microRNA-34a增加奥沙利铂对结肠癌细胞敏感性的实验研究

目的:构建奥沙利铂耐药结肠癌细胞株(SW480/ADR),观察miRNA-34a对SW480/ADR细胞奥沙利铂敏感性的影响。方法:使用浓度梯度法构建奥沙利铂耐药细胞株(SW480/ADR)。miR-34a慢病毒转染SW480/ADR细胞,MTT法检测细胞增殖,Real-time PCR定量检测miR-34a表达,Western blot检测蛋白表达。结果:SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞miR-34a的2-△△Ct值为0.15±0.03、0.12±0.02和0.74±0.13,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。奥沙利铂对SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞的IC50值分别为8.64±1.54、24.16±3.72和11.52±1.22μmol/L,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞OCT-4蛋白的相对灰度值为0.096±0.014、0.352±0.053和0.136±0.017,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-34a可以显著降低结肠癌奥沙利铂耐药细胞OCT-4蛋白表达,逆转结肠癌细胞对奥沙利铂的耐药。     

miR-124靶向调控Notch 1通路影响肝癌细胞的增殖和迁移

[摘 要] 目的 探索微小RNA-124（miR-124）通过Notch1信号通路对肝细胞性肝癌（HCC）细胞增殖和迁移的影响。方法 将肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞HL7702作为受试对象。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测细胞中miR-124的表达。HepG2细胞转染miR-124模拟物（miR-124 mimic）后,CKK-8法检测细胞增殖活性,Transwell法检测细胞迁移能力。Western blotting检测Notch1信号通路表达。结果 在HepG2细胞中,miR-124表达低于人正常肝细胞HL7702[（1.00±0.00） vs （21.32±1.02）;P < 0.05];与对照组（无处理的HepG2细胞）相比,miR-124 mimic转染组中Hep G2细胞增殖明显降低[（0.44±0.01） vs（0.21±0.01）;P < 0.05],细胞迁移能力也降低[（12.00%±2.00%） vs （5.67%±1.52%）;P < 0.05];miR-124过表达可以明显抑制Hep G2细胞内Notch1信号通路蛋白表达[（100.00%±0.00%） vs （36.46%±2.36%）;P <0.05]。结论 本研究显示,miR-124可靶向抑制Notch1表达,进而抑制HCC的增殖和迁移。     

小干扰RNA沉默多药耐药相关蛋白基因2对人肝癌细胞HepG2多药耐药的逆转作用

目的 检测小干扰RNA(siRNA)对肝癌耐药细胞株HepG2/阿霉素(ADM)多药耐药相关蛋白基因2(MRP2)及其蛋白产物的抑制作用,观察对多药耐药性的影响.方法 使用浓度梯度法制作HepG2耐ADM细胞株(HepG2/ADM),ADM浓度从0.1～2.0 m/L:设计合成针对MRP2的siRNA小片段,转染HepG2/ADM耐药细胞,24 h后通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测siRNA对MRP2基因mRNA和蛋白的抑制效果;噻唑蓝(MTT)比色法观察抑制MRP2基因表达后,HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性变化,并计算各药物的半数抑制浓度(IC50).结果 HepG2/ADM对ADM、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱和奥沙利铂的IC50值分别为0.3204、3.8002、0.2014和0.1221;siRNA明显抑制了HepG2/ADM细胞MRP2基因mRNA和蛋白的表达(P＜0.05);转染MRP2-siRNA后,HepG2/ADM细胞对ADM、5-Fu、长春新碱和奥沙利铂的IC50值明显减小,分别为0.1023、1.4417、0.0452和0.0268.结论 用siRNA沉默MRP2基因能够逆转HepG2/ADM细胞对化疗药物的耐药性,MRP2基因与HepG2/ADM肝癌细胞的多药耐药性相关,可通过沉默MRP2基因提高耐药细胞对化疗药物的敏感性.     

miR-492、CD147在结肠癌细胞LS174T奥沙利铂耐药中的作用

目的:探讨miR-492、CD 147在结肠癌细胞LS174T奥沙利铂(L-OHP)耐药中的作用。方法:采用浓度递增法建立获得性L-OHP耐药的人结肠癌细胞耐药模型LS174T/L-OHP;MTT法测定LS174T细胞及LS174T/L-OHP细胞对L-OHP的生长抑制率,分别采用RT-PCR和Western blot方法对LS174T细胞和LS174T/L-OHP细胞行miR-492与CD 147的表达检测。结果:与LS174T细胞相比较,LS174T/L-OHP细胞中miR-492表达减少、CD 147表达增加。结论:miR-492可能通过调节CD 147的表达在结肠癌细胞L-OHP耐药中发挥作用。     

miR-30c对肝癌细胞增殖和周期及凋亡的影响

目的:观察过表达微小RNA-30c(miR-30c)对肝癌Hep G2细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:过表达miR-30c慢病毒载体转染Hep G2细胞为过表达miR-30c组,同时设立空病毒载体转染的阴性对照组和无转染的对照组。荧光定量PCR检测miR-30c表达水平,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果:对照组、阴性对照组和过表达miR-30c组miR-30c的2~(-△△Ct)值分别为0.16±0.04、0.15±0.03和0.58±0.14,其中对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P0.05),过表达miR-30c组miR-30c的2~(-△△Ct)值显著高于对照组和阴性对照组(P0.01)。过表达miR-30c组在24、48、72 h吸光度值显著低于对照组和阴性对照组(P0.01),对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P0.05)。对照组、阴性对照组和过表达miR-30c组G_2期细胞分别占整个细胞周期的(13.04±1.26)%、(12.43±1.18)%和(32.57±5.34)%,其中对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P0.05),过表达miR-30c组G_2期比例显著高于对照组和阴性对照组(P0.01)。对照组、阴性对照组和过表达miR-30c组凋亡细胞的比例分别为(5.74±1.15%)、(6.12±1.34)%和(24.42±4.45)%,其中对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P0.05),过表达miR-30c组凋亡细胞比例显著高于对照组和阴性对照组(P0.01)。结论:过表达miR-30可以抑制肝癌Hep G2细胞增殖,阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。     

微小RNA-19b对急性坏死性胰腺炎腺泡细胞坏死的作用

目的 观察微小RNA-19b(miRNA,miR-19b)在大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)中的表达变化及其对腺泡细胞坏死的作用.方法 建立ANP模型:接种AR42J细胞1×105个/孔于24孔板,24 h后加入200 μm/L牛磺石胆酸-3-硫酸酯二钠盐(TLC-S),1h后检测淀粉酶和miR-19b表达量.病毒转染及分组:转染腺病毒介导miR-19b模拟物(mimic)为mimic组,转染miRNA反义寡核苷酸链(AMO)为AMO组,转染空病毒组及未转染病毒的空白组,转染48 h后荧光检测转染效率,诱导ANP,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-19b的表达量,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染色法检测AR42J细胞坏死率.结果 TLC-S处理后AR42J细胞较未处理细胞淀粉酶水平[(1 084.5±64.9)U/L比(290.3 ±6.8)U/L]明显升高(P＜0.05),miR-19b表达量升高(2.51±0.14)倍,建立模型成功;mimic组miR-19b表达量较空病毒组升高(5.94±0.95)倍,AR42J细胞坏死率明显升高[(50.3±1.5)％比(39.6±2.3)％,P ＜0.05];AMO组miR-19b表达量降低(0.38±0.15)倍,AR42J细胞坏死率明显降低[(23.1±3.3)％比(39.6±2.3)％,P＜0.05];空病毒组比空白组miR-19b表达量、细胞坏死率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-19b表达量在ANP中升高,上调其表达,腺泡细胞坏死率增加,下调其表达,腺泡细胞坏死率降低.     

miR-122调控N-myc下游调节基因3对乙型肝炎病毒感染相关肝细胞癌生长的影响

目的探究微小RNA-122(miR-122)抑制乙型肝炎病毒(HBV)感染相关肝细胞癌生长的分子机制。方法检测肝癌细胞HepG2、HepG2.2.15及肝细胞LO2中miR-122及N-myc下游调节基因3(NDRG3)的mRNA及蛋白表达。将HepG2.2.15细胞分为转染miR-122组(转染miR-122模拟物)、转染对照组(转染miR-122模拟物的对照物)和不作处理的对照组, 检测各组细胞的miR-122、NDRG3 、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)表达变化, 比较各组细胞的迁移、侵袭和增殖能力。结果转染miR-122组的miR-122表达量为(2.32±0.05), 高于对照组的(0.48±0.09), 转染miR-122组NDRG3的mRNA及蛋白表达量分别为(0.45±0.15)、(0.43±0.08), 均小于对照组的(1.53±0.14)、(1.68±0.25), 差异均有统计学意义(均P<0.05)。转染miR-122组HBsAg、HBeAg及HBV-DNA表达量分别为(1.05±0.05)IU/ml、(0.69±0.09)NC...     

miR-124通过靶向调控PKM2基因的表达抑制前列腺癌PC3细胞的增殖

目的:探讨miR-124抑制前列腺癌PC3细胞增殖活性的机制。方法:利用荧光素酶报告基因验证miR-124能否靶向作用于丙酮酸激酶M2型(PKM2)3'端非编码区(UTR)。将miR-124 mimic转染至PC3细胞后,采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测前列腺癌PC3细胞PKM2 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测miR-124 mimic与PKM2 siRNA对PC3细胞生长活性的影响。结果:与人前列腺上皮细胞RWPE-1比较,PC3细胞中PKM2 mRNA和蛋白水平表达分别上调(5.12±0.35)倍和(4.05±0.20)倍(P0.05)。荧光素酶报告基因结果证实,PKM2是miR-124调控的靶基因,miR-124可特异性地结合于PKM2 mRNA的3'-UTR。转染miR-124 mimic 24 h后,PKM2蛋白水平下调至阴性对照组(0.16±0.04)倍(P0.05),但对PKM2 mRNA表达无显著影响(P0.05)。MTT结果显示,转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA都能显著抑制PC3细胞的增殖,但miR-124 mimic对PC3细胞生长活性的抑制能力较PKM2 siRNA强。转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA 24 h和48 h后,PC3细胞的增殖率分别为(66.20±5.10)%和(82.10±6.35)%(P0.05)、(49.34±2.37)%和(70.10±5.80)%(P0.05)。结论:miR-124可通过靶向调控PKM2基因的表达而抑制前列腺癌PC3细胞的增殖。     

微小RNA-181b及其靶基因肝癌缺失基因-1在肝癌发生中的作用

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-181b对肝癌缺失基因-1(DLC-1)的调控及其在肝癌发病中的作用.方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测4份正常肝脏组织,17份癌旁组织、肝癌组织及肝癌SMMC7721细胞、胚肝LO2细胞中miR-181b和DLC-1的mRNA和蛋白质表达水平.应用miR-181b抑制剂下调肝癌细胞SMMC7721中miR-181b表达后,实时定量聚合酶链反应和Westem blot检测SMMC7721细胞中DLC-1表达水平的变化.结果 miR-181b在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.162 ±0.004、0.175±0.021和0.656±0.034,肝癌组织高于正常肝组织(P＜0.05).miR-181b在SMMC7721细胞中的表达较LO2细胞上调(0.723±0.042和0.262±0.037,P＜0.01).DLC-1 mRNA在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.392±0.094、0.187 ±0.043和0.081 ±0.012,肝癌组织低于正常肝组织(P＜0.05);DLC-1蛋白在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.423±0.026、0.214±0.029和0.112±0.021,差异有统计学意义(P＜0.01).miR-181b抑制剂转染SMMC7721细胞后,DLC-1蛋白在空白组、转染组和阴性对照组的相对表达量分别为0.132±0.027、0.379±0.019和0.125±0.015,转染组较其他两组明显升高(P＜0.05).结论 miR-181b在肝癌组织中表达上调,其抑制DLC-1的表达可能是肝癌发生的重要机制.     

miR-21诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移

目的探讨miR-21诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移。方法人工合成miR-21 mimic/inhibitor及其对照组序列,分别转入前列腺癌细胞株C4-2、DU145中,收集细胞行RT-qPCR检测miR-21、FOXO1 mRNA表达,行Western blot检测FOXO1、E-cadherin和N-cadherin表达,行Transwell试验检测转染后前列腺癌细胞侵袭透膜能力变化。结果前列腺癌细胞株C4-2、DU145转染miR-21 mimic/inhibitor及对照序列后,RT-qPCR检测miR-21表达升高/降低明显(P0.05),RT-qPCR检测FOXO1 mRNA表达与miR-21一致。在Western blot结果中,转染miR-21 mimic前列腺癌细胞FOXO1、N-cadherin表达高于对照组,E-cadherin表达相反;转染miR-21 inhibitor前列腺癌细胞FOXO1、N-cadherin表达低于对照组,E-cadherin表达相反。Transwell试验显示,转染miR-21 mimic前列腺癌细胞侵袭透膜能力较对照组增强(P0.01),转染miR-21 inhibitor前列腺癌细胞侵袭能力较对照组减弱(P0.01)。结论 miR-21通过诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移。     

藤黄酸逆转人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂耐药性的作用及机制研究

目的探讨藤黄酸对多药耐药人结肠癌细胞株SW480/L—OHP的耐药逆转及其对多药耐药基因（MDR1）和P-糖蛋白（P—gP）表达的影响。方法采用逐步增加药物浓度的方法建立奥沙利铂耐药结肠癌细胞株SW480/L—OHP。噻唑蓝（MTT）法测定SW480/L-OHP细胞株的耐药指数和藤黄酸在无细胞毒浓度下对结肠癌细胞耐受奥沙利铂的逆转作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化,RT—PCR检测各组细胞MDRlmRNA表达水平,Westernblot检测各组细胞P—gP蛋白的表达水平。结果藤黄酸对结肠癌SW480及SW480/LOHP细胞增殖均具有抑制作用,且呈量效关系。奥沙利铂与低毒剂量藤黄酸共同作用SW480/L-OHP细胞,其Ic50显著降低（P〈0．05）,耐药逆转倍数为3．72。与奥沙利铂单药组相比,加入低毒剂量藤黄酸后,细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。藤黄酸作用后MDRlmRNA转录水平降低,同时下调了P—gp蛋白表达。结论藤黄酸部分逆转SW480/L—OHP细胞对奥沙利铂的耐药性,其机制与增加细胞内奥沙利铂的蓄积,抑制MDRl基因的表达及降低P—gp的表达有关。     

miR-1470对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨miR-1470对人肝细胞癌增殖和凋亡的影响。 方法 采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）检测人正常肝细胞株（LO2）和人肝癌细胞株（HepG2、Hep3B、Huh7）中miR-1470的差异表达；采用慢病毒转染肝癌细胞株，过表达（HepG2细胞株，过表达组）或敲减miR-1470（Huh7细胞株，抑制组）后，qPCR检测各组细胞miR-1470的表达；CCK8法检测细胞增殖改变；流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 miR-1470在肝癌细胞系HepG2、Hep3B和Huh7中的表达水平高于正常肝细 胞系LO2，HepG2、Hep3B、Huh7三种细胞系相对正常细胞表达量分别为：2.304±0.366、2.851±0.508、 5.768±0.445（均P＜0.05）。CCK8实验证实，过表达miR-1470组OD值在72 h显著高于对照组（P＜0.05），而抑制组显著低于对照组（P＜0.05）。流式细胞分析结果显示过表达miR-1470抑制肝癌细胞的凋亡（P＜0.05）；而miR-1470抑制组对比对照组，凋亡细胞显著增多（P＜0.05）。结论 miR-1470促进肝癌细胞增殖，抑制肝癌细胞凋亡。     

表柔比星+5-氟尿嘧啶、奥沙利铂对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的观察表柔比星、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶(5-FU)三种药物联合对人肝癌细胞株HepG2生长的影响,并探讨其可能发生的机制。方法设立空白对照组、表柔比星组、5-FU+奥沙利铂组、表柔比星+奥沙利铂+5-FU组。经MTT实验方法确认各药物48 h的IC50做为联合用药的浓度分别为表柔比星(3.44μmol/L)、5-FU(1.76 mmol/L)、奥沙利铂(6.89mmol/L),实时荧光定量PCR实验方法测定各组间Bcl-2基因、Bax基因表达的变化,Western blot实验方法测定各组间Bcl-2蛋白、Bax蛋白表达的变化。结果各用药组均够抑制HepG2细胞增殖、诱导细胞凋亡、增加Bax mRNA及Bax蛋白的表达,同时降低Bcl-2mRNA及Bcl-2蛋白的表达,且表柔比星+奥沙利铂+5-FU组的作用优于表柔比星组、奥沙利铂+5-FU组,差异有统计学意义(P0.01)。结论表柔比星+奥沙利铂+5-FU组能够明显抑制HepG2细胞的增殖,其联合作用可能通过促进Bax基因的表达,抑制Bcl-2基因的表达,从而加速肿瘤细胞的凋亡。     

miR-103通过抑制LATS2促进肝细胞肝癌侵袭转移的机制

目的研究原发性肝癌中miR-103的表达及对肝癌细胞系转移能力的影响。方法 RT-PCR检测miR-103在肝癌组织及肝癌源性细胞系中的表达。分别转染miR-103 mimic至L02细胞、转染miR-103抑制剂至HepG2细胞,CCK8法检测miR-103对细胞增殖的影响,TUNEL法检测miR-103对细胞凋亡的影响,Transwell实验检测miR-103对肿瘤细胞侵袭和转移的影响。生物信息学分析miR-103的靶基因,western blot验证靶基因表达与rmiR-103的相关性。结果 miR-103在肝癌标本和肝癌源性细胞系中表达上调,miR-103可以促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,Transwell实验结果表明miR-103增加细胞侵袭和转移能力。生物信息学分析表明拉特抑癌基因同源分子2(LA,TS2)为miR-103的潜在靶基因。miR-103的表达与LATS2呈负相关。结论以上数据证明miR-103通过抑制LA,TS2促进肝细胞肝癌侵袭转移,miR-103/LA,TS2失调有可能成为治疗肝癌的新靶点。     

沉默Lin28b基因表达促进人结肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性

目的 探讨人结肠癌细胞中Lin28b基因表达及其与奥沙利铂化疗敏感性之间的关系.方法 构建干扰Lin28b的shRNA质粒(sh-Lin28b),并转染至结肠癌细胞(Cac02、SW480和HCT116细胞);逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测结肠癌细胞中Lin28b在mRNA和蛋白水平的表达;用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测sh-Lin28b和奥沙利铂化疗协同作用,Transwell实验检测处理后的结肠癌细胞迁移能力.结果 RT-PCR和Western blot结果证实Cac02、HCT116及SW480结肠癌细胞中均有Lin28b基因表达,其中在SW480细胞中的蛋白表达量比在HCT116中高1.83倍.SW480和HCT116细胞中Lin28b的mRNA表达在50 nmol/L的sh-Lin28b作用下分别被下调36.4％和90.2％,在100 nmol/L的sh-Lin28b的条件下分别被下调61.8％和89.5％.CCK-8结果显示奥沙利铂处理48 h后,HCT116细胞的IC50值为(6.09±1.42) mg/L,SW480细胞升高34.3％,至(8.18 ±3.64) mg/L.sh-Lin28b联合奥沙利铂处理组比较于对照转染组(NC)抑制SW480和HCTll6细胞生存率分别为(55.10±0.78)％和(50.30±0.69)％.Transwell 实验结果显示SW480细胞的迁移能力在sh-Lin28b的作用下降低至(48.60±0.92)％.结论 沉默表达于结肠癌细胞的Lin28b,可显著抑制结肠癌细胞的迁移能力,并促进奥沙利铂的化疗敏感性.     

miR-26b的表达及其与Foxf2相互作用在乳腺癌细胞生物学行为中的作用

目的:探讨miR-26b在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的的影响。方法:比较正常乳腺细胞系MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7中miR-26b的表达差异。以无处理的MCF-7细胞为空白对照,分别检测MCF-7细胞转染miR-26b模拟物(miR-26b组)、空质粒(阴性对照组)后的miR-26b表达与增殖、迁移、侵袭能力,以及Foxf2的mRNA与蛋白表达的变化。用双荧光素酶报告系统检测miR-26b对MCF-7细胞中Foxf2转录活性的影响。结果:miR-26b在MCF-7细胞中的表达水平明显低于MCF-10A细胞(P0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,miR-26b组miR-26b mRNA表达水平明显升高、细胞增殖迁移、侵袭能力明显降低,Foxf2的mRNA和蛋白表达量均明显下调(P0.05)。转染miR-26b模拟物后,MCF-7细胞中Foxf2-3'UTR的转录活性明显抑制(P0.05)。结论:miR-26b在乳腺癌细胞中表达降低、增加其表达能抑制乳腺癌细胞的恶性生物学行为,机制可能与其下调Foxf2的表达有关。     

siRNA抑制S100A4蛋白对人胃腺癌细胞增殖和凋亡及化疗敏感性的影响

目的 研究应用小干扰RNA沉默S100A4蛋白后对人胃腺癌细胞BGC-823增殖、凋亡及化疗敏感性的影响.方法 人胃腺癌BGC-823细胞系转染siRNA,RT-PCR检测转染效果后将对数期胃腺癌细胞分为干扰组、阴性对照组、正常对照组,MTT检测不同浓度奥沙利铂对胃腺癌细胞中效浓度IC50值;绘制细胞生长曲线;TUNEL法检测细胞凋亡;RT-PCR检测各组细胞mRNA变化;Western blot检测蛋白水平的变化,计量资料选用t检验,SPSS17.0分析RT-PCR检测各组细胞mRNA的变化,Western blot检测蛋白水平的变化,细胞生长曲线描述细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,MTT法检测不同浓度奥沙利铂对胃腺癌细胞中效浓度IC50值.计量资料以((x)±s)表示,多个样本比较采用单因素方差分析和LSD检验方法.P＜0.05为差异有统计学意义.结果 RT-PCR结果显示BGC-823细胞转染S100A4siRNA 48 h后,S100A4mRNA的表达量分别为:(0.674±0.011)、(0.652±0.021)、(0.345±0.040),正常对照组与干扰组相比差异有统计学意义(P =0.012,P＜0.05),阴性对照组与干扰组差异均有统计学意义(P =0.000,P＜0.05),正常对照组与阴性对照组差异无统计学意义(P =0.380,P＞0.05);Western blot结果显示BGC-823细胞转染S100A4 48 h后表达量明显下调分别为:(0.654±0.025)、(0.642 +0.014)、(0.317 +0.061),正常对照组与干扰组相比差异有统计学意义(P=0.01,P＜0.05),阴性对照组与干扰组差异均有统计学意义(P=0.000,P＜0.05),正常对照组与阴性对照组无统计学差异(P =0.341,P＞0.05).S100A4siRNA转染后人胃腺癌BGC-823细胞增殖下降;TUNEL法结果显示转染后凋亡明显增加;MTT结果表明人胃腺癌BGC-823单用奥沙利铂中效浓度IC50分别为56.31 μmol/L,转染后奥沙利铂中效浓度IC50为0.654 μmol/L.结论 本研究结果表明,siRNA沉默S100A4蛋白后抑制胃腺癌细胞增殖、诱导凋亡并提高奥沙利铂化疗敏感性,提示S100A4可能是治疗胃腺癌的有效靶点.     

微小RNA-301表达与胃癌细胞对奥沙利铂敏感性的关系

目的:探讨胃癌组织中微小RNA-301(miR-301)表达水平与肿瘤细胞对奥沙利铂(L-OHP)化疗敏感性的关系。方法:收集75例新鲜胃癌组织及癌旁黏膜组织,荧光实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测组织中miR-301及B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、生存素(Survivin)、NFKB抑制物...     

miR-381-3p通过靶向ERK1/2/ETS1信号通路影响MC3T3-E1细胞成骨分化

目的 探讨miR-381-3p对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响和作用机制。方法 慢病毒转染细胞后实验分为NC mimic miR-381-3p组、mimic miR-381-3p组、NC inhibitor miR-381-3p组和inhibitor miR-381-3p组;运用实时荧光定量PCR(qR T-PCR)法检测不同组miR-381-3p的表达水平以验证转染效率;诱导MC3T3-E1细胞成骨分化后,检测各组细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性水平;茜素红染色法检测各组细胞的成骨矿化能力; qR T-PCR测定各组细胞中ALP、Runx2、PPARγ和ETS1 mR NA表达水平;蛋白免疫印迹法测定各组细胞中collagenⅠ、ALP、Runx2、PPARγ、ETS1、P-ERK1/2水平;并用MAPK/ERK通路抑制剂(PD98059)干预各组细胞后进行目的蛋白检测。结果 与NC mimic miR-381-3p组、mimic miR-381-3p组及NC inhibitor miR-381-3p组比较,inhibitor miR-381-3p组中细胞中ALP、Runx2、ET...     

靶向于人端粒酶逆转录酶的miR-138增强结肠癌细胞SW480对5-氟尿嘧啶的敏感性

目的 观察miR-138对结肠癌细胞SW480人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的影响,探讨miR-138模拟体mimic沉默hTERT在SW480对5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗药物敏感性中的作用.方法 流式细胞仪检测50 nmol/L和10 nmol/L miR-138模拟体(mimic)转染SW480后hTERT的表达;5μl异硫氰酸荧光素(FITC)标记的细胞核增殖抗原(Ki-67)抗体染色转染和未转染50 nmol/Lmimic的SW480,流式细胞仪检测1 mmol/L 5-Fu处理和未处理的细胞增殖;碘化丙锭(PI)单染和膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)-PI双染转染和未转染50 nmol/L mimic的SW480,流式细胞仪检测1 mmol/L5-Fu处理和未处理的细胞周期和凋亡状态.结果 miR-138 mimic在50 nmol/L和10 nmol/L时,hTERT表达率分别为(30.25±1.34)％和(60.03±2.78)％,而阴性对照组为(87.50±1.63)％;转染miR-138 mimic的SW480细胞组与非转染组Ki-67阳性细胞分别为(58.18±2.90)％和(83.45±2.41)％;sub-G0期分别为(27.33±1.70)％和(1.05±0.19)％;凋亡率达(29.50±2.27)％和(5.30±1.74)％;mimic转染组、5-Fu处理组和mimic转染与5-Fu联合组的细胞增殖率分别为(61.00±1.73)％、(57.00±2.03)％和(23.00±1.24)％,sub-G0期细胞分别为(28.12±1.47)％、(34.87±2.01)％和(70.94±3.04)％;凋亡细胞比例分别为(32.15 ±2.76)％、(40.07±2.58)％和(80.84±3.06)％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 MiR-138 mimic可以抑制SW480中hTERT表达并增强SW480对5-Fu的敏感性.