度,给药3d为最佳给药时间,并可以明显延长果蝇白天平均睡眠的总时间和夜晚平均睡眠的总时间,增强果蝇的片段化睡眠.结论 酸枣仁皂苷A对野生型CS品系7d龄雄果蝇的睡眠具有一定的改善作用.     

不同产地酸枣仁皂苷含量的测定

本实验采用HPLC法对10个不同产地的酸枣仁所含有的皂苷A、B进行了含量测定,不同产地的酸枣仁其皂苷A及B的含量有很大的差异,以陕西延安产的酸枣仁其皂苷含量最高。     

黄芪注射液对大鼠缺血性脑损伤神经细胞凋亡的影响

目的：观察黄芪注射液对缺血性脑损伤大鼠脑细胞凋亡的影响。方法：30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和黄芪注射液组,每组10只。采用大脑中动脉局灶性栓塞（MCAO）模型,免疫组化法检测缺血脑组织中Bcl-2表达变化,Tunel法检测缺血灶周围神经细胞凋亡改变。结果：与模型组比较,黄芪注射液可显著降低大鼠脑细胞凋亡,增加Bcl-2蛋白表达（P〈0.01）。结论：黄芪注射液对缺血性脑损伤大鼠有抗细胞凋亡作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后血管源性脑水肿与细胞凋亡

研究大鼠大脑中动脉（MCA）短暂闭塞后血管源性脑水肿（VBE）与调亡细胞数的关系。VBE程度用光密度法测量甲酸胺提取外渗至血脑屏障（BBB）受损最严重的脑区Evans蓝（EB）含量定量，石蜡切片的调亡细胞数用原位末端标记法（ISEL）检测。结果表明BBB受损程度与调亡细胞数随缺血时间延长而增加二者密切相关。VBE促进了细胞凋亡机制。     

rhG-CSF拮抗糖尿病脑缺血后神经细胞凋亡的研究

目的验证重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)是否能改善局灶性脑缺血糖尿病大鼠的神经功能,并观察对神经细胞凋亡的影响。方法线栓法复制糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞模型,rhG-CSF干预组连续皮下注射rhG-CSF,50μg·kg-1·d-1,进行神经功能缺损评分,采用TUNEL染色计数脑缺血周边区神经细胞凋亡数。结果rhG-CSF干预组神经功能缺损评分明显低于对照组(P<0.01);rhG-CSF干预组缺血周边区的TUNEL阳性细胞数均明显少于对照组(P<0.01)。结论rhG-CSF可拮抗糖尿病脑缺血之后神经细胞凋亡,改善神经功能。     

局灶性脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡及七叶皂甙钠干预的研究

目的:观察七叶皂甙钠在大鼠脑缺血再灌注后神经元细胞凋亡过程中的作用。方法:运用大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,比较正常对照组、假手术组、缺血3h组、缺血3h再灌注3h/6h/12h/24h/48h/72h组、缺血3h再灌注β-七叶皂甙钠药物干预后3h/6h/12h/24h/48h/72h组等大鼠脑组织中的神经元凋亡情况。结果:七叶皂甙钠干预治疗后,缺血组缺血侧凋亡阳性细胞减少。结论:七叶皂甙钠有明显抑制大鼠脑缺血再灌注后神经元细胞凋亡的作用。     

大鼠局灶性脑缺血后脑组织内皮素的变化

为研究局灶性脑缺血后局部内皮素（ＥＴ）水平的变化，通过放射免疫法检测右大脑中动脉栓塞（Ｒ－ＭＣＡＯ）大鼠不同时间左右脑组织的ＥＴ含量，发现Ｒ－ＭＣＡＯ３０分钟，脑组织ＥＴ浓度明显升高，且随缺血时间延长而继续升高，并以便死侧为明显。说明ＥＴ在脑缺血所至的脑组织损伤中起了重要作用。     

缺血性脑损伤后多巴胺和5羟色胺含量的变化

对沙土鼠(gerbil)进行单侧颈总动脉结扎,做成单侧脑缺血的动物模型,运用高效液相色谱电化学检测仪测定,研究额叶皮质区、尾状核区、海马区内神经递质多巴胺及5羟色胺在恢复过程中不同存活期内的含量变化,其中下降最显著的在海马组内,损伤侧DA下降到仅占对照侧的33%,P<0.01(第七天);在尾状核组内,5HT下降到仅占对照侧的38%,P<0.01(第七天),但额叶皮质组内二者变化不显著,为防治脑血管疾患提供了客观指标。     

大豆异黄酮对脑缺血再灌注大鼠海马神经再生的影响

目的?观察大豆异黄酮对脑缺血再灌注大鼠海马神经再生的影响。方法?线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,分别给予大豆异黄酮（SI）、7硝基吲哚（7NI）或联合给药（SI+7NI）,BrdU免疫荧光法标记新生海马神经细胞,免疫组化法检测海马区ONOO-的反应产物硝基酪氨酸（NT）。结果?SI组、7NI组和SI+7NI组大鼠海马区BrdU＋细胞数增加更显著,NT的数量明显减少（P<0.05,P<0.01）。结论?长期给予大豆异黄酮可以使脑缺血再灌注时病理性的ONOO-生成减少,并促进脑缺血组织的海马神经再生,这对脑缺血损伤有潜在的应用价值。      

当归对大鼠局灶性缺血脑组织细胞凋亡的作用

目的 :应用大鼠局灶性脑缺血模型观察当归对脑缺血损伤的治疗作用及其机制。方法 :TTC染色计算脑缺血梗塞灶体积。原位末端标记法观察细胞凋亡并计算凋亡率和凋亡指数。免疫组化观察凋亡相关蛋白Bcl 2及Bax蛋白表达的变化。结果 :①与单纯缺血再灌组相比 ,当归治疗组TTC染色显示当归治疗组脑缺血梗塞区体积缩小 (P <0 .0 5 ) ,凋亡率和凋亡指数较单纯缺血再灌组有明显下降 (P <0 .0 1 ) ,Bcl 2蛋白表达与单纯缺血再灌组无差异 (P >0 .0 5 ) ,而Bax蛋白表达显著减少 (P <0 .0 1 )。②缺血 2h再灌 4 8h组较缺血 2h再灌 2 4h组 ,凋亡细胞明显减少 (P <0 .0 1 )。结论 :①当归能抑制Bax蛋白的表达 ,减少脑缺血区细胞凋亡的发生 ,这是当归治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的可能机制之一。②缺血 2h再灌 4 8h ,脑缺血神经细胞迟发性损伤已开始减轻     

小檗碱对实验性脑缺血的改善作用

小檗碱５、１０、２０ｍｇ／ｋｇ腹腔注射，可显著延长双侧颈总动脉结扎臻脑缺血小鼠的存活时间。自颅外阻断大鼠大脑中动脉造成局灶性脑缺血模型，小檗柘２０、４０ｍｇ／ｋｇ于术前，能缩小缺血２小时造成的梗塞范围，减轻神经功能障碍。小檗碱４０ｍｇ／ｋｇ能提高大鼠急性脑缺血３０分钟时的血浆，海马及皮层脑组织的超氧化物岐化酶活力，降低丙二醛含量。结果表明，小檗碱对缺血脑组织有保护作用，其机理推测与其抗氧自由基损伤     

尼莫地平对沙土鼠脑缺血后细胞凋亡及Bcl-2的影响

目的:探讨沙土鼠短暂脑缺血后海马区细胞凋亡与Bcl鄄2表达的改变及尼莫地平的影响。方法:52只健康沙土鼠随机分成3组,假手术组(n=12),尼莫地平组(n=20),对照组(n=20)。采用夹闭双侧颈总动脉制成全脑缺血模型。尼莫地平组及对照组均夹闭双侧颈总动脉5min,随即分别予尼莫地平注射液(1mg/kg)及等量生理盐水腹腔注射。3组分别于再灌注24、48、72、168h断头取脑,海马石蜡切片,原位末端标记法(TUNEL)测定海马CA1区锥体细胞凋亡阳性数及免疫组化法测定Bcl鄄2反应强度。结果:对照组72h见大量凋亡细胞;Bcl鄄2在72h表达最强,168h明显减少。尼莫地平组凋亡细胞数明显减少(P<0.01),Bcl鄄2在24、48、72、168h均有较强表达(P<0.01)。结论:尼莫地平可显著减少沙土鼠脑缺血后海马CA1区细胞凋亡的发生,并可增强Bcl鄄2的表达;脑缺血后及时应用尼莫地平治疗具有明显脑保护作用。