LIM激酶1对肝癌细胞增殖、迁移及血管形成能力的影响

目的 探讨LIM激酶1(LIMK1)在人肝癌细胞系Huh7中的表达及其对Huh7细胞的增殖、迁移及促进血管形成能力的影响。方法 检测人正常肝细胞系MIHA和人肝癌细胞系Huh7中LIMK1的mRNA和蛋白水平，siRNA转染Huh7细胞后通过CCK-8实验、克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验和内皮细胞管形成实验探究对肝癌细胞增殖、迁移及血管形成能力的影响。结果 LIMK1在Huh7细胞中表达升高；敲低LIMK1后Huh7细胞的增殖及迁移能力显著下降，人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外血管形成能力减弱。结论 LIMK1在Huh7细胞中高表达，敲低LIMK1可抑制Huh7细胞的增殖、迁移及血管形成能力。     

环状RNA circEIF6在肝细胞癌中的表达及功能研究

目的探讨环状RNA circEIF6在肝细胞癌中的表达及其对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法从GEO数据库下载肝细胞癌与癌旁组织有差异表达的circRNA数据集GSE94508和GSE97332,选取在肝癌组织中高表达的circEIF6作为研究对象。选取2015年1月至2018年12月间中山大学附属第一医院确诊为肝细胞癌并行根治性切除术(术前均未经过放疗和化疗治疗)患者15例的肿瘤组织标本和配对的癌旁肝组织标本。采用qPCR检测circEIF6的表达;采用siRNA敲低circEIF6的表达,通过CCK8、EdU、平板克隆实验、Transwell实验方法检测肝癌细胞系Huh7细胞的增殖、侵袭与迁移能力的改变。结果筛选出肝癌差异表达circRNA共81个,对其中表达上调的73个circRNA对应的母基因进行GO分析。circEIF6在肝癌组织中的表达明显高于癌旁肝组织(P0.05)。敲低circEIF6后,肝癌细胞系Huh7细胞增殖能力明显下降(P0.05),Huh7细胞的侵袭能力和迁移能力明显下降(P0.05)。结论 circEIF6在肝癌组织中高表达,对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移能力均有促进作用,值得进一步的机制探究。     

POLE2对非小细胞肺癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的 探讨POLE2对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞侵袭迁移能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测人支气管上皮样细胞BEAS-2B和NSCLC细胞A549、SPC-A1中POLE2的表达水平。构建POLE2过表达细胞模型,qRT-PCR和蛋白质印迹法（Western blot）验证转染效率。采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）实验检测NSCLC细胞的增殖能力,Transwell实验检测NSCLC细胞的侵袭迁移能力,qRT-PCR检测MMP9的表达水平。结果 人NSCLC细胞SPC-A1、A549中POLE2的表达水平显著高于人支气管上皮样细胞BEAS-2B（P<0.05）。过表达POLE2促进了A549细胞的增殖和侵袭迁移,上调了MMP9的表达（P<0.05）。结论 过表达POLE2可能通过上调MMP9促进NSCLC细胞的侵袭迁移。     

黄芩苷对胆囊癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:观察黄芩苷对胆囊癌细胞增殖、侵袭及凋亡等生物学行为的影响。方法:用梯度浓度的黄芩苷(0、12.5、25、50、100、200 μmol/L)处理胆囊癌细胞24 h,正常胆囊癌细胞为对照,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测黄芩苷对胆囊癌细胞增殖的影响,同时采用划痕实验、Transwell检测胆囊癌细胞的迁移及侵袭...     

Pin1相互作用的长非编码RNA lncPIL-1调控乳腺癌恶性表型的研究

目的 探究与Pin1蛋白结合的长非编码RNA lncPIL-1对乳腺癌细胞增殖、迁移和干性表型的影响。方法 采用RNA免疫沉淀联合深度测序（RIP-seq）得到与Pin1特异性结合的长非编码RNA,并通过RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）和紫外交联免疫沉淀（CLIP）进行验证筛选;利用小干扰RNA（siRNA）敲降乳腺癌细胞lncPIL-1的表达,利用慢病毒感染得到lncPIL-1过表达乳腺癌细胞株,并通过qRT-PCR实验检测敲降及过表达效率;采用平板克隆方法检测lncPIL-1对乳腺癌细胞增殖能力的影响;采用Transwell实验检测lncPIL-1对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响;采用ALDEFLUOR法检测lncPIL-1对乳腺癌细胞干性表型的影响。结果 RIP-seq及验证实验显示,lncPIL-1在Pin1免疫沉淀复合物中富集。乳腺癌患者高表达lncPIL-1与总生存率低密切相关。平板克隆实验显示lncPIL-1不影响乳腺癌细胞生长。Transwell实验中过表达lncPIL-1会加强乳腺癌细胞的迁移能力,而敲降lncPIL-1会降低乳腺癌细胞的迁移能力;ALDEFLUOR检测结果显示敲降lncPIL-1明显抑制乳腺癌细胞干性表型。结论 lncPIL-1与Pin1特异性结合并与乳腺癌患者预后不良高度相关,具有促进乳腺癌细胞运动迁移及干性表型的能力,提示lncPIL-1有望成为新的乳腺癌治疗靶点。     

circ0000267通过miR-661/NGAL轴调控胃癌进展的研究

目的探讨circ₀000267对胃癌细胞体外增殖、迁移、侵袭、凋亡及体内生长的影响。方法体外构建敲低circ₀000267和过表达miR-661的胃癌细胞株, 采用qRT-PCR检测胃癌组织和细胞中circ₀000267、miR-661和NGAL mRNA表达, 采用克隆形成、Transwell小室和流式细胞仪实验检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡, Western blot检测相关蛋白表达, 通过在线预测结合双荧光素酶实验和RNA pull down实验验证circ₀000267、miR-661和NGAL之间的靶向关系, 裸鼠成瘤实验观察敲除circ₀000267对胃癌细胞体内生长的影响。结果 circ₀000267在胃癌组织和细胞中高表达;敲低circ₀000267能够抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭, 促进细胞凋亡;circ₀000267靶向miR-661, 抑制miR-661能够部分逆转敲低circ_0...     

七氟烷通过BACE1-AS和糖酵解途径抑制肝癌细胞的增殖及侵袭迁移

目的分析七氟烷对肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭迁移、糖酵解以及BACE1反义RNA(BACE1-AS)表达的影响。方法培养肝癌细胞,经过4%七氟烷处理后,用CCK-8方法检测肝癌细胞细胞增殖,用流式细胞检测细胞凋亡、用Transwell和划痕实验检测细胞侵袭和迁移,利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TCGA)数据库对BACE1-AS的相关生物学信息进行挖掘,包括肝癌组织中的BACE1-AS表达量,预后相关分析等。结果七氟烷刺激明显降低HepG2细胞的存活率(P0.05)。此外,七氟烷是一种有效的促凋亡因子(P0.05);Transwell实验表明,与未处理细胞相比,七氟烷刺激明显降低HepG2细胞的侵袭力(P0.05)。划痕实验表明,经过七氟烷处理,HepG2细胞的迁移能力下降(P0.05);七氟烷刺激明显降低HepG2细胞的葡萄糖摄取以及乳酸的生成(P0.05)。经过七氟烷处理后,HepG2细胞的细胞外酸化(ECAR)明显下降,而耗氧量(OCR)明显上升(P0.05),BACE1-AS在肝癌组织中,不管是配对样本,还是非配对样本中的表达均高于对照组织(P0.05)。预后分析表明,高表达BACE1-AS的肝癌病人生存期更短,风险比达1.75(P0.05)。BACE1-AS在3种肝癌细胞中的表达高于正常肝细胞(P0.05),而经过七氟烷处理后,肝癌细胞BACE1-AS的表达明显降低(P0.05)。结论 BACE1-AS是一个肝细胞癌相关癌基因,七氟烷通过抑制BACE1-AS的表达,抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移和糖酵解,同时促进其凋亡,七氟烷有望用于肝癌的辅助治疗。     

短发卡状RNA抑制AKT2对肝癌细胞增殖及侵袭的影响

目的 探讨短发卡状RNA(siRNA)抑制AKT2对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭转移的影响.方法 设计并合成特异性靶向AKT2的siRNA片段并构建SMMC7721AKT2 siRNA表达质粒,将其转染SMMC7721细胞,通过G418筛选出稳定株.MTT法检测肝癌SMMC7721细胞的生存率变化;流式细胞术检测细胞周期;Western- blot检测P27、CyclinD1;Transwell实验和划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变.结果 MTT检测显示AKT2干扰可抑制SMMC7721细胞的生长,与其他组比较差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术显示AKT2干扰组细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降.Western- blot检测显示CyclinD1表达下降,P27的表达上升.Transwell试验和划痕试验显示AKT2干扰组的侵袭和转移能力受到抑制.结论 AKT2基因沉默可明显抑制肝癌SMMC7721细胞的生长并阻滞细胞周期.AKT2基因沉默可抑制肝癌SMMC7721细胞的侵袭和转移能力.     

长链非编码RNA LINC00606对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC00606对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法 （1）利用转录组测序技术检测3组胰腺癌组织与癌旁组织中的lncRNA表达水平,经对比分析筛选出目标lncRNA LINC00606。（2）采用PCR检测LINC00606在3种胰腺癌细胞系（BxPC-3、PANC-1、SW1990）和正常胰腺导管上皮细胞系（HPDE6c-7）中的表达。（3）通过oeRNA过表达质粒上调PANC-1细胞中LINC00606的表达水平,然后将其分为未转染组（Ctrl）、转染pcDNA3.1空载体组（Vector组）和转染重组质粒 pcDNA3.1组（oe-LINC 00606）;下调BxPC-3细胞中LINC00606水平,然后将其分为未转染组（Ctrl组）、转染空白（shNC组）及转染组（sh-LINC 00606组）;采用RT-qPCR检测各组细胞中LINC00606的表达水平;运用平板克隆实验检测细胞克隆形成数,细胞划痕实验检测划痕愈合相对百分比,Transwell实验研究检测细胞侵袭迁移能力。结果 （1）胰腺癌组织中 LINC00606的表达显著降低（P<0.05）;（2）胰腺癌细胞中LINC00606表达水平显著降低（P<0.05）;（3）与Vector组相比,oe-LINC 00606组细胞克隆形成数、划痕愈合相对百分比、细胞迁移和侵袭数量降低（均P<0.05）;与shNC组相比,sh-LINC00606组细胞克隆形成数、划痕愈合相对百分比、细胞迁移和侵袭数升高（P<0.05）。结论 LINC00606低表达可促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,在胰腺癌发生发展过程中可能起着重要的调节作用。     

siRNA干扰ABCG2影响肝癌细胞的耐药及侵袭能力

目的探讨ABCG2在肝癌细胞的耐药及转移侵袭过程中的作用。方法 MTT方法检测siRNA干扰前后三种肝癌细胞MHCC97-L、MHCC97-H、SMMC-7721对多柔比星的药物敏感性;划痕与Transwell实验证实这几种肝癌细胞在siRNA干扰前后的转移、侵袭能力;western-blot、PCR实验证实siRNA转染效率。结果 SMMC-7721、MHCC97-L、MHCC97-H细胞内ABCG2水平呈逐渐上升趋势,对多柔比星的耐受程度也同样逐步上升,同时侵袭能力逐渐增强;siRNA干扰后,MHCC97-L、MHCC97-H两株细胞中ABCG2水平明显降低,对多柔比星敏感性明显增强,侵袭能力明显下降。结论 ABCG2不仅在肝癌细胞的耐药过程中起到重要作用,同时还影响肝癌细胞的转移侵袭能力,靶向干扰ABCG2水平增加了化疗药物敏感性并降低肝癌细胞的转移侵袭能力。     

具核梭杆菌通过下调LCN2促进结直肠癌细胞增殖和迁移

目的 探究具核梭杆菌（Fn）对结直肠癌细胞的影响机制。方法 研究对象来自深圳市人民医院门诊的肠镜受检者,共选取15例结直肠癌患者（按术前与术后分组）,和15例无结直肠疾病的肠镜受检者（健康组）,qPCR检测粪便样品中具核梭杆菌的丰度;CCK-8和Transwell分别检测具核梭杆菌对结直肠癌细胞（HCT116、SW480）增殖和迁移侵袭的影响;转录组微阵列分析具核梭杆菌对结直肠癌细胞相关基因表达的影响;筛选差异基因,并加以功能验证。结果 qPCR结果显示具核梭杆菌在术前组中的丰度显著高于术后组和健康组;具核梭杆菌能够促进结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭;微阵列分析结果显示脂质运载蛋白-2（LCN2）mRNA相对含量在具核梭杆菌感染的结直肠癌细胞中显著下调。过表达LCN2能够抑制结直肠癌细胞增殖活性和迁移侵袭能力,而具核梭杆菌能够可以抑制LCN2的mRNA和蛋白表达,减弱LCN2对结直肠癌细胞的抑制效应。结论 具核梭杆菌能够通过下调LCN2的表达来促进结直肠癌细胞增殖和迁移侵袭能力,为LCN2作为预防和治疗与具核梭杆菌相关的结直肠癌的靶点提供了相关理论依据。     

NK4基因转染对前列腺癌DU145细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

研究HGF拮抗剂NK4在前列腺癌中的作用。将包含NK4cDNA的表达载体pBudCE4．1-EGFP-NK4转染到DU145细胞中。体外实验检测白分泌的NK4对肿瘤细胞增殖、迁移、转移及凋亡的影响。体内实验裸鼠分为三组,分别皮下种植DUl45、空质粒转染的Dul45和NK4转染的DUl45细胞,检测皮下肿瘤的大小、细胞凋亡及细胞增殖情况。体外实验结果显示转染NK4的DUl45细胞可以分泌NK4蛋白。自分泌的NK4抑制HGF诱导的肿瘤细胞增殖、迁移及转移,促进凋亡（P〈0．01）。NK4可以调节HGF受体c－Met及其下游ERKl与Akt1／2蛋白的活性。体内实验显示,NK4转染DUl45细胞组的肿瘤生长及细胞增殖受到抑制,同时肿瘤细胞凋亡增加。本实验显示包含NK4cDNA的表达载体转染前列腺癌细胞可以有效地调节肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡。NK4作用于HGF／c－Met可以作为前列腺癌治疗的一个有效靶点。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对HepG2中SLIT2甲基化和细胞恶性表型影响的实验研究

目的评估5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza-2dc）对人肝癌细胞系HepG2中抑癌基因SLIT2甲基化状态和细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,探讨SLIT2基因在肝癌中的作用及5-aza-2dc的体外抑制肝癌的效应。方法实验分为对照组和加药组,分别应用MSP、MTT、划痕实验、侵袭实验、AnnexinV—FITC／PI双染实验检测细胞中SLIT2基因的甲基化状态和细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡的变化。结果5-aza-2dc处理后,HepG2细胞株中SLIT2基因甲基化程度得到一定程度逆转,并呈现出剂量依赖性;划痕实验48h后,对照组肝癌细胞明显向划痕的中央迁移,而药物处理组肝癌细胞迁移受到抑制;侵袭实验24h后,加药组细胞的侵袭能力较对照组降低（P〈0．05）;AnnexinV．FITC／PI双染实验显示加药组细胞凋亡率显著增加（P〈0．01）。结论5-aza-2dc对HepG2细胞有抑制细胞增殖、促进凋亡及抑制细胞迁移和侵袭能力等作用,其中对抑制细胞迁移和侵袭的作用可能是通过逆转SILT2基因甲基化、恢复其表达来实现的。     

长链非编码RNA MALAT1在肝癌组织中的表达及其在肝癌细胞增殖与侵袭转移中的作用

目的:探讨长链非编码RNA MALAT1在肝癌组织中的表达及意义。方法:用qRT-PCR检测85例肝癌组织及其配对癌旁组织中MALAT1的表达,分析MALAT1的表达与肝癌患者临床病理因素的关系;在肝癌SMMC-7721细胞中分别过表达与敲除基因MALAT1后,通过CCK-8与Transwell实验检测肝癌细胞增殖与侵袭转移能力的改变。结果:MALAT1在肝癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P0.01);MALAT1在肝癌组织中的表达与肿瘤大小、肝癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显有关(均P0.05)。肝癌SMMC-7721细胞过表达MALAT1后增殖、侵袭与转移能力明显增强,而敲低MALAT1后增殖、侵袭与转移能力明显减弱(均P0.05)。结论:MALAT1在肝癌组织中表达上调,MALAT1可促进肝癌细胞增殖、侵袭与转移,故可能与肝癌的发生发展密切相关。     

低氧诱导因子-3α对胎盘滋养层细胞生长的影响

目的 研究低氧诱导因子-3α(HIF-3α)对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)生物学行为的影响.方法 构建人HIF-3α过表达载体(pcDNA3.1-HIF-3α),并筛选HIF-3α抑制剂(HIF-3α siRNA)最佳靶序列;用2.5μg的pcDNA3.1-HIF-3α质粒和75 pmol/L的HIF-3...     

circZBTB44通过调控AKT通路促进肾透明细胞癌增殖和迁移的研究

目的 探究circZBTB44在肾透明细胞癌中的表达情况及探讨circZBTB44在肾透明细胞癌中的生物学功能及促进肾透明细胞癌细胞进展的可能机制.方法 通过qRT-PCR法检测circZBTB44在我院21对肾透明细胞癌组织及细胞系786-O、ACHN中的表达水平;通过放线菌素D实验、RNase R实验、核浆分离实验...     

ARH3通过稳定MCM2-7表达促进神经胶质母细胞瘤增殖

目的 探讨ADP-核糖水解酶ARH3在神经胶质母细胞瘤内促进细胞增殖的机制。方法 通过GEPIA2和CPTAC数据库分析ARH3在胶质母细胞瘤中的mRNA及蛋白水平的表达量;设计两条siRNA并分别转入胶质母细胞瘤细胞系U87和LN229细胞内沉默ARH3的表达,利用Western Blot验证ARH3的敲低效率;克隆形成检测细胞增殖情况;流式细胞术检测不同时期的细胞比例;利用EdU实验检测细胞处于S期的比例;构建Flag标签的ARH3过表达载体并转染进入细胞,通过免疫共沉淀技术结合质谱分析ARH3的相互作用蛋白组并进行相关通路网络富集分析;通过细胞转染siRNA结合Western Blot验证ARH3对细胞周期相关蛋白稳定性的影响;采用细胞转染siRNA结合质谱技术分析ARH3沉默后胶质母细胞瘤细胞内部的信号通路网络变化。结果 GEPIA2和CPTAC数据库结果显示胶质母细胞瘤显著高表达ADP-核糖水解酶ARH3(P<0.05);在胶质母细胞瘤U87和LN229内敲低内源ARH3后,克隆形成数目减少（P<0.05）;流式结果显示内源性ARH3敲降细胞G1期比例增加（P&l...     

长链非编码RNA MALAT1在肝癌中表达及功能研究

目的:探讨长片段非编码RNA(lnc RNA)MALAT1在肝癌中的表达及其的功能。方法:用q RT-PCR方法检测80例肝癌患者手术切除的癌组织及其癌旁组织,以及不同肝癌细胞系(Hep G2、Hep3B、HCCLM3、Hu H7)与正常肝细胞系(L02)中MALAT1的表达。分别用MTT试验、划痕试验、流式细胞术检测肝癌细胞(Hep G2、Hu H7)转染MALAT1 si RNA后增殖、迁移、凋亡的变化。结果:80例配对标本中,72例(90%)肝癌组织MALAT1表达较其癌旁组织明显上调,MALAT1在不同肝癌细胞系中的表达水平均不同程度明显高于正常肝癌细胞(均P0.05);Hep G2、Hu H7转染MALAT1 si RNA后,增殖率均呈时间依赖性降低、划痕愈合能力均明显减弱(均P0.05),细胞凋亡率分别为17.0%、16.41%,而各自的对照组分别为8.89%、6.56%,差异有统计学意义(P0.05)。结论:MALAT1在肝癌中的表达上调,且可能与肝癌的恶性生物学行为密切相关,对其作用机制的进一步研究,有望为肝癌的治疗找到新的靶点。     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷联合多西紫杉醇对前列腺癌细胞系PC3恶性表型抑制作用的实验研究

目的:观察甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2dc)联合多西紫杉醇(DT)对人前列腺癌(PCa)细胞系PC3细胞增殖、迁移、侵袭能力、细胞周期变化和细胞凋亡的影响,探讨上述两种药物联合应用对前列腺癌细胞的体外抗肿瘤效应。方法:实验分为对照组、5-aza-2dc组、DT组及5-aza-2dc和DT联合用药组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、划痕损伤实验、细胞迁移实验分别观察5-aza-2dc和(或)DT对PC3细胞株增殖、迁移、侵袭能力的抑制效应,利用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞术检测其诱导肿瘤细胞凋亡的作用及其与细胞周期的关系。结果:5-aza-2dc组、DT组及联合用药组均能明显提高对PC3细胞的抑制率,降低细胞迁移距离,减少侵入下室的细胞(P<0.05),联合用药组作用更明显;对照组、5-aza-2dc组、DT组及联合用药组细胞凋亡率分别为(10.65±0.39)%、(16.60±0.67)%、(17.95±1.08)%、(22.98±1.18)%,各用药组均能明显提高细胞凋亡率,联合用药组作用更明显(P<0.05);联合用药组能明显减少G0/G1期细胞,增加G2/M期细胞(P<0.05)。结论:5-aza-2dc和DT单独及联合应用均能在体外细胞水平显著抑制PC3细胞的增殖、迁移和侵袭作用,诱导细胞凋亡,使细胞停滞于G2/M期,两药联合的作用比各单药作用大,5-aza-2dc和DT联合作用于PC3细胞具有协同作用,值得进一步研究。