基质金属蛋白酶9与创伤性脑损伤

基质金属蛋白酶系(MMPs)是脑损害特异性血清标志物,其中MMP-9的作用尤为重要。MMP-9可破坏血脑屏障,促进脑水肿形成,诱导脑创伤后神经细胞的死亡。基质金属蛋白酶抑制剂能抑制受激后脑内MMP-9的活性,减轻脑水肿的程度,有利于维持神经元生存微环境的稳定。MMP-9的表达水平有可能作为判断脑创伤发展和预后的指标。     

纳络酮预处理对脑出血大鼠脑组织水通道蛋白4及基质金属蛋白酶9表达的影响

目的 探讨纳络酮预处理对脑出血大鼠的保护效应及相关作用机制.方法 将30只雄性Sprague-Dawley大鼠(体质量280～350 g)按随机数字表法随机分为假手术对照组(Sham组)、脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)组和纳络酮预处理(Naloxone preconditioning,NP)组,每组10只大鼠.复制上述动物模型之前,NP组大鼠预先给予盐酸纳络酮(2.0 mg/kg),ICH组给予相同体积的生理盐水,随后制备ICH模型.切取并收集大鼠脑出血灶周围脑组织,分别采用RT-PCR和Western blot检测大鼠病变脑组织中水通道蛋白(aquaporin protein 4,AQP4)在转录水平和蛋白水平上的变化情况;同时采用免疫组织化学检测大鼠病变脑组织中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)的阳性表达情况.结果 相对于Sham组,ICH组大鼠脑组织中含水量明显增加(P<0.05),而经过纳络酮预处理后,大鼠脑组织中含水量明显减少(P<0.05);相对于ICH组,NP可有效降低脑出血大鼠脑组织中AQP4 mRNA和蛋白水平(P<0.01);同时,NP组大鼠脑组织中MMP-9阳性表达率明显下调(P<0.01).结论 纳络酮作为脑出血的一种有效的保护措施,其具体作用机制可能与其降低脑组织中AQP4的表达,从而减少脑水肿的发生及下调的MMP-9水平密切相关.     

重组人促红细胞生成素对大鼠创伤性脑损伤细胞凋亡的影响

目的研究重组人促红细胞生成素（rhEPO）对大鼠创伤性脑损伤的创伤灶周围神经细胞凋亡的影响。探讨rhEPO对大鼠创伤性脑损伤的保护作用。方法采用改进的Feeney氏法制作脑创伤模型，而后实验组立即腹腔注射5000u／kg rhEPO，对照组和假手术组注射生理盐水。于伤后12h、48h、120h处死动物，制作脑切片后行HE染色、TUNEL染色。结果rhEPO干预组与对照组、假手术组比较，各时间点rhEPO治疗组创伤灶周围TUNEL阳性细胞数比对照组显著减少，差异有高度统计学意义（P〈0．01）。结论rhEPO可以抑制神经细胞凋亡，对大鼠创伤性脑损伤具有保护作用。     

重组人促红细胞生成素对创伤性脑损伤大鼠炎性因子及线粒体损伤的影响

目的研究重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rh EPO)对创伤性脑损伤大鼠炎性因子及线粒体损伤的影响。方法将SPF级SD雄性大鼠随机分为三组,每组15只,分别为假手术组(sham组),模型组、rh EPO干预组(治疗组),模型组、治疗组采用改良过的Feeney自由落体撞击头部来建立创伤性大鼠模型,sham组大鼠不撞击脑部。造模结束后,治疗组每日定时以5000 IU/kg剂量rh EPO进行腹腔注射,sham组和模型组腹腔注射等剂量生理盐水。连续给药7 d后处死大鼠。罗丹明123(rhodamine 123,Rh 123)染色检测脑组织线粒体膜电位改变。免疫组化检测脑组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,L-1β),白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达。蛋白免疫印迹检测脑组织中线粒体动力学有关蛋白(动力相关蛋白1(Drp-1)、分裂蛋白1(Fis-1)、融合蛋白2(Mfn 2)、视神经萎缩蛋白1 (Opa 1)的表达水平。结果与sham组相比,模型组脑组织Rh123荧光强度明显减弱,IL-1β、IL-6、TNF-α、Drp-1、Fis-1蛋白的表达明显升高,Mfn 2、Opa 1蛋白的表达明显降低(均P<0.05)。与模型组相比,治疗组脑组织Rh123荧光强度明显增强,IL-1β、IL-6、TNF-α、Drp-1、Fis-1蛋白的表达明显降低,Mfn 2、Opa 1蛋白的表达明显升高(均P<0.05)。结论重组人促红细胞生成素可以减轻创伤性脑损伤后的炎性反应及线粒体损伤,从而起到对创伤性脑损伤后脑组织的保护作用。     

促红细胞生成素对单侧输尿管梗阻小鼠肾组织中基质金属蛋白酶-3及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2的影响

[目的]通过分析促红细胞生成素(EPO)对基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)的作用,探讨了EPO对肾间质纤维化进展过程的影响.[方法]选取2～4周龄雄性昆明种幼鼠,随机分为假手术组、肾间质纤维化模型组(UUO组)和EPO治疗组(EPO组).UUO组和EPO组采用结扎单侧输尿...     

创伤性脑损伤后肠黏膜核因子-κB和基质金属蛋白酶-9的表达

目的：研究创伤性脑损伤（TBI）后肠组织核因子-κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达，探讨其在肠黏膜屏障损害中的作用机制。方法：采用自由落体撞击法造成大鼠右侧顶叶脑挫裂伤。Wistar成年大鼠36只。随机分为对照组、TBI后3、12、24、72h和7d组，每组各6只。采用凝胶电泳迁移（EMSA）法测定NF—κB的活性。免疫组化测定MMP-9的表达。结果：TBI后肠组织NF-κB的活性和MMP-9的表达逐渐增强，TBI后72h达高峰，至伤后7d仍保持较高水平。NF-κB和MMP-9在表达时相和强度上基本一致。MMP-9的表达主要位于绒毛固有膜、隐窝和黏膜下层，阳性细胞包括血管内皮细胞、淋巴细胞和中性粒细胞。结论：TBI可引起肠组织NF-κB活性和MMP-9的表达明显增强。可能在肠黏膜屏障损害中起重要作用。     

清肺化痰通络方对肺纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的探讨清肺化痰通络方对博莱霉素A5（BLMA5）所致肺纤维化大鼠的干预作用及可能机制。方法将Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、干预组。模型组和干预组通过气管插管灌注BLMA5复制大鼠肺纤维化模型,对照组给予等量生理盐水气管灌注;对照组和模型组给予生理盐水灌胃,干预组给予清肺化痰通络方药物灌胃。灌胃后3、7、14、28d分别处死大鼠,采用HE和Masson染色观察肺组织病理变化,免疫组化染色检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9在肺组织的表达水平。结果清肺化痰通络方能显著改善大鼠的一般身体状况．减轻肺泡炎及肺纤维化的程度。干预组和模型组肺内MMP-2表达在第14天达到高峰,MMP-9的表达在第7天达到高峰,且两组同时期MMP-2、MMP-9的表达均高于对照组（P〈0．05）;干预组MMP-2、MMP-9表达低于同时期模型组（P〈0．01）。结论清肺化痰通络方可能通过抑制MMP-2、MMP-9在肺内的表达,对BLMA5致肺组织纤维化起到一定的防治作用。     

基质金属蛋白酶-9在缺氧后脑损伤中的动态表达

目的基质金属蛋白酶-9在早产儿缺氧缺血性性脑损伤中的具体作用机制仍然不是十分明确,本研究拟了解基质金属蛋白酶-9在缺氧大鼠脑组织中的蛋白表达,进而了解基质金属蛋白酶-9对于缺氧之后脑组织修复的具体作用。方法将72只3日龄新生SD大鼠随机分成正常对照组和缺氧组,每组各36只,对正常对照组大鼠不做任何处理,将缺氧组大鼠置于密闭容器中,充以8%氧气＋92%氮气的混合气体90 min。分别于造模1、3、7、14、21和28 d后留取脑组织,应用Western blot检测基质金属蛋白酶-9的表达情况。结果缺氧组大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9呈现动态表达变化规律,在缺氧早期（缺氧后1 d）,基质金属蛋白酶-9变化不明显,从缺氧后3 d开始表达升高,较正常对照组明显增加,至7 d达到高峰,14 d时表达有所降低,21 d和28 d时表达量与正常对照组相当。结论缺氧造成新生大鼠脑损伤时,基质金属蛋白酶-9的表达谱呈现高峰提前以及早期表达量升高的趋势,提示基质金属蛋白酶-9通过剂量的变化对缺氧后脑组织损伤进行了调节作用。     

大鼠脑缺血再灌注损伤与杏仁核基质金属蛋白酶-9、水通道蛋白4、热休克蛋白70的表达

目的 观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(CIRI)后杏仁核基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、水通道蛋白4(AQP4)、热休克蛋白70(HSP70)的表达变化,检测脑水肿,探讨其可能机制. 方法 线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞2 h/再灌注24 h模型.AutoCAD软件计算缺血侧脑水肿程度;免疫组织化学法检测杏仁核MMP-9、AQP4以及HSP70表达,计数阳性细胞数,图像分析系统作半定量分析. 结果 局灶性脑缺血2 h/再灌注24 h后,大鼠杏仁核MMP-9、AQP4及HSP70阳性细胞计数显著增多P-9(38.70±1.51) vs (4.00±1.27),AQP4(28.35±2.00) vs (1.00±0.80), HSP70(21.58±1.75) vs (2.00±0.99),(P＜0.01)],脑水肿程度[模型组(30.25±9.20)%,假手术组0,(P＜0.01)]. 结论 CIRI后杏仁核MMP-9、AQP4表达增加,参与继发性血脑屏障的开放和脑水肿的发生;而杏仁核HSP70表达增加,提示CIRI后杏仁核呈现明显的缺血性损伤反应.     

丙泊酚下调水通道蛋白3和基质金属蛋白酶-9表达抑制人肺癌A549细胞的侵袭力

目的探讨丙泊酚对人肺癌A549细胞水通道蛋白3（AQP-3）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达及其侵袭力的影响。方法 A549细胞经丙泊酚不同剂量（25、50、100 μmol/L）和不同时间（12、24 h）处理。用RT-PCR方法观察丙泊酚对A549细胞AQP-3 mRNA的作用,用Western Blot方法和Transwell侵袭实验分别检测不同浓度丙泊酚作用24 h对A549细胞AQP-3、MMP-9蛋白 表达和细胞侵袭力的影响。结果与空白组比较,25、50、100 μmol/L 丙泊酚24 h 处理组对AQP-3 mRNA表达的最大抑制比 值为0.13,最小0.41;12 h处理组最大抑制比值0.19,最小0.65,差异有统计学意义（P<0.05）;丙泊酚100 μmol/L组24 h达到最 大抑制效果（0.13±0.035）。25、50、100 μmol/L 丙泊酚24 h处理组AQP-3蛋白表达（0.91±0.009,0.60±0.020,0.57±0.006）和50、 100 μmol/L 丙泊酚24 h处理组MMP-9蛋白表达（0.65±0.006,0.46±0.021）,较空白组明显降低（P<0.05）。25、50、100 μmol/L 丙泊酚 24 h 处理组的穿膜细胞数（122.55±17.20,96.33±5.82,74.33±2.85）,较空白组（199.33±23.88）明显减少（P<0.05）。结论丙泊酚 50、100 μmol/L处理24 h,可下调人肺癌A549细胞AQP-3 mRNA、AQP-3蛋白和MMP-9蛋白的表达,抑制A549细胞的侵袭力。     

p38信号通路对大鼠脑创伤后MMP-9的表达及脑水肿形成的影响

目的观察并探讨阻断p38通路激活对大鼠脑创伤后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达变化及脑水肿形成的影响及意义。方法健康成年雄性SD大鼠130只,随机分为正常组10只,对照组40只:假手术处理;脑创伤组40只:制作改进式Feeney’s脑创伤模型;p38抑制组40只:脑创伤前15 min股静脉注射p38抑制剂(SB203580,400μg/kg)。分别在脑创伤后2 h、2 d时断头取脑,采用RT-PCR法和Western blotting法检测脑组织P38磷酸化水平及MMP-9 mRNA及蛋白表达水平,Evans Blue法测定血脑屏障通透性变化;干湿比重法测定脑组织含水量。结果(1)与对照组相比,脑创伤组磷酸化p38的水平在伤后2 h明显上升;MMP-9 mRNA和蛋白在脑创伤后2 h未见明显差异(P>0.05),但2 d时表达均显著增高(P<0.01)。与脑创伤组相比,p38抑制组伤后2 h时p38磷酸化水平明显降低(P<0.01),MMP-9 mRNA和蛋白在创伤后2 d时的高表达也均有明显下降(P<0.05);(2)与对照组比较,脑创伤组血脑屏障通透性在创伤后2 h明显增加(P<0.05),2 d时出现继续升高(P<0.01);脑含水量在创伤后2 h无明显变化(P>0.05),在2 d时显著增加(P<0.01)。与脑创伤组相比,p38抑制组血脑屏障通透性及脑含水量在创伤后均有明显降低(P<0.05)。结论阻断p38通路激活可下调大鼠脑创伤后MMP-9高表达,减轻血脑屏障破坏及创伤性脑水肿,提示p38信号通路可通过调节MMP-9的表达变化在创伤性脑水肿中发挥重要作用。     

阻断ERK信号通路降低大鼠脑创伤后MMP-9的表达及减轻脑水肿

目的 观察并探讨阻断ERK通路激活对SD大鼠脑创伤后基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达变化及脑水肿形成的影响及意义。方法 取健康成年雄性SD大鼠90只,随机分为：对照组：只在颅骨上做一直径约为4 mm的骨窗,不作脑创伤;脑创伤组：制作改进式Feeney’s创伤性脑损伤模型;ERK抑制组：脑创伤前15 min股静脉注射ERK抑制剂（SCH772984,500 μg/kg）,每组30只/组大鼠。制作改进式Feeney’s 脑创伤模型后,分别在脑创伤后2 h、2 d时断头取脑,Evans Blue法测定血脑屏障通透性变化,干湿比重法测定脑组织含水量,RT-PCR法和Western blotting法检测各组大鼠脑组织ERK磷酸化的水平及MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平。结果（1）与对照组比较,脑创伤组大鼠脑组织中ERK的磷酸化水平在伤后2 h和2 d均出现明显上升（P<0.01）,MMP-9mRNA和蛋白的表达在脑创伤后2 d时表达也出现显著增高（均P<0.01）;与脑创伤组比较,ERK抑制组大鼠脑组织中ERK的磷酸化水平在各时间点均明显下降（P<0.01）,MMP-9 mRNA和蛋白在伤后2 d的过表达水平也较脑创伤组出现明显降低（均P<0.01）;（2）脑创伤组大鼠的血脑屏障通透性较对照组在伤后出现显著升高（P<0.05）,ERK抑制组大鼠的血脑屏障通透性则较脑创伤组出现明显降低（P<0.05）;脑创伤组大鼠的脑含水量在伤后在2 d时出现显著增加（P<0.01）,ERK抑制组大鼠的脑含水量则较脑创伤组有明显降低（P<0.01）。结论 阻断ERK通路过度的活化可显著降低大鼠脑创伤后MMP-9高表达,减轻大鼠血脑屏障破坏及创伤性脑水肿,提示ERK信号通路在脑创伤后的过度活化可通过调节MMP-9的表达在创伤性脑水肿中发挥重要作用。     

甲基强的松龙对创伤性脑水肿中AQP4及MMP-9的影响

目的研究大鼠创伤性脑水肿皮质中AQP-4与MMP-9的表达关系及甲强龙对其表达的影响。方法采用成年雄性SD大鼠随机分为甲强龙组（n=25）、模型组（n=25）、假手术组（n=5）;甲强龙组和模型组均采用改进Feeney法制作脑损伤模型。甲强龙组致伤后即刻腹腔内给药,模型组则注射对应生理盐水。根据处死时间分为6h、24h、3d、5d、7d,5组。过度麻醉并断头取脑,对损伤皮层采用HE染色及免疫组化进行AQP4与MMP-9的检测。结果在模型组与甲强龙组中6h已可见AQP4与MMP-9的表达,MMP-9与AQP-4的表达均在3d达到高峰,模型组AQP4及MMP-9的表达显著高于甲强龙组（P〈0.05）,相关系数（r=0.753,P〈0.01）。结论创伤性脑损伤后大鼠AQP4与MMP9的表达呈正相关;甲强龙冲击治疗能够通过下调AQP4及MMP9的表达来发挥减轻脑水肿的作用。     

脑疏宁对颅脑创伤后大鼠血脑屏障通透性及MMP-9表达的影响

目的观察中药脑疏宁对创伤性脑损伤(TBI)大鼠血脑屏障(BBB)通透性及脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响,探讨中药保护血脑屏障的作用机理.方法按Feeney自由落体撞击法造成TBI模型,采用免疫组织化学技术观察大鼠脑组织MMP-9表达.结果模型组创伤后24h BBB破坏,脑组织含水量增加,病灶区MMP-9蛋白表达增高,脑疏宁组BBB通透性、脑组织含水量及MMP-9表达较模型组降低(P＜0.01).结论颅脑损伤后MMP-9表达增高,促使BBB破坏,导致血管源性脑水肿.中药脑疏宁可以保护BBB,降低脑组织含水量,其作用可能与抑制MMP-9在损伤脑组织中的表达有关.     

缬沙坦对肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后脑组织MMP-2和MMP-9表达的影响

目的:通过观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(Angiotensin receptor blocker,ARB)对肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后脑组织中基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响,探讨ARB的脑保护机制.方法:将Wistar雄性大鼠32只随机分为高血压组和正常血压组.前组采用狭窄肾动脉方法建立肾性高血压大鼠模型,再随机分为高血压缺血再灌注组(Hypertension ischemie reperfusion,HIR)和HIR缬沙坦组(G),分别采用生理盐水和缬沙坦12mg/kg进行灌胃治疗4周;正常血压组分为假手术组(N)和缺血再灌注组(Isehemic reperfusion,IR),分别行假手术和缺血再灌注处理.采用大脑中动脉线栓法造成大脑缺血再灌注模型,缺血时间为2h,再灌注22h.采用免疫组织化学技术检测脑组织 MMP-2 和 MMP-9 的表达,用图象分析仪测定灰度值.结果:与N组比较,IR组MMP-2、MMP-9灰度值明显增高(P<001);与IR组比较,HIR组 MMP-2、MMP-9 灰度值增高(P<0.05);与HIR组比较,G组 MMP-2、MMP-9 灰度值减少(P<0.01).结论:高血压加重缺血再灌注后脑组织 MMP-2 和 MMP-9 的表达;ARB能明显抑制脑组织 MMP-2 和 MMP-9 的表达.     

大鼠轻度脑外伤后水通道蛋白9在大脑皮质及海马的表达变化

目的研究轻度脑外伤（traumatic brain injury，TBI）后水通道蛋白9（AQP9）在脑组织中的表达变化规律，初步探讨AQP9对脑外伤的作用。方法采用Feeney自由落体法制作大鼠轻度脑外伤模型。用TTC法、免疫组织化学法、RT—PCR分别检测脑组织缺血程度、AQP9的表达及双侧大脑皮质和海马AQP9mRNA的变化。结果TTC染色结果显示．损伤早期脑缺血灶不明显，但随时间的推移，逐渐扩大，于72h达最大面积。AQP9及AQP9mRNA表达变化基本一致：TBI后1h，所测区AQP9 mRNA的含量均无明显变化，至3h，双侧大脑皮质及对侧海马AQP9 mRNA的含量明显增高，6h后降低；24h后，双侧大脑皮质及海马均再次明显增高，并于48-72h达峰值。结论TBI早期和继发性损伤期AQP9表达的上调可能分别与TBI应激和能量代谢调节有关。     

颅脑损伤后脑组织中水通道蛋白4表达的变化

目的研究颅脑损伤后水通道蛋白4（AQP-4）在脑组织中表达的变化及其临床意义。方法对27例颅脑损伤患者行开颅手术,将术中取得的挫伤水肿脑组织（损伤组）和颞极减压获得的相对正常脑组织（对照组）进行AQP-4的免疫组化和re-al- time PCR检测。结果损伤组各时点挫伤水肿脑组织AQP-4的表达量均明显高于对照组（均P＜0.05）;损伤24h后周围水肿脑组织中的AQP-4表达量显著升高。结论颅脑损伤后脑水肿的形成和发展与AQP-4的异常表达密切相关。     

乌司他丁对百草枯急性中毒大鼠肺组织MMP-9mRNA表达的影响

目的 探讨乌司他丁（UTI）对百草枯（PQ）急性中毒大鼠肺组织基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA的影响及肺损伤的肺保护作用机制.方法 将80只SD大鼠随机分成8组,每组10只,分别为正常对照组、UTI组和PQ中毒后12、24、48h组及PQ＋UTI 12、24、48h组,同时应用RT-PCR技术对各组大鼠肺组织中MMP-9的表达进行观察.结果 （1）通过大鼠行为学改变及肺组织切片证实PQ急性中毒模型成立.（2）PQ急性中毒组早期肺组织毛细血管扩张充血,肺组织炎症细胞浸润.（3） PQ组大鼠12、24、48h时肺组织MMP-9mRNA水平分别为（1.13士0.02）、（1.28士0.04）、（1.38士0.06）,PQ组大鼠经UTI干预后上述各时段肺组织MMP-9mRNA水平分别为（1.05士0.03）、（1.09士0.05）、（1.12士0.05）,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 UTI可明显减低PQ急性中毒大鼠肺组织MMP-9mRNA表达水平,可能是其防治PQ致肺损伤的机制之一.     

重型颅脑损伤患者血清及脑脊液中AQP-4水平表达及意义

目的 探讨重型颅脑伤患者血清及脑脊液中水通道蛋白质4（aquaporin-4,AQP-4）的表达水平及其意义. 方法 选取我科重型颅脑损伤46例手术患者,分别在手术时、手术后3d、手术后1周采集血清及脑脊液,应用酶联免疫吸附法检测血清及脑脊液中AQP-4水平. 结果 在手术时、手术后3d及手术后1周重型颅脑损伤患者血清及脑脊液均可检测到AQP-4,术后3d较手术时升高（P＜0.05）,术后1周AQP-4水平较术后3d降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）. 结论 重型颅脑损伤后患者血清及脑脊液中AQP-4水平随着病程进展变化,推测AQP-4可能参与了脑损伤过程.