复合神经营养因子对大鼠视神经损伤后轴突数的影响

目的观察玻璃体腔注射复合神经营养因子[睫状神经营养因子(CNTF)+脑源性神经营养因子(BDNF)]对大鼠视神经损伤后轴突的形态和纤维数目变化的作用。方法60只雌性健康成年SD大鼠、体重200~225 g,随机分为对照组、CNTF治疗组、BDNF治疗组及复合神经营养因子(CNTF+BDNF)治疗组。各组又分为7、14、21 d 3个时间组,每组5只大鼠,每只动物进行单眼实验,另外一眼为正常对照。四组制成视神经损伤模型后分别向玻璃体腔内注射生理盐水、CNTF、BDNF、CNTF+BDNF。按视神经损伤后不同时间点,分别将动物灌注固定。完整取下视神经,固定,包埋,切片处理后进行图像分析,对正常大鼠视神经内的轴突数和夹伤后大鼠视神经内的轴突数的变化规律进行观察和分析。结果视神经轴突计数结果显示各组轴突数随时间推移逐渐减少。与对照组相比CNTF治疗组、BDNF治疗组及CNTF+BDNF治疗组7、14、21 d各组轴突数均明显多于对照组(P<0.01),且CNTF+BDNF治疗组轴突数亦明显多于单独应用CNTF治疗组、BDNF治疗组(P<0.01)。结论在对大鼠视神经损伤的治疗中,应用CNTF+BDNF明显优于单独应用CNTF或BDNF。     

复合神经营养因子应用于大鼠视神经损伤的研究

目的观察玻璃体腔注射复合神经营养因子(睫状神经营养因子,CNTF和脑源性神经营养因子,BDNF)对大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞存活的作用。方法60只健康成年大鼠、体重200～225g、雌性,随机分为对照组、CNTF治疗组、BDNF治疗组及复合神经营养因子(CNTF+BDNF)治疗组。各组又分为7、14、21d3个时间组,每组5只大鼠,每只动物进行单眼实验,另外一眼为正常对照。荧光金逆行标记视网膜神经节细胞(RGCs),7d后做成视神经损伤模型。4组术后分别向玻璃体腔内注射生理盐水、CNTF、BDNF、CNTF+BDNF。按视神经损伤后不同时间点,分别将动物灌注固定。做全视网膜铺片,荧光显微镜下观察,在每张视网膜距视乳头1mm部位随机取4个视野拍片,对每个视野中标记的RGCs进行计数,求平均值,计算视神经损伤后玻璃体腔内注射不同药物、不同时间所剩余的RGCs数。结果视神经夹伤后各组RGCs随时间推移逐渐减少。与对照组相比,CNTF治疗组、BDNF治疗组及CNTF+BDNF治疗组7、14、21d各组RGCs数均明显多于对照组(P<0.01),且CNTF+BDNF治疗组RGCs数亦明显多于单独应用一种神经营养因子的CNTF治疗组、BDNF治疗组(P<0.01)。结论在对大鼠视神经损伤的治疗中,应用CNTF+BDNF明显优于单独应用一种神经营养因子(CNTF或BDNF)。     

睫状神经营养因子对周围神经损伤后功能恢复的影响

目的：研究睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对受损周围神经功能恢复的影响。方法：将８０只大鼠左侧坐骨神经切断后行神经外膜吻合,随机分为两组。实验组腹腔内注入基因重组人ＣＮＴＦ,对照组注入等量生理盐水（ＮＳ）。术后行坐骨神经功能指数（ＳＦＩ）测定、电生理检测、轴突图像分析及霍乱毒素－辣根过氧化物酶（ＣＢ－ＨＲＰ）逆行追踪。结果：ＣＮＴＦ组ＳＦＩ恢复率、各项电生理及轴突图像分析指标、ＣＢ－ＨＲＰ标记的脊髓前     

睫状神经营养因子对大鼠急性高眼压视神经损害的保护作用

目的观察睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)对大鼠急性高眼压视神经损害的保护作用。方法用平衡盐液前房加压灌注制成大鼠急性高眼压模型,造模前2 d玻璃体内注入CNTF,利用计算机图像分析技术,造模后不同时期观察视神经轴突面积占视神经横截面积百分比。结果CNTF治疗组较对照组视神经轴突面积占视神经横截面积百分比明显增加(P<0.01)。结论CNTF能对急性高眼压视神经损伤提供保护作用。     

己酮可可碱通过抑制小胶质细胞激活减轻大鼠痛觉超敏和痛觉过敏

目的:观察己酮可可碱腹腔注射对大鼠坐骨神经分支选择性损伤致神经病理性疼痛的作用.方法:切断腓总神经和胫神经保留腓肠神经,制作坐骨神经分支选择性损伤模型.16只雄性SD大鼠从术前1 d起至术后6 d腹腔注射己酮可可碱100 mg·kg-1,qd.观察术前1 d和术后1,3,5,7和14 d大鼠的机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射持续时间(TWD);并测定不同组别脊髓小胶质细胞标志物0X-42的表达.实验同时设假手术组和坐骨神经分支选择性损伤模型组(n=16).结果:大鼠坐骨神经选择性切断后1 d起MWT降低、TWD延长,与假手术组比差异有显著性统计学意义(P<0.05);己酮可可碱组MWT增加、TWD缩短,与模型组相比差异有显著性统计学意义(P<0.05);己酮可可碱组部分坐骨神经切断后脊髓0X-42的表达和小胶质细胞阳性细胞数均显著减少.结论:己酮可可碱腹腔注射可抑制坐骨神经分支选择性损伤致脊髓小胶质细胞的激活,减轻痛觉超敏和痛觉过敏.     

BMSCs靶向移植联合EPO法对脊髓损伤组织多因子表达水平的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)靶向移植联合促红细胞素(EPO)的综合治疗方法对脊髓损伤的修复效果.方法 采用Western blot法检测对照组、模型组、BMSCs治疗组、EPO治疗组和BMSCs联合EPO治疗组大鼠的神经生长因子(NGF)、神经营养因子(NT-3)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经胶质细胞源性神经营养因子(GD-NF)和睫状神经营养因子(CNTF)的表达情况.结果 BMSCs联合EPO综合治疗较BMSCs、EPO单纯治疗更能提高NGF、BDNF、GDNF和CNTF的表达水平.结论 BMSCs联合EPO综合治疗有利于脊髓损伤的修复,具有良好的应用前景.     

脊髓脑源性神经营养因子表达水平评估大鼠坐骨神经缺损修复程度

目的研究应用脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)表达程度评价大鼠坐骨神经缺损修复情况。方法取大鼠30只,随机分成正常组、自体神经组和硅胶管组,每组10只。自体神经组将剪断的10 mm神经缝合于原处,硅胶管组用10 mm医用硅胶管桥接神经缺损,正常组不手术。饲养4个月,于脊髓腰膨大处取材,切片,免疫荧光染色,荧光显微镜下观察。结果各组脊髓前角内均有BDNF表达,表现为点状红色荧光,均匀弥漫分布,胶质细胞内及周围均有分布,未染出神经元。光密度正常组>自体神经组>硅胶管组。结论应用脊髓脑源性神经营养因子表达程度可以评价周围神经损伤的修复情况。     

CNTF与NGF对视神经损伤模型大鼠视网膜神经节细胞的影响

目的:本实验通过给视神经不全损伤模型大鼠玻璃体腔内注射外源性神经生长因子(NGF)及外源性睫状神经营养因子(CNTF),观察两种神经营养因子对视网膜神经节细胞是否具有一定的保护作用.方法:将30只Wistar大鼠随机分组,利用无创血管钳造成大鼠左眼视神经的不全损伤,右眼不予任何处理,作为正常对照组.并在造模成功后分别给予大鼠左眼玻璃体腔内注射NGF及CNTF各2μL,作为两组实验治疗组,实验对照组在相同时间给予大鼠左眼玻璃体腔内注射平衡盐溶液2μL.在大鼠视神经不全损伤后5d、10d时分别做RGC计数、光镜组织学观察及生长相关蛋白-43(growth associated pro-tein-43,GAP-43)免疫组织化学检测.结果:光镜下,伤后5d-10d光镜下观察实验组视网膜及视网膜神经节细胞均有不同程度水肿及肿胀,RGC数量明显比正常对照组下降,有明显的统计学差异(P＜0.01),两组实验治疗组视网膜神经节细胞数目明显高于实验对照组,具有明显统计学差异(P＜0.05).免疫组织化学染色结果,伤后5d实验组GCL层GAP-43表达均呈阳性,实验治疗组GAP-43的表达量明显高于实验对照组,具有明显统计学差异(P＜0.05).10d后实验治疗组GAP-43表达量达高峰,实验对照组GAP-43表达量明显减少,具有明显统计学差异(P＜0.05).结论:在视神经受损后NGF与CNTF能提高视网膜神经节细胞的存活率,延长GAP-43的表达时间并增加其表达量,对视网膜神经节细胞具有一定的保护作用.     

合成纳米纤维支架水凝胶对周围神经损伤的修复作用

目的探讨纳米短肽RADA16在大鼠周围神经损伤的再生作用。方法制作坐骨神经损伤的雌性SD大鼠钳夹模型和切断模型,将50只雌性SD大鼠分为假手术组、切断实验组、切断空白对照组、钳夹实验组及钳夹空白对照组5组,每组10只。记录大鼠术后30d坐骨神经传导速度。结果钳夹实验组神经传导速度较钳夹空白对照组快,差异有统计学意义（P〈0．05）;切断实验组与切断空白对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论自组装肽可促进大鼠坐骨神经的再生和修复。     

人参皂苷Rg1对大鼠视神经损伤病理改变的实验研究

目的研究人参皂苷Rg1对大鼠视神经损伤的影响。方法制作大鼠视神经损伤模型,设置实验组和对照组,腹腔注射人参皂苷Rg1,10mg／kg,连续注射20d,取视神经损伤眼和对照眼球及球后视神经,HE染色、SABC法免疫组织化学染色：Bcl-2、Neurocan表达情况。结果HE染色显示健康大鼠视神经组织细胞和视神经损伤组形态学有差异。免疫化学提示视神经损伤后神经细胞凋亡明显增多,人参皂苷Rg1腹腔注射能够明显改善细胞凋亡情况。视神经损伤后神经纤维蛋白表达明显增多,可能部分与其改善细胞凋亡情况有关,但机制尚不清楚。结论人参皂苷Rg1对大鼠视神经损有保护作用。     

新型神经吻合口制动动物模型的建立

目的 建立神经内制动实验动物模型,探讨周围神经损伤后机械牵拉力对神经再生的影响.方法 SD大鼠24只,随机分为实验组和对照组,每组12只.两组均建立神经损伤模型,实验组于坐骨神经远端套入硅胶导管,两端用医用粘合剂固定;对照组将坐骨神经断端吻合.评估实验组神经制动效果,观察两组术后8周神经电生理检测结果 及神经吻合口组织病理学.结果 实验组神经吻合口无位移,制动完全.术后8周实验组神经电生理检测潜伏期短于对照组,振幅高于对照组,神经吻合口周围结缔组织面积小于对照组,神经纤维再生数量多于对照组(P<0.05).结论 医用粘合剂、硅胶导管用于周围神经损伤后神经吻合口制动可促进神经纤维再生和动物模型的建立.     

黄体酮对视神经损伤大鼠视网膜神经节细胞微管相关蛋白-1B的影响

目的：观察并探讨黄体酮对视神经损伤早期视网膜神经节细胞微管相关蛋白-1B的影响,以期为黄体酮在视神经保护方面的作用提供实验依据。方法60只大鼠随机分为3组,每组20只。正常对照组不做任何处理,损伤1组制作右眼视神经夹伤模型,给予0)．9％氯化钠溶液腹腔注射,损伤2组制作右眼视神经夹伤模型,给予黄体酮腹腔注射。分别于损伤后1、3、7、14、28 d将3组大鼠右眼球摘除,取视网膜组织, HE染色光学显微镜观察视网膜形态学变化,并计数视网膜神经节细胞存活数量,免疫组织化学染色观察视网膜组织中MAP-1B在视网膜神经节细胞的表达情况。结果视神经损伤后损伤1组视网膜神经纤维层明显水肿,视网膜神经节细胞数目迅速减少,经黄体酮治疗的损伤2组视网膜形态改变轻微,视网膜神经纤维层轻度水肿,视网膜神经节细胞数目减少缓慢。损伤2组各时间段视网膜MAP-1B平均光密度值较损伤1组高,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论黄体酮可以通过增加细胞骨架蛋白MAP-1B减轻视神经损伤早期视网膜神经节细胞的损害,对视神经及视网膜有保护作用。     

大鼠外伤性视神经损伤后促凋亡基因P53、Bax和Caspase 3蛋白的表达

目的：观察大鼠外伤性视神经损伤后不同时间点的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)病理形态学改变,及P53、Bax和Caspase3蛋白表达变化规律,探讨外伤性视神经损伤发生机制及促凋亡基因的作用。方法：应用液压颅脑损伤仪建立大鼠视神经损伤动物模型,伤后1,3,5,7,9,14,28天处死,病理学观察RGCs的改变,免疫组化方法分析P53、Bax和Caspase 3在视网膜中的表达变化。结果：视神经损伤后l天RGCs开始减少,7天内呈快速减少,14天后减少速度减慢,28天后趋于稳定;P53、Bax、Caspase 3伤后表达明显增加,与对照组表达水平相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：视神经损伤后RGCs数目减少是其视功能下降的重要病理基础,凋亡是RGCs的死亡机制之一,促凋亡基因P53、Bax和Caspase3在RGCs凋亡发生中起重要作用。     

优化黏合吻合法修复神经专用导管结构的实验研究

目的优化神经导管结构参数,使其更适用于黏合吻合法修复神经技术。方法①取12只sD大鼠双侧坐骨神经,分为A、B、c3组（n=8）,插入导管神经长度分别为3、4、5mm,滴黏合剂于神经导管结合处待凝固后观察神经断端情况;②取12只SD大鼠双侧坐骨神经,随机分为D、E、F3组,导管内径1．5、1．8、2．0mm,分别将神经横断后的断端插入导管内,滴黏合剂于神经导管结合处待凝固后检测拉力强度;③取12只SD大鼠双侧坐骨神经,随机分为传统导管组（G组）、改进导管（表现有两个V形切口的神经导管）组（H组）,将神经插入导管,记录操作时间,观察导管内神经屈曲情况。结果①A、B组分别有5、2根发生黏合剂浸入神经断端,c组无一根发生。②D、E、F3组待黏合剂凝固后能承受的拉力值分别为（2．48±0．32）、（1．93±0．26）、（1．26±0．41）N。D组拉力值显著高于E、F组（t=4．08、t=7．08,P〈0．05）。③H组操作时间[（0．25±0．05）min]较G组[（1．20±0．10）min]显著缩短（t=23．81,P〈0．01）。H组发生神经断端屈曲现象的根数（1根）较G组（10根）大大减少。结论本实验推荐的神经导管结构参数及外形更适用于黏合吻合修复神经技术。     

鞘内西地那非能减轻神经病理性疼痛大鼠的痛觉高敏

目的观察鞘内注射西地那非对腰5(L5)脊神经切断大鼠痛觉高敏及对脊髓小胶质细胞活化、炎症细胞因子表达的影响。方法♂SD大鼠120只,随机分为5组(n=24),Ⅰ组:假手术组;Ⅱ组:L5脊神经切断模型鞘内注射生理盐水20μl;Ⅲ～Ⅴ组:L5脊神经切断模型分别鞘内注射3μg/20μl、10μg/20μl、30μg/20μl西地那非组。Ⅰ组仅暴露L5脊神经,Ⅱ～Ⅴ组均切断L5脊神经,术后d 7开始鞘内给药,Ⅰ、Ⅱ组注射20μl生理盐水,Ⅲ～Ⅴ组分别给予上述剂量西地那非,各组每天1次,连续5 d。测定各组大鼠术前1d,术后7、8、10、12 d机械痛阈(mechanical withdrawa1 thresh-old,MWT),术后8、10、12 d取L5脊髓,测定各组大鼠肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素1β(in-terleukin-1β,IL-1β)含量和小胶质细胞标记物白细胞分化抗原11b(cluster differentiation antigen 11b,CD11b)的mRNA表达水平。结果①术后7 d,与Ⅰ组相比,各组MWT明显下降(P<0.05),术后8、10、12 d与Ⅱ组相比,Ⅲ～Ⅴ剂量依赖地升高MWT(P<0.05)。②与Ⅰ组相比较,其余各组大鼠术后8、10、12 d TNF-α和IL-1β的水平及CD11b mRNA含量均明显上升(P<0.05),与Ⅱ组相比较,Ⅲ～Ⅴ于术后8、10、12 d明显剂量依赖地抑制了TNF-α和IL-1β及CD11b mR-NA的表达(P<0.05)。结论西地那非能剂量依赖性地缓解大鼠神经病理性痛觉过敏的发展,该效应可能与抑制脊髓小胶质细胞活性,减少TNF-α和IL-1β表达有关。     

生物粘接端端缝合法修复早期周围神经损伤的实验研究

目的观察以自体外周血为生物膜室的生物粘接端端缝合法修复损伤早期周围神经的效果。方法选用Wistar大鼠60只,制成坐骨神经损伤模型,然后在双目放大镜下分别用生物粘接端端缝合法和单纯端端缝合法修复大鼠损伤的坐骨神经。术后1、2、3、4、5、6周进行坐骨神经功能指数(SFI)测定,并分批处死,取坐骨神经进行离体神经传导速度(NCV)测定、电镜组织形态学观察。结果生物粘接端端缝合组在SFI、NCV两项指标上均优于对照组(P<0.05);实验组修复初期雪旺细胞增生明显,不同时间段的神经纤维再生速度、数目、髓鞘厚度明显优于对照组。结论生物粘接端端缝合法可以促进神经再生,加快神经再生速度与功能恢复。     

Effect of Botulinum Toxin Injection and Extracorporeal Shock Wave Therapy on Nerve Regeneration in Rats with Experimentally Induced Sciatic Nerve Injury

This study was designed to compare the roles of botulinum neurotoxin A (BoNT/A) and extracorporeal shock wave therapy (ESWT) in promoting the functional recovery and regeneration of injured peripheral nerves. A total of 45 six-week-old rats with sciatic nerve injury were randomly divided into two experimental groups and one control group. The experimental groups received a single session of intranerve BoNT/A or ESWT immediately after a nerve-crushing injury. The control group was not exposed to any treatment. Differentiation of Schwann cells and axonal sprouting were observed through immunofluorescence staining, ELISA, real-time PCR, and Western blot at 3, 6, and 10 weeks post-nerve injury. For clinical assessment, serial sciatic functional index analysis and electrophysiological studies were performed. A higher expression of GFAP and S100β was detected in injured nerves treated with BoNT/A or ESWT. The levels of GAP43, ATF3, and NF200 associated with axonal regeneration in the experimental groups were also significantly higher than in the control group. The motor functional improvement occurred after 7 weeks of clinical observation following BoNT/A and ESWT. Compared with the control group, the amplitude of the compound muscle action potential in the experimental groups was significantly higher from 6 to 10 weeks. Collectively, these findings indicate that BoNT/A and ESWT similarly induced the activation of Schwann cells with the axonal regeneration of and functional improvement in the injured nerve.     

自由基在视神经损伤后的毒性作用及氨基胍对其影响

目的观察氨基胍（aminoguaniding,AG）在兔视神经损伤后对视网膜超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量的影响,研究对视网膜神经节细胞（retinalganglioncell,RGC）的保护性作用机制。方法健康成年大耳白兔66只,随机分为正常对照组、损伤对照组和损伤治疗组,损伤组按损伤后ld、3d、7d、14d、21d分5组,每组6只。损伤组采用同一反向动脉夹夹闭视神经法制作动物模型。伤后2min耳缘静脉注射2％AG溶液（损伤治疗组）及等量0．9％氯化钠溶液（损伤对照组）,测定视网膜组织中SOD、MDA的含量。结果正常视网膜组织中含有一定量的MDA、SOD,视神经损伤后MDA含量逐渐升高,而SOD活力逐渐下降,至伤后14d时达到高峰,同一时间点损伤对照组和损伤治疗组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论兔视神经损伤后,AG通过对抗自由基的途径减少视神经损伤诱导的RGC凋亡。     

Vasoactive agent buflomedil up-regulated expression of vascular endothelial growth factor in a rat model of sciatic nerve crush injury

Objectives:

To study the effect of Buflomedil on the morphological repair on crush injury of sciatic nerve and also the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF).

Materials and Methods:

Rat sciatic nerves were crushed by pincers. All of the 400 Sprague Dawley rats were randomly divided into: Sham-operated; saline; saline + VEGF-antibody; Buflomedil; and Buflomedil + VEGF antibody groups. The expression of VEGF in dorsal root ganglia (DRGs), following crush injury to sciatic nerves, was studied by RT-PCR, immunohistochemistry. The effects of Buflomedil on expression of VEGF and repair of neural pathology were also evaluated.

Results:

VEGF mRNA was significantly increased in Buflomedil and Buflomedil + VEGF-antibody groups, compared with other groups. The number of VEGF-positive neurons was significantly increased in the Buflomedil and the saline groups. Besides, Buflomedil also caused less pathological changes in DRGs.

Conclusions:

The vasoactive agent Buflomedil may decrease the pathological lesion and improve the functional rehabilitation of peripheral nerves, which may correlate to upregulation of the expression of VEGF, following crush injury to the peripheral nerves.KEY WORDS: Crush injury, dorsal root ganglion, sciatic nerve, vascular endothelium growth factor, vasoactive agent