亲环素A在ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞泡沫化过程中的作用

目的观察亲环素A在ox-LDL（氧化低密度脂蛋白）诱导血管的平滑肌细胞中的作用。方法不同浓度（0、20、40、80、160 mg/L）ox-LDL与大鼠血管平滑肌细胞共同孵育,进而选择80 mg/L ox-LDL与细胞共同孵育不同的时间（0、24、48、72、96 h）,用免疫印迹（Western blot）检测亲环素A蛋白质的表达改变。高效液相色谱法（HPLC）检测细胞内胆固醇含量。结果随ox-LDL浓度增加和孵育时间延长,亲环素A蛋白质的表达均逐渐减弱。HPLC显示80 mg/L ox-LDL孵育细胞72 h组细胞胆固醇酯/总胆固醇比值为57.9%（〉50%）,符合泡沫细胞特征。结论ox-LDL可降低血管平滑肌细胞中亲环素A的蛋白表达并诱导泡沫细胞形成。     

KDM3A加重高胰岛素诱导的血管平滑肌细胞损伤

目的 探究组蛋白去甲基化酶KDM3A对高胰岛素条件下平滑肌细胞增殖、迁移功能以及炎性状态的影响。方法 从SD大鼠胸主动脉分离原代血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）,之后将VSMCs随机分为3组∶①正常培养基+对照组干扰siRNA组;②高胰岛素刺激+KDM3A特异siRNA组;③高胰岛素刺激+对照组干扰siRNA组。分别用CCK-8、Transwell检测细胞的增殖和迁移。RT-PCR检测白介素6（IL-6）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的mRNA的表达水平。蛋白免疫印记法检测KDM3A的表达。结果 高胰岛素刺激可以显著促进VSMCs的增殖和迁移,同时上调KDM3A的表达,并提高IL-6及MCP-1的mRNA水平。然而,使用siRNA下调KDM3A的表达可以显著减少高胰岛素诱导的VSMCs的增殖、迁移及炎性因子的表达。结论 KDM3A加重高胰岛素诱导的血管平滑肌细胞的损伤。     

清达颗粒对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨清达颗粒（QDG）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移的影响。方法采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,用表型标志蛋白α-SM-actin对VSMCs进行免疫荧光染色鉴定,取3～6代的VSMCs用于实验。将VSMCs分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+QDG 0.125 mg/m L组、AngⅡ+QDG 0.25 mg/m L组、AngⅡ+QDG 0.5 mg/m L组,共5组。以10-6 mol/L AngⅡ作为诱导剂,干预建立VSMCs增殖、迁移的模型。采用CCK-8法检测VSMCs的细胞活力,计算AngⅡ对VSMCs的增殖率以及QDG对AngⅡ诱导VSMCs增殖的抑制率;采用划痕实验检测VSMCs划痕损伤修复情况;transwell法检测VSMCs迁移情况。结果与对照组比较,AngⅡ能显著促进VSMCs的增殖和迁移;不同浓度QDG可在一定程度上抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖和迁移,且随着浓度的升高,抑制作用越明显。结论 QDG具有抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖与迁移的作用。     

CPI-17调控血管平滑肌表型对动脉粥样硬化形成的影响

目的  研究CPI-17（PKC-potentiated protein phosphatase inhibitory protein-17）通过诱导血管平滑肌细胞表型改变影响动脉粥样硬化形成的作用。方法  载脂蛋白E基因敲除（ApoE-knockout）小鼠经颈动脉套管术诱导形成动脉粥样斑块,以野生型C57BL/6小鼠为对照,分离颈动脉并提取总RNA,采用实时荧光定量PCR技术对比检测斑块组织与对照小鼠颈动脉中CPI-17及血管平滑肌细胞收缩功能相关蛋白-平滑肌肌球蛋白重链（sm-MHC）、α-肌动蛋白（α-actin）的mRNA水平。然后分别用50mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激及乏氧环境下培养作用于小鼠平滑肌细胞系MOVAS 细胞,实时荧光定量PCR检测两种刺激条件下CPI-17表达的变化。结果  ApoE-knock out小鼠粥样斑块平滑肌细胞的CPI-17 mRNA水平及sm-MHC、α-actin显著低于C57BL/6小鼠,ox-LDL刺激及乏氧培养的MOVAS细胞的CPI-17表达水平显著降低（P均<0.05）。结论  ox-LDL刺激及乏氧培养使MOVAS 细胞的CPI-17表达水平降低,可能通过调控血管平滑肌细胞的收缩特性参与动脉粥样硬化的发生。     

ADAM10在人动静脉内瘘狭窄处血管组织中的表达及其对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨去整合素金属蛋白酶10 (ADAM10)在人动静脉内瘘（AVF）狭窄处血管组织中的表达及其对血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移的影响,并阐明其可能的分子机制。方法：收集42例因AVF狭窄再次接受手术治疗的终末期肾病（ESRD）患者狭窄静脉血管组织（AVF组）及其首次手术的正常静脉血管组织（正常对照组）。采用免疫组织化学法检测2组患者静脉血管组织中ADAM10蛋白表达情况,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组患者静脉血管组织中ADAM10 mRNA表达水平。将VSMCs分为对照组、模型组[脂多糖（LPS）组,给予10 mg·L-1LPS]、LPS+si-NC组（转染si-NC质粒+10 mg·L-1 LPS）、LPS+si-ADAM10组（转染si-ADAM10质粒+10mg·L-1LPS）、 LPS+Notch信号通路抑制剂DAPT组（10mg·L-1LPS+10μmol·L-1Notch信号通路抑制剂DAPT）和LPS+si-ADAM10+DAPT组（转染si-ADAM10质粒+10 mg·L-1LPS+10μmol·L-1 DATP）,CCK-8法检测各组...     

脂联素通过干扰TLR4介导的炎症反应抑制血管平滑肌细胞泡沫化

目的 探讨脂联素(APN)抑制氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)泡沫化是否与干扰Toll样受体4(TLR4)及其介导的炎症反应相关.方法 组织贴块法培养C57BL/6J背景野生型及TLR4基因敲除(TLR4-/-)小鼠主动脉VSMCs.油红O染色观察VSMCs内脂质聚积;酶法检测VSMCs内胆固醇水平;Western blot检测VSMCs TLR4蛋白表达;ELISA方法检测VSMCs培养液中炎症因子IL-6和TNF-α的表达.结果 ox-LDL刺激VSMCs 48 h显著诱导细胞泡沫化;ox-LDL诱导VSMCs泡沫化过程中伴随着TLR4及其下游炎症因子IL-6、TNF-α表达的上调;而对于TLR4-/-型VSMCs,ox-LDL刺激并不能有效诱导VSMCs泡沫化及IL-6、TNF-a表达上调;APN显著抑制ox-LDL诱导的VSMCs泡沫化,伴随着TLR4及其下游炎症因子IL-6、TNF-a表达的下调.结论 APN可通过干扰TLR4介导的炎症反应抑制ox-LDL诱导的VSMCs泡沫化.     

同型半胱氨酸对大鼠主动脉血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的： 验证同型半胱氨酸（Hcy）是否具有促进大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）去分化的作用。 方法： SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4～7代细胞用于实验。VSMCs分为对照组、100 μmol/L Hcy干预组、500 μmol/L Hcy干预组、1 000 μmol/L Hcy干预组共4组。MTT法测各组VSMCs的增殖情况;划痕法和Transwell法检测各组VSMCs的迁移情况;ICC法检测各组VSMCs的细胞形态;Western blot法检测各组VSMCs中SM-actin、SM-MHC、Calponin、骨桥蛋白（OPN）的表达情况。 结果： 相比于对照组,Hcy组VSMCs增殖迁移增加;细胞形态变圆;SM-MCH和Calponin表达减少（ P＜0.01〉;OPN表达增加（ P＜0.01）,Hcy的这一作用与浓度呈正相关。 结论：Hcy可以促进VSMCs去分化,这可能是其促进VSMCs增殖和迁移的机制之一。     

黄酒多酚对Hcy诱导的血管平滑肌细胞MMP-2/9表达与活性的影响

目的探讨黄酒多酚（YWPC）对同型半胱氨酸（Hcy）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达和活性的影响及其信号通路。方法SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4~7代细胞用于实验。YWPC组VSMCs分别用1、10、100mg/L的YWPC干预,采用Westernblot法检测VSMCs中MMP-2、MMP-9、AKT、pAKT的表达情况;明胶酶谱检测VSMCs中MMP-2和MMP-9的活性。用IGF-1（3ng/ml）干预VSMCs8h激活PI3K/AKT通路后,用YWPC干预VSMCs,检测MMP-2、MMP-9的表达和活性。结果Westernblot结果显示,与Hcy组比较,YWPC组VSMCs中MMP-2/9的表达减少,pAKT表达减少（均P＜0.01）;明胶酶谱结果显示,与Hcy组比较,YWPC组VSMCs中MMP-2/9的活性降低。在加入IGF-1后,与对照组比较,IGF-1组VSMCs中pAKT、MMP-2/9的表达和活性增加（P＜0.01）;与YWPC组比较,YWPC+IGF-1组VSMCs中pAKT、MMP-2/9的表达和活性增加（P＜0.01）。结论YWPC通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制Hcy诱导的VSMCs中MMP-2/9的表达和活性。     

二苯乙烯苷对HepG2 细胞胆固醇含量的 影响及其作用机制研究

目的 探索二苯乙烯苷对HepG2 细胞胆固醇含量的影响及其作用机制。方法 将细胞随机分为 正常组、模型组（ox-LDL 50 mg/L）、A 组（ox-LDL 50 mg/L+ 二苯乙烯苷250μmol/L）、B 组（ox-LDL 50 mg/L+ 二苯乙烯苷188μmol/L）、C 组（ox-LDL 50 mg/L+ 二苯乙烯苷125μmol/L）及D 组（ox-LDL 50 mg/L+ 二苯乙烯苷62.5μmol/L）。细胞处理48 h 后，采用油红O 脂肪染色法观察、胆固醇测定试剂盒测 定各组胆固醇的含量并用逆转录聚合酶链反应检测肝癌HepG2 细胞ABCG1、ABCA1 及SR-BI 的表达水平。 结果 正常组、A、B、C 和D 组细胞内总胆固醇（TC）、细胞内游离胆固醇（FC）含量均低于模型组（P <0.05）， 同时A、B、C 和D 组上清TC 和FC 含量较正常组升高（P <0.05）。二苯乙烯苷能够降低HepG2 细胞内 胆固醇含量，增加胆固醇外流率（P <0.05），其中二苯乙烯苷浓度为125μmol/L 时达最高值。模型组细胞 ABCA1 mRNA 表达水平较正常组下降（P <0.05）。A、B、C 和D 组ABCA1、ABCG1 和SR-BI mRNA 表 达水平较模型组上升（P <0.05）。结论 二苯乙烯苷能够降低HepG2 细胞胆固醇的含量，其机制可能是通过 上调ABCA1、ABCG1 和SR-BI 的表达水平而增加胆固醇外流。     

基于HAT/HDAC平衡调控PPARγ/PI3K/Akt通路活化探讨黄连化浊胶囊对糖尿病大血管病变的作用

摘要：目的：探讨基于HAT/HDAC平衡调控PPARγ/PI3K/Akt通路活化探讨黄连化浊胶囊对糖尿病大血管病变的影响。方法：40只ApoE基因剔除小鼠均建立糖尿病大血管病变模型,随机模型组、Atorvastatin组、黄连化浊胶囊组、A+E（Atorvastatin+黄连化浊胶囊）组,其余10只野生型C57小鼠为空白组, Atorvastatin组灌胃阿托伐他汀10mg/(kg·d),黄连化浊胶囊组灌胃0.675g/kg的黄连化浊胶囊水溶液,A+E组灌胃按照Atorvastatin组、黄连化浊胶囊组,其余大鼠灌胃等剂量的生理盐水。取大鼠平滑肌细胞,分为空白组、ox-LDL组、ox-LDL+PPARγ沉默组、ox-LDL+PPARγ过表达组,除空白组外均采用ox-LDL处理后采用200μ·mL-1的含有黄连化浊胶囊血清共培养,ox-LDL+PPARγ沉默组进行PPARγsiRNA转染,ox-LDL+PPARγ过表达组转染PPARγ质粒,采用全自动生化分析仪器检测各组大鼠血糖及血脂水平,HE染色观察各组大鼠胸主动脉病理形态,流式细胞仪检测各组平滑肌细胞凋亡率,免疫印迹及QRT-PCR分别检测细胞中HAT1、HDAC1、PPARγ、PI3K及Akt表达。结果： Atorvastatin组、黄连化浊胶囊组、A+E组大鼠静脉血FPG、TC、TG及HDL-C低于模型组（P均＜0.05）;Atorvastatin组、黄连化浊胶囊组与模型组相比,内壁层次紊乱改善,可见少量的泡沫细胞,A+E组大鼠胸主动脉血管内壁改善最为显著;与ox-LDL组,ox-LDL+PPARγ沉默组纤维细胞凋亡率降低（P＜0.05）,与ox-LDL+PPARγ沉默组相比,ox-LDL+PPARγ过表达组纤维细胞凋亡率升高（P＜0.05）;与ox-LDL组相比,LDL+PPARγ沉默组平滑肌细胞中HAT1表达升高,HDAC1、PPARγ、PI3K及Akt表达降低（P＜0.05）,LDL+PPARγ过表达组与LDL+PPARγ沉默组相比差异显著（P＜0.05）。结论：黄连化浊胶囊能够通过抑制HAT表达提高HDAC、PPARγ/PI3K/Akt通路活化,抑制糖尿病大血管病变大鼠代谢紊乱,增加平滑肌细胞凋亡,减少动脉斑块形成,发挥保护机制。     

G蛋白偶联受体激酶4对氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究G蛋白偶联受体激酶4(GRK4)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。方法以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞)为靶细胞,检测在不同浓度的ox-LDL(10、20、30、40、60、80 mg/L)刺激下A10细胞的增殖情况;观察ox-LDL(40 mg/L)刺激下A10细胞GRK4表达变化;用siRNA干扰A10细胞GRK4表达后,检测ox-LDL对A10细胞增殖的影响。Western blot检测GRK4蛋白表达,CCK-8检测细胞增殖活力。结果用不同浓度ox-LDL刺激A10细胞,发现ox-LDL(40 mg/L)刺激下细胞增殖幅度可达78.3%(P<0.05),且细胞GRK4蛋白表达增加[实验组(0.367 9±0.049 1),对照组(0.193 0±0.038 5),P<0.05];与对照组相比,用siRNA干扰A10细胞GRK4表达后ox-LDL对A10细胞增殖的影响明显减弱[对照组(1.050 1±0.302 9),ox-LDL刺激组(1.929 1±0.390 0),siRNA组(1.403 2±0.164 4),P<0.05]。结论 ox-LDL可增强GRK4表达,干扰细胞GRK4表达后可减弱ox-LDL诱导的大鼠平滑肌细胞的增殖。     

姜黄素通过抑制ERK1/2磷酸化减弱ET-1诱导的大鼠VSMCs增殖

目的观察姜黄素（curcumin）对内皮素-1（ET-1）诱导培养的离体大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖及p44/42丝裂原活化蛋白激酶（p44/42 MAPK,ERK1/2）表达的影响。方法组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMCs。分别以ET-110-8 mol/L,ET-110-8 mol/L联合浓度为10-6 mol/L、10-5 mol/L、10-4 mol/L的姜黄素作用于体外培养的VSMCs 24 h,采用细胞计数检测VSMCs的增殖,3H-胸腺密啶掺入（3H-TdR）法测定VSMCs的DNA合成,western bolt法检测VSMCs磷酸化ERK1/2的表达。结果与对照组比较,ET-1能显著刺激VSMCs增殖,姜黄素能显著抑制ET-1诱导的VSMCs增殖,且呈剂量依赖关系;ET-1能显著刺激VSMCs磷酸化ERK1/2的表达,该作用可被姜黄素所抑制。结论姜黄素能抑制ET-1刺激的VSMCs的增殖,其作用可能与抑制磷酸化ERK1/2的表达相关。     

染料木黄酮调控小鼠血管平滑肌细胞钙化的研究

目的观察染料木黄酮(Genistein)对小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响,并探讨其可能通过的信号通路。方法体外培养小鼠血管平滑肌细胞并构建钙化模型,分为Genistein 30μmol/L处理组、钙化组、钙化+Genistein 10μmol/L处理组、钙化+Genistein 30μmol/L处理组、钙化+Genistein 50μmol/L处理组。茜素红染色观测各组钙化情况,用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western Blot检测护骨素(OPG)、α-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)、碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)表达。结果茜素红染色表明,Genistein能明显抑制VSMCs钙化,并呈浓度依赖性。荧光定量PCR和Western Blot结果表明,Genistein可诱导OPG、a-SMA的表达、抑制骨形成相关基因ALP、OPN的表达(P 0.05)。结论 Genistein通过OPG信号通路调控小鼠VSMCs,为抑制血管钙化提供新的途径。     

β-榄香烯对血管内皮细胞功能紊乱和血管平滑肌细胞异常增殖的影响

研究β-榄香烯是否能改善低剪切力（LSS）诱导的血管内皮细胞功能紊乱和氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移。分别采用平行板流动腔和ox-LDL建立血管内皮细胞（ECs）功能紊乱模型和血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移模型,并检测β-榄香烯对ECs功能紊乱和VSMCs增殖迁移的影响。DHE法检测ECs中ROS的活性,DAF-FM DA法检测ECs中NO的活性。Western blot法检测ECs中Akt和ERK的蛋白磷酸化水平。MTT法检测VSMCs的增殖。细胞划痕实验和Transwell实验检测VSMCs的迁移。RT-qPCR法检测VSMCs中MMP-2和MMP-9的基因表达。在ECs中,β-榄香烯可以显著降低LSS诱导的ROS的升高,显著升高LSS诱导的NO的降低,并且降低ERK的磷酸化,并升高Akt的磷酸化。在VSMCs中,β-榄香烯可以显著降低ox-LDL诱导的VSMCs的增殖和迁移,降低MMP-2和MMP-9的基因表达。β-榄香烯可以改善LSS诱导的ECs功能紊乱和ox-LDL诱导的VSMCs增殖和迁移。     

固醇调节素结合蛋白调节辛伐他汀对血管平滑肌细胞的作用

目的观察辛伐他汀对血管平滑肌细胞（VSMCs）是否存在双向作用,是否通过固醇调节素结合蛋白（SREBPs）调节起作用。方法①培养大鼠原代VSMCs,观察不同浓度辛伐他汀对VSMCs增殖、迁移的影响,以及SREBP-1、SREBP-2mRNA在VSMCs的表达。②建立大鼠动脉粥样硬化血管损伤模型,分为动脉粥样硬化损伤组（n=6）、低剂量辛伐他汀组（n=6）和高剂量辛伐他汀组（n=6）;另设正常对照（假手术）组（rt=8）。低剂量和高剂量辛伐他汀组每天1次灌胃给药,剂量分别为0．5kg^1&#183; d^-1和2．5 kg^1&#183; d^-1,正常对照组和动脉粥样硬化损伤组喂予等量生理盐水,4周后处死动物。酶法测定各组血脂水平,检测胸主动脉和左颈总动脉内膜／（内膜＋中膜）比值。RT—PCR法检测SREBP-1、SREBP-2 mRNA在血管的表达。结果细胞及动物实验均证明辛伐他汀对VSMCs增殖和迁移无双向调节作用。低剂量辛伐他汀对VSMCs的增殖和迁移无促进作用,高剂量辛伐他汀抑制VSMCs增殖和迁移,且这种作用呈剂量依赖性但不依赖他汀的调脂性。辛伐他汀能激活VSMCs的SREBP-1、SREBP-2mRNA表达,且高浓度辛伐他汀SREBP-1、SREBP-2mRNA表达显著。结论辛伐他汀可能通过激活SREBPs抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移。     

Ox-LDL对大鼠血管平滑肌细胞OPG及RANKL表达的影响

目的：观察氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）骨保护素（OPG）及核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）表达的影响。方法：体外培养大鼠VSMCs细胞株（A7r5）,采用不同浓度Ox-LDL（75、150、300μg/mL）或不同时间（4、12、24h）处理构建VSMCs损伤模型,分别采用定量PCR、Western blot方法检测大鼠主动脉OPG、RANKL表达情况。结果：经过oxLDL干预后,VSMCs高表达OPG而低表达RANKL,且呈现浓度和时间的依赖性。结论：ox-LDL能够促进大鼠VSMCs OPG表达,并同时抑制RANKL表达。     

黄芪甲苷抑制NLRP3/IL-1β轴改善高糖诱导的血管平滑肌细胞炎症反应

目的:探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对高糖诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)炎症反应的作用及机制。方法:①采用不同浓度的葡萄糖(5.5、10、15、25 mmol/L)刺激VSMCs细胞24 h,或高浓度葡萄糖(25 mmol/L)处理VSMCs不同时间(0、6、12、24 h)。Western blot检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达;ELISA检测白介素-1β(IL-1β)含量。②采用不同浓度(0、10、20、40μg/ml)AS-Ⅳ干预VSMCs细胞24 h后,CCK8法检测并计算细胞活力。③将VSMCs细胞分为对照组、高糖组、AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+高糖组。先给予AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+高糖组20μg/ml AS-Ⅳ预孵育2 h后,再向高糖组和AS-Ⅳ+高糖组加入25 mmol/L葡萄糖刺激24 h。Western blot检测NLRP3蛋白表达;ELISA检测IL-1β含量。④构建si-NLRP3 RNA转染的VSMCs细胞。将细胞分为对照组、高糖组、si-NLRP3组和si-NLRP3+高糖组。细胞转染6 h后,高糖组和si-NLRP3+高糖组细胞加入25 mmol/L葡萄糖刺激24 h。PCR检测NLRP3 mRNA表达;ELISA检测IL-1β含量。⑤应用转染技术构建NLRP3过表达的VSMCs细胞。将细胞分为对照组、AS-Ⅳ组、NLRP3过表达组和NLRP3过表达+AS-Ⅳ组。细胞转染6 h后,AS-Ⅳ组和NLRP3过表达+AS-Ⅳ组加入20μg/ml AS-Ⅳ干预24 h。PCR检测NLRP3 mRNA表达;ELISA检测IL-1β含量。结果:①高糖刺激能够上调VSMCs细胞NLRP3和IL-1β蛋白表达(P0.01),且呈一定的浓度/时间依赖性,故选取25 mmol/L葡萄糖作用24 h进行后续研究。②10、20μg/ml AS-Ⅳ作用VSMCs细胞24 h后,细胞活力无显著变化(P0.05),选择20μg/ml浓度进行后续实验。③与对照组相比,AS-Ⅳ组细胞NLRP3蛋白表达量显著下调(P0.05),IL-1β含量显著降低(P0.05);与高糖组相比,AS-Ⅳ+高糖组NLRP3蛋白表达量显著减少(P0.01),IL-1β含量显著降低(P0.01)。④与对照组相比,si-NLRP3组细胞NLRP3 mRNA表达量显著降低(P0.01),IL-1β含量没有明显变化;与高糖组相比,si-NLRP3+高糖组NLRP3 mRNA表达量显著减少(P0.01),IL-1β含量显著降低(P0.01)。⑤与AS-Ⅳ组相比,NLRP3过表达+AS-Ⅳ组NLRP3 mRNA表达量显著增多(P0.01),IL-1β含量显著升高(P0.01)。结论:黄芪甲苷可能通过抑制NLRP3/IL-1β轴改善高糖诱导的VSMCs炎症反应。     

尼古丁调控血管平滑肌细胞内生物钟基因表达节律的研究

目的研究尼古丁对原代大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）内生物钟基因表达节律的影响。方法使用贴壁法提取原代VSMCs，免疫荧光法检测VSMCs标志物α-SMA的表达，MTT法检测细胞活力，RT-PCR法检测VSMCs内生物钟基因Bmal1、CLOCK、Per1、Cry1的表达节律。数据使用余弦法拟合，计算昼夜节律参数。结果尼古丁在100 nmol/L浓度刺激48 h，诱导VSMCs增殖效果最好。Bmal1和CLOCK基因的中值相对于对照组下调（P < 0.05和P < 0.01），而Per1和Cry1基因表达的中值上调，CLOCK基因表达振幅相对于对照组下调，而Per1和Cry1的振幅上调，差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）；尼古丁使VSMCs内生物钟基因表达相位后移4~7 h。结论尼古丁在48 h内使VSMCs内生物钟基因表达变化的同时，使VSMCs特异性增殖，产生表型分化。     

锌指蛋白A20对抑制ox-LDL诱导的平滑肌细胞LOX-1、TLR-4表达的作用

目的 探讨锌指蛋白A20对氧化性低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的血管平滑肌细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX-1）和toll样受体-4（TLR-4）表达的作用.方法 体外培养SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）,简单随机化分成4组：A组（对照组）;B组（OX-LDL组）;C组（A20组）;D组（ox-LDL＋A20组）.收集以上各组细胞,用RT-PCR检测LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA的表达;提取核蛋白,并用western blot的方法检测NF-κ B核易位的量.结果 ox-LDL刺激大鼠主动脉平滑肌细胞后LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA的表达明显增加及核因子κ B（NF-κ B）的活化均明显增加.转染含A20基因质粒的平滑肌细胞TLR-4 mRNA的表达达到正常水平,LOX-1 mRNA的表达及NF-κ B的核移位的量甚至降低到正常水平以下.结论 ox-LDL诱导的平滑肌细胞LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA表达增加,可能由此激活TLR-4/NF-κB信号系统,启动动脉壁的炎症反应,触发动脉粥样硬化发生.A20明显抑制了ox-LDL对平滑肌细胞的上述诱导作用,可能由此阻断了ox-LDL引发的不断级联扩大的正反馈效应.阻止了动脉粥样硬化的发展.     

钙调神经磷酸酶信号通路在AngⅡ刺激的大鼠VSMCs增殖中的作用

目的:探讨钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）依赖的信号通路在血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）刺激的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖中的作用。方法:采用组织贴块法,体外原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞;Ang Ⅱ刺激培养的大鼠 VSMCs增殖;CaN特异性抑制剂环孢素 A（CsA）阻断Ang Ⅱ刺激的大鼠VSMCs中CaN依赖的信号转导通路;观察各因素对CaN活性、细胞增殖活度、增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的影响。结果:在一定范围内,Ang Ⅱ（10-8～10-6mol/L）以浓度依赖性方式增加VSMCs的CaN活性,同时细胞增殖活度（AMTT值）增高,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.01或P<0.001）。CsA（1 μmol/L）抑制CaN活性后,明显降低Ang Ⅱ（10-7mol/L）刺激的VSMCs增殖活度及核内PCNA的表达水平（OD值）,与Ang Ⅱ组比较,差异显著（P<0.001）。结论:CaN依赖的信号通路在Ang Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖中发挥重要作用。