CD_3AK细胞的培养与抗肿瘤活性研究

目的体外扩增经ＣＤ３单抗（ＣＤ３ＭｃＡｂ）活化的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ），并测定其抗肿瘤细胞作用和表型变化。②方法取１３例肺癌和２例肝癌病人外周血，经密度梯度离心获取淋巴细胞，以ＣＤ３ＭｃＡｂ和ＩＬ－２作为诱导剂，采用液相三步扩增方法扩增培养，并分别用ＭＴＴ和ＩＦＡ法与自体ＬＡＫ对照细胞比较细胞动力学、细胞毒作用和表型变化。③结果ＣＤ３ＡＫ细胞扩增速度、数量和抗肿瘤活性均优于自体ＬＡＫ细胞，其表型为ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８和ＣＤ１６的特殊异源淋巴细胞群。其中ＣＤ４亚群表型数量随培养时间延长明显升高（χ２＝７．６６，Ｐ＜０．０１），而ＣＤ１６则明显下降（χ２＝５．２３，Ｐ＜０．０５），该亚群表型变化可能与培养时间有关。④结论ＣＤ３ＡＫ细胞具有较强的杀肿瘤细胞作用，同时也可作为基因治疗的理想载体细胞。     

人实体瘤肿瘤浸润淋巴细胞的高效扩增及功能评价

目的体外高效扩增肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），为进一步开展基因治疗肿瘤奠定基础。②方法采用机械分离、酶消化和不连续密度梯度离心法分离提取ＴＩＬ前体细胞；以ＩＬ－２作为诱导剂，采用液相三步扩增方法扩增培养，并分别用ＭＴＴ和ＩＦＡ法与对照的自体ＬＡＫ细胞比较细胞动力学。同时对Ｋ５６２细胞和自体肿瘤细胞（ＡＴＣ）进行杀伤试验以及表型检测。③结果从２８例实体瘤组织和肿瘤引流淋巴结中获取的ＴＩＬ前体细胞，２６例培养成功，其中２３例ＴＩＬ数量达到治疗数量级；ＴＩＬ细胞对ＡＴＣ杀伤作用强于自体ＬＡＫ细胞（ｔ＝１１．４，１８．９，Ｐ＜０．０１）。ＴＩＬ细胞表型特点为ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８淋巴细胞亚群。④结论ＴＩＬ细胞具有高效杀肿瘤细胞作用，ＴＩＬ细胞可作为基因治疗的理想载体细胞。     

CD3AK细胞的培养与抗肿瘤活性研究

目的 体外扩增经ＣＤ３单抗（ＣＤ３ＭｃＡｂ）活化的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ），并测定其抗肿瘤细胞作用和表型变化。方法 取１３例肺癌和２例肝癌病人外周血，经密度梯度离心获取淋巴细胞，以ＣＤ３ＭｃＡｂ和ＩＬ－２作为诱导剂，采用液相三步扩增方法扩增培养，并分别用ＭＴＴ和ＩＦＡ法与自体ＬＡＫ对照细胞比较细胞动力学、细胞毒作用和表型变化。结果 ＣＤ３ＡＫ细胞扩增速度、数量和抗肿瘤活性均优于自体ＬＡＫ细胞，其表型     

自体LAK高效扩增法的建立及活性诱导实验

目的 建立体外高效扩增自体ＬＡＫ细胞方法，并测定诱导扩增的ＬＡＫ细胞是否具有杀瘤细胞作用及表型变化。方法 取２８例不同类型的肿瘤病人中静脉血液，经密度梯度离心获取ＬＡＫ细胞前体，以白细胞介素２（ＩＬ－２）作为诱导剂，应用独特的液相三步扩增方法扩增自体ＬＡＫ细胞。分别用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）法，测定细胞表型和对肿瘤细胞的杀伤活性，并与对照组细胞进行比较。结果 以该法诱导扩增     

A－LAK细胞与LAK细胞体外增殖及抗肿瘤作用的比较

本实验观察了Ａ－ＬＡＫ细胞的体外扩增及其抗肿瘤作用，并与ＬＡＫ细胞进行了比较。结果表明，Ａ－ＬＡＫ细胞在短期内大量扩增，在培养第７天时达到增殖高峰，Ａ－ＬＡＫ细胞增加１２．０２倍，而ＬＡＫ细胞增加２．６９倍，培养３周后Ａ－ＬＡＫ细胞增加５３．５０倍，而ＬＡＫ细胞仅增加４．４５倍。１８小时ＬＤＨ－Ｌ释放试验表明，Ａ－ＬＡＫ细胞对Ａｎｉｐ９７３和Ｋ５６２细胞均显示较高的杀伤活性，与ＬＡＫ细胞相比有显著差异（Ｐ＜０．０５）。通过ＦＡＣＳ细胞表型分析显示，Ａ－ＬＡＫ细胞大量表达ＣＤ１６、ＣＤ５６抗原，提示Ａ－ＬＡＫ细胞可能来源于ＬＧＬ－ＮＫ细胞群。     

妇科肿瘤患者CD3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为比较ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞的杀瘤特性，观察发妇科肿瘤患者ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞对卵巢癌细胞系的杀伤活性。结果表明；良性肿瘤组ＬＡＫ细胞杀瘤活性高峰在培养第１，２周，显著高于同期培养的ＣＤ３ＡＫ细胞，第３周则较低，而ＣＤ３ＡＫ细胞的杀瘤活性高峰在培养第３，４周，显著高于ＬＡＫ细胞；恶性肿瘤组，ＬＡＫ细胞杀瘤高峰在培养第１周，显著高于同期培养的ＣＤ３ＡＫ细胞，而ＣＤ３ＡＫ细胞杀瘤高峰在培养第     

人LAK细胞对胃癌细胞的杀伤作用

用人重组白细胞介素—２（ｒＩＬ－２）体外激活健康献血员外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ），使之形成淋巴因子激活杀伤（ＬＡＫ）细胞，借助中性红摄入法，研究了ＬＡＫ细胞对胃癌细胞的杀伤作用机制。结果表明：①ＬＡＫ细胞对胃癌细胞具有明显杀伤作用，诱导４天后其活性达峰值；②ＩＬ一２对已诱导的ＬＡＫ细胞杀伤胃癌细胞活性无协同作用；③ＬＡＫ细胞上清液有明显杀瘤活性物质，而ｒＩＬ一２对胃癌细胞无明显毒性作用。提示在ＬＡＫ细胞诱导过程中，淋巴细胞可能自身分泌一些细胞毒因子。     

正常鼠和免疫鼠CD3AK细胞和LAK细胞杀伤活性的比较研究

实验取正常鼠和Ｐ８１５肿瘤细胞致敏的免疫鼠脾细胞，经抗ＣＤ３抗体与低剂量ＩＬ－２或高剂量ＩＬ－２分别诱生为ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞，用改良的乳酸脱氢酶释放法以Ｐ８１５细胞和ＹＡＣ－１细胞为靶细胞，测定ＣＤ３ＡＫ和ＬＡＫ细胞的杀伤活性。结果表明：正常鼠ＣＤ３ＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性高于ＬＡＫ细胞，对ＹＡＣ－１细胞的杀伤活性低于ＬＡＫ细胞。免疫鼠ＬＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性明显增高，高     

LAK和TIL细胞的表型测定

应用多种抗人淋巴细胞的单克隆抗体和流式细胞仪，分析用ＩＬ－２诱生患者淋巴细胞２周形成的ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞的表型。结果：ＬＡＫ细胞中ＣＤ＿３￣＋细胞为（８５．０±２．５３）％，ＣＤ＿（１６）细胞为（８．３±１．０）％，证实ＬＡＫ细胞是以Ｔ细胞为主，包括有ＮＫ细胞的混合群体。双标记表型分析ＣＤ＿８￣＋Ｌｅｕ７￣－的ＣＴＬ细胞占８１．４８％，因而推测ＬＡＫ细细胞中，抗原特异性和ＭＨＣ限制性的ＣＴＬ细胞占有很大比例。ＴＩＬ细胞中ＣＤ＿３￣＋细胞为（６４．７±９．７）％，ＣＤ＿（１６）￣＋细胞为（１．６±０．２）％，Ｌｅｕ７￣＋细胞为（６．８±１．１）％。双标记表型分析ＣＤ＿８￣＋Ｌｅｕ７￣－的ＣＴＬ细胞占ＣＤ＿８￣＋细胞的８６．７６％，证实ＴＩＬ细胞主要是Ｔ细胞，ＮＫ细胞极少。     

原发性卵巢癌患者CD3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为探讨ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞杀瘤作用的特异性及靶细胞选择性，对比观察了３例原发性卵巢癌患者ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞对卵巢癌细胞系和人早幼粒细胞白血病细胞系的杀伤活性。结果表明；ＬＡＫ细胞在培养第１－３周，各效靶比对ＨＬ６０的杀伤活性略高于对３ＡＯ的杀伤活性，但差异无显著性；ＣＤ３ＡＫ细胞在培养第１周，各效靶比对ＨＬ６０的钉伤活性均显著高于对３ＡＯ的杀伤活性，而培养第２，３，４周时，对ＨＬ６０     

肿瘤化疗药物对人LAK细胞活性的影响

用四氮唑（ＭＴＴ）法分别检测顺氨氯铂（ＰＤＤ），丝裂霉素－Ｃ（ＭＭＣ）、阿霉素（ＡＭＤ）、氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ），长春新碱（ＶＣＲ）对ＩＬ－２诱导人外周血ＬＡＫ细胞活性的影响，及其与ＬＡＫ细胞对胃癌细胞的相加杀伤作用。①ＭＭＣ、ＡＤＭ、５－Ｆｕ、ＶＣＲ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性稍有下降，Ａｒａ－Ｃ能抑制ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性，ＰＤＤ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性明显提高。     

LAK细胞及其冻融液,培养上清液对肿瘤细胞的杀伤作用

目的研究ＬＡＫ细胞的活性诱导和杀伤机制。方法用ＭＴＴ法检测不同培养时间的ＬＡＫ细胞、ＬＡＫ细胞冻融液及培养上清液对肿瘤细胞杀伤作用的相关性以及对肿瘤的杀伤作用。方法加入终浓度为１ｍｇ／Ｌ的放线菌素Ｄ以阻断检测过程中肿瘤增殖对实验结果影响。结果①ＬＡＫ细胞冻融液和培养上清液的杀伤活性与ＬＡＫ细胞活性呈正相关（ｒ分别为０．９９６和０．９９９，直线相关性ｔ检验Ｐ＜０．００１和０．００５）；②动态杀伤分析显示，ＬＡＫ细胞动态杀伤活性与ＬＡＫ细胞冻融液、培养上清液之间不呈直线性相关（ｒ分别为０．８４７，０．７９９，Ｐ值均＞０．０５），而ＬＡＫ细胞冻融液和培养上清液间则呈显著直线相关（ｒ为０．９６９，Ｐ＜０．０１）。这表明ＬＡＫ细胞对肿瘤细胞的杀伤方式为快速杀伤，而ＬＡＫ细胞冻融液和培养上清液对肿瘤细胞的杀伤方式则为慢杀伤，ＬＡＫ细胞杀伤活性明显高于ＬＡＫ细胞冻融液。结论ＬＡＫ细胞活性诱导与胞浆内细胞毒因子表达有关；ＬＡＫ细胞可能通过释放细胞毒因子对肿瘤细胞起直接杀伤作用；ＬＡＫ细胞通过与肿瘤细胞直接接触释放杀伤介质，而导致肿瘤细胞凋亡，是其高效、快速杀伤肿瘤细胞的作用机制。     

植物血凝素及淋巴因子激活的杀伤细胞体外抗肿瘤作用的MTT比色法分析

目的　检测植物血凝素及淋巴因子激活的杀伤细胞（ＰＨＡ－ＬＡＫ）的体外广谱抗肿瘤作用。方法 用ＭＴＴ比色法测定 ＰＨＡ－ＬＡＫ对体外培养的Ｋ５６２、ＭＧｃ８０－３、１４３ＴＫ－、ＨｅＬａ、ＬｏＶｏ等５种肿瘤细胞的杀伤活性。结果ＰＨＡ－ＬＡＫ对５种不 同组织器官来源的肿瘤细胞均有明显杀伤活性,在效靶比为７．５：１．０时,ＰＨＡ－ＬＡＫ对１４３ＴＫ－细胞的杀伤率可高达 ５７．３％,杀伤效应随效靶比增加而升高;但在效靶比为１５：１时,杀伤效应不随效靶比增加而增高数。结论　（１）来自健康献血 员的ＰＨＡ－ＬＡＫ对肿瘤细胞具非特异性杀伤活性,能较好解决传统过继免疫治疗中免疫效应细胞的数量和活性问题; （２）在一定的条件下,ＭＴＴ法用于检测免疫效应细胞的杀瘤作用时才具灵敏、可靠的优点。     

T—AK细胞上清液抑瘤活性的研究

本文应用ＭＴＴ比色法检测了ｒＩＬ－２和抗ＣＤ３单抗共同诱导激活的Ｔ－ＡＫ细胞培养上清液对Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制效应，并观察了Ｔ－ＡＫ上清液抑瘤活性与Ｔ－ＡＫ细胞杀伤活性的相关性，结果表明：（１）Ｔ－ＡＫ细胞能够自发分泌一些抑制Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制因子，但活性很低；（２）Ｔ－ＡＫ细胞在杀伤Ｋ５６２细胞过程中释放的抑制肿瘤细胞生长的物质，抑瘤活性比较高，共     

乳腺癌细胞抗原和自身淋巴结树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞作用研究

目的：从乳腺癌患者淋巴结　中分离和定向诱导培养扩增　树突状细胞（ＤＣ），观察其经自身肿瘤细胞抗原冲击后对自身细胞因子诱导的杀伤细胞（ＣＩＫ）　杀伤活性的影响。方法：取手术切除肿瘤周围转移的淋巴结，提取单个核　细　胞，将贴壁生长的细胞用细胞因子基因重组粒巨集落生长因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）、基因重组白介　素４（ｒｈＩＬ－４）、基因重组α－肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－α）联合诱导培养ＤＣ，然后用　自身肿瘤细胞抗原冲击ＤＣ并作用ＣＩＫ，最后检测ＣＩＫ杀伤３种靶细胞（自身乳腺癌细胞、Ｋ５６２和　ＳＧＣ－７９０１细胞）的活性。结果：乳腺癌患者转移淋巴结中的贴壁细胞，经　细胞因子联合诱导培养，ＤＣ含量可达１５．３％～３７．０％。经自身肿瘤抗原冲击的淋巴结ＤＣ活化的Ｃ　ＩＫ，杀伤自身肿瘤细胞活性达７１．３％，单纯ＣＩＫ为３７．０％，两者比较差异有显著性（Ｐ＜０　．０１）；而对Ｋ５６２和ＳＧＣ－７９０１细胞杀伤活性无明显差异。结论：肿瘤周围转　移淋巴结贴壁细胞在体外能定向诱导扩增出大量ＤＣ；ＤＣ经自身肿瘤抗原冲击后能明显提高ＣＩ　Ｋ对自　身肿瘤细胞的杀伤活性。     

螺旋藻多糖对CD3AK细胞增殖能力的影响

研究了螺旋藻多糖（ＰＳ）对ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＭｃＡｂ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ，ＣＤ３ＡＫ ｃｅｌｌｓ）增殖能力的影响。结果表明，当ＰＳ浓度为２．５μｇ／ｍｌ培养体系条件下，对ＣＤ３ＡＫ细胞具有明显的刺激细胞增殖作用（Ｐ〈０．０２）；对培养长达２３ｄ的ＣＤ３ＡＫ细胞杀伤肿瘤细胞（ＫＬ５６２细胞）的活性仍维持在较高的水平（４６．５％￣５０％）。     

植物血凝素激活的LAK细胞激活培养条件与其生物学特性关系的研究

将ＰＨＡ和ｒＩＬ ２合理配伍应用于ＬＡＫ细胞的激活培养中，研究了ＰＨＡ ＬＡＫ细胞的增殖、细胞毒活性及表型。结果表明：培养条件中加入适量ＰＨＡ可促进ＰＨＡ ＬＡＫ的增殖（Ｐ＜０．０５），不影响其细胞毒活性。ＰＨＡ／ｒＩＬ ２共同预刺激组于培养第２ｄ细胞数明显下降（３０％～４０％），但其到达增殖高峰的时间、峰值及扩增倍数与同一培养条件下的ＰＨＡ单独预刺激组相比，差别无显著性（均为Ｐ＞０．０５）；但前者对Ｋ５６２和Ｒａｊｉ的杀伤高峰值大于后者（Ｐ＜０．０１）。各组ＰＨＡ ＬＡＫ中有０．６０～０．７７的细胞为ＣＤ３＋Ｔ细胞，但ＰＨＡ ＬＡＫ／ｒＩＬ ２共同预刺激者的ＣＤ３＋、ＣＤ８＋细胞所占比率较ＰＨＡ单独预刺激者为高（Ｐ＜０．０５）。     

硒酸酯多糖对CD3AK细胞活性的增强作用

目的：研究硒酸酯多糖（ＫＳＣ）对ＣＤ３ＡＫ细胞增殖活性和杀瘤活性的增强效应。方法：应用ＣＤ３单抗（ＣＤ３ＭｃＡｂ）和小剂量ｒＩＬ－２从正常外周血单个核细胞中诱生ＣＤ３ＡＫ细胞；观察ＫＳＣ在诱生和扩增阶段对ＣＤ３ＡＫ细胞增殖特性（增殖指数、激活率、克隆率和分裂指数）、ＩＬ－２Ｒ表达水平和对Ｒａｊｉ、Ｌ４２１０细胞杀伤活性的影响。结果：ＫＳＣ（５μｇ／ｍｌ）单独对ＣＤ３ＡＫ细胞的殖无明显作用，但增强Ｉ     

妇科肿瘤患者CD3AK细胞对卵巢癌细胞杀伤活性动态观察

为探讨妇科良，恶性肿瘤患者ＣＤ３ＡＫ细胞体外肿瘤细胞的杀伤活性，将５例妇科良性肿瘤，１２例妇科恶性肿瘤患者的外周血单个核细胞制备成ＣＤ３ＡＫ细胞，用ＭＴＴ法测定ＣＤ３ＡＫ细胞对卵巢癌细胞的杀伤活性，同时观察不同效靶比的杀瘤情况，每周测定１次，共４周。     

LAK细胞治疗慢性活动型乙型肝炎的疗效与机理研究

目的观察淋巴因子激活杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）治疗慢性活动型乙型肝炎（ＣＡＨ）的疗效，探讨治疗机理。方法ＬＡＫ细胞治疗４０例患者，治疗前、疗程结束时，分别检测ＨＢＶＭ，ＡＬＴ，Ｔ细胞亚群，Ｂ细胞，ＩＬ－２，ｍＩＬ－２Ｒ，ＮＫ及ＬＡＫ细胞活性。疗程结束１ａ复查ＨＢＶＭ。对照组４０例。结果ＬＡＫ治疗组疗程结束时，ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ转阴率分别为２２．５％和４０．０％，与对照组相比差异显著（Ｐ均＜０．００１）。疗程结束１ａ复查ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ转阴率分别达４０．０％和６８．６％。治疗后患者ＣＤ＋４细胞数及ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比值，ＩＬ－２水平及ｍＩＬ－２Ｒ表达，ＮＫ细胞及ＬＡＫ细胞活性均较治疗前明显升高（Ｐ均＜０．０１）。尤以ＨＢｅＡｇ转阴者，ＩＬ－２升高更显著（Ｐ均＜０．００５）。结论ＬＡＫ细胞疗法有增强免疫功能、调节免疫紊乱和清除乙肝病毒的效用，但主要不是ＬＡＫ细胞的溶细胞作用。