人胎盘绒毛膜滋养层细胞的培养

目的 建立纯度较高的适于试验研究的人绒毛膜滋养层细胞。方法 胰蛋白酶-DNase联合消化法培养人绒毛膜滋养层细胞，间接免疫染色进行细胞鉴定。透射电镜观察细胞内部结构。结果 倒置显微镜下，可见细胞呈不规则多角形，核大卵圆形，胞质透明，呈片状铺展生长，角蛋白染色阳性率超过95%，未检测到波形蛋白阳性细胞，表明不含污染细胞。透射电镜观察示所获细胞有典型滋养层细胞结构。结论 该法简便易行，可获得合乎试验要求的人绒毛膜滋养层细胞。     

组织块法培养人绒毛膜滋养层细胞

目的培养符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。方法用组织块法行原代培养,胰蛋白酶消化法行传代培养,免 疫组织化学染色进行细胞鉴定。结果６ｄ时,细胞开始由组织块边缘向外生长;１５ｄ时,即可进行传代。角蛋白染色示细 胞纯度达９５％以上。结论组织块法培养人绒毛膜滋养层细胞简便易行,可获得符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。     

组织块法培养人绒毛膜滋养层细胞

目的 培养符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。方法 用组织块法行原代培养,胰蛋白酶消化法行传代培养,免疫组织化学染色进行细胞鉴定。结果 ６ｄ时,细胞开始由组织块边缘向外生长;１５ｄ时,即可进行传代。角蛋白染色示细胞纯度达９５％以上。结论 组织块法培养人绒毛膜滋养层细胞简便易行,可获得符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。     

早孕期绒毛膜区的超声评估

目的：使用二维超声观察妊娠早期绒毛膜区的存在及变化。方法：回顾性分析在华中科技大学同济医学院附属同济医院分娩的126例孕妇的妊娠早期超声影像资料,以晚孕期胎盘位置做评估标准,分别测量妊娠早期底蜕膜和壁蜕膜侧的绒毛膜区的厚度并分析其变化趋势。结果：底蜕膜侧绒毛膜区厚度在妊娠第5～9周时分别为2.19 mm、3.60 mm、4.70 mm、6.10 mm、6.89 mm。壁蜕膜侧绒毛膜区厚度在妊娠第5～9周时分别为1.86 mm、2.12 mm、2.32 mm、2.14 mm、2.12 mm。结论：超声可见观察并评估妊娠早期底蜕膜侧和壁蜕膜侧绒毛膜区变化趋势。     

早孕期人绒毛组织的体外培养及绒毛膜促性腺激素分泌的动态观察

建立人孕６～８周绒毛组织块直接体外贴壁静止培养方法，对培养的绒毛滋养层细胞进行形态观察，并对绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）分泌的动态进行观察。结果表明：培养第２天滋养层细胞开始向外生长，第５天最旺盛，细胞生长可维持１０天左右。ＨＣＧ于培养第５天达高峰，第７天开始下降，第１３天降至可测水平以下。这种培养方法的建立不仅为抗早孕药物筛选提供一个离体模型，而且有助于滋养层细胞功能的研究。     

人早孕绒毛膜与蜕膜组织体外培养方法的研究

目的：探讨体外培养人绒毛膜组织和蜕膜组织的方法，并对其体外生长规律进行研究，方法：分别采取组织切割和胰酶消化处理两种人流组织，置RPMI－1640培养液，组织细胞可存活四周以上。结果：正常人流组织可在体外分离出绒毛膜组织和蜕膜组织，并能生长出单层组织，结论：分离培养的两种组织细胞可供体外基础与临床的实验研究。     

人绒毛外细胞滋养层细胞与蜕膜基质细胞共培养模型的建立

目的模拟体内环境,建立可保持绒毛外细胞滋养层细胞(EVCT)与蜕膜基质细胞(DSC)生物学特性的共培养细胞模型,应用于研究滋养细胞的侵袭行为。方法利用胰酶消化和BSA、Percoll梯度沉降,收集纯化人早孕绒毛组织的EVCT和DSC,分别放入Transwell的上下小室,观察该模型下细胞形态变化及侵袭特性,免疫组化、免疫荧光染色检测细胞的纯度。结果免疫组化显示EVCT的细胞角蛋白7阳性表达的细胞数占95%以上,阳性表达转化生长因子β2的细胞数占95%以上,DSC泌乳素阳性表达的细胞数也超过95%,证实共培养系统中EVCT和DSC纯度均在95%以上,且生物学特性得以维持。上室中的EVCT保持了其侵袭能力,在Matrigel包被的滤膜上EVCT的侵袭指数为3.22±0.04。结论适当的培养方法可获得高纯度的EVCT和DSC,并使其维持特有的生物学活性,成功地建立了共培养系统模型,便于研究滋养细胞侵袭和胚胎着床的机制。     

人胎盘绒毛滋养层细胞PTEN基因和PCNA的表达

目的研究人胎盘绒毛滋养层细胞中的10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensinhomology deleted on chromosome 10,PTEN)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达与意义。方法PCR检测胎盘PTEN的外显子以证明PTEN基因的存在,原位杂交检测胎盘绒毛滋养层中PTEN mRNA的表达,免疫组化染色方法检测胎盘滋养层细胞中PTEN与PCNA的表达。结果在所分析的28例胎盘中,PCR均检测到PTEN基因的3,4,5外显子,93%(26/28)胎盘绒毛滋养层表达PTEN mRNA较强,同样地,86%(24/28)胎盘滋养层细胞中PTEN蛋白表达强,而胎盘绒毛内小的间质细胞不表达或弱表达PTEN mRNA和PTEN蛋白。PCNA主要在细胞滋养层细胞中表达强,在合体滋养层细胞中呈阴性。结论PTEN的表达与人胎盘绒毛滋养层细胞形成有密切的关系,细胞滋养层是胎盘绒毛中可增殖的细胞。     

三苯氧胺对离体人早孕绒毛、蜕膜分泌功能的影响

目的　观察三苯氧胺对体外培养的人早孕绒毛、蜕膜组织细胞分泌功能的影响。方法　采用组织培养 ,放射免疫测定等。结果　 (1)在绒毛组织中 ,三苯氧胺可降低HCG、P、E2 及 6 -Keto -PGF1α水平 (P <0 0 5 ) ,升高TXB2 水平 (P <0 0 1) ,6 -Keto -PGF1α/TXB2 比值降低 (P <0 0 1)。 (2 )在蜕膜组织中 ,三苯氧胺显著降低E2 、 6 -Keto-PGF1α水平 (P <0 0 5 ) ,显著升高TNF -а水平 (P <0 0 1)。结论　三苯氧胺显著改变绒毛、蜕膜组织细胞的分泌功能     

Effect of Mifepristone and Anordrin Compound on Levels of Estrogen and Progesterone Receptor mRNAs in Human Decidua of Early Pregnancy

Objective To provide the theoretical fundation for the further clinical application of mi fepristone and anordrin compound. Materials & Methods Ribonuclease protection assay was used for the detection and quantitation of estrogen and progesterone receptor mRNAs in human decidua from the termination of early pregnancy. Three groups, each of which had 6～8 cases, were studied. Results Compared to the normal control group, estrogen and progesterone receptor mRNAs increased significantly (P＜0.05) in the mifepristone group, whereas the changes in the group administrated mifepristone compound which contains anordrin were not obvious. Conclusions The result suggests that with the similar clinical effect, mifepristone compound has less side effect on the patients, thus being more suitable for the anti-ear ly pregnancy drug.     

Effect of Mifepristone and Anordrin Compound on Levels of Estrogen and Progesterone Receptor mRNAs in Human Decidua of Early Pregnancy

Mifepristone( RU4 86) is a synthetic steroid thatacts mainly as a progesteroneantagonist and also affects the level of estrogen receptor[1 ,2 ] .Although at present,the clinical dosage for termination of early pregnancy is decreased to 1 50～ 2 0 0 mg,there are still some side effects such as bleeding,abdominal pain,weakness andthose on digestive system.Anordrin has an anti-implantation action. It has been used as an emergency an-tifertility drug since the early70 's,the oral administration d…     

Effect of Mifepristone on the Telomerase Activity in Chorion and Decidua during Early Pregnancy

Objective To investigate telomerase activity in chorion and decidua from abortion induced by mifepristone incorporated with misoprostol at early pregnancy. Methods TRAP-SYBR Green assay was used to detect the expression of telomerase. Forty specimen were obtained from medicinal abortion （experiment group） and forty were from normal induced abortion （control group）. Results Positive expression of chorion telomerase was significantly different between the experimental group （28%, 11/40） and the control group （73%, 29/40） （P〈0.05）. While in decidua, the positive rate was 28% （11/40） in the experimental group and 20% （9/40） in the control group, there was no significant difference （P〉0.05）. Conclusion It is suggested that miferistone may significantly decrease the telomerase activity in chorion but not in decidua.     

胰岛素样生长因子系统在人早孕绒毛滋养层细胞中的表达

目的　探讨胰岛素样生长因子系统 (IGFs)在体外培养的人早孕绒毛滋养层细胞中的基因表达及其作用。方法　采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)技术半定量检测体外培养的人早孕绒毛滋养层细胞中IGFs m RNA的表达。结果　体外培养的人早孕绒毛滋养层细胞中可以检测出 IGF- m RNA、IGF- R m RNA、IGFBP- 3m RNA的表达。结论　 IGFs可能在早期细胞滋养层的侵入、增殖分化、胎盘形成和胚胎生长发育过程中以自分泌和 /或旁分泌方式发挥重要的调节作用     

绒毛膜促性腺激素(HCG)及表皮生长因子受体(EGFR)在人早孕滋养层细胞的表达

目的对早孕绒毛膜滋养层细胞中EGFR、HCG的表达作定位、定性研究.方法取停经45～55天健康妇女人工流产的绒毛组织,固定,石蜡包埋,切片,用ABC法进行抗HCG及抗EGFR免疫组织化学染色,光镜观察.结果合体滋养层细胞HCG强阳性反应,细胞滋养层细胞HCG阴性,部分中间型滋养层细胞HCG阴性或弱阳性;合体滋养层和中间型滋养层细胞胞质和核膜EGFR中度阳性,细胞滋养层细胞膜、核膜EGFR中度阳性、胞质弱阳性,各层滋养层细胞核EGFR弱阳性.结论为进一步研究EGF/EGFR调控滋养层细胞合成分泌HCG奠定了基础.     

人早孕蜕膜组织中神经递质与神经肽含量的研究

于吸刮术时收集月经周期增殖期和分泌期的子宫内膜组织及妊娠6～11周的新鲜壁蜕膜组织。用高压液相色谱-电化学检测及放射免疫法对38例子宫内膜及70例早孕壁蜕膜组织中的各种神经递质、神经肽含量进行测定。证实早孕蜕膜组织富含神经递质、神经肽。其中DA、DOPAC显著高于子宫内膜中的量(P<0.05),且随妊娠时间的延长含量逐渐升高,β-EP及LH-RH的含量也显著高于子宫内膜组织(p<0.05),但随妊娠时间的延长含量逐渐下降。这一初步结果表明蜕膜组织可以合成神经递质、神经肽,其意义有待进一步深入研究。     

早孕人体蜕膜的体外培养及其催乳素释放动态的初步观察

本文建立了以尼龙网过滤组织块,对早孕蜕膜组织进行体外培养的简便的干贴壁方法。对培养的蜕膜细胞的形态、组织化学及催乳素的释放作了动态观察。催乳素放免测定示,在体外培养的第7d 时,蜕膜细胞释放的催乳素尚能被检测到。     

米非司酮终止早孕后对再次妊娠蜕膜ER、PR的影响

目的 :探讨米非司酮配伍米索前列醇 (米索 )中止早孕后对再次妊娠早孕蜕膜雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)的影响。方法 :取停经 4 9d内、无口服米非司酮史妇女早孕蜕膜绒毛 2 0例 ,分为两组 (Ⅰ、Ⅱ组 )。另取有使用米非司酮抗早孕史再孕妇女蜕膜绒毛 2 0例 ,分为两组 (Ⅲ、Ⅳ组 )。其中Ⅰ、Ⅲ组行人工流产 ,Ⅱ、Ⅳ组行药物流产。绒毛组织均行HE染色光镜下观察 ,蜕膜组织应用免疫组织化学方法及电子计算机图像分析技术观察ER、PR的变化。结果 :①Ⅰ、Ⅲ组合体滋养细胞及细胞滋养细胞无水肿变性 ,间充质无异常染色。Ⅱ、Ⅳ组绒毛水肿变性明显。②早孕蜕膜ER、PR均位于大部分间质细胞及少数腺上皮细胞的胞核内。 4组受体水平积分Ⅰ、Ⅱ组间有显著差异 (P <0 .0 1) ;Ⅲ、Ⅳ组间有显著差异 (P <0 .0 1) ;Ⅰ、Ⅲ组间及Ⅱ、Ⅳ组间均无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :①米非司酮配伍米索可引起早孕绒毛水肿变性坏死 ;②米非司酮配伍米索可使早孕蜕膜ER、PR水平下降 ,但月经恢复后ER、PR水平已回复至正常 ,再次妊娠后蜕膜ER、PR与未服用米非司酮及米索者早孕蜕膜ER、PR无差异。前次药物流产效果正常者 ,再次行药物流产同样有效     

巨噬细胞移动抑制因子mRNA在早期自然流产者蜕膜组织中的表达

目的研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA在早期自然流产者蜕膜组织中的表达,并探讨其与早期自然流产的关系。方法选择2010年11月至2012年1月深圳市罗湖区人民医院收治的自然流产者40例(自然流产组),同期选择要求进行人工流产的健康早孕妇女40例(正常妊娠组)。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测蜕膜组织中MIF mRNA的表达水平,并进行比较。结果自然流产组蜕膜组织MIF mRNA相对定量表达为1.19±0.25,显著低于正常妊娠组1.33±0.27,两组比较差异有统计学意义(t=2.502,P<0.01)。结论 MIF mRNA在早期自然流产患者蜕膜组织中表达水平下降,说明其可能在早期自然流产的发生、发展中起重要作用。