抑制性消减杂交技术与肿瘤相关基因克隆新进展

抑制性消减杂交（ＳＳＨ）技术是以抑制性ＰＣＲ为基础的基因差异显示克隆技术,近年来已成功应用于疾病相关基因的克隆,特别是肿瘤相关基因的克隆。现将ＳＳＨ近年来在肿瘤相关基因克隆中的应用和进展作一综述。     

应用抑制性消减杂交技术分离E1A药敏相关基因

背景与目的：大量研究已经证明,腺病毒5型E1A基因能抑制肿瘤的生长和转移,逆转其恶性表型,特别是能提高肿瘤细胞对多种化疗药物的敏感性,对射线也具有明显的增敏作用。但E1A基因通过哪些基因发挥作用还不知道。本研究利用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术在药物敏感的肿瘤细胞中分离差异表达的E1A药敏相关基因。方法：以E1A蛋白处理的人头颈淋巴结转移肿瘤细胞LN686为实验组,以亲本LN686细胞为对照组,提取mRNA,构建消减cDNA文库。随机挑取克隆,采用斑点杂交技术鉴定差异基因片段的表达水平,分析所获cDNA核苷酸序列,并在GenBank中进行比较,半定量RT-PCR鉴定实验组和对照组中新基因的mRNA水平。结果：文库包含约7000个阳性克隆,随机挑取：384个克隆进行PCR鉴定,其中．362个有插入片段,通过斑点杂交技术,证实这些基因在实验组中表达水平较对照组显著提高。将这362个克隆进行测序并经过BLAST分析,表明10个为新基因,已在GenBank中登录。对其中7个新基因进行半定量RT—PCR检测,证明经E1A蛋白处理的LN686细胞中,新基因的表达水平明显高于亲本LN686细胞,相差3～8倍。结论：应用抑制性消减杂交技术筛选到10个新基因片段,为进一步克隆其全长基因、研究其功能打下基础。     

结肠癌转移相关基因1及其在肿瘤中的作用

结肠癌转移相关基因1(MACC1)编码的蛋白质在肝细胞生长因子/肝细胞生长因子受体(HGF/c-Met)信号转导通路中转录激活c-Met基因,上调c-Met蛋白的表达,促进肿瘤细胞的侵袭和转移.MACC1蛋白高表达与人类多种肿瘤的发生和转移相关,如结肠癌、胃癌、肝癌、肺癌、卵巢癌等,且与肿瘤临床分期、有无远处转移密切相关,可作为肿瘤转移和预后判断的独立指标,为基因治疗提供新靶点.     

人结肠癌组织HCCR-1基因蛋白的表达及其临床意义

目的:探讨人宫颈癌HCCR-1基因蛋白在人结肠癌组织中的表达及其临床意义.方法:分别采用RT-PCR、免疫组化、蛋白质印迹法法分析HCCR-1基因蛋白在152例人结肠癌组织、43例癌旁组织及37例正常组织中的表达水平,同时用免疫组化法检测CEA在结肠癌组织中的表达情况.结果:HCCR-1mRNA的相对表达强度在结肠癌组织中高于癌旁组织,P<0.05;在癌旁组织中高于正常组织,P<0.05.结肠癌组织HCCR-1的阳性率为80.9%,高于癌旁组织,P<0.05.HCCR-1在人正常结肠组织中几乎无表达,癌旁组织中弱表达,结肠癌组织中有较强表达;结肠癌Duke分期B～C期中HCCR-1阳性率(87.3%)高于A期中的阳性率(63.6%),P<0.05.结论:HCCR-1在结肠癌组织呈过表达,HCCR-1可能参与了结肠癌的发生与发展,可作为结肠癌诊断的指标之一.     

1,25-二羟基维生素D3对抗多种肿瘤作用的研究进展

1,25-二羟基维生素D3是VD的活性形式,大量体内外研究证明它具有抗增殖、促凋亡、促分化等抗肿瘤作用。维生素D受体高度表达于多种人类肿瘤细胞,对于许多患者其VD状态可能与他们癌症的发生和发展密切相关。本文综述了1,25-二羟基维生素D_3对于乳腺癌、前列腺癌、直肠癌等多种癌症的抗癌作用机制以及近年来一些临床研究的鼓舞人心的结果。     

结肠癌转移相关基因1对结肠癌细胞肝转移的影响

目的:研究结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer1,MACC1)的表达对结肠癌肝转移的影响。方法:将融合绿色荧光蛋白(green fluorescent proteins,GFP)的慢病毒表达载体分别感染具有不同转移潜能的人结肠癌细胞株SW1116和HCT116。给予BALB/c-nu/nu裸鼠脾脏注射感染后的结肠癌细胞,构建结肠癌肝转移模型。注射后35d,在荧光解剖显微镜下观察肝脏内结肠癌细胞的转移情况,计算肝转移率。应用蛋白质印迹法检测SW1116和HCT116细胞中MACC1蛋白的表达水平,评估MACC1的表达水平与肝转移率的关系。结果:SW1116细胞的肝转移率明显高于HCT116细胞。MACC1蛋白在HCT116细胞中呈低表达,而在SW1116细胞中呈高表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:MACC1蛋白的表达水平可能与结肠癌的肝转移能力呈正相关。     

应用抑制性消减杂交技术克隆人肺鳞癌差异性表达基因

目的 克隆人肺鳞癌肿瘤差异性表达基因。方法 应用抑制性消减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH)构建人肺鳞癌cDNA消减杂交文库，筛选后挑选阳性克隆进行测序，并在Gen Bank数据库中进行同源性比较，最后经RT－PCR验证。结果 成功克隆10个差异基因片段，其中2个为新基因（GenBank登录号分别为：C20：AF363068；C34：AY032661）。结论 抑制性消减杂交技术是克隆差异表达基因及发现新基因的有效方法。     

结肠癌转移相关基因1与肿瘤

 结肠癌转移相关基因1（MACC1）为新近发现的调节肿瘤生长和转移的基因,在多种恶性肿瘤中异常表达,其编码蛋白作为HGF-MET信号通路的一个关键调节因子,可明显增强肿瘤细胞的侵袭及转移能力。     

VD预防罹患乳腺癌风险的研究进展

维生素D（VD）不仅是已知的调节骨发育和钙稳态的物质，在最近的研究中发现它对体内其他组织也有广泛的影响。一些流行病学研究表明VD缺乏和暴露于太阳紫外线β减少会导致包括乳腺癌在内的一些癌症的风险增加，本文试对近年来维生素D与患乳腺癌风险的关系及补充VD安全范围的研究进展做一综述。     

基于PCR的消减杂交法克隆脑胶质瘤肿瘤相关基因和抑癌基因

背景与目的:脑胶质瘤是神经系统常见肿瘤,其发病机制尚不清楚。本研究运用基于PCR的消减杂交法克隆脑胶质瘤肿瘤相关基因和抑癌候选基因,并探讨胶质瘤的分子生物学发病机制。方法:从人脑胶质瘤组织标本中提取mRNA,反转录成cDNA,然后采用基于PCR的消减杂交法克隆脑胶质瘤肿瘤相关基因和抑癌基因。结果:在肿瘤相关候选基因组克隆到人星形细胞内富含的磷酸蛋白PEA15(phosphoproteinenrichedinastrocytesof15)和酸性纤维蛋白生长因子(acidfibroblastgrowthfactor,aFGF)同源物等基因,在抑癌候选基因组克隆到干扰素诱导蛋白17和ndr2等。ndr2在正常脑组织中广泛表达,在胶质瘤组织内无表达。结论:ndr2基因是抑癌候选基因,可能在胶质瘤的发生中起一定作用。     

Lung Cancer Metastatic Related Genes by Suppression Subtractive Hybridization

Background and Objective The invasion and metastasis are not only the malignant markers and characteristics of lung cancer, but also the leading cause of failure to treatment and patient’     

mRNA-DD法鉴定、筛查脊索瘤相关基因的实验研究

目的:本研究采用mRNA-DD法鉴定、筛查与脊索瘤发生的相关基因,为脊索瘤的分子机制、基因诊断和基因治疗的研究提供靶基因.方法:应用mRNA-DD方法,对1例脊索瘤肿瘤和瘤旁正常组织的差异条带进行扩增、纯化、测序分析,鉴定与脊索瘤相关的基因,并应用RT-PCR方法对18例脊索瘤进行筛查.结果:mRNA-DD检测结果在l例脊索瘤中发现9条差异片段,对其中2条进行测序分析,发现分别与RNF-11和CTC-50DM5基因具有高度同源性.对全部18例脊索瘤筛查结果显示RNF-11和CTC-50DM5基因在脊索瘤和瘤周正常组织中表达差异均具有统计学意义(P＜0.001),其中RNF-11基因表达在瘤周组织中明显增高,而CTC-50DM5基因表达在脊索瘤组织中明显增高.结论:RNF-11基因可能是与脊索瘤相关的肿瘤抑制基因,而CTC-50DM5基因可能是与脊索瘤相关的癌基因.     

肿瘤敏感相关基因克隆cDNA消减文库的构建

目的 :烷基磷脂类化合物 (十六烷基磷酸胆碱 ,HePC)诱导人上皮性肿瘤细胞系产生交叉耐药。方法 :用抑制消减杂交技术 ,构建KB和KBrcDNA消减文库。KB为testercDNA与过量的KBrcDNA消减杂交 ,非特异性cDNA片段被有效消减 ,特异表达的文库得到富集。结果 :扩增后得到 12 7个克隆 ,挑取质粒 ,酶切分析均得到 4 0 0～ 80 0bp插入片段。在获得可分析的 78个克隆中 ,2 7%没有同源基因片段或同源性很低 ,暂定为“新基因” ;14 %具有染色体明确定位 ,应该认为是化疗敏感肿瘤KB细胞所特有的cDNA片段 ;19%在人类EST文库MGC和CGAP中出现 ,可能是肿瘤细胞所特有基因 ;发现与耐药性相关的已知功能基因高达 4 0 %。结论 :探索伴随肿瘤细胞耐药发生基因丢失 ,以开拓抗性逆转措施的新途径。     

应用mRNA差异显示方法克隆维甲酸诱导的人肺腺癌GLC-82细胞分化相关基因

目的克隆维甲酸诱导的人肺腺癌ＧＬＣ８２细胞分化相关基因。方法在全反式维甲酸诱导人肺腺癌ＧＬＣ８２细胞系分化的基础上,采用ｍＲＮＡ差异显示技术,对这个细胞系以全反式维甲酸诱导前及诱导后８小时、２４小时和４天的细胞基因表达差异情况进行分析。结果在全反式维甲酸诱导前后的细胞之间存在明显的基因表达差异。有些基因经维甲酸（ＲＡ）诱导后持续表达或瞬时表达,而有些基因经ＲＡ作用后表达水平降低或完全被抑制。经克隆筛选,获得了一些经全反式维甲酸诱导激活或抑制的差异表达基因片段,对其中的３个片段进行了序列分析和同源性比较。结论全反式维甲酸具有调控分化相关基因表达与否的重要作用,由ＲＡ诱导的肿瘤细胞再分化是一个多基因参与的过程     

生物信息学方法筛选结肠癌相关长链非编码RNA

目的 筛选结肠癌中差异表达长链非编码RNA（lncRNA）并探讨其表达情况。方法 从NCBI（美国国立生物技术信息中心）公共数据平台Gene Expression Omnibus（GEO）下载结肠癌基因芯片数据GSE41328,包含10对结肠癌组织及正常组织,用微阵列显著性分析（SAM）软件输出差异表达基因,信息学网站对基因重注释得到lncRNA名称,然后用Gene Cluster和TreeView软件分析差异表达lncRNA数据,进一步验证其表达情况。结果 分析GSE41328发现,与正常组织相比,结肠癌共有66个lncRNA差异表达,其中22个高表达,44个低表达,结肠癌与正常组织表达值倍数均大于2或小于0.5,差异有统计学意义。结论 运用生物信息学方法筛选结肠癌相关lncRNA,可为寻找新的肿瘤标志物提供新的途径,但其结果需要进一步实验验证。     

肿瘤相关基因FRAT1在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的研究FRAT1在结肠癌组织中的表达及临床意义。方法免疫组织化学法检测73例结肠癌组织及正常结肠组织中FRAT1的表达;Westernblot、RT-PCR方法检测FRAT1蛋白和mRNA的表达水平。结果FRAT1在结肠癌组织中的表达阳性率(80.8%)高于正常组织(在正常组织中不表达)。FRAT1表达水平与肿瘤分化程度和TNM分期相关,分化程度越低表达水平越高,并与TNM分期成正比。结论FRAT1 与结肠癌的发生、发展密切相关,并可能成为结肠癌基因治疗的一个潜在候选靶点。     

胃癌患者外周血与癌组织基因差异表达比较

[目的]利用基因芯片技术筛选与早期胃癌癌变相关的基因.[方法]用U133A基因芯片分别检测胃癌组(T)、癌旁上皮组(P)和切缘正常胃黏膜上皮组(C)及胃癌患者外周血(WB)和正常对照组外周血(NB)的基因表达谱,对荧光强度进行扫描并数字化,用专业软件对检测结果进行分析.[结果]胃癌、癌旁和正常胃黏膜上皮相比,有327个基因共同表达上调,211个基因共同表达下调.胃癌和癌旁上皮同时有差异表达的基因中,在外周血也有差异表达,其中同时表达上调有39个,同时表达下调有4个.[结论]虽然在癌旁上皮病理组织图像上尚未见异常,但在基因表达水平上已经显示有多个与胃癌相关基因表达.尤其在患者外周血有核细胞的基因表达中,也发现某些基因与胃癌及癌旁基因差异表达正相关.提示这些基因可能与早期胃癌的启动和演化有关,通过外周血有核细胞基因芯片检查可能早期发现胃癌患者,提高患者的治愈率.     

A Systemic Analysis of S-1 Regimens for Treatment of Patients with Colon Cancer

Background: Fluorouracil-based regimens have been widely accepted and recommended in the guidelinesfor treating patients with early or advanced staged colon cancer, although results are controversial. Here weperformed a systemic analysis to evaluate the impact of S-1 based regimens on response and survival of patientswith colon cancer. Methods: Clinical studies evaluating the impact of S-1 based regimens on response andsurvival of patients with colon cancer were identified using a predefined search strategy. Summary responserates (RRs) to treatment were calculated. Results: Six clinical studies which including 227 patients with advancedcolorectal cancer were considered eligible for inclusion. Two studies were conducted using combination of S-1and Oxaliplatin, and four studies featured S-1 and irinotecan. Systemic analysis showed that, in all patients,pooled RRs was 43.17%. Major adverse effects were hematological toxicities, gastrointestinal disturbance,neurosensory toxicity. No treatment related death occurred. Conclusion: This systemic analysis suggests thatS-1 based regimens, both with oxaliplatin or irinotean are associated with acceptable response and toxicity inpatients with colon cancer.     

XRCC1基因多态性对结肠癌患者术后FOLFOX4方案化疗疗效的影响

目的 探讨X射线交错互补修复基因1(XRCC1) Arg399Gln基因多态性对结肠癌患者术后FOLFOX4方案化疗疗效的影响.方法 113例结肠癌患者均接受根治术治疗.术后采用焦磷酸测序法检测肿瘤组织中的XRCC1Arg399Gln基因多态性,并给予FOLFOX4方案化疗6个周期.治疗结束后对患者进行随访.结果 (1)113例结肠癌患者的XRCC1 Arg399Gln位点包括Gln/Gln、Gln/Arg、Arg/Arg等3种等位基因型,其频率分别为66.4％(75/113)、27.4％(31/113)、6.2％(7/113).(2)Gln/Gln基因型组与非Gln/Gln基因型组之间性别、年龄、病理类型、癌肿部位、肿瘤形态、TNM分期、T分期、癌胚抗原(CEA)相比差异无统计学意义(P＞0.05).(3)随访期内,Gln/Gln基因型组复发转移率显著低于非Gln/Gln基因型组,3年生存率显著高于非Gln/Gln基因型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 XRCC1Arg399Gln基因多态性可以影响结肠癌患者术后FOLFOX4辅助化疗的远期疗效.