小鸡形觉剥夺性近视眼后极部巩膜MMP-2与TIMP-2 mRNA表达的动态变化

目的　探讨小鸡形觉剥夺性近视眼 (form deprivationmyopia,FDM )后极部巩膜基质金属蛋白酶 2 (matrixmetalloproteinase 2 ,MMP 2 )及其特异性组织抑制剂 (tissuein hibitorofmatrixmetalloproteinase 2 ,TIMP 2 )mRNA表达的时间动态性变化。方法　 5 0只 1d龄来亨雏鸡以半透明眼罩分别遮盖右眼 4、7、14、2 1、30d制备FDM动物模型 ,每组10只 ,未遮盖眼为自身对照眼 ,并随机选取同数目同龄小鸡作为正常对照眼。实验前及预定实验时间进行视网膜检影验光和眼轴长度测量。摘除眼球 ,提取后极部巩膜总RNA ,采用一步法逆转录 聚合酶链反应检测每组小鸡后极部巩膜MMP 2、TIMP 2mRNA表达水平。结果　与正常组、自身对照组相比 ,FDM后极部巩膜MMP 2mRNA显著增高 ,TIMP 2mRNA表达明显降低 ,组间差异非常显著 (P <0 .0 1)。随遮盖时间延长 ,MMP 2mRNA表达逐渐上调 ,7～ 2 1d达最高峰 ,以后轻度下降 ,但仍维持于一较高水平 ,不同遮盖时间组间差异显著 (P <0 .0 1) ,而TIMP 2mRNA表达与之相反。自身对照组MMP 2mRNA表达较同龄正常对照组有轻度上调趋势 ,TIMP 2有下调趋势 ,但组间均无统计学差异 (P >0 0 5 )。结论　MMP 2 /TIMP 2之间动态平衡失调极可能是启动小鸡FDM巩膜细胞外基质早期主动重塑的关键     

形觉剥夺对小鸡后极部巩膜MMP-2基因表达的影响

目的：研究形觉剥夺对小鸡后极部巩膜MMP-2基因表达影响的动态性变化,以揭示FDM巩膜重塑的发生机制.方法：1 d龄来亨雏鸡进行单眼遮盖以制备形觉剥夺性近视眼（FDM）动物模型,按遮盖时间不同分为FDM4,7,14,21,30d 5组,对侧眼作为自身对照组.随机选取同龄、非遮盖小鸡作为正常对照组,每组10只.采用明胶酶谱法、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）一步法、免疫组化法分别检测各组小鸡后极部巩膜明胶酶活性、mRNA及蛋白质表达.结果：FDM组后极部巩膜MMP-2酶活性与mRNA水平显著增高,与相应自身对照组、正常对照组比较差别均有统计学意义（P＜0.01）;随遮盖时间延长后极部巩膜MMP-2酶活性、mRNA水平逐渐增高,尤其在被剥夺4～14d最明显,21d达高峰,其后稍下降,但仍维持于较高水平.FDM组组间差别有统计学意义（P＜0.01）.上述改变与免疫组化结果一致.结论：形觉剥夺可明显促进小鸡后极部巩膜MMP-2酶活性表达,其中基因表达转录调节参与FDM后极部巩膜MMP-2酶活性调控.     

豚鼠形觉剥夺早期后极部巩膜基质金属蛋白酶2及其抑制剂动态表达

目的探讨豚鼠形觉剥夺性近视（form-deprivation myopia, FDM ）早期后极部巩膜基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2, MMP-2）及基质金属蛋白酶抑制剂2（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2,TIMP-2）mRNA的表达。方法4周龄三色豚鼠50只,随机分成实验组和正常对照组各25只,实验组又随机分为5组,单眼形觉剥夺（monocular deprivation, MD）右眼1、4、7、14、21d制备FDM动物模型,未遮盖眼为自身对照组。各组豚鼠进行检影验光和A超测量眼轴长度。提取后极部巩膜总RNA,二步法逆转录聚合酶链反应检测各组后极部巩膜MMP-2及TIMP-2mRNA的表达水平。结果除1d外,各组MD后极部巩膜MMP-2mRNA的表达与正常对照组、自身对照组差异均有统计学意义（P〈0,05）,MD组间差异也有统计学意义（P〈0．01）;而TIMP-2mRNA的表达则逐渐下降。各自身对照组MMP-2、TIMP-2mRNA的表达与MD组变化趋势大致相同。结论MMP-2／TIMP-2之间动态平衡失调可能是启动豚鼠FDM巩膜细胞外基质早期主动重塑的重要因素。（中国跟耳鼻喉科杂志,2010,10：75—78）     

外源性视黄酸对鸡后巩膜基质MMP-2/TIMP-2表达作用的动态观察

目的探讨外源性视黄酸(RA)对小鸡后极部巩膜基质MMP-2表达的作用。方法新孵化来亨鸡90只随机分为三组,实验组右眼球后注射RA,隔日1次;左眼为自身对照;阴性对照组右眼球后注射生理盐水;正常对照组不做任何处理。于4、8、14 d时各组取10只测量眼轴和屈光度后摘取眼球,采用一步法逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR法)检测每组小鸡后极部巩膜MMP-2与TIMP-2 mRNA转录水平。结果实验组眼轴明显延长,屈光度增加,后极部巩膜MMP-2 mRNA转录明显增高,与正常组与阴性对照组比较,差异有显著性统计学意义(P<0.01)。注射后随时间延长眼轴及屈光度逐渐增加,组内不同时间差异有显著性统计学意义(P<0.01),MMP-2 mRNA转录上调,组内不同时间差异无显著性统计学意义(P>0.05)。TIMP-2 mRNA转录与之相反。自身对照组眼轴及屈光度均有增加,MMP-2 mRNA转录较同龄正常对照组有轻度上调,TIMP-2有下调,与正常组与阴性对照组比较,差异有显著性统计学意义(P<0.01)。结论外源性RA能够调节巩膜MMP-2/TIMP-2的转录,并可能通过这一途径促进眼轴及屈光度的增加。     

TIMP-2基因转染后豚鼠形觉剥夺眼后极部巩膜Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白的表达

背景细胞外基质（ECM）蛋白和酶参与眼球后极部巩膜主动的重塑过程,主要通过影响I型胶原蛋白（Col-Ⅰ）纤维连接蛋白（FN）发挥作用。目的通过对形觉剥夺性近视（FDM）豚鼠经脉络膜上腔注入转染有TIMP-2基因的脂质体,观察基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）对细胞外基质中Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）和FNmRNA表达的影响。方法半透明眼罩遮盖36只豚鼠的右眼14d建立FDM动物模型,用随机数字表法分组后分别于右眼脉络膜上腔注入5p,1TIMP-2脂质体质粒、空质粒和生理盐水,每组12只眼,左眼为自身对照。另12只豚鼠持续遮盖右眼为模型对照组。分别于脉络膜上腔注药后的2、7、14d过量麻醉处死豚鼠,获取眼球后极部巩膜组织,用RT-PCR法分别检测各组豚鼠眼巩膜组织中Col-Ⅰ和FNmRNA的表达。结果TIMP-2组豚鼠后极部巩膜Col-Ⅰ mRNA表达降低,FNmRNA表达升高,与自身对照相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。注入TIMP-2后,Col-I mRNA表达水平从第2天开始升高,第7天达到高峰,第14天时有所回落;FNmRNA表达水平则呈相反变化。二者在第7天、第14天的表达与其他3组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。C01．ImRNA和FNmRNA表达水平在注射后第7天与第2天或第14天比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论TIMP-2注入FDM豚鼠脉络膜上腔可上调Col-I mRNA表达,下调FNmRNA表达,早期可有减缓豚鼠FDM巩膜重塑的作用。     

TIMP-2基因转染FDM豚鼠模型早期后极部巩膜中MMP-2的动态表达

目的通过对形觉剥夺性近视豚鼠模型脉络膜上腔注射外源性组织金属蛋白酶抑制剂-2(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP-2)基因,观察近视早期后极部巩膜中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达,探讨外源性TIMP-2基因对后极部巩膜MMP-2表达的影响。方法采用单眼遮盖法对3周龄三色豚鼠进行形觉剥夺,2周后从模型建立成功的豚鼠中随机选取60只,随机分成4组,分别为TIMP-2组(脉络膜上腔注射外源性TIMP-2质粒)、空质粒组(脉络膜上腔注射空质粒)、生理盐水组(脉络膜上腔注射生理盐水)、对照组,每组15只。TIMP-2组、空质粒组、生理盐水组对右眼完成注射操作后继续遮盖,其中TIMP-2组左眼为自身对照组;对照组右眼持续遮盖不做任何处理。分别于注射后2d、7d、14d采集后极部巩膜标本,用RT-PCR及Western blot法检测MMP-2 mRNA、TIMP-2 mRNA及MMP蛋白的表达,统计分析各组之间不同时间的表达差异。结果 TIMP-2组注射后2d与7dMMP-2 mRNA及蛋白表达变化差异有统计学意义(均为P<0.05),7d与14d表达差异无统计学意义(均为P>0.05)。注射后2d、7d、14d,TIMP-2组与自身对照组、对照组之间比较,MMP-2 mR-NA及蛋白的表达变化均有统计学意义(均为P<0.05);空质粒组、生理盐水组、对照组之间比较,差异无统计学意义(均为P>0.05)。TIMP-2组注射后2d与7dTIMP-2 mRNA表达变化差异有统计学意义(P<0.05),7d与14d差异无统计学意义(均为P>0.05)。注射后2d、7d、14dTIMP-2组与自身对照组、对照组之间比较,TIMP-2 mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05);空质粒组、生理盐水组、对照组之间比较,TIMP-2 mRNA表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论外源性TIMP-2基因转染能明显抑制形觉剥夺性近视眼后极部巩膜MMP-2 mRNA及蛋白的表达,这种改变早期就已经开始发生,随着转染时间的延长出现先降低后增高的变化。     

视黄酸对体外培养的鸡巩膜成纤维细胞MMP-2表达的影响

目的在体外研究视黄酸(retinoicacid,RA)对小鸡后极部巩膜成纤维细胞MMP-2表达的调节作用,探讨RA在形觉剥夺性近视(form-deprivationmyopia,FDM)中的作用。方法取40只1d龄来亨雏鸡以半透明眼罩遮盖右眼14d制备FDM动物模型,未遮盖眼为正常眼。将正常小鸡眼后极部巩膜成纤维细胞作体外培养并传2代细胞作为正常对照组细胞,FDM眼小鸡后极部巩膜成纤维细胞作体外培养并传2代细胞作为FDM组细胞,取其中20只正常小鸡眼第2代后极部巩膜成纤维细胞,加入不同终浓度RA(6×10-7,6×10-6,6×10-5和6×10-4mol/L)培养24h作为RA组细胞。各组细胞均采用SABC免疫组织化学染色法检测MMP-2的表达,进行计算机图像分析及统计学检验。结果MMP-2在培养的正常鸡巩膜成纤维细胞胞质呈弱阳性表达。FDM组鸡巩膜成纤维细胞较对照组MMP-2表达明显增高(P<0.01)。6×10-7mol/LRA组与对照组比较无统计学意义(P>0.05)。6×10-6和6×10-5mol/LRA组较对照组MMP-2表达增高(P<0.01),6×10-4mol/LRA组细胞普遍变形崩解。各视黄酸浓度组之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论在一定浓度范围内,RA上调体外培养的鸡巩膜成纤维细胞MMP-2的表达。RA可能是调节巩膜MMP-2表达的重要因素而参与FDM形成。     

外源性基质金属蛋白酶抑制剂GM6001对FDM形成的抑制作用

目的研究非特异性基质金属蛋白酶（MMPs）抑制剂GM6001对小鸡形觉剥夺性近视眼（FDM）形成的影响。方法150只ld龄来亨雏鸡采用半透明塑料眼罩单眼遮盖制备FDM动物模型，同时每日球后注射不同剂量GM6001连续4d、14d。检测眼轴长度及屈光度，观察后极部巩膜组织病理学变化及检测MMP-2蛋白质、酶活性及其mRNA的表达。结果GM6001明显抑制遮盖4d眼FDM的形成，对遮盖14d眼仅部分抑制，对正常鸡无作用。GM6001干预后，遮盖14d眼后极部巩膜组织病理学改变与FDM相似，后极部巩膜MMP-2表达显著降低，而遮盖4d组均与正常小鸡眼相似。GM6001干预眼明胶酶谱图未检测到透亮带。GM6001对后极部巩膜MMP-2mRNA表达无影响。结论MMP。2活性增高为小鸡细胞外基质（ECM）后极部巩膜ECM重塑的关键因素之一。     

bFGF对鸡形觉剥夺性近视眼的抑制作用

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）抑制鸡形觉剥夺性近视眼（form deprivation myopia,FDM）的作用及机制。方法：半透明眼罩遮盖法建立90只鸡FDM模型,随机分成6组：正常对照组（A）,FDM组（B）,FDM＋PBS组（C）,FDM＋bFGF 100ng组（D）,FDM＋bFGF 500ng（E）,FDM＋bFGF 1000ng组（F）。按预定时间把bFGF注入小鸡玻璃体腔。眼罩遮盖15d后检影验光,游标卡尺测眼轴长度,RT-PCR检测后极部巩膜基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）的表达。结果：与A组比较,B组眼轴延长,近视形成,后极部巩膜MMP-2 mRNA表达升高。玻璃体腔注射bFGF能明显抑制FDM形成,且下调后极部巩膜MMP-2 mRNA表达。随剂量加大,bFGF抑制作用增强,1000ng bFGF能完全抑制小鸡FDM形成。结论：玻璃体腔注射bFGF能通过下调后极部巩膜MMP-2 mRNA表达,有效抑制鸡FDM形成。     

TIMP-2基因转染FDM豚鼠后极部巩膜MMP-2蛋白早期动态表达

目的探讨外源性基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP)对豚鼠形觉剥夺性近视(form deprivation myopia,FDM)眼后极部巩膜基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)蛋白表达的影响。方法单眼形觉遮盖法制备FDM豚鼠右眼模型,45只豚鼠分为TIMP-2组、空质粒组和生理盐水组,每组15只,右眼脉络膜上腔内分别注射转染TIMP-2基因的脂质体、空质粒和生理盐水,左眼暴露为自身对照;另15只豚鼠持续遮盖右眼,不作任何处理,为对照组。各组分别于注药后的第2天、第7天和第14天处死豚鼠,取眼球后极部巩膜组织,用明胶酶谱法检测MMP-2蛋白的表达。结果转染第2天、第7天和第14天TIMP-2组豚鼠后极部巩膜MMP-2酶原及活性酶的相对表达量分别为0.9012±0.0056和0.3006±0.0051、0.8876±0.0060和0.2858±0.0065、0.8915±0.0068和0.2915±0.0076,表达均降低,与自身对照组、对照组组间比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05),而空质粒组和生理盐水组与对照组相比,转染后第2天、第7天和第14天差异均无统计学意义(均为P>0.05)。TIMP-2组豚鼠后极部巩膜MMP-2酶原及活性酶表达水平从第2天开始降低,第7天最低,第14天时略有回升,第2天与第7天、第14天之间差别均有统计学意义(均为P<0.05),第7天与第14天比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论外源性TIMP-2基因注入FDM豚鼠后,早期即可有效抑制后极部巩膜MMP-2蛋白的表达,减缓巩膜的重塑,但随时间的延长抑制作用逐渐减弱。     

近视鸡眼巩膜纤维层MMP-2和TIMP-2的表达

目的　检测鸡眼巩膜纤维层MMP 2和TIMP 2的表达 ,进一步阐明近视鸡眼巩膜重塑的机制。方法　采用形觉剥夺的方法建立鸡眼近视模型。提取鸡眼巩膜纤维层的总RNA和蛋白质。利用RT PCR和Westernblot技术检测MMP 2和TIMP 2的mRNA和蛋白质表达水平的改变。结果　近视组鸡眼巩膜纤维层MMP 2mRNA和蛋白质表达水平明显升高 ,分别是正常组的 2 14和 2 11倍 ,差异显著 (P <0 0 1,P <0 0 1) ,而TIMP 2的表达水平较正常组分别下降5 5 0 5 %和 5 3 73 % ,差异亦显著 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。结论　近视鸡眼巩膜纤维层变薄是组织主动重塑的结果 ,至少部分是由于MMP 2和TIMP 2表达改变所致。     

基质金属蛋白酶-2在实验性近视眼鸡巩膜成纤维细胞的表达

目的研究基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)在形觉剥夺性近视眼(formdeprivation myopia,FDM)鸡巩膜成纤维细胞的表达。方法20只1d龄来亨雏鸡以半透明眼罩遮盖右眼14d制备FDM动物模型,随机取10只FDM眼去除遮盖7d作为恢复组,均以对侧未遮盖眼作为对照组。将各组小鸡眼后极部巩膜成纤维细胞作体外培养并传2代,行光镜与透射电镜形态学观察,并采用SABC免疫细胞化学染色法检测MMP-2的表达,进行计算机图像分析及统计学检验。结果培养的正常鸡巩膜成纤维细胞胞浆表达MMP-2,阳性灰度值为192·2319±1·2521。FDM组细胞MMP-2染色阳性灰度值为168·1730±5·0039,较对照组MMP-2表达明显增高(P<0·01)。恢复组阳性灰度值为180·4001±2·3522,其MMP-2表达较FDM组有所回降(P<0·01),但与对照组相比仍有升高,差异有显著性(P<0·01)。结论MMP-2参与形觉剥夺性近视眼的发生发展与恢复的过程,在近视发生机制中起重要作用。     

NGF在鸡巩膜中的表达及其与形觉剥夺性近视眼形成的关系

目的探讨神经生长因子(NGF)在鸡形觉剥夺性近视形成中巩膜中的表达和变化情况。方法鸡雏30只,随机分为3组,每组10只,于出生后第2 d将右眼以半透明眼罩遮盖作为遮盖眼,左眼开放作为对照眼。分别遮盖3、7、14d。运用免疫组织化学和原位杂交技术探测NGF蛋白及其mRNA在鸡巩膜软骨细胞中的表达。结果NGF蛋白及其mRNA均表达于巩膜的软骨细胞中尤其在双核细胞中;两者在各时间段遮盖眼巩膜中阳性细胞数均明显高于对照组(P<0.05);免疫组织化学(FDG=20.556P<0.01)和原位杂交(FDG=25.520P<0.01)在对照组(或遮盖组)各组间阳性细胞的表达数目随时间变化明显下降。结论NGF对鸡巩膜软骨层的发育和形觉剥夺性近视的形成密切相关。     

哌仑西平对鸡形觉剥夺性近视的疗效及作用机制

目的初步探讨选择性M1受体拮抗剂哌仑西平抑制近视的作用机制.方法 1日龄鸡40只,随机分为4组,Ⅰ组为正常组;Ⅱ组为单纯遮盖组;Ⅲ组为药物对照组;Ⅳ组为哌仑西平组.Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组右眼用半透明眼罩遮盖,Ⅲ、Ⅳ组鸡的剥夺眼分别每日结膜下注射0.1 mol/L的磷酸缓冲液和10%哌仑西平溶液;2周后检测4组动物右眼屈光度数、眼轴长度和赤道部直径.提取鸡眼巩膜纤维层的RNA和蛋白质,利用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶2抑制剂（TIMP-2） mRNA和蛋白质表达水平的改变.结果哌仑西平组的各项指标较单纯遮盖组、药物对照组显著减低 （P〈0.01）,较正常组形成相对近视,眼轴长度、赤道部直径明显增大;药物对照组与单纯遮盖组相比各项指标无统计学意义（P〉0.05）,与遮盖组相比,哌仑西平组鸡眼巩膜纤维层MMP-2 mRNA和蛋白质表达水平显著下降 （P〈0.01）,而TIMP-2的表达水平显著升高 （P〈0.01）.结论选择性M1受体拮抗剂哌仑西平能部分抑制近视的发生发展,可能是通过调节巩膜纤维层MMP-2和TIMP-2的表达而发挥疗效的.     

Induced myopia associated with increased scleral creep in chick and tree shrew eyes

PURPOSE: To investigate the role of scleral creep in the axial elongation of chick and tree shrew eyes with induced myopia. METHODS: Form-deprivation myopia was induced with a diffusing occluder worn over one eye. Scleral samples from the posterior pole and equatorial regions of myopic, contralateral (control), and age-matched normal chick and tree shrew eyes were loaded in vitro with a force of 5 g for 20 minutes while creep extension was monitored. The elastic behavior of sclera from myopic, control, and normal chick eyes was also compared. RESULTS: In both chick and tree shrew, posterior and equatorial scleral samples from myopic eyes had significantly (P < 0.05) greater creep extensions than equivalent samples from control and normal eyes (n = 10, each group). Among individual tree shrews the difference in creep rate between the sample from the myopic eye and that from the control eye correlated with vitreous chamber elongation (r = 0.746, P < 0.05) and development of myopia (r = 0.792, P < 0.01) in the deprived eye. No such association was found in the data from chicks. The elastic properties of chick sclera were unaffected in form-deprivation myopia. CONCLUSIONS: In chick and tree shrew, form-deprivation myopia is associated with increased creep rate of posterior and equatorial sclera. In tree shrew, the correlation between increased scleral creep rate and vitreous chamber elongation in myopic eyes supports the hypothesis that induced changes in the axial length of the mammalian eye are mediated by changes in the creep properties of the sclera.     

Disturbance of electrolyte balance in vitreous of chicks with form-deprivation myopia

PURPOSE: To investigate the changes in the electrolyte and protein concentrations in the vitreous of 3-week-old chicks with form-deprivation myopia (FDM). METHODS: FDM was induced in 2-day-old male white leghorn chicks by covering the left eye with a translucent plastic goggle and leaving the right eye uncovered to serve as control. After 19 days the animals were euthanized, and the axial dimensions of the eyes were measured with a caliper in an unfixed condition. The liquid vitreous and aqueous humor were removed by paracentesis, and blood was collected from the jugular vein. Sodium, potassium, and chloride concentrations were determined using ion-selective electrodes. Calcium and phosphate concentrations were determined by colorimetric assays using orthocresol phthalein complexone and bacterial xanthine oxidase, respectively. RESULTS: The concentrations of potassium and phosphate were decreased, whereas chloride concentration was increased in the vitreous of the FDM eyes (P < .01). Sodium and calcium concentrations were similar to those in the control eyes. No significant changes in the concentration of electrolytes were observed in the aqueous humor. No significant differences were found in the protein concentrations in the liquid vitreous, gel vitreous, and aqueous humor. CONCLUSIONS: Form-deprivation induced a significant increase of the volume of the liquid vitreous in the eye of the FDM chick. The increased liquid vitreous of the myopic eye was accompanied by an alteration of the electrolyte balance, by a mechanism that has not yet been clarified.