冠心病患者C 反应蛋白的测定及临床意义

近来研究发现血清中C反应蛋白（CRP）的浓度轻度升高或甚至在正常范围内都与心血管疾病发生的危险性增加有关,可以推测以后或几年以后心肌梗死事件发生的可能性。本文旨在探讨C反应蛋白在心血管疾病患者中的变化情况以及CRP在心血管疾病中的诊断意义。     

C反应蛋白的临床研究进展

C反应蛋白的临床研究已经从感染性疾病的检测拓展到心血管疾病的诊断和预测。现就近年来C反应蛋白在感染性疾病、心血管疾病以及相应的临床检测方法方面的研究进展作一综述 ,并提出不断挖掘传统实验室检测指标新的临床应用价值 ,是一项十分有意义的工作。     

C反应蛋白与心血管疾病

组织损伤或感染可导致多种血清成份浓度增加或减低。这种浓度的变化被称为急性相反应。浓度增加的血清成份有Ｃ反应蛋白、血清淀粉样蛋白Ａ、纤维蛋白原、触珠蛋白、铜蓝蛋白、铜、白介素－６、多肽特异性抗原、新喋呤和铁蛋白等。浓度降低的则有运铁蛋白和铁等［１］。其中,最有代表性的急性相反应蛋白首推Ｃ反应蛋白（ＣＲＰ）。ＣＲＰ作为炎症标志物,本身尽管为非特异性的,但对于细菌感染、各种炎症过程及组织坏死与损伤（如外科手术后）及其恢复期的筛检、监测,病情评估与疗效判断,都具有重要的价值,已得到广泛的应用［２］。近年…     

液相蛋白质芯片检测血清C反应蛋白方法的建立

目的 建立液相蛋白质芯片检测血清C反应蛋白（CRP）的方法,探讨该方法诊断冠心痛的临床应用价值。方法 用聚苯乙烯荧光微珠,将抗CRP单克隆抗体包被在微珠上,将另一针对CRP不同抗原表位的单克隆抗体生物素化;包被好的微珠加入到96孔板中,将待测血清分别加入各孔,用CRP标准品建立标准曲线,各孔中加入生物素化抗CRP单抗和PE荧光素标记的链霉亲合素。在Bio-Plex液相蛋白质芯片分析仪上检测296份血清样品。同一血清标本同时用免疫比浊法测定。比较两种方法对CRP检测的敏感性和特异性。结果 液相蛋白质芯片检测CRP方法对诊断冠心病的敏感性（78,3％）和特异性（87．1％）较免疫比浊法的敏感性（63．0％）和特异性（86．5％）高,χ^2=28,94,P〈0．001。结论 建立了一种检测血清CRP的新方法,对诊断冠心痛有临床应用价值。     

C反应蛋白与心房颤动的关系

目的探讨C反应蛋白（CRP）作为系统炎症因子与心房颤动（房颤）发生和持续的关系。方法入选58例房颤患者，其中风湿性心脏病房颤36例，孤立性房颤22例；根据有无既往病史分为初发房颤组共20例，复发房颤组共38例；根据病变性质分为阵发性房颤组共24例，持续性房颤组共34例。选择门诊及住院检查身体健康者60例作为正常对照组。比较各组CRP水平高于复发房颤组，差异有统计学意义；持续性房颤组CRP水平高于阵发性房颤组，差异有统计学意义（P＜0.05）。持续性房颤组左房前后径明显增加，与阵发生房颤组左房前后径及对照组左房前后径相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。在持续性房颤组，CRP与左房前后径存在正相关关系。结论 CRP水平升高可能参与心房颤动发生，提示炎症反应具有促进心房颤动的发生和持续作用。     

全程C反应蛋白的检测与临床应用

1930年Tillet和Francis首次在急性大叶性肺炎患者的血清中发现了一种能在Ca2+存在时与肺炎球菌细胞壁中的荚膜多糖(C多糖)形成复合物的物质,命名为C反应素.1941年Abernethy Avery和Macleod Avery等测知它是一种蛋白质,故称为C反应蛋白(CRP)[1].     

单宁酸对糖尿病大鼠血清及肾脏C反应蛋白表达的影响

目的观察单宁酸(tannic acid,TA)对链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病(DM)大鼠血清及肾脏C反应蛋白(CRP)表达的影响。方法 70只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、氨基胍(AG)组和TA低高剂量组,给药10周后处死大鼠。ELISA法检测各组大鼠血清CRP水平,免疫组织化学染色观察CRP在肾组织中的表达。结果 DM大鼠血清及肾组织CRP表达增加,单宁酸可降低DM大鼠血清CRP水平,下调肾组织CRP蛋白的表达。结论单宁酸可改善糖尿病大鼠微炎症状态,对保护糖尿病大鼠的肾脏损害具有一定的积极作用。     

C反应蛋白在临床实验室中的应用

C反应蛋白是一种急性反应时相蛋白。在发病6—12小时血中浓度会迅速升高，采用末梢血用Quik Read CRP分析仪进行检测。方法简便快速。对于疾病的早期诊断、疗效观察和预后判断，特别是对抗生素应用是否有效，有其重要作用。     

胰腺癌相关自身抗原47原核表达、纯化及其抗体检测胰腺癌的价值初探

目的 验证胰腺癌相关性自身抗原47(PAA47)的质谱鉴定结果，初探抗PAA47检测在诊断胰腺癌中的意义。方法 构建pQE—30—PAA47重组表达载体；在大肠杆菌M15中诱导表达KIAA0111编码蛋白质；经纯化后用点印迹、免疫印证法验证表达产物与相应胰腺癌相关性自身抗体阳性血清的抗原反应性；建立间接酶联免疫吸附实验(ELISA)，检测60名健康体检者、60例胰腺癌、20例慢性胰腺炎及120例其他肿瘤(大肠癌、肝癌、胃癌及肺癌各30例)患者血清中的抗PAA47，并与回顾性糖链抗原19—9(CAl9—9)检测结果相比较。结果 表达产物的序列与KIAA0111编码序列一致；点印迹法和免疫印迹法显示纯化表达产物与抗PAA47血清具有抗原反应性。ELISA结果显示，胰腺癌患者中，该抗体阳性率为31．67％(19／60)，大肠癌、肝癌、胃癌分别为10．00％、3．33％、6．67％，正常人、慢性胰腺炎及肺癌患者中未见阳性。抗PAA47对胰腺癌的灵敏度为31．67％，特异性为95．89％。与慢性胰腺炎患者比较，PAA47的灵敏度为31．67％，特异性为100％，CAl9—9的灵敏度为75．00％，特异性为86．96％。平行法联合检测2项指标，既保持了相同的特异性，又提高了检测的灵敏度(90％，P＜0．05)。采用顺序法联合检测，灵敏度和特异性分别为70％和100％。结论 本研究成功克隆了人KIAA0111编码基因，并将其在大肠杆菌中成功表达；新鉴定的PAA47，其抗体血清学检测与CAl9—9等肿瘤标志物联合，对提高胰腺癌诊断的灵敏度和特异性具有一定的意义。     

人可溶性生长刺激表达基因2蛋白的真核表达、纯化和鉴定

目的构建人可溶性生长刺激表达基因2(sST2)蛋白的重组真核表达载体,获得高纯度的人sST2重组蛋白。方法根据人sST2基因序列设计引物,利用RT-PCR技术获得人sST2基因;构建人sST2-pcDNA3.1-his(-)重组真核表达载体;脂质体法转染COS7细胞,表达人sST2重组蛋白,并用镍柱亲和层析法纯化;用western blot和ELISA法对人sST2重组蛋白进行鉴定。结果PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示产物长度与预期一致,约为1000 bp;同源性比对分析结果显示,人sST2基因成功插入PGH-T载体;用Bam HⅠ和Hin dⅢ对重组真核表达载体双酶切后凝胶电泳分析,结果显示产物电泳位置与预期一致;表达产物经SDS-PAGE电泳结果显示在相对分子质量(M r)约为65000处有一明显条带,与预期蛋白质位置一致;western blot鉴定结果显示人sST2重组蛋白有His标签,ELISA鉴定结果显示人sST2重组蛋白有与抗sST2抗体结合的特异性抗原表位。结论通过重组DNA技术成功构建人sST2基因重组真核表达载体,通过蛋白质纯化技术成功获得人sST2重组蛋白。     

妊娠相关血浆蛋白A的原核表达及蛋白纯化

目的构建原核表达PAPP-A重组蛋白,并对蛋白质进行纯化。方法根据DNAstar软件分析获得的编码PAPP-A特异抗原表位,利用Primer Premier 5.0软件设计引物,以PAPP-A c DNA-质粒转化菌液为模板,进行PCR扩增。PAPP-A的DNA和p ET42a质粒分别双酶切,经琼脂糖凝胶电泳及胶回收后进行连接反应,转化至大肠埃希菌Top10,筛选阳性克隆经测序鉴定正确后,转化至大肠埃希菌BL21,诱导产生PAPP-A重组蛋白,利用镍柱初步纯化及离子交换层析柱进一步纯化,用SDS-PAGE及DEAE层析鉴定重组抗原蛋白。结果筛选出抗原表位集中区,在大肠埃希菌BL21中高效表达了重组的PAPP-A蛋白,经过镍柱及离子交换层析纯化后,PAPP-A浓度为0.22 g/L,DEAE层析分析证实其纯度较高。结论成功筛选出PAPP-A的抗原表位集中区,并制备了重组抗原蛋白,为PAPP-A的后续临床研究提供依据。     

RPA1在肝癌组织中的表达及临床意义的研究

目的观察复制蛋白A1(RPA1)在肝细胞肝癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测30例肝细胞肝癌组织及癌旁组织中RPA1 mRNA及蛋白的半定量表达水平,结合临床病理资料,统计分析肝细胞肝癌患者中RPA1表达的临床意义。结果 RPA1 mRNA在肝细胞肝癌组织的表达高于癌旁组织(0.635±0.228 vs.0.448±0.186,P0.05)。RPA1蛋白在肝细胞肝癌组织的表达高于癌旁组织(0.876±0.205 vs 0.727±0.153,P0.05)。在肝细胞肝癌组织中,RPA1 mRNA的表达在临床分期Ⅰ+Ⅱ组低于Ⅲ+Ⅳ组,组间差异有统计学意义(0.471±0.190 vs.0.744±0.184,P0.05)。在肝细胞肝癌组织中,RPA1蛋白的表达在临床分期为Ⅰ+Ⅱ组低于Ⅲ+Ⅳ组,组间差异有统计学意义(0.742±0.155 vs.0.965±0.188,P0.05)。在肝细胞肝癌组织中,RPA1 mRNA和蛋白的表达水平在患者不同年龄、性别、肝癌组织分级、是否有乙肝表面抗原、淋巴转移、门脉癌栓等临床病理特征中差异无统计学意义(P0.05)。结论 RPA1在肝细胞肝癌组织中表达上调,其表达上调可能促进肝癌的发生和发展。     

SARS病毒M蛋白真核表达载体的构建与表达

目的 构建SARS病毒M蛋白片段真核表达载体,并检测其在Vero细胞中的表达.方法 在PCR引物下游引入Flag序列,以PCR从质粒pGEX-6P-1-SARS-M中扩增M蛋白编码基因片段,将酶切后的PCR产物克隆至pcDNA3.1(+)中,构建并鉴定重组质粒pcDNA3.1(+)-SARS-M.重组质粒经Superfect转染Vero细胞,Western blot检测基因表达情况.结果 重组质粒经酶切鉴定和基因测序显示构建正确;Western blot检测表明重组M蛋白片段在Vero细胞中获得正确表达.结论 成功构建SARS病毒M蛋白片段真核表达载体,并在Vero细胞中获得正确表达,为进一步研究M蛋白的功能奠定了基础.     

血小板生成素突变体的克隆和扩增及其融合蛋白在大肠杆菌中高效表达的研究

目的：通过获得编码血小板生成素（Ｔｐｏ）成熟肽Ｎ端１～１９６个氨基酸的突变体ｃＤＮＡ在大肠杆菌ＪＭ１０９中的表达，为Ｔｐｏ进一步的结构和功能研究提供材料来源。方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）及ＤＮＡ重组技术，将ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９载体并测序，然后克隆到表达载体ｐＭＡＬ－ｃ２上。结果：转化重组质粒ｐＭＡＬ－ＭＢＰ／ＴｐｏＭ的大肠杆菌经异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷诱导４～５小时，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示融合蛋白（ＭＢＰ／ＴｐｏＭ）的分子量约为６．３万。薄层扫描分析表明该蛋白占菌体总蛋白量的３７％。结论：经ＰＣＲ方法扩增的Ｔｐｏ基因突变体可在大肠杆菌中高效表达，为Ｔｐｏ突变体的进一步结构和功能研究以及Ｔｐｏ抗体的制备打下了基础。     

失血致低血容量性休克大鼠心脏G蛋白表达及纳络酮的影响

目的：探讨纳络酮对失血致低血容量性休克大鼠的治疗作用及其对休克大鼠心脏组织Ｇ蛋白含量的影响。方法：颈总动脉放血,使平均动脉压降至６ｋＰａ（１ｋＰａ＝７．５ｍｍＨｇ）稳定１小时完成失血致低血容量性休克大鼠模型。２１只大鼠随机均分为：休克组（ＨＳ组）、纳络酮治疗组（ＮＡＬ组）和正常对照组（ＮＳ组）。在观察动脉血压、血气等指标的同时,采用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ技术测定大鼠伤后６小时心脏组织中Ｇｓａ、Ｇ     

肺表面活性物质相关蛋白C真核表达载体的构建及体外表达

目的 克隆人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)基因,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/SP-C,并检测其在体外的表达,为SP-C的批量生产提供可靠的方法.方法 提取肺癌手术患者病灶周围正常肺组织总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术获得SP-C cDNA序列.用NotI和XhoI内切酶双酶切SP-C cDNA序列和质粒pcDNA3.1(+),胶回收后体外连接.酶切和测序后,用脂质体包裹转染人乳腺癌细胞株MCF-7,采用RT-PCR和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测SP-C的表达.结果 能够正确克隆人SP-C基因并插入至质粒pcDNA3.1(+)中;重组质粒体外转染MCF-7细胞后可以表达SP-C蛋白.结论 采用体外重组技术,成功构建了人SP-C真核表达载体 pcDNA3.1(+)/SP-C,并能在体外表达SP-C,为下一步构建人SP-C乳腺特异表达载体,利用乳腺生物反应器大量生产SP-C奠定了基础.     

黏着斑蛋白vinculin在子宫内膜异位症组织中表达的初步研究

目的初步探讨黏着斑蛋白(vinculin)在正常子宫内膜、子宫内膜异位症(EMs)患者在位内膜、异位内膜间的表达差异。方法用免疫组化法和Western blot分析,研究3例增生中晚期正常子宫内膜、3例增生中晚期EMs患者的在位内膜和异位内膜中vinculin的表达差异。结果 vinculin主要表达于细胞外质和细胞质中,且EMs患者异位内膜中的表达强度高于在位内膜与正常内膜中的表达(P<0.05);而患者在位内膜和正常内膜中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 vincu-lin可能参与EMs的发生和发展。     

GRIM-19及其截断体原核表达载体的构建及表达与纯化

目的构建GRIM-19及其截断体原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化融合蛋白。方法用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出带BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的GRIM-19及其截断体基因片段,将GRIM-19及其截断体基因片段克隆到pGEX-4T-3原核表达载体上,在大肠杆菌中诱导表达GST-GRIM-19及其截断体融合蛋白,用Glutathione Sepharose 4B纯化,纯化后蛋白经Western-blot鉴定。结果 pGEX-4T-3-GRIM-19及其截断体原核表达载体构建正确,并在大肠杆菌中成功诱导表达,IPTG诱导以浓度0.5mM,时间2h为宜,且通过Glutathione Sepharose4B成功纯化到融合蛋白。结论成功构建GRIM-19及其截断体原核表达载体,诱导表达并纯化GST-GRIM-19及其截断体融合蛋白。