大鼠大脑皮层神经干细胞培养方法比较

目的:比较不同培养基对大脑皮层神经干细胞增殖的影响,以寻找培养神经干细胞的有效方法。方法:体外分离生后24 h SD大鼠大脑皮层细胞,使用DMEM/F12+B27+bFGF、Neurobasal+B27+bFGF和Neuro-basal+B27三种培养条件,分别用悬浮培养法和贴壁培养法对细胞进行培养。免疫细胞化学技术分别以Nestin、β-TubIII和GFAP标记神经干细胞、神经元和星形胶质细胞。结果:在悬浮培养情况下,三种培养条件均诱导所培养的细胞形成神经球,经染色鉴定神经球中的细胞均表达Nestin;其中DMEM/F12+B27+bFGF培养的神经干细胞增殖速度最快(P<0.01),Neurobasal+B27培养的神经干细胞增殖效率最高(P<0.01)。在贴壁培养情况下,经染色鉴定,部分细胞表达β-TubⅢ或GFAP。结论:大脑皮层神经干细胞不适合贴壁培养,DMEM/F12+B27+bFGF条件适合大脑皮层神经干细胞体外增殖。     

大鼠神经干细胞体外生长特性

目的 :观察大鼠神经干细胞的体外生长特性。方法 :利用无血清培养基悬浮培养 ,观察神经干细胞的体外生长过程。并比较不同接种密度 ,不同传代时间对神经干细胞生长的影响。用免疫细胞化学技术检测神经干细胞巢蛋白 (nestin)的表达 ;用吖啶橙 (AO) /溴化乙啶 (EB)检测细胞活性 ;用DAPI荧光染料标记细胞。结果 :神经干细胞聚合成细胞团生长 ,细胞团成分复杂。细胞接种密度以 5× 1 0 5个细胞 /ml组生长较好 ;原代细胞生长 3～ 4d后传代为宜。传代后 4d时可获得大量nestin阳性细胞。DAPI标记率为 1 0 0 %。结论 :细胞团成分复杂。神经干细胞要高密度接种 ,及时传代。DAPI可作为有效的体外标记物     

体外培养的神经干细胞球的超微结构

目的 探讨体外培养的神经干细胞球的超微结构。方法 采用常规透射电镜结合硝酸镧示踪染色、钌红染色和单宁酸染色等技术，观察体外培养的大鼠脑神经干细胞球的超微结构。结果 神经球中细胞之间连接较为松散，不存在紧密连接结构，神经干细胞增殖活跃，并可见神经球中有部分干细胞分化为具有突起和轴突样结构的细胞，甚至出现髓鞘样结构。结论 揭示了体外培养的神经干细胞球的超微结构。     

神经干细胞定向诱导分化的研究进展

长期以来,中枢神经系统疾病一直是困扰人类健康的难题。传统观点认为,成体哺乳动物中枢神经系统的神经细胞不具备更新的能力,受损后不能再生。1992年Reynolds[1]从成年小鼠脑纹状体中分离出能在体外不断分裂增殖、具有多向分化潜能的神经干细胞(NSCs)之后,人们又从胚胎和其他成     

大鼠胚胎神经干细胞体外分化时间的特异性

背景：目前对于神经干细胞体外培养过程中神经干细胞自身分化特性的变化研究的较少。 目的：观察大鼠胚胎神经干细胞体外分化的时间特异性。 方法：利用无血清悬浮培养的方法分离培养大鼠胚胎皮质神经干细胞,取不同培养时间的神经干细胞进行诱导分化,检测其分化特性的改变。 结果与结论：体外培养的神经干细胞早期分化以神经元为主,随着培养时间的增加,分化成神经元的比例下降,神经胶质细胞的比例增加,而神经干细胞分化成少突胶质细胞的潜能与培养时间无明显相关。提示体外培养的神经干细胞其分化成神经元的潜能随着培养时间的增加而降低,而分化成神经胶质细胞的潜能随培养时间的增加而增加,神经干细胞分化为少突胶质细胞的潜能无时间相关性。     

神经上皮干细胞蛋白在体外培养的大鼠肌卫星细胞中的表达

目的：探讨大鼠脑创伤后神经元型及诱生型一氧化氮合酶及其一氧化氮的神经毒性作用机制。方法：雄性Wistar大鼠250只，随机分成①假于术组，②创伤对照组，③氨基胍(AG)治疗组，④7-硝基吲哚(7-NI)治疗组，⑤AG和7-NI联合治疗组，用Marmarou方法造成大鼠重型弥漫性颅脑创伤，采用免疫组织化学检测nNOS和iNOS蛋白表达情况，     

新生大鼠神经干细胞的培养方法

神经干细胞研究是目前神经科学研究的热点 ,如何快速经济地培养出神经干细胞是每个研究者必须面对的问题。目前多数研究者采用胎鼠脑组织作为神经干细胞的组织来源 ,培养方法是加入EGF、bFGF的DMEM/F12无血清培养基。我们在进行新生大鼠神经干细胞分离和培养的过程中 ,发现应用无血清培养基 ,培养神经干细胞的速度较慢 ,数量也较少 ,需要较长周期才能达到研究要求。为此我们采用乳鼠为神经干细胞的组织来源 ,应用DMEM/F12 /N2为基础培养基 ,在此基础上添加不同成份 ,观察神经干细胞的生长情况。确定最佳的培养方法。1　材料1 1　Wis…     

大鼠脑的神经干细胞的体外培养、增殖和分化

采用无血清培养基分离和培养大鼠脑的神经干细胞,并通过免疫荧光细胞化学技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定。鉴定结果表明,所分离培养的细胞为大鼠神经干细胞,具有神经干细胞的特征,并可在体外大量增殖和较长期培养,可经诱导分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞,是进行诱导分化的良好细胞模型。本文讨论了神经干细胞传代培养中应予以注意的问题和对策。     

成年大鼠毛囊神经嵴干细胞的培养、鉴定及初步诱导分化

目前多以施万细胞(Schwann cell,SC)、神经干细胞(neural stem cell,NSC)、骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)为种子细胞构建组织工程化周围神经。然而SC传代后形态和功能逐渐改变,NSC来源受限,BMSCs向神经细胞的分化率相对较低,因此寻     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离和体外培养

骨髓中的间充质干细胞 (ＭＳＣｓ ,ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ)是一种具有多向分化潜能的细胞 ,它的分化程度低 ,在特定的条件下 ,能诱导分化形成多种非造血组织细胞 (如 :成骨细胞、软骨细胞、肌细胞等 )。本实验对成体大鼠骨髓间充质干细胞进行了分离、培养和初步的组织化学检测 ,并对其生长方式进行了观察。1　材料与方法1.1　材料　实验动物为成年ＳＤ大鼠 ,由广西医科大学实验动物中心提供 ,饲养观察一周后使用。主要试剂为ＤＭＥＭ培养液 ,胎牛血清 ,胰蛋白酶和Ｐｅｒｃｏｌｌ分离液。1.2　方法1.2 .1　骨髓中间充质干…     

神经干细胞的增殖分化及当归对其影响

20世纪90年代初期提出神经干细胞的概念,从此彻底改变了以往认为中枢神经不能再生的认识。神经干细胞（neural stem cells,NSCs）研究是当前国际神经科学和脑科学研究的热点,因为它的多向潜能性决定了它将成为脑脊髓损伤和老年性疾病如帕金森氏病等神经系统疾病移植治疗最为理想的原材料,     

新生大鼠海马神经干细胞的培养与传代

目的:探讨新生大鼠海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分离培养的条件和传代新方法。方法:从新生大鼠海马中分离细胞,采用无血清培养技术,在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)和B27联合作用下使其不断增殖克隆。采用机械吹打和神经小球分离试剂盒两种不同方法进行传代,利用免疫荧光染色的方法对培养的细胞进行鉴定。结果:从新生大鼠海马分离的细胞群可不断增殖形成细胞克隆球,并能稳定传代,呈nestin阳性表达,且具有多向分化能力。采用神经小球分离试剂盒传代的细胞球比机械吹打传代的细胞球生长快,数量多,体积大,折光性好。结论:利用无血清技术和特定生长因子,可以使来源于新生大鼠海马的NSCs在体外扩增,利用大鼠神经小球分离试剂盒可以有效地进行传代,稳定高效地培养出神经干细胞。     

胚胎小鼠纹状体神经干细胞的体外培养和分化

目的：探索胚胎小鼠纹状体神经干细胞(striatum-neural stem cells，^strNSC)的体外培养和分化鉴定方法。方法：无菌条件下分离E15天胚胎小鼠纹状体，制成单细胞悬液，在bFGF和B27存在的培养基中培养扩增，通过免疫细胞化学显色鉴定神经干细胞及其子代细胞的分化方向。结果：培养的部分细胞在B27和bFGF存在的无血清培养基中可以在体外分裂增殖，同时表达神经干细胞特异性抗原nestin，并在撤出B27和bFGF的有血清培养基中向神经细胞和神经胶质细胞分化。结论：胚胎小鼠纹状体存在具有多分化潜能的神经干细胞，它们能在体外培养、传代和自然分化．     

成年神经干细胞的内在潜力

各种实验研究表明神经干细胞 神经元和神经胶质自我更新的祖细胞已能从胚胎和成年哺乳动物中枢神经系统分离培养[1] 。成人脑中的神经元祖细胞也已被识别 ,分离和培养的方法也已确立[2 ] 。它们可在培养中克隆增殖 ,为移植提供可更新材料 ;也可作为基因工程的理想载体 ,经基因转移表达神经递质、神经营养因子和代谢酶等外源性基因。但更直接的、更有效的治疗措施是充分调动干细胞的内在潜力 ,在体内诱导其增殖、神经元化、修复中枢神经系统功能。1　神经干细胞的分布、属性1 .1　胚胎发育中的神经干细胞起源　中枢神经系统起源于胚胎背侧神…     

新生大鼠神经干细胞的分离培养与观察

目的 建立神经干细胞的分离，培养及分化鉴定技术；观察神经干细胞生长，增殖及分化的特点，方法 分离新生SD大鼠脑室下区的组织，经消化及机械吹打后，采用原代贴壁及传代悬浮的方法，培养获得细胞克隆。应用免疫细胞化学方法及透射电镜检测技术，鉴定神经干细胞和分化的神经细胞，结果 从新生SD大鼠脑室下区分离的组织，经原代和传代培养均可形成细胞克隆，并具增殖的能力，原代和传代细胞抗原-nestin呈阳性，分化后的细胞可表达神经元，星形角质细胞和少突角质细胞的特异性抗原。结论 用此方法分离的细胞具有自我更新和分化潜能，有很强的增殖能力，是属于中枢神经系统的干细胞。     

雪旺氏细胞体外培养不同方法的比较

雪旺氏细胞(Schwann cells,SCs)在维持周围神经功能及周围神经损伤后再生的过程中发挥重要的作用。周围神经受损后能较好地再生。研究证明,周围神经这种自身修复能力主要依赖于SCs提供了适宜神经再生的微环境[1~3]。近年SCs在组织工程中作为重要的种子细胞应用于周围神经的损伤     

中枢神经系统干细胞研究进展

近年来，中枢神经系统干细胞的研究方法和其在临床应用方面的价值日益成为神经干细胞研究的焦点，本文对于神经干细胞的发现，最新的神经干细胞研究技术以及神经干细胞在中枢神经系统退变性疾病，缺血损伤和肿瘤治疗等方面的研究进展作一概述。     

成年大鼠纹状体区神经干细胞的分离培养

目的 从成年大鼠纹状体区分离并鉴定神经干细胞。方法 利用无血清增减和单细胞克隆技术在成年大鼠纹状体区分离具有单细胞克隆能力的细胞群,选取单个克隆进行连续伟代培养获得大量亚克隆,采用兔疫荧光细胞化学技术检测神经上皮干细胞蛋白（Ｎｅｓｔｉｎ）和分化后牧民性成熟神经细胞抗原的表达。结果 从纹状体区分离的细胞群具有连续克隆能力,表达神经上皮干细胞蛋白,分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的牧     

培养胚胎神经干细胞移植入纹状体后的形态学观察

本研究的目的是 :将体外培养的小鼠胚胎大脑皮层和脊髓的神经干细胞经单细胞悬液微移植后观察其在大鼠纹状体的存活、迁移和分化的状况。实验在无血清条件下将这些细胞扩增、培养再经活细胞荧光染料 Di I标记后 ,采用微移植的方法 ,通过脑立体定位仪上用微玻璃针将干细胞分别植入成年大鼠双侧纹状体的对称部位。大鼠存活 8周后 ,经灌注固定、恒冷箱切片 ,在荧光显微镜下观察标记的移植细胞的迁移状况 ;用星形胶质细胞特异性抗体观察移植区 GFAP的表达 ,以显示移植细胞分化状况。结果表明 :来源于胚胎小鼠大脑皮层和脊髓的体外培养神经干细胞经微移植后 ,均可在成年大鼠脑内纹状体区域存活 ,移植的神经干细胞可向周围的脑实质内迁移 ,迁移细胞沿特定的纹状体结构分布。神经干细胞主要分化成星形胶质细胞。本实验结果提示 ,移植的神经干细胞可在脑实质内存活、迁移和分化。     

不同年龄段大鼠脊髓源性神经干细胞的体外培养及鉴定

背景：不同年龄段神经干细胞的增殖及分化特性目前未见报道。 目的：观察不同年龄段大鼠脊髓源性神经干细胞的体外分离、培养及鉴定。 方法：取不同年龄大鼠的脊髓,制成单细胞悬液,用含有表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和B27的DMEM/F12培养基,以细胞浓度5.0×105 L-1进行原代培养,每隔3 d传代1次。 结果与结论：不同年龄段大鼠的脊髓中均可培养出细胞,其形态为结构紧密、大小不等的悬浮细胞球,称之为“神经干细胞球”;经过传代后单细胞又迅速增殖成球且数目明显增多。提示不同年龄段大鼠脊髓中均能够在体外培养出神经细胞球。