鼠巨细胞病毒感染诱导小鼠精子凋亡及线粒体调控机制研究

目的 研究鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对小鼠精子凋亡的影响,探讨MCMV感染诱导小鼠精子凋亡的线粒体调控机制.方法 建立小鼠睾丸MCMV急性感染模型(n=15),以正常小鼠作为对照(n=15),采用流式细胞术(FCM)与激光扫描共聚焦显微术(LCSM)对不同感染时段的小鼠附睾尾部成熟精子进行凋亡与线粒体膜电位的检测,同时应用电镜观察不同感染时段的精子线粒体超微结构的改变.结果 MCMV感染第2天起精子凋亡率开始升高,第4天达最高值(39.3±1.0)%,随后逐渐下降(F=362.822,P＜0.05).而感染第1天的精子线粒体膜电位增加至74.0±1.4,第2天开始下降至63.0±2.2,第4天降至最低40.2±2.3,随后缓慢回升(F=32.257,P＜0.05).MCMV感染可引起精子线粒体超微结构的损伤,以感染第2～6天为重.结论 生殖器官MCMV急性感染可诱导附睾尾部成熟精子的凋亡;精子线粒体主动参与并调控了精子的凋亡过程.     

特发性弱精子症线粒体功能和超微结构研究

目的观察特发性弱精子症的精子线粒体功能和超微病变结构,探讨线粒体在精子活力特性中的作用。方法根据特发性弱精子症诊断标准,筛选特发性弱精子症患者151例,根据A级精子活动力分成3组,15％≤A组〈25％、5％≤B组〈15％、C组〈5％。3组精子线粒体均作功能检测和电子显微镜观察,并与53例正常已育男性作比较。结果A、B、C3组线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）着色率、线粒体膜电位（MMP）着色率与正常组比较差异有统计学意义（t=28．12、38．82、64．71;t=21．34、33．60、44．99,均P〈0．01）。各组间线粒体结构病变出现的频率差异有统计学意义（x^2=60．85,P〈0．01）。病变线粒体数量随着精子活力的减低而增加（回归x^2=479．72,回归系数b=0．86,P〈0．01）。随着精子活力的下降,线粒体病变程度也随之加剧（回归x^2=435．89,回归系数b=0．80,P〈0．01）。结论特发性弱精子症的精子线粒体存在多种不同性质的病变及功能障碍,精子活力与线粒体结构及功能密切相关。     

线粒体钙摄取蛋白1表达下降导致脓毒症小鼠骨骼肌功能障碍

目的 观察脓毒症对骨骼肌功能的影响,并探讨骨骼肌线粒体钙摄取蛋白1(mitochondrial calcium uptake protein 1, MICU1)的作用。方法 选择SPF级健康雄性C57/BL 6J小鼠40只,随机分为4组：假手术组（Sham组,n=8）;脓毒症建模6 h组（CLP-6 h组,n=10）;脓毒症建模12 h组（CLP-12 h组,n=10）;脓毒症建模24 h组（CLP-24 h组,n=12）。采用盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture, CLP）构建脓毒症模型,Sham组小鼠仅行开腹盲肠探查。另选取SPF级小鼠20只,一侧胫前肌空转染腺相关病毒（AAV）作为对照（AAV-C）,另一侧胫前肌转染AAV提高MICU1表达（AAV-M）。小鼠随机分为2组：假手术组（AAV-C-Sham,AAV-M-Sham;n=8）和脓毒症建模24 h组（AAV-C-CLP,AAV-M-CLP;n=12）。于相应时间点检测小鼠抓力以及复合肌动作电位（compound muscle action potential, CMAP）。采用ELISA测...     

巨细胞病毒脑内感染小鼠听觉诱发电位的变化

目的 探讨脑内感染小鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,MCMV）后脑干听觉诱发电位（auditory brainstem response,ABR）的变化,以明确经脑内感染MCMV后小鼠ABR是否出现异常改变,从而验证经脑内感染MCMV能否建立巨细胞病毒（CMV）感染致听力损伤的动物模型,并在此基础上观察更昔洛韦对CMV感染致听力损伤的干预效果.方法 将24只新生小鼠按窝随机分成正常对照组、模型组、干预组3组,对照组经脑内注射无菌生理盐水10 μl,模型组与干预组经脑内接种TCID50为1×105 U/ml的MCMV病毒悬液10 μl,同时干预组在接种MCMV后第2天开始腹腔注射更昔洛韦60 mg/（kg·d）,连用2周.2周后在小鼠麻醉状态下应用脑干听觉诱发电位仪在电屏蔽装置中检测小鼠的ABR,并记录ABR的波形以及Ⅰ波的潜伏期、波幅.结果 模型组与正常对照组相比潜伏期延长、波幅降低（F=9.151,P=0.011;F=5.095,P=0.043）,更昔洛韦干预组与模型组相比潜伏期缩短、波幅升高（F=13.797,P=0.003;F=14.587,P=0.002）,差异有统计学意义.结论 经脑内感染MCMV可以引起小鼠ABR的异常改变,脑内感染MCMV可建立CMV感染致听力损伤的动物模型,婴幼儿CMV感染后早期应用更昔洛韦对CMV感染致听力损伤的进行性发展有一定的抑制作用.     

弱精子症患者精子凋亡和线粒体膜电位等相关研究

目的 比较正常人与弱精子症患者精子早期凋亡率、线粒体膜电位、活性氧及钙离子含量的差异,探讨其与精子活力的相关性.方法 收集50例精液标本,标本洗涤处理后分别行Annexin V-FITC/PI、JC-1、DCFH-DA及Fluo3-AM荧光染色,采用流式细胞术(FCM)分析两组精子早期凋亡率、死亡率、线粒体膜电位、活性氧及钙离子含量.结果 与对照组精子比较,弱精子症组精子早期凋亡率显著增加(P＜0.01),线粒体膜电位明显降低(P＜0.01),两组精子死亡率,精子内活性氧及钙离子含量无统计学意义(P均＞0.05);精子早期凋亡率与线粒体膜电位丧失率间呈显著正相关(r=0.789,P＜0.01).结论人精子早期凋亡率增加及线粒体膜电位降低可能是弱精子症的重要病因;线粒体膜电位检测对预测精子早期凋亡具有重要的应用价值.     

白藜芦醇改善多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢颗粒细胞线粒体功能和抑制凋亡的作用

目的：观察白藜芦醇对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）模型大鼠卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响以及线粒体的形态和功能的改变,并探讨其可能的保护机制。方法：32只雌性SD大鼠幼鼠随机分为2组,PCOS模型组（n=24）和模型对照组（n=8）。成功提取PCOS组颗粒细胞并体外培养,然后用不同浓度的白藜芦醇处理颗粒细胞,CCK-8法检测细胞活力的变化;Mito Tracker Deep Red染色观察细胞线粒体的形态变化;JC-1检测线粒体膜电位的变化;ATP检测试剂盒检测ATP的变化;分光光度计检测与凋亡密切相关casppase-3和caspase-9酶活性变化;最后,蛋白免疫印迹法检测颗粒细胞内caspase-3和caspase-9蛋白水平的变化。结果：白藜芦醇处理PCOS模型大鼠卵巢颗粒细胞后,颗粒细胞的增殖活性明显增强（P=0.000）;Mito Tracker Deep Read染色结果显示线粒体质量明显增加,形状呈管状或长条状;颗粒细胞内ATP产量和线粒体膜电位也明显增加（P=0.000、P=0.000）。另外,白藜芦醇也降低了caspas...     

小鼠睾丸巨细胞病毒感染对精子顶体反应与膜功能的影响

目的探讨小鼠睾丸巨细胞病毒(MCMV)感染对附睾尾部精子顶体反应与膜功能的影响。方法随机选择无MCMV感染史的BALB/c雄性小鼠48只作为实验组,睾丸直接接种MCMV,分别于感染后第1、2、4、6、9、14天处死小鼠,用地高辛标记的MCMVM83mRNA寡核苷酸探针对睾丸组织进行原位杂交,检测睾丸MCMV感染情况,同时取附睾尾部成熟精子进行精子顶体反应与精子膜低渗肿胀功能检测。另设平行对照组雄性小鼠30只(同法随机选择),睾丸接种不含MCMV的细胞培养液,其他处理方法同实验组。结果实验组48只雄性小鼠睾丸组织间质及(或)生精细胞中均出现原位杂交阳性信号。实验组精子顶体反应与膜功能在接种病毒后的第2天、第4天,精子顶体反应率(58%±9%、56%±9%)低于平行对照组(71%±6%、70%±7%)(P均<0.05),精子膜尾部低渗肿胀率(48%±9%、38%±8%)低于平行对照组(60%±7%、50%±4%)(P均<0.05)。结论小鼠睾丸MCMV感染模型成功建立。小鼠睾丸MCMV急性感染可导致精子顶体反应与膜功能的显著下降。     

生物信息学鉴定低氧诱导小鼠肾脏线粒体损伤的Hub基因及其作用机制

目的 利用生物信息学分析挖掘低氧介导线粒体损伤的关键基因,并分析关键基因与小鼠肾脏组织凋亡的相关性,进一步阐明高原低氧条件下小鼠肾脏组织损伤的分子作用机制。方法 构建30 d常氧与低氧动物模型,分别作为平原常氧组(n=5)和高原低氧组(n=5),测定血气分析指标与小鼠肾脏指数,通过H&E染色观察小鼠肾脏组织病理学改变,对平原常氧组与高原低氧组小鼠肾脏组织进行转录组学测序。随后将测序得到的差异表达基因(DEGs)分别与线粒体数据库、凋亡相关基因数据库进行关联,鉴定差异线粒体功能相关基因(DE-MFRGs)与差异凋亡相关基因(DE-ARGs),蛋白质互作(PPI)网络筛选Hub基因,利用生物信息学对DEGs、DE-MFRGs、DE-ARGs进行富集分析,并通过RT-qPCR和Western blotting对Hub基因及凋亡基因进行验证。结果 与平原常氧组相比,高原低氧组小鼠肾脏指数显著下降。H&E染色结果显示,高原低氧组小鼠肾小球明显萎缩,肾小管上皮细胞肿胀、破裂,炎细胞浸润,部分肾小管上皮细胞体积增大,胞浆疏松淡染,可见空泡变性。低氧暴露条件下共鉴定出3 007个DEG...     

睾丸Clock基因下调后小鼠精子前向运动百分率降低的机制

目的 通过对睾丸精子超微结构的观察和实验室前期数据的生物信息学再分析,探讨睾丸Clock基因下调使小鼠精子前向运动百分率降低的机制。 方法 选取SPF级ICR雄性小鼠（8周龄）14只,随机分为实验组和对照组,每组6只,另2只小鼠作为免疫共沉淀实验样本。获取小鼠Clock基因下调的睾丸组织,透射电镜观察其中精子的超微结构。结合对实验室前期数据再分析的结果,ELISA检测睾丸组织中α-KGDH的活性,并以RT-qPCR检测睾丸中二氢硫辛酸脱氢酶（DLD）的转录组水平。最后在野生型小鼠睾丸组织中验证CLOCK蛋白与DLD蛋白的相互作用关系。 结果 与对照组相比,实验组Clock基因的表达显著降低（P＜0.001）;实验组睾丸中精子细胞线粒体形态和排列出现异常;差异蛋白的GO和KEGG富集分析提示,实验组精子线粒体中三羧酸循环限速酶α-KGDH的亚基构成蛋白之一的DLD明显下调 （P＜0.05）;与对照组相比,实验组睾丸α-酮戊二酸脱氢酶复合体（α-KGDH）酶活性明显降低（P＜0.05）;与对照组相比,实验组睾丸Dld基因mRNA水平也明显下调（P＜0.05）;而野生型小鼠睾丸中CLOCK蛋白与DLD蛋白能够相互作用。 结论 睾丸Clock基因的下调可导致小鼠精子线粒体结构和功能蛋白发生改变,从而限制了线粒体能量的产出,最终导致精子前向运动百分率降低。     

PINK1-Parkin线粒体自噬在创伤性脑损伤小鼠中的作用

目的探讨PINK1-Parkin线粒体自噬在创伤性脑损伤(TBI)中减轻神经细胞线粒体功能障碍及凋亡的保护作用。方法 36只小鼠随机分为野生对照组(野生小鼠接受假手术)(n=6);基因对照组(Parkin-/-小鼠接受假手术)(n=6);野生模型组(野生小鼠接受TBI)(n=18),并将其分为TBI 1、3、5 d组,各6只小鼠;基因模型组(Parkin-/-小鼠接受TBI)(n=6)。采用控制性皮层损伤法建立TBI模型。Western blot检测线粒体自噬相关蛋白(PINK1表达、Parkin移位)及凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase-3);JC-1法检测线粒体膜电位;TUNEL法检测神经细胞凋亡;干湿重比法检测脑水肿;mNSS评分评价小鼠神经功能缺损。结果与野生对照组比较,野生模型组PINK1及线粒体Parkin表达显著增加,细胞质Parkin表达显著下降,其中在第3天最为明显,分别为(326.0±21.9)%、(300.0±23.1)%及(57.0±6.6)%;与野生对照组比较,野生模型组第3天脑组织含水量、mNSS评分、神经细胞线粒体JC-1单体含量、凋亡率、cleaved caspase-3及Bax表达显著增加为(77.3±3.5)%、(9.7±1.5)分、(143.5±22.6)%、(16.3±3.9)%、(184.0±19.5)%及(201.0±21.7)%,Bcl-2表达显著下降为(77.0±5.1)%。与野生模型组比较,基因模型组第3天脑组织含水量、m NSS评分、神经细胞线粒体JC-1单体含量、凋亡率、cleaved caspase-3及Bax表达进一步显著增加为(83.0±4.3)%、(13.8±1.9)分、(194.5±26.1)%、(34.2±6.9)%、(297.0±15.0)%及(303.0±28.5)%,Bcl-2进一步显著下降为(57.0±7.0)%。结论在TBI小鼠中,PINK1-Parkin线粒体自噬通过减轻神经细胞线粒体功能障碍及凋亡发挥神经保护作用,针对PINK1-Parkin线粒体自噬的干预可能作为治疗TBI的潜在治疗靶点。     

肥胖男性不育患者精子线粒体膜电位、游离脂肪酸、活性氧的关系

目的：探讨肥胖男性不育患者精子线粒体膜电位的改变,以及线粒体膜电位与精浆中游离脂肪酸、活性氧之间的关系。方法按照研究条件,随机整群选取正常生育男性51人（对照组）、正常体重指数不育男性36人（正常体重不育组）、超重不育男性44人（超重不育组）、肥胖不育男性45人（肥胖不育组）。精液常规分析,ELSA法检测精浆中游离脂肪酸、活性氧,流式细胞仪检测精子线粒体膜电位。结果线粒体膜电位正常率的比较中正常体重不育组（27.34%±13.38%）、超重不育组（28.26%±9.76%）、肥胖不育组（25.27%±7.51%）均低于对照组（35.12%±15.90%）,差异有统计学意义（P<0.01）。肥胖不育组中线粒体膜电位正常率虽然低于正常体重不育组及超重不育组,但差异无统计学意义。精子线粒体膜电位正常率与精子前向运动率呈明显正相关（r=0.29,P<0.01）。精浆中游离脂肪酸与精浆中活性氧呈明显正相关（r=0.30,P<0.01）,精浆中活性氧与精子正常线粒体膜电位呈明显负相关（r=-0.24,P<0.01）。结论超重及肥胖男性不育患者精浆中游离脂肪酸增高,引起活性氧增加,活性氧使得线粒体膜电位下降,最终可能导致精子运动能力下降。治疗时应考虑建议患者减少高脂餐、适当运动。     

线粒体活性对人类精子活动力的影响

目的:分析线粒体活性对人类精子活动力的影响。方法:以线粒体特异性荧光染料——mitotracker deep red 633(MTDR对不同活力的精子进行染色,然后用流式细胞术测定精子线粒体活性(即MTDR荧光强度值)。用雷帕霉素(rapamycin,RP)和羟氯喹(hydroxychloroquineon,HCQ)调控精子活性水平,测定精子活动力的变化。结果:MTDR荧光强度值与前向运动速率(progressive motility,PR)不相关(r=0.182,P=0.268)。5 nmol/L和100 nmol/L的RP均可明显降低线粒体活性,50μmol/L HCQ可明显提高线粒体活性(P<0.05),但它们对精子活动力影响都不明显(P>0.05)。结论:线粒体活性对人类精子活力影响不明显。     

姜黄素调控脂多糖诱导成骨细胞线粒体功能改变及凋亡研究

目的：研究脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）和姜黄素（curcumin,Cur）对成骨细胞线粒体功能活性改变及凋亡的影响。方法：体外培养小鼠原代成骨细胞,并将细胞分为4组：无任何处理的对照组（N组）;10 μmol/L姜黄素预处理2 h,使用正常培养基培养24 h组（Cur组）;用1 mg/L LPS处理24 h组（LPS组）;用10 μmol/L姜黄素预处理2 h,然后再用1 mg/L LPS处理成骨细胞24 h组（Cur +LPS组）。利用线粒体荧光探针测量线粒体活性氧的产生,检测线粒体氧化呼吸链酶活性、线粒体膜电位、细胞内ATP的合成及细胞凋亡情况。结果：在经过1 mg/L LPS刺激后,小鼠成骨细胞线粒体内活性氧（reactive oxygen species,ROS）生成为对照组的2.59倍;与对照组相比,LPS组氧化呼吸链酶Ⅰ活性降低21%,氧化呼吸链酶Ⅲ活性降低26%,氧化呼吸链酶Ⅳ活性降低28%;线粒体细胞膜电位降低32%,ATP合成量为（0.79±0.06） μmol/mg蛋白,细胞凋亡数目增加3.2倍;而Cur+LPS组较LPS组相比,小鼠成骨细胞内ROS水平降低（1.48±0.21 vs. 2.59±0.32,P=0.003）,氧化呼吸链酶Ⅰ活性升高（0.98±0.02 vs. 0.79±0.03,P=0.000）,氧化呼吸链酶Ⅲ活性升高（0.93±0.03 vs. 0.74±0.03,P=0.004）,氧化呼吸链酶Ⅳ活性升高（0.92±0.05 vs. 0.72±0.02,P=0.009）,线粒体膜电位增加（0.91±0.04 vs. 0.68±0.04,P=0.002）,ATP合成量增加（1.53±0.05 vs. 0.79±0.06,P=0.000）,细胞凋亡数目减少（1.67±0.42 vs. 5.33±0.80,P=0.002）。结论：姜黄素预处理组的成骨细胞线粒体功能得以明显改善,并且细胞凋亡数目明显减少,为姜黄素可能被进一步应用于临床治疗慢性牙周炎提供一定的实验依据。     

黄芪注射液对阿霉素中毒性小鼠心肌细胞凋亡及细胞线粒体膜电位的影响

目的观察黄芪注射液对阿霉素中毒性小鼠心肌细胞凋亡及心肌细胞线粒体膜电位的影响。方法昆明小鼠60只,随机分为黄芪注射液治疗组（大、中、小剂量组）、阿霉素模型组和正常对照组,建立阿霉素中毒性心肌损伤模型,实验结束24 h后处死小鼠,取出心脏,应用流式细胞仪分析技术检测小鼠心肌细胞线粒体膜电位及心肌细胞凋亡百分率。结果（1）阿霉素模型组的心肌细胞线粒体膜电位小于其他各组（P＜0．05）;黄芪注射液各剂量组的心肌细胞线粒体膜电位小于正常对照组（P＜0．05）。（2）阿霉素模型组心肌细胞凋亡率高于正常对照组及黄芪注射液中、小剂量治疗组（P＜0．01）,但阿霉素模型组与黄芪注射液大剂量治疗组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论黄芪注射液可通过稳定细胞线粒体膜电位,抑制心肌细胞发生异常凋亡,保护心肌细胞。     

乙肝病毒表面蛋白及其抗体复合物对人精子功能的影响

目的：研究乙肝表面蛋白（HBs）与其单克隆抗体（MAb）复合物对人精子功能的影响,探讨乙肝病毒（HBV）损害人精子的可能机制。方法：对HBs-HBsMAb孵育后的精子活力进行分析,采用JC-1染料结合流式细胞术监测人精子线粒体膜电位（MMP）。结果：人精子在体外与25μg/mL的HBs和不同浓度（20、40、80μg/mL）HBsMAb共孵育后,活力好的精子百分比例显著下降（P〈0.01）,MMP也下降。结论：HBV可能通过HBs-HBsMAb对人精子功能产生负面影响。     

不育症患者精子凋亡率与精浆活性氧水平检测及相关性分析

目的检测不育症患者精子凋亡率与精浆活性氧水平并分析其相关性。方法92例男性不育症患者,分为精索静脉曲张（VC）组（n=32）、白细胞精液症组（n=30）和其他原因组（n=30）;另取24例成功进行体外授精精液样本作为对照组。采用计算机辅助精液分析系统行精液常规检测（精液pH值、精子密度和精子活力）,Annexin V／PI染色法检测精子凋亡率,TBA法检测精浆活性氧水平。比较不育症各组与对照组各精液参数的差异,分析各组精子凋亡率与精浆活性氧水平的相关性。结果不育症各组精子活力显著低于对照组（P〈0．01）,VC组和白细胞精液症组精子凋亡率和精浆活性氧水平显著高于对照组（P〈0．05或P〈0．01）。白细胞精液症组精浆活性氧水平与精子凋亡率呈显著正相关（r=0．573,P〈0．05）。结论精子凋亡率和精浆活性氧水平升高可能与VC患者和白细胞精液症患者不育相关,白细胞精液症患者活性氧水平升高可能是引起精子凋亡率升高的重要因素之一。     

不同时期胚胎线粒体拷贝数与胚胎自身形态学分型的关系研究

目的:探讨人类不同形态学分型的卵裂期胚胎和囊胚与自身线粒体拷贝数的关系。方法:选择在生殖中心因女性双侧输卵管梗阻行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）助孕顺利娩出健康胎儿后,自愿丢弃冷冻的卵裂期胚胎和囊胚用于科学研究。将冷冻的胚胎解冻复苏后,依据胚胎发育的时期,将所有胚胎分为卵裂期胚胎冷冻组（D3冷冻胚胎组,n=63）和囊胚冷冻组（D5冷冻胚胎,n=82）,再根据冷冻胚胎的形态学评分标准,将冷冻卵裂期胚胎分为优质胚胎组（n=38）和较差胚胎组（n=25）,将冷冻囊胚分为优质囊胚组（n=52）和较差囊胚组（n=30）。采用实时PCR检测胚胎线粒体拷贝数,比较不同阶段胚胎和相同阶段不同质量的胚胎与自身线粒体拷贝数的差异。结果:D3冷冻胚胎组线粒体拷贝数明显低于D5冷冻胚胎组（t=9.34,P<0.02）,D3冷冻胚组中优质胚胎mtDNA拷贝数高于质量较差胚胎组（t=6.62,P<0.01）,D5冷冻胚组中优质胚胎mt DNA拷贝数明显高于质量较差胚胎组（t=8.03,P<0.04）。结论:不同时期胚胎mt DNA拷贝数对胚胎的发育潜能有重要影响,mtDNA拷贝数越高,胚胎质量越好。     

低强度脉冲超声抑制脓毒症大鼠脾脏淋巴细胞的凋亡

目的 探讨低强度脉冲超声（LIPUS）对脓毒症SD大鼠脾脏淋巴细胞凋亡的抑制效应及可能机制。方法 通过盲肠结扎穿刺术建立脓毒症SD大鼠模型,将78只雌性SD大鼠随机分为超声组（LIPUS,n=26）、盲肠结扎穿刺组（CLP,n=26）和假手术组（Sham,n=26）。超声参数如下：声强200 mW/cm2,辐照时间20 min,频率0.37 MHz。观察各组大鼠术后72 h内的存活情况;苏木精-伊红染色法观察脾脏淋巴细胞的数量变化;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法和流式细胞术检测脾脏淋巴细胞凋亡情况;免疫组化、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测线粒体凋亡通路B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)的蛋白及m RNA的表达水平。结果 Sham组72 h内全部存活,LIPUS组的存活率显著高于CLP组（P<0.05）;与CLP组相比,LIPUS组脾脏淋巴细胞凋亡率显著降低（P<0.05）,Bcl-2的蛋白及mRNA表达水平显著升高（P<0.05）,Bax及Caspase 3的蛋白及m RNA表达水...     

甲基转移酶样3抑制剂STM2457通过调节线粒体功能改善代谢相关脂肪性肝病

目的 探讨甲基转移酶样3(METTL3)特异性抑制剂STM2457在代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）中的作用及机制。方法动物水平：15只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为基础组（CD组,n=5,10%低脂饲料喂养16周）、高脂组（HFD组,n=5,60%高脂饲料喂养16周,建模MAFLD）、STM2457组（STM组,n=5,60%高脂饲料建模小鼠MAFLD后,给予STM245750 mg/kg腹腔注射2周）。斑点杂交实验（Dot-blot）检测小鼠肝组织m6A修饰水平,检测各组肝组织匀浆甘油三酯（TG）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）含量,HE染色观察小鼠肝组织形态,IPGTT和IPITT检验小鼠胰岛素抵抗程度,代谢笼实验检测代谢方式的改变,透射电镜(TEM)检测线粒体的形态。细胞生物学水平：油酸钠/棕榈酸钠作用48 h诱导建立人肝癌细胞株HepG2脂肪变性模型（FFA）。STM2457组在诱导脂肪变性的同时给予STM2457(1μmol/L)作用48 h,通过线粒体膜电位荧光探针（JC-1）检测线粒体功能。结果 经高脂饮食诱导建立的MAFLD模型小鼠,其肝组织中m...     

白藜芦醇通过影响线粒体膜电位诱导HepG2细胞凋亡

目的 研究白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的机制,探讨白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化。方法采用MTT法测定白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,通过荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡,电子显微镜观察细胞超微结构的变化,用Rhodaminel23和TMRE标记细胞线粒体膜电位（△ψ）,并分别通过流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜检测。结果低浓度白藜芦醇（≤25μmoFL）对HepG2细胞的生长抑制作用不显著,而高浓度白藜芦醇（〉25μmol／L）显著地抑制HepG2细胞的生长,且呈时间和浓度的依赖性（F=18．532,P〈0．05）;流式细胞术分析显示,白藜芦醇能显著诱导HepG2细胞凋亡,且呈浓度依赖性（P〈0．05）;白藜芦醇能降低HepG2细胞线粒体膜电位。结论白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡,白藜芦醇使HepG2细胞线粒体膜电位去极化,提示线粒体膜电位去极化在白藜芦醇诱导细胞凋亡的过程中起作用。