姜黄素抑制尾加压素-Ⅱ诱导的人晶状体上皮细胞增殖及[Ca^2＋]i、cAMP、cGMP信号转导机制

目的：探讨姜黄素（curcumin,Cur）抑制尾加压素Ⅱ（urotensinⅡ,U-Ⅱ）诱导的人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cell,HLEC）增殖及[Ca^2＋]i、cAMP、cGMP信号转导机制。方法：将U-Ⅱ诱导体外培养的HLEC发生增殖,并用不同浓度的Cur与其共同孵育后,用MTT法检测HLEC的活性;用流式细胞术（flowcytometer,FCM）检测HLEC增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达;用荧光分光光度法检测HLEC内游离钙离子浓度[Ca^2＋]i;用放射免疫分析法检测HLEC内环化腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）和环化鸟苷酸（cyclic guanosine monophosphate,cGMP）浓度。结果：U-Ⅱ组HLEC活性、PCNA蛋白表达和cGMP浓度均高于对照组（P〈0.01）;Cur组HLEC活性、PCNA蛋白表达和cGMP浓度均比U-Ⅱ组降低（P〈0.01）。U-Ⅱ组HLEC[Ca^2＋]i比对照组显著升高（P〈0.01）,U-Ⅱ组cAMP浓度比对照组显著降低（P〈0.01）;Cur组与U-Ⅱ组比较[Ca^2＋]i、cAMP浓度显著升高（P〈0.01）。结论：Cur可抑制U-Ⅱ诱导的HLEC增殖。[Ca^2＋]、cAMP-PKA、cGMP-PKG是其重要的细胞信号转导机制。Cur有可能成为防治后发性白内障的有效药物。     

车前子对晶状体上皮细胞氧化损伤防护作用的信号转导机制

目的：研究车前子对过氧化氢（H2O2）所致氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）内钙（Ca^2＋）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响,探讨归肝经明目中药防治白内障的细胞信号转导机制。方法：将H2O2与传代培养的牛LEC共同孵育复制氧化损伤模型,同时加入车前子水提取液孵育后,用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测LEC活性,用荧光分光光度法检测LEC内钙离子的浓度（[Ca^2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量,并探讨不同浓度的车前子及孵育12、24、36h的影响。结果：H2O2组LEC活性下降,车前子可明显增强氧化损伤的LEC活性（P〈0.01）,呈浓度依赖关系和时间依赖关系。H2O2组LEC的[Ca^2＋]i升高,车前子可显著降低由氧化损伤所致的LEC的[Ca^2＋]i的升高（P〈0.01）,呈时间-效应关系。H2O2组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降,车前子可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低（P〈0.01）、cGMP水平显著升高（P〈0.01）,也呈时间-效应关系。结论：车前子可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡,[Ca^2＋]i、cAMP和cGMP信号系统及其相互作用调节生物学效应可能是其细胞和分子生物学的主要作用机制。     

五种天然药物抑制晶状体上皮细胞增殖效应比较

目的：对五种天然药物姜黄素（curcumine,Cur）、榄香烯（elemene,Ele）、三氧化二砷（arsenite trioxide,As2O3）、雷公藤内酯醇（triptolide,Tfi）、莪术（rhizoma curcumae,Rc）抑制重组人碱性成纤维细胞生长因子（recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF）诱导的牛晶状体上皮细胞（lens epithelial cell,LEC）增殖效应进行比较。方法：将rhbFGF诱导体外培养的LEC发生增殖,并用Cur、Ele、As2O3、Tri、Rc分别与其共同孵育后,用MTT法检测LEC的活性：用流式细胞术（flow cytometer,FCM）检测LEC增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达。结果：增殖组LEC活性、PCNA蛋白表达显著高于对照组（P〈0．01）;Cur组、Ele组、As2O3组、％组、Rc组的LEC活性、PCNA蛋白表达均比增殖组显著降低（P〈0．01）。其中Cur、Ele的作用最强,As2O3的作用次之,Tri作用较弱,Rc作用最弱（P〈0．01）。Cur和Ele的作用相近（P〉0．05）。结论：五种天然药物Cur、Ele、As2O3、Tri、Rc均可抑制LEC增殖。Cur和Ele的作用最佳,有希望成为防治后发性白内障的有效药物。     

五种天然药物抑制晶状体上皮细胞增殖效应比较

目的：对五种天然药物姜黄素（curcumine,Cur）、榄香烯（elemene,Ele）、三氧化二砷（arsenitetrioxide,As203）、雷公藤内酯醇（triptolide,Tri）、莪术（rhizomacureumae,Re）抑制重组人碱性成纤维细胞生长因子（recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF）诱导的牛晶状体上皮细胞（1ensepithelial cell,LEC）增殖效应进行比较。方法：将rhbFGF诱导体外培养的LEC发生增殖,并用Cur、Ele、As20,、Td、Rc分别与其共同孵育后,用MTT法检测LEC的活性;用流式细胞术（flow cytometer,FCM）检测LEC增殖细胞核抗原（prolif-erating cell nuclear antigen,PcNA）表达。结果：增殖组LEC活性、PCNA蛋白表达显著高于对照组（P〈0．01）;Cur组、Ele组、As,O,组、Tri组、Rc组的LEC活性、PCNA蛋白表达均比增殖组显著降低（P〈0．01）。其中Cur、Ele的作用最强,A鄢O,的作用次之,畅作用较弱,Rc作用最弱（P〈0．01）。Cur和Ele的作用相近（P〉0．05）。结论：五种天然药物Cur、Ele、As,Q、％、Rc均可抑制LEC增殖。Cur和Ele的作用最佳,有希望成为防治后发性白内障的有效药物。     

阿魏酸钠防护晶状体上皮细胞氧化损伤的信号转导机制

目的:探讨阿魏酸钠对氧化损伤的晶状体上皮细胞内Ca2 、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,从细胞信号转导角度揭示天然药物防治白内障的细胞和分子学机制。方法:采用牛晶状体上皮细胞进行晶状体上皮细胞(LEC)原代和传代培养,以含有过氧化氢(H2 O2 )的培养液孵育LEC复制氧化损伤模型,并加入阿魏酸钠单体共同孵育。分别采用四甲基偶氮唑兰(MTT)比色测定法观察在不同时间和浓度条件下LEC活性变化,采用荧光分光光度计测定不同时间细胞内钙离子浓度([Ca2 ]i)以及放射免疫分析法测定不同时间LEC内cAMP、cGMP的含量变化。结果:H2 O2 组可引起LEC吸光度值(A)明显下降(P <0 .0 1) ,阿魏酸钠能明显增强氧化损伤的LEC活性,并呈剂量 效应关系和时间 效应关系。氧化损伤的LEC[Ca2 ]i 升高(P<0 .0 1) ;阿魏酸钠可以降低由H2 O2 引起的细胞[Ca2 ]i 的升高,并呈时间 效应关系。H2 O2 组cAMP浓度升高;cGMP浓度下降(P <0 .0 1) ;阿魏酸钠使cAMP水平下调,cGMP水平上升(P <0 .0 1) ,并呈时间 效应关系。结论:阿魏酸钠可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡,其作用机制可能是通过钙信号系统、cAMP信号系统、cGMP信号系统及其相互作用来调节生物学效应。     

榄香烯对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的：研究榄香烯（Ele）对重组人表皮生长因子（rhEGF）诱导的晶状体上皮细胞（LEC）增殖的抑制作用及剂量．效应和时间．效应关系，探寻防治后发性白内障的有效方法。方法：四甲基偶氮唑蓝法（MTT）测定不同浓度Ele对增殖状态的牛LEC活性的抑制作用，同时观察时间．效应关系；流式细胞术（FCM）检测不同浓度的Ele对增殖状态的牛LEC增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的抑制作用，同时观察时间．效应关系。结果：低、中、高不同浓度的Ele作用24h后，其增殖抑制率随浓度增加而增高，呈明显的剂量．效应关系；中浓度的Ele作用6、12、24、48、72h后，其增殖抑制率随作用时间延长而增高，呈明显的时间．效应关系。Ele对LEC内PCNA蛋白表达有明显的下调作用，低、中、高不同浓度的Ele作用24h后，其PCNA表达率随浓度增加而降低，呈明显的剂量．效应关系；中浓度的Ele作用6、12、24、48、72h后，其PCNA表达率随作用时间延长而降低，呈明显的时间．效应关系。结论：Ele能有效抑制IhEGF诱导的LEC增殖，对防治后发性白内障具有广阔的前景。     

环磷腺苷葡胺对儿童哮喘的治疗作用及机制探讨

目的：考察环磷腺苷葡胺对儿童哮喘患者的临床疗效,并初步探讨其机制。方法：选择2007年10月～2008年6月本院收治的哮喘急性期患儿51例,随机分为治疗组（29例）和对照组（22例）,另选24例健康儿童作为正常组。对照组给予糖皮质激素及支气管扩张剂常规治疗,治疗组在常规治疗的基础上静脉点滴环磷腺苷葡胺2.5～5mg/（kg.次）,每日1～2次,连续7d,分别于治疗前后测定各组患儿血浆cAMP、cGMP水平及cAMP/cGMP。结果：哮喘患儿急性期外周血浆cGMP水平高于正常组（P〈0.05）;cAMP,cAMP/cGMP水平低于正常组（P〈0.05）;给予环磷腺苷葡胺治疗的哮喘患儿外周血浆cGMP水平低于常规治疗组（P〈0.05）;cAMP、cAMP/cGMP水平高于常规治疗组（P〈0.05）。结论：环磷腺苷葡胺对哮喘急性期患儿有较好的治疗作用,其机制可能与纠正cAMP/cGMP失衡有关。     

Gua对培养的皮质神经元和成神经细胞瘤细胞钙超载的影响

目的：探讨Guattegaumerine（Gua）对H2O2、谷氨酸（glutamate，Glu）和缓激肽（bradykinin，BK）诱导的培养皮质神经元和成神经细胞瘤细胞内钙超载的影响。方法：采用钙荧光探针Furo-2／Am标记培养的细胞，荧光显微图象分析系统和双荧光波长分光光度计检测不同组细胞内钙荧光信号。结果：Gua能显抑制H2O2、谷氨酸引起的培养皮质神经[Ca^2＋]i升高（P〈0．05），亦明显抑制BK所诱导的培养人成神经细胞瘤细胞[Ca^2＋]i升高（P〈0．01）。结论：Gua具有一定的钙拮抗作用，其作用机制可能与其抑制外钙内流及抑制内质网钙释放有关。     

补阳还五汤及有效组分生物碱和苷对大鼠血小板聚集及血小板环核苷酸的影响

目的探讨补阳还五汤及其有效组分生物碱和苷抗血小板聚集机制。方法大鼠分别给予补阳还五汤原方、生物碱、苷和噻氯匹定，进行ADP诱导的血小板聚集实验。取聚集前、后的血小板提取cAMP、cGMP，采用放免法检测血小板cAMP、cGMP。结果各组血小板聚集比较，生物碱组、苷组和噻氯匹定组血小板聚集强度与空白组相比显著降低（P〈0．01）。原方组血小板聚集强度与空白组相比显著降低（P〈0．05）。血小板聚集后cAMP含量降低（P〈0．01）．而原方、生物碱、苷和噻氯匹定均可抑制ADP诱导的血小板cAMP下降（P〈0．05，P〈0．01）。血小板聚集后cGMP含量降低（P〈0．01），原方、生物碱、苷和噻氯匹定也可抑制聚集后血小板cGMP下降（P〈0．05，P〈0．01）。结论生物碱、苷、原方和噻氯匹定可抑制ADP诱导的大鼠血小板聚集，各药可抑制血小板聚集后血小板内cAMP、cGMP的下降，提示其抗血小板聚集作用是通过抑制聚集后血小板内环核苷酸降低而实现的。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠肾入球小动脉细胞内钙离子浓度的影响及Losartan的拮抗作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对肾小球入球小动脉细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响与高血压肾小动脉重建的关系及Losartan的治疗作用。方法细胞培养：大鼠肾小球入球小动脉细胞随机分为4组。对照组：不加AngⅡ处理;AngⅡ组：加入终浓度为0.1μmol.L^-1AngⅡ;Losartan组：加入终浓度为50μmol.L^-1Losartan;AngⅡ＋Losartan组：同时加入Losartan 50μmol.L^-1AngⅡ0.1μmol.L^-1负载后上机检测[Ca^2＋]i。结果细胞培养显示AngⅡ引起了细胞收缩变化,表现为胞突变细变短,胞突回缩,胞体变圆,细胞长度与直径均明显缩小。Losartan处理组较AngⅡ组细胞形态变化减轻且Losartan对AngⅡ增高RASMCs内[Ca^2＋]i有明显抑制作用。结论 AngⅡ可引起肾小球入球小动脉细胞内[Ca^2＋]i的上升,导致细胞收缩,因此Ca^2＋超载可能是肾素-血管紧张素系统起作用的重要环节。Losartan可抑制细胞内Ca^2＋超载。     

cGMP Signaling, Phosphodiesterases and Major Depressive Disorder

Deficits in neuroplasticity are hypothesized to underlie the pathophysiology of major depressive disorder (MDD): the effectiveness of antidepressants is thought to be related to the normalization of disrupted synaptic transmission and neurogenesis. The cyclic adenosine monophosphate (cAMP) signaling cascade has received considerable attention for its role in neuroplasticity and MDD. However components of a closely related pathway, the cyclic guanosine monophosphate (cGMP) have been studied with much lower intensity, even though this signaling transduction cascade is also expressed in the brain and the activity of this pathway has been implicated in learning and memory processes. Cyclic GMP acts as a second messenger; it amplifies signals received at postsynaptic receptors and activates downstream effector molecules resulting in gene expression changes and neuronal responses. Phosphodiesterase (PDE) enzymes degrade cGMP into 5’GMP and therefore they are involved in the regulation of intracellular levels of cGMP. Here we review a growing body of evidence suggesting that the cGMP signaling cascade warrants further investigation for its involvement in MDD and antidepressant action.     

预先应用咪哒唑仑抑制小鼠和大鼠吗啡戒断反应

目的:研究咪哒唑仑对小鼠和大鼠吗啡戒断反应的影响.方法:实验中采用急性和慢性吗啡依赖和纳洛酮催促戒断模型.使用放免法测定cAMP含量,免疫组织化学方法观察Fos蛋白表达变化.结果:合用咪哒唑仑和吗啡可抑制小鼠急性和慢性吗啡依赖的发展.在急性吗啡依赖小鼠,咪哒唑仑-吗啡组纳络酮催促跳跃的ED_(50)(10.4,8.5-12.3 mg/kg)明显大于生理盐水-吗啡组(3.0,1.9-4.3 mg/kg)(P<0.01).在慢性吗啡依赖小鼠,咪哒唑仑-吗啡组纳络酮催促跳跃的发生率和跳跃次数明显低于生理盐水-吗啡组(P<0.01).预先使用咪哒唑仑抑制吗啡戒断大鼠脊髓Fos蛋白表达,但不能抑制脊髓cAMP含量的增加.结论:咪哒唑仑通过抑制脊髓神经元敏感化减轻吗啡戒断反应,cAMP信号转导通路不参与介导这一效应.     

N-ethylmaleimide inhibition of thrombin-induced platelet aggregation.

The data presented in this report show that N-ethylmaleimide (NEM) is a powerful inhibitor of thrombin-induced platelet aggregation. NEM increased guanosine 3', 5'-cyclic monophosphate (cGMP) and adenosine 3', 5'-cyclic monophosphate (cAMP) levels in intact cells. The inhibition of cAMP high-affinity phosphodiesterase and cGMP phosphodiesterase was implicated in the elevation of the cyclic nucleotides. NEM dose dependently blocked the thrombin-stimulated, but not the phorbol myristate acetate-dependent phosphorylation of the protein kinase C substrate pleckstrin. Myosin light chain phosphorylation was also inhibited by NEM. In addition, the sulphydryl reagent inhibited Ca2+ mobilisation induced by thrombin. The data indicate that phospholipase C activation by thrombin is interrupted by NEM at the level of receptor-mediated signal transduction.     

cAMP/PKA信号通路在肾上腺肿瘤中的作用

目的：探讨cAMP/PKA信号通路在肾上腺肿瘤中的作用。方法将人肾上腺肿瘤H295R细胞随机分为对照组、实验组A及实验组B,对照组不进行处理,实验组A加入cAMP衍生物db-cAMP,实验组B加入db-cAMP及cAMP/PKA信号通路抑制剂H-89,分别检测细胞PKA活性;应用Western Blot方法检测cAMP/PKA信号通路下游CREB蛋白的磷酸化水平;CCK8实验检测细胞72 h的增殖水平;糖皮质激素分泌实验检测3组H295R的激素分泌能力。结果实验组A的PKA活性水平、CREB蛋白的磷酸化水平、细胞增殖水平、糖皮质激素分泌水平均较对照组和实验组B显著升高(P<0．05);而实验组B与对照组比较差异无统计学意义(P<0．05)。结论 cAMP/PKA信号通路的异常活化能够促进肾上腺肿瘤的形成与功能的发挥。