RT-PCR检测乳腺癌患者外周血表皮生长因子受体和细胞角质蛋白-19mRNA的表达

目的　探讨逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR )方法检测乳腺癌患者外周血表皮生长因子受体(EGFR)mRNA作为乳腺癌循环肿瘤细胞标志的可能性及意义。方法　以转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,分别对40例乳腺癌患者和30例健康人静脉血进行EGFRmRNA检测,同时与目前研究较多的循环上皮细胞标志:细胞角质蛋白CK-19的mRNA做比较。结果　在30例健康人外周静脉血中没有发现EGFRmR NA的表达( 0% ),但有8例CK-19阳性( 26. 7% )。而40例乳腺癌患者检测出13例EGFRmRNA阳性(32. 5% ),与正常人相比P<0. 01,两组间存在显著性差异;CK-19的mRNA阳性例数为14 (35. 0% ),与正常人相比P>0. 05,两组间无统计学差异。通过免疫组化检测到25例( 62. 5% )的肿瘤组织中EGFR阳性,所有外周血中EGFRmRNA阳性的病例,相应的原发肿瘤病灶中EGFR蛋白均为阳性,组织中EGFR蛋白高表达的患者外周血EGFRmRNA检出率也高(P<0. 01)。26例初治患者中5例EGFRmRNA阳性(19. 2% ),14例复治患者中8例EGFRmRNA阳性(57. 1% ),两组相比P<0. 05,存在显著性差异。6例曾使用过紫杉醇类药物挽救化疗的转移性患者中1例EGFRmRNA阳性(16. 7% ), 8例未使用过紫杉醇类药物挽救化疗的转移性患者中7例EGFRmRNA阳性(87. 5% ),两组相比P<0. 05,存在显著性差异。结论　CK-19的     

乳腺癌组织中HSG和EGFR基因mRNA表达与其临床病理因素的相关性研究

目的探讨增殖抑制基因（HSG）与表皮生长因子受体（EGFR）在乳腺癌组织中的表达及与其临床病理因素的相关性.方法应用荧光定量PCR及免疫组织化学方法,检测在正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤组织及乳腺癌组织中HSG及EGFR的mRNA表达,研究两者的相关性.结果乳腺癌组HSGmRNA表达水平显著低于正常乳腺组和纤维腺瘤组（P〈0.05）,而EGFRmRNA表达水平则显著高于正常乳腺组及纤维腺瘤组（P〈0.05）.乳腺癌组织中HSG、EG-FR的mRNA表达水平与淋巴结转移、病理组织学分级、雌激素受体和HER 2显著相关（P〈0.05）.HSG与EGFR的mRNA表达呈负相关,γ=-0.427,P〈0.05.结论乳腺癌组织中HSG、EGFR的mRNA表达与肿瘤组织分化程度、淋巴结转移有关,为患者疾病程度的评估、预后评估及个体化治疗方案的设计提供临床依据.     

乳腺癌中BAG-1 EGFR和PARP-1的表达及其临床意义

  目的  观察乳腺癌组织芯片中BAG-1、EGFR和PARP-1的表达及其与临床病理指标的相关性,并探讨其临床意义。  方法  采用免疫组织化学法对159例组织芯片中乳腺癌和癌旁组织点行BAG-l、EGFR及PARP-1蛋白检测,同时分析其与临床病理指标的相关性。  结果  乳腺癌组织中BAG-1、EGFR、PARP-1蛋白表达水平显著高于癌旁组织（P < 0.05）。BAG-1蛋白表达水平与年龄、肿瘤部位、淋巴结转移数目、临床分期均无明显相关性,但与肿瘤大小、组织学分级、ER、PR和HER-2表达以及分子分型有关（P < 0.05）;EGFR蛋白表达水平与肿瘤大小、临床分期以及分子分型有明显相关性（P < 0.05）;PARP-1与组织学分级、淋巴结转移数目、ER表达以及分子分型有关（P < 0.05）。119例病例中BAG-1蛋白表达与EGFR、PARP-1蛋白表达无明显相关性,但在三阴性乳腺癌（TNBC）中BAG-1蛋白表达与PARP-1蛋白表达呈正相关（P < 0.05）。单因素分析结果显示,BAG-1、PARP-1蛋白表达和分子分型是影响乳腺癌患者预后的因素。多因素分析结果显示,BAG-1、PARP-1蛋白表达是影响乳腺癌患者预后的独立危险因素。  结论  乳腺癌中BAG-1、EGFR和PARP-1蛋白高表达提示其可能参与乳腺癌的发生发展,BAG-1、EGFR和PARP-1高表达可作为乳腺癌诊治和预后的生物指标。      

外周血人类斯钙素-1基因表达与乳腺癌微转移的关系

目的:检测乳腺癌患者外周血、肿瘤组织中hSTC-1mRNA的表达,判断外周血微转移状况,探讨微转移与肿瘤恶性程度之间的关系。方法:采用RT-PCR法检测乳腺癌组织、外周血中hSTC-1的mRNA表达,用免疫组化法检测乳腺肿瘤组织中ER、PR及VEGF的表达。结果:hSTC-1mRNA在乳腺癌患者癌组织中的阳性率为93.3%(28/30),在外周血中的阳性率为37.3%(19/51);17例非肿瘤成年女性患者外周血中未检测到hSTC-1的mRNA。血液中的hSTC-1的mRNA表达与多个临床病理因子有相关性(P<0.05),包括:肿瘤大小、腋淋巴结转移、TNM分期、ER、VEGF等;结论:乳腺癌患者外周血检测到hSTC-1基因的表达,说明乳腺癌已发生血行微转移,乳腺癌患者外周血hSTC-1的mRNA表达与多个临床病理因子有关;这些因子决定乳腺癌的预后,因此hSTC-1可以作为检测乳腺癌外周血微转移的一种新的分子标记。     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织与外周血中EGFR表达相关性研究

背景与目的 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在肿瘤细胞的增殖中起重要作用,肿瘤组织中EGFR表达水平可为肺癌的诊断、预后判断提供依据.本研究通过检测EGFR在非小细胞肺癌患者肿瘤组织和外周血中的表达,探讨利用外周血中EGFRBI表达水平来预测肿瘤组织中的表达并作为肿瘤标记物的可行性.方法 应用real-time RT-PCR技术检测46例非小细胞肺癌组织和10例肺良性病变组织中EGFK mRNA的表达;应用ELISA法检测46例非小细胞肺癌患者外周血中EGFR蛋白的表达,并以10例肺良性疾病患者的外周血作对照.结果 直线相关分析表明EGFR在外周血中的蛋白表达水平与肿瘤组织中的mRNA表达水平具有相关性(R2=0.83,P=0.016).结论 血清中EGFR蛋白水平的测定有可能替代肿瘤组织中mRNA的检测.为无法取得肿瘤组织或取到肿瘤组织困难的患者提供一种更快捷、简便的替代检测方法,尽早为临床选择治疗方法及预后判断提供依据.     

奥曲肽对TGF-α刺激EGFR和ERK表达的抑制作用

目的 研究奥曲肽对转化生长因子-α（TGF-α）刺激表皮生长因子受体(EGFR)和细胞外信号调节激酶(ERK)表达的影响。方法TGF-α刺激人肝癌细胞系SMMC-7721前后EGFR的表达以免疫组化法和RT-PCR检测，ERK的表达以免疫组化法和Western-blot检测。结果TGF-α使人肝癌细胞中EGFRmRNA和蛋白、ERK蛋白表达增加，奥曲肽对TGF-α刺激的EGFR和ERK表达增加具有明显的抑制作用。结论奥曲肽对TGF-α刺激的EGFR和ERK表达具有明显的抑制作用，这可能是奥曲肽抗肝癌的机制之一。     

乳腺癌特异性标志物人乳腺小黏蛋白的检测及临床意义

目的通过检测乳腺癌特异性的标志物人乳腺小黏蛋白（hSBEM）在良、恶性乳腺组织及外周血中表达，探讨其作为乳腺癌细胞血行转移标志物的可能性。方法应用巢式逆转录聚合酶链反应（nested-RT-PCR）技术，对67例乳腺癌、癌旁正常乳腺组织，16例乳腺良性肿瘤组织和患者外周血，以及20位健康志愿者外周血hSBEM的表达进行检测；同时分析胃癌、大肠癌、食管癌、肺癌和卵巢癌各5例组织中hSBEM的表达情况。结果hSBEM在乳腺癌、乳腺良性疾病及正常乳腺组织中的表达分别为92．54％（62／67）、87．50％（14／16）及88．05％（59／67），3组间差异无统计学意义（P〉0．05）；hSBEM在非乳腺癌的其他癌组织中无表达。67例乳腺癌患者外周血hSBEM检出率为50．75％（34／67），转移性及伴淋巴结转移乳腺癌患者外周血中hSBEM表达率明显高于局限性乳腺癌及无淋巴结转移者（P〈0．05）；hSBEM在健康人及乳腺良性疾病患者外周血中均无表达。hSBEM的表达与患者的年龄、原发肿瘤大小、病理类型、ER和PR的状态无关（P〉0．05）。结论hSBEM特异性表达于乳腺组织，乳腺癌患者外周血检测出hSBEM提示已有癌细胞进入血液循环，因此可作为检测乳腺癌血行微转移的标志物。     

radixin在乳腺癌组织中的表达及其与预后的相关性

目的:观察radixin蛋白表达与乳腺癌临床病理参数的相关性及临床意义。方法:收集散发性乳腺癌标本278例,乳腺纤维腺瘤组织46例,应用SP免疫组化法检测radixin蛋白的表达情况,并分析与乳腺癌患者临床病理参数的相关性。结果:乳腺癌中radixin蛋白表达阳性率为73.7%（205/278）,乳腺纤维腺瘤中radixin蛋白表达阳性率为32.6%（15/46）,与乳腺纤维腺瘤组织比较,radixin蛋白阳性表达率显著高于乳腺纤维腺瘤组织（P＜0.000 1）。在乳腺癌组织中,radixin蛋白表达与患者TNM分期、HER-2表达正相关,在临床分期高、HER-2表达阳性的组织中,radixin蛋白表达阳性率明显增加（P=0.023,P=0.007）。radixin蛋白表达与患者年龄、绝经状态、淋巴结转移、肿瘤大小、p53蛋白表达均未见相关性。生存分析发现,radixin蛋白表达与乳腺癌患者总体生存期无关,radixin阳性表达的乳腺癌患者,RFS时间明显缩短（P＜0.05）。结论:乳腺癌组织中radixin蛋白高表达与患者临床分期、HER-2表达和临床预后相关。     

食管鳞癌患者外周血中APRIL mRNA的表达意义

目的采用实时荧光定量PCR方法检测食管鳞癌患者及正常对照外周血中APRIL mRNA、CEA mRNA水平。探讨外周血中APRIL mRNA与CEA mRNA的表达水平与肿瘤的病理分期及转移等临床诸因素的相关性,并探讨其临床意义。方法应用SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR方法检测63例食管鳞癌患者APRIL mRNA和CEA mRNA术前3 d外周静脉血中的表达,并与20例健康人的外周血进行对比分析,建立荧光RT-PCR检测外周血APRIL mRNA、CEA mRNA的方法,并将结果与肿瘤的临床病理、转移等诸因素进行相关性分析。结果63例食管癌患者外周静脉血中CEA mR-NA的阳性率为68.3%,APRIL mRNA为65.1%。同时检测这两种靶基因,如果至少表达其中一种即可记为阳性表达者,其阳性率提高为81.1%。外周静脉血中APRIL mRNA的表达水平与CEA mRNA的表达水平呈正相关性。结论RT-PCR联合检测APRLL mRNA和CEA mRNA可以增加食管鳞癌外周血检测的敏感性,为了解肿瘤的恶性生物学行为(侵袭和转移)提供依据,为指导临床治疗方案的选择,判断预后及监测疗效提供帮助。     

乳腺癌患者EB病毒感染与癌基因c-erbB-2相关性的研究

目的：探讨乳腺癌患者EB病毒（Epstein—Barr virus，EBV）感染与癌基因c—erbB-2相关性。方法：原位杂交法检测乳腺癌患者癌组织及相应癌旁组织石蜡标本中EBV编码的小RNA（EBER1）；免疫组化法检测EBV阳性乳腺癌及EBV阴性乳腺癌标本癌基因c—erbB-2的表达状况。结果：180例乳腺癌患者癌组织标本中检测到17例EBER1表达，阳性率为9．4％；而相应癌旁组织中均未检测到EBV感染，二者差异有显著性（P〈0．05）。EBV阳性乳腺癌组c—erbB-2蛋白表达显著高于EBV阴性（P〈0．01）。结论：部分乳腺癌患者EB病毒感染与癌基因c—erbB-2有-定的相关性。     

乳腺癌患者骨髓GalNAcT mRNA的检测及其临床意义

目的：研究乳腺癌患者骨髓β1，4-N-乙酰半乳糖胺转移酶（GalNAcT）mRNA的表达，探讨其作为乳腺癌骨髓微转移检测指标对临床的应用价值。方法：对40例乳腺癌患者的骨髓及外周血采用巢式RT—PCR方法检测GalNAcT mRNA表达，同时以免疫组化的方法检测骨髓标本中细胞角蛋白（cytokeratin，CK）的表达。结果：40例患者骨髓中GalNAcT mRNA阳性表达17例（42．5％），外周血阳性表达7例（17．5％）；10例血液系统良性疾病患者骨髓和15例健康志愿者外周血中GaINAcT mRNA均为阴性。免疫组化结果显示：40例乳腺癌骨髓中有11例（27．5％）CK阳性，其GalNAcT mRNA都阳性；有6例（15．0％）CK阴性而GalNAcT mRNA阳性。结论：RT—PCR和免疫组化都是检测乳腺癌患者骨髓微转移的可靠的方法，但前者的敏感性高于后者。GalNAcT mRNA可作为一种新的肿瘤标志物来检测乳腺癌患者骨髓微转移。     

乳腺癌患者外周血中PIP mRNA检测的临床意义

目的:探讨泌乳素诱导蛋白(PIP)mRNA作为标志检测乳腺癌患者外周血中微转移的可能性。方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测69例乳腺癌患者外周血中PIPmRNA表达情况,另抽取28例乳腺良性疾病患者和10例健康志愿者外周血标本作为对照组。结果:69例乳腺癌患者外周血中PIPmRNA有21例表达,阳性率为30.4%,对照组中PIPmRNA表达均为阴性。两组比较差异有统计学意义,P<0.05。PIPmRNA的阳性表达与患者的淋巴结转移状况差异有统计学意义,P<0.05;而与患者的年龄、原发肿瘤大小、分期、病理类型、ER、PR等差异均无统计学意义,P>0.05。结论:PIPmRNA可能作为标志来检测乳腺患者外周血中微转移。     

外周血PIP mRNA与乳腺癌预后因素的相关性研究

目的探讨泌乳素诱导蛋白（PIP）mRNA对估计乳腺癌预后的临床价值。方法用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法,检测121例乳腺癌患者外周血中PIP mRNA表达情况,另抽取30例乳腺良性疾病患者外周血标本作为对照组。结果 121例乳腺癌患者外周血中PIP mRNA有38例表达,阳性率为31.4%,对照组中PIP mRNA表达为阴性。两组比较差异有显著性（P〈0.05）。PIPmRNA阳性表达与患者的淋巴结转移状况、原发肿瘤大小、分期、病理分级显著相关（P〈0.05）;而与患者的年龄、病理类型、ER、PR等无显著相关（P〉0.05）。结论外周血PIP mRNA阳性表达与乳腺癌不良预后有关。     

定量RT-PCR检测乳腺癌患者外周血中 CK19 mRNA表达的意义

目的:建立实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应法(RT-PCR)检测乳腺癌患者外周血细胞角蛋白19(CK19)mRNA表达的状况,并探讨其临床意义.方法:70例经病理诊断的乳腺癌患者和30名健康对照者,以实时荧光定量RT-PCR检测其外周血CK19 mRNA的表达.结果:70例乳癌患者外周血CK19 mRNA表达的阳性率为32.9%(23/70),30例对照者的阳性率为3.3%(1/30),经统计学分析,两者差异具有显著性差异(P=0.002).在不同分期的乳腺癌患者中均存在不同程度CK19 mRNA的表达,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者外周血CK19 mRNA阳性率随分期增加而增高.结论:实时荧光定量RT-PCR方法可检测出各期乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA的表达,具有较高的敏感性和特异性,提示循环肿瘤细胞可能存在于乳腺癌发展的各个阶段.     

乳腺癌患者外周血中CEA mRNA表达的检测及临床意义

目的探讨RT—PCR法检测乳腺癌患者外周血中的CEA mRNA表达的情况及在乳腺癌外周血微转移诊断中的应用。方法采用RT—PCR法,检测46例乳腺癌患者外周血中CEA mRNA表达情况,以良性乳腺疾病患者及健康志愿者外周血标本作为对照。结果46例乳腺癌患者外周血中CEA mRNA阳性率为32．6％。对照组中CEA mRNA表达均为阴性。CEA mRNA的阳性表达与患者的TNM分期、腋淋巴结状况差异有统计学意义（P〈0．05）,而与患者的年龄、原发肿瘤大小、病理类型以及激素受体状况等差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论CEA mRNA可作为标志物来检测乳腺癌患者外周血中微转移,有助于指导临床治疗及判断预后。     

SBEM和hMAM在乳腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨乳腺上皮粘蛋白（SBEM）和人乳腺珠蛋白（hMAM）在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测109例乳腺癌患者和25例对照组（5例健康者与20例其他肿瘤患者）外周血SBEM mRNA和hMAM mRNA的表达情况,流式细胞术检测SBEM和hMAM阳性表达细胞的比例;并分析其与临床病理特征的关系。结果 RT-PCR检测显示SBEM mRNA和hMAM mRNA仅表达于乳腺癌患者外周血中,在健康者和其他肿瘤患者外周血中无表达。流式细胞术检测显示SBEM和hMAM在乳腺癌患者中阳性表达细胞的比例分别为55.9％和40.4％,而在健康者和其他肿瘤患者中仅为10％左右。乳腺癌外周血SBEM和hMAM表达与TNM分期、淋巴结转移有关,而与年龄、肿瘤大小、激素受体和C erbB-2均无关。结论 SBEM mRNA和hMAM mRNA在乳腺癌患者外周血中均有高表达,两者联合检测有助于判断血道微转移的存在。