甲基汞对卵巢细胞酶及其线粒体的影响

用氯甲基汞（以１／２００ＬＤ５０、１／２０ＬＤ５０和１／２ＬＤ５０即０．１９２５ｍｇ／ｋｇ、１．９２５ｍｇ／ｋｇ和１９．２５ｍｇ／ｋｇ体重的剂量）给昆明种雌性小鼠经口染毒，然后测定卵巢细胞中的ＬＤＨ、Ｇ－６－ＰＤ和ＳＤＨ活性，同时做卵巢细胞线粒体的电镜观察。结果表明：各剂量组的ＬＤＨ、Ｇ－６－ＰＤ活性明显低于对照组（Ｐ＜０．０５）。１／２ＬＤ５０和１／２０ＬＤ５０组的ＳＤＨ活性也明显低于对照组（Ｐ＜０．０５）。从电镜看到线粒体膜较完整，但在１／２ＬＤ５０和１／２０ＬＤ５０组中的线粒体嵴数目减少，甚至完全消失，基质呈空泡状改变。总之，酶活性改变，能量代谢的异常和线粒体的损伤可能是氯化甲基汞造成卵巢细胞功能改变的重要原因。     

氯化甲基汞对卵巢细胞酶及其线粒体的影响

用氯化甲基汞（以１／２００ＬＤ５０、１／２０ＬＤ５０和１／２ＬＤ５０即０．１９２５ｍｇ／ｋｇ、１．９２５ｍｇ／ｋｇ和１９．２５ｍｇ／ｋｇ体重的剂量）给昆明种雌性小鼠经口染毒，然后测定卵巢细胞中的ＬＤＨ、Ｇ－６－ＰＤ和ＳＤＨ活性，同时做卵巢细胞线粒体的电镜观察。结果表明：各剂量组的ＬＤＨ、Ｇ－６－ＰＤ活性明显低于对照组（Ｐ＜０．０５）。１／２ＬＤ５０和１／２０ＬＤ５０组的ＳＨＤ活性也明显低于对照组（Ｐ＜０．０５）。从电镜看到线粒体膜较完整，但在１／２ＬＤ５０和１／２０ＬＤ５０组中的线粒体嵴数目减少，甚至完全消失，基质呈空泡状改变。总之，酶活性改变，能量代谢的异常和线粒体的损伤可能是氯化甲基汞造成卵巢细胞功能改变的重要原因。     

镍和镉对人外周血淋巴细胞的DNA损伤作用

目的了解不同类型ＤＮＡ损伤在镍、镉遗传毒理中的不同意义。方法分别用ＮｉＣｌ２和ＣｄＣｌ２对人外周血淋巴细胞进行体外染毒,再用单细胞凝胶电泳法,测定其ＤＮＡ单链、双链断裂和ＤＮＡ蛋白质交联水平,同时用［３Ｈ］ＮＡＤ参入法测定了这些细胞的聚（腺苷二磷酸核糖）聚合酶（ＰＡＲＰ）活性。结果尽管在两种金属处理过的细胞中ＤＮＡ单链、双链断裂和ＤＮＡ蛋白质交联水平与对照相比均有明显增高,但只有０．１０～１０．００μｍｏｌ／Ｌ的ＮｉＣｌ２和０．１６～２０．００μｍｏｌ／Ｌ的ＣｄＣｌ２诱导的ＤＮＡ双链断裂呈剂量反应关系。两种金属在低浓度时（ＮｉＣｌ２０．１０～０．４０μｍｏｌ／Ｌ,ＣｄＣｌ２０．１６μｍｏｌ／Ｌ）还能通过诱导ＤＮＡ断裂而激活ＰＡＲＰ,高浓度时（ＮｉＣｌ２２．００～１０．００μｍｏｌ／Ｌ,ＣｄＣｌ２０．８０～２０．００μｍｏｌ／Ｌ）反而不激活该酶。结论ＤＮＡ双链断裂的形成和ＰＡＲＰ激活的受阻可能在镍和镉的致癌和致突变机制中起着重要的作用。     

镉对中国仓鼠成纤维细胞活力和缝隙连接通讯功能的影响

目的　探讨致癌物镉对中国仓鼠肺成纤维细胞（Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒａｂｌａｓｔｓ,ＣＨＬＦ） 缝隙连接通讯（ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍ ｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ,ＧＪＩＣ） 功能的影响。方法　细胞毒性实验采用常规的噻唑蓝（ ＭＴＴ） 法,同时观察显微镜下细胞形态的变化。细胞ＧＪＩＣ 水平用划痕标记染料示踪（ＳＬＤＴ）技术测定。结果　ＣｄＣｌ２ 染毒２４ 小时和１２ 小时对ＣＨＬＦ 活力的半数抑制浓度ＩＣ５０ 分别为２０ ．８ μｍｏｌ／Ｌ和０ ．１５ ｍ ｍｏｌ／Ｌ。ＣｄＣｌ２ 在不产生明显细胞毒性的浓度下即可抑制ＣＨＬＦ 的ＧＪＩＣ 功能,该作用具有一定的剂量时间效应关系。细胞持续接触低浓度ＣｄＣｌ２ 一定时间后,受抑的ＧＪＩＣ 有恢复倾向,而在出现明显细胞毒性的情况下,ＧＪＩＣ 抑制是不可逆的。结论　ＧＪＩＣ 功能抑制可能在镉化合物致癌过程中起了一定的作用。     

Ge—132对人乳癌细胞株BCaP—37的生物学作用

应用细胞培养技术，分子杂交的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ法和图像细胞分析技术（ＩＣＭ），研究Ｇｅ—１３２对人乳癌细胞株ＢＣａＰ—３７的生物学作用。细胞生长曲线的结果显示，Ｇｅ—１３２的３个实验组（１０．０ｍｇ／Ｌ，１００．０ｍｇ／Ｌ，２００．０ｍｇ／Ｌ）对细胞的生长没有显著抑制作用，并对细胞的毒性作用很小。基因检测显示，高浓度Ｇｅ—１３２（２００．０ｍｇ／Ｌ）对癌基因Ｃ—ｅｒｂＢ，和癌相关基因ＥＧＦＲ ｍＲＮＡ的表达具有抑制作用。ＩＣＭ的四项指标显示，Ｂ和Ｃ两实验组（１０．０ｍｇ／Ｌ，２００．０ｍｇ／Ｌ）ＤＩ值呈异倍体。表现为恶性细胞的特征，两组核面积显著低于对照组（Ｐ＜０．０ｌ）：Ｃ组的Ｓ期百分比显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）。综合评价ＩＣＭ各项指标发现，Ｇｅ—１３２（２００．０ｍｇ／Ｌ）对细胞的增殖有一定抑制作用。     

氯化镉影响肾上腺皮质细胞分泌功能的实验研究

目的　探讨ＣｄＣｌ２ 对肾上腺皮质细胞分泌功能、细胞［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 调控和能量代谢的毒作用,为深入了解金属内分泌毒性机制提供依据。方法　体外分离培养原代豚鼠肾上腺皮质细胞,采用Ｆｌｕｏ － ３／ＡＭ 和Ｆｕｒａ－ ｒｅｄ／ＡＭ 联合标记、流式细胞术测定细胞［Ｃａ２＋ ］ｉ 变化,化学发光法测定ＡＴＰ 水平,ＲＩＡ 法测定培养细胞皮质醇分泌水平。结果　①ＣｄＣｌ２ 可浓度依赖性地抑制肾上腺皮质细胞分泌皮质醇的功能,且随时间延长抑制效应愈趋明显,呈现明显的剂量效应和时间效应关系,剂量和时间对抑制效应存在交互作用;②细胞［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 随ＣｄＣｌ２ 浓度增加而持续上升,表现出剂量效应关系。③细胞ＡＴＰ 水平随ＣｄＣｌ２ 浓度增加而降低,有明显的剂量效应和时间效应关系,而且存在交互作用。结论　一定浓度ＣｄＣｌ２ 对肾上腺皮质细胞［Ｃａ２＋ ］ｉ 调控、能量代谢和肾上腺皮质激素合成分泌具有直接毒作用。     

实时细胞分析技术与ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ法用于测定 纳米氧化铜细胞毒性的比较研究

摘要：目的　通过比较研究实时细胞分析技术（ｒｅａｌｔｉｍｅｃｅｌｌａｎａｌｙｚｅ,ＲＴＣＡ） 及ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ法测定纳米 氧化铜体外作用于人胚肺成纤维细胞ＭＲＣ ５及人正常肺上皮细胞ＢＥＡＳ ２Ｂ的毒性作用,探讨ＲＴＣＡ 实时 细胞分析技术用于测定纳米材料体外细胞毒性的可行性。方法　分别将ＭＲＣ ５ 及ＢＥＡＳ ２Ｂ 细胞接种于 ＲＴＣＡ 配套１６孔板中及普通９６孔板中,９６孔板中细胞用于ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ法测定细胞毒性。分别用剂量为 ０．７５ｇ／Ｌ、０．３８ｇ／Ｌ、０．１９ｇ／Ｌ、０．０９４ｇ／Ｌ、０．０４７ｇ／Ｌ 的纳米氧化铜混悬液进行染毒。选择１２ｈ、２４ｈ、 ３６ｈ、４８ｈ、６０ｈ时间点计算两种方法测得的ＩＣ５０值。采用ＳＰＳＳ１６．０分析软件,利用配对狋检验,对两种 方法所得相同时间点的ＩＣ５０值进行统计分析,判断其相关性及是否存在差异。结果　ＭＲＣ ５细胞用ＲＴＣＡ 法测定染毒后１２ ｈ、２４ ｈ、３６ ｈ、４８ ｈ、６０ ｈ 的ＩＣ５０ 值分别为３９１ ｍｇ／Ｌ、２４９ ｍｇ／Ｌ、１８５ ｍｇ／Ｌ、 １６５ｍｇ／Ｌ、１４７ｍｇ／Ｌ;ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ法所得相同时间点的ＩＣ５０值分别为５０７ ｍｇ／Ｌ、２０６ ｍｇ／Ｌ、１７２ ｍｇ／Ｌ、 １５４ｍｇ／Ｌ、９５．２ｍｇ／Ｌ。两种方法所测得ＩＣ５０值进行统计分析,差异无统计学意义。ＢＥＡＳ ２Ｂ 细胞用ＲＴＣＡ 法测定染毒后１２ｈ、２４ｈ、３６ｈ、４８ｈ、６０ｈ 的ＩＣ５０ 值分别为１３１ ｍｇ／Ｌ、８３．７８ ｍｇ／Ｌ、６５．３７ ｍｇ／Ｌ、 ５３．９８ｍｇ／Ｌ、５１．２３ ｍｇ／Ｌ;Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ 法所得相同时间点的ＩＣ５０ 值分别为１４８ ｍｇ／Ｌ、１０４ ｍｇ／Ｌ、 ７７．３ｍｇ／Ｌ、４２．５ｍｇ／Ｌ、３９．２ｍｇ／Ｌ。两种方法所测得ＩＣ５０ 值进行统计分析, 差异无统计学意义。结论　 ＲＴＣＡ 实时监测法与ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ法在相同时间点测定纳米氧化铜体外细胞毒性得ＩＣ５０值差异无统计学意 义,说明ＲＴＣＡ 实时监测法测定体外细胞毒性结果可靠,适用于纳米材料的体外毒性研究。 关键词：实时细胞分析技术（ＲＴＣＡ）;ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ法;纳米氧化铜;ＭＲＣ ５细胞;ＢＥＡＳ ２Ｂ细胞 中图分类号：Ｒ１１４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１６）０７ ０４９１ ０５     

苯并(a)芘代谢产物作用下人胚肺细胞热应激蛋白70表达与DNA损伤

目的 探讨苯并（ａ）芘（ＢａＰ）代谢产物作用下,人胚肺细胞ＨＳＰ７０表达与ＤＮＡ损伤的关系。方法 选用正常人胚肺（ＨＥＬ）二倍体细胞,进行如下处理：一般处理组,以０、１０、５０、１００、２００ｕｍｏｌ／Ｌ ＢａＰ染毒３ｈ（体外经大 地Ｓ９－ｍｉｘ活化诱导）,单细胞凝胶电泳技术检测ＤＮＡ损伤情况;热应激组,细胞预热应激（４１℃１ｈ,３７℃２ｈ）,再以同样浓度的ＢａＰ染毒３ｈ,采用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和单细胞凝胶电泳技术检测ＨＳＰ７０表达与ＤＮＡ损伤情况。结果 一般处理组ＢａＰ在５０ｕｍｏｌ／Ｌ时可引起ＨＥＬ细胞ＤＮＡ的明显损伤,且随ＢａＰ染毒剂量增加,ＤＮＡ损伤级别加重;接受预热应激的细胞经不同浓度ＢａＰ染毒３ｈ后,与对照组比,ＨＳＰ７０表达水平降低,ＢａＰ在１０ｕｍｏｌ／Ｌ时可见明显的ＤＮＡ损伤,随染毒剂量     

氯化镉诱发肾上腺皮质细胞凋亡与应激活化蛋白激酶活性的 …

目的 了解氯化镉诱发肾上腺皮质细胞凋亡的发生及应激活化蛋白激酶（ＳＡＰＫ）活性的变化。方法 体外分离培养豚鼠肾上腺皮质细胞,以蛋白因子添加素Ⅴ和碘化丙啶联合标记,流式细胞仪检测,观察氯化镉诱发细胞凋亡的特征;采用免疫沉淀－化学发光法测定ＳＡＰＫ活性。结果 ６．２５～２００．００μｍｏｌ／Ｌ剂量氯化镉处理２ｈ,凋亡细胞百分率随剂量增加而增加,平均为９．９０％、１５．４７％、３３．６７％、５３．７０％     

嗜银蛋白在矽肺纤维化过程中的意义

目的探索ＳｉＯ２刺激ＴＨＰ１细胞（具有肺泡巨噬细胞特性的人血单核细胞株）上清液对中国仓鼠肺成纤维（ＣＨＬ）细胞核仁组成区相关的嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲｓ）形成及其增殖的关系。方法通过５个系列浓度（０、５０、１００、２００和５００μｇ／ｍｌ）的ＳｉＯ２刺激ＴＨＰ１细胞培养上清液作用于ＣＨＬ细胞,采用综合改良ＡｇＮＯＲｓ染色技术,观察其ＡｇＮＯＲｓ形成并计数;四唑盐（ＭＴＴ）比色法检测ＣＨＬ细胞的增殖。结果随ＳｉＯ２浓度增大,ＣＨＬ细胞ＡｇＮＯＲｓ颗粒均数、颗粒分散度以及ＭＴＴ分析Ａ５７０ｎｍ值均相应增大,呈良好的剂量反应关系,并和ＳｉＯ２尘的肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）的细胞毒性指数呈高度负相关（ｒ＝－０．９６８,Ｐ＜０．０１）。结论ＳｉＯ２刺激的ＴＨＰ１细胞上清液可以引起肺成纤维细胞ＡｇＮＯＲｓ含量的改变,并与成纤维细胞的增殖和ＳｉＯ２尘ＰＡＭ细胞毒性相一致。     

潜在转化生长因子结合蛋白2在镉致人支气管上皮细胞氧化损伤中的作用

目的 研究潜在转化生长因子结合蛋白2基因(latent transforming growth factor-β binding protein 2,LTBP2)在氯化镉致人支气管上皮细胞(the human bronchial epithelial cells,16HBE)氧化损伤中的作用。 方法 分别用10、20、30、40 μmol/L氯化镉处理16HBE细胞24 h,用30 μmol/L 氯化镉处理16HBE细胞12、24、48 h,利用qRT-PCR法检测细胞LTBP2基因表达变化。针对目的基因设计特异性shRNA序列,退火并组装到慢病毒载体pCDH上,构建16HBE稳定LTBP2低表达细胞株。分别用硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力。 结果 30、40 μmol/L处理组细胞LTBP2 mRNA相对表达与氯化镉浓度为0 μmol/L对照组比较有统计学意义(P<0.05),且随着氯化镉染毒剂量的增加,LTBP2mRNA表达逐渐升高(P<0.01)。30 μmol/L氯化镉分别处理16HBE细胞24、48 h,细胞LTBP2 mRNA基因相对表达与氯化镉未染毒细胞比较差异有统计学意义(P<0.01)。不同浓度氯化镉处理16HBE及LTBP2低表达细胞株16HBE-shLTBP2不同时间,与16HBE相比,氯化镉处理的16HBE-shLTBP2 SOD含量显著升高(P<0.05),而MDA含量显著降低(P<0.05)。 结论 LTBP2低表达细胞减弱镉致细胞氧化损伤毒性,提示LTBP2基因可能在镉致细胞氧化损伤过程中发挥促氧化作用。     

镉对人胚肾细胞中经典瞬时受体电位通道mRNA表达影响

目的观察不同质量浓度的氯化镉(CdCl2)染毒后人胚肾细胞(HEK 293T细胞)经典瞬时受体电位通道(TRPC)6个亚型mRNA表达水平的改变,在mRNA水平上探讨镉对肾细胞钙通道的影响。方法 HEK 293T细胞分别暴露于7.5、15.0、30.0、45.0和60.0μmol/L的CdCl28 h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活力;实时荧光定量聚合酶链反应法检测0、15.0和30.0μmol/L CdCl2作用8 h和30.0μmol/L CdCl2染毒4 h后TRPC 6个亚型mRNA表达水平。结果以对照组(CdCl20μmol/L)HEK 293T细胞存活率为100%,各不同质量浓度的染毒组细胞存活率分别为79.40%、77.29%、72.26%、70.25%、60.80%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。经CdCl2染毒后,各染毒组HEK 293T细胞的TRPC 6个亚型mRNA相对表达量均低于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论 CdCl2可能引起HEK 293T细胞的TRPC基因mRNA的表达水平发生改变。     

氯化镉对大鼠肾上皮细胞丝裂原活化蛋白激酶表达及其磷酸化的影响

目的 探讨氯化镉染毒大鼠正常肾上皮(normal rat kidney epithelial,NRK)细胞对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达及其磷酸化水平的影响.方法 应用不同剂量(0、1、5、10、20、40 μmol/L)氯化镉染毒NRK细胞24 h和同一剂量氯化镉(10 μmol/L)于不同时间(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 h)染毒NRK肾细胞.采用蛋白免疫印迹法检测氯化镉染毒后NRK细胞中MAPK表达水平,并用磷酸化抗体检测MAPK磷酸化水平.结果 不同氯化镉剂量和不同染毒时间染毒NRK细胞,发现MAPK表达无明显改变,但MAPK磷酸化蛋白表达量较对照组升高.氯化镉浓度在10 μmol/L时p-ERK1/2表达明显,表达量为1. 00±0.06;20 μmol/L和40 μmol/L剂量组表达量分别为2.58±0.11、2.76±0.23,比10 μmol/L组高1.58倍和1.76倍,差异有统计学意义(F=827.70,P＜0.01);氯化镉浓度为20 μmol/L(2.47±0.20)和40 μmol/L(3.73±0.25)时p-p38MAPK表达量比对照组(1.00±0.02)高1.47倍和2.73倍,差异有统计学意义(F=280.06,P＜0.01).p-ERK1/2和p-p38MAPK表达量与氯化镉浓度存在剂量-效应关系(p-ERK1/2相关系数为r=0.919,t=4.69,P=0.009;p-p38MAPK相关系数为r=0.945,t=5.79,P=0.004).MAPK磷酸化蛋白表达水平也与染毒时间相关,p-ERK1/2在染毒1 h(1.26±0.11)时表达明显,染毒4 h(1.51±0.07)和8 h(3.53±0.23)时表达量是对照组(1.00±0.02)的1.5倍和3.5倍,差异有统计学意义(F=427.82,P＜0.001);p-p38MAPK在染毒1 h(1.31±0.07)时表达也明显增加,染毒4 h(3.53±0.32)和8 h(4.41±0.38)时表达水平是对照组(1.00±0.03)的3.5倍和4.4倍,差异有统计学意义(F=280.06,P＜0.001).结论 氯化镉染毒NRK细胞可引起MAPK蛋白磷酸化水平明显升高,可能与MAPK的激活有关.     

牛磺酸拮抗氯化镉致肝细胞氧化损伤的保护作用

目的观察牛磺酸拮抗氯化镉致大鼠肝细胞氧化损伤的保护作用。方法实验分5组:①阴性对照组;②氯化镉组:分别加入终浓度为10、20、40、100μmol/L的氯化镉;③同时处理组:终浓度为100 mmol/L的牛磺酸与氯化镉10、20、40、100μmol/L同时加入;④后处理组:先加入终浓度为10、20、40、100μmol/L的氯化镉,45min后加入100 mmol/L的牛磺酸;⑤预处理组:先加入终浓度为100 mmol/L的牛磺酸,45 min后加入10、20、40、100μmol/L的氯化镉。所有的处理组均培养2 h。结果①肝细胞中10、20、40、100μmol/L的氯化镉组GSH-Px酶活性明显低于阴性对照组;随着镉浓度增加,GSH-Px酶活性下降呈一定的剂量-效应关系。②预先处理组(65.26±14μmol/L)及同时处理组(49.65±1.54μmol/L)细胞GSH-Px酶活性明显升高,与相应的氯化镉组(27.11±1.09μmol/L)比较有显著性差异(P<0.05)。③当后处理组镉浓度达到40～100μmol/L时,细胞内SOD活性显著降低(23.08±1.49 U/ml),与相应的氯化镉组...     

镉诱导人胚肾细胞金属硫蛋白基因亚型的表达

[目的]研究镉对人胚肾细胞（HEK293T）金属硫蛋白（MT）各基因亚型表达的影响。[方法]以10μmol/LCdCl2染毒HEK 293T0、2、4、8、12、16、20、24h,2.5、5、10、20、40μmol/LCdCl2染毒HEK293T24h后,采用MTT法测定HEK 293T增殖活性;采用RT-PCR检测镉对HEK 293T MT-1A、MT-1B、MT-1E、MT-1F、MT-1G、MT-1H、MT-1X及MT-2A mRNA表达的影响。[结果]CdCl2染毒HEK 293T 24h后,经10μmol/LCdCl2诱导后,随时间MT-1A、MT-1F、MT-1G、MT-1H及MT-2A mRNA表达水平均呈先升高后降低趋势。MT-1X mRNA水平在8h明显升高（P〈0.05）,16h达到峰值并持续到24h。5μmol/L以上CdCl2均可明显抑制HEK293T活力,与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。MT-1A、MT-1F、MT-1G、MT-1H及MT-2A mRNA在2.5μmol/LCdCl2诱导表达水平均达到峰值,随着剂量增加,MT-1F、MT-1G、MT-1H维持在较高水平,40μmol/L剂量水平仍明显高于对照组（P〈0.05）,MT-1A、MT-2A在40μmol/L降低到基础表达水平。MT-1X mRNA表达水平与染毒剂量呈线性正相关（r=0.75,P〈0.01）。MT-1X的表达与镉对HEK 293T毒性呈负相关关系（r=-0.88,P〈0.01）。[结论]镉可以诱导MT-1F、MT-1G、MT-1H、MT-1X及MT-2A mRNA表达水平明显升高,并表现出特定的剂量-效应和时间-效应关系。     

p38MAPK和ERK1／2对镉诱导NRK肾细胞c-myc与c-fos基因mRNA表达的影响

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和细胞外信号调节激酶（ERK）1／2抑制剂对镉染毒NRK肾细胞后原癌基因c—myc与c—fos表达的影响。方法用不同剂量CdCl2（0、2．5、5．0、10．0μmol／L）染毒大鼠NRK细胞12h,p38MAPK抑制剂SB20358010．0μmol／L和ERK1／2抑制剂PD9805910μmol／L预处理NRK细胞0．5h后,再加入10．0μmol／LCdCl2染毒细胞,用流式细胞技术检测细胞凋亡率,SYBRGreenI荧光定量PCR检测c-rnyc与c-fosmRNA表达。结果流式细胞仪检测NRK细胞染镉后细胞凋亡率随染毒剂量增加而增加;p38MAPK抑制剂SB203580＋10．0μmol／LCdCl2组与单独染镉组比较,细胞凋亡率显著下降;但ERK1／2抑制剂PD98058＋10．0μmol／LCdCl2组与单独染镉组比较,细胞凋亡率显著升高。实时荧光定量PCR检测NRK细胞染镉后c—myc和c—fosmRNA表达明显增强;单独用SB203580和PD98058刺激NRK细胞后c-myc和c—fosmRNA表达与对照组比较,差异无统计学意义,但SB203580和PD98058预处理NRK细胞0.5b后加入10．0μmol／LCdCl2与单纯10．0μmol／L染镉组比较,c—myc和c-fosmRNA表达显著降低。结论MAPK信号转导通路可能在镉诱导原癌基因c—myc和c—fos表达中发挥作用。     

镉致成骨细胞增殖、分化及矿化损伤的预后效应

[目的]探讨镉染毒和染毒中止后成骨细胞增殖、分化及矿化等生物学功能的改变。[方法]采用混合酶消化法,分离sD大鼠颅盖骨成骨细胞,在5％CO2、37℃条件下培养24h后,持续镉染毒组以不同浓度的氯化镉（0～2．000μmol／L）持续染毒72h;间断镉染毒组以同样浓度的氯化镉染毒48h后,更换成无镉培养液继续培养24h,以噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖能力改变,用对硝基苯磷酸二钠盐（PNPP）偶氮法检测碱性磷酸酶（ALP）活性。同时,成骨细胞培养7d后,以0．500μmol／L氯化镉持续作用3—13d,然后分别停止作用10、8、6、0d,采用茜素红S进行矿化结节染色并计算面积以观察镉暴露中止后成骨细胞矿化能力损伤的恢复情况。[结果]氯化镉可明显抑制成骨细胞增殖、ALP活性及矿化能力。间断镉染毒组在停止作用24h后,成骨细胞的增殖、分化仍然明显低于对照组（P〈0．05）,与持续作用组比较没有明显改善。同样,间断镉染毒组在停止作用不同时间后,成骨细胞矿化结节数量和面积仍然明显低于对照组（P〈O．05）,与持续作用组相比没有明显恢复。[结论]镉暴露中止一定时间后,镉对成骨细胞的影响作用仍明显存在,表现为对成骨细胞增殖、分化及矿化能力的持续抑制。     

苯并(a)芘致神经元线粒体膜电位和胞质细胞色素C的变化

目的 探讨苯并(a)芘[B(a)P]致神经元凋亡中线粒体膜电位和胞质中细胞色素C(CytC)蛋白变化.方法 选用新生1～3 d的SD大鼠分离大脑皮质进行神经元培养,在细胞培养第5天,选取生长良好的同批次神经细胞,以B(a)P同时加S9分别对神经元染毒,使B(a)P终浓度分别为0、10、20、40 μmol/L.继续培养40 h,应用Annexin V和碘丙啶(PI)双染法进行细胞凋亡的检测,加入Rh123,应用流式细胞仪测定细胞线粒体膜电位,免疫印迹(Western blot)法测定神经元胞质中Cyt C蛋白的表达.结果 随着B(a)P浓度的增加,神经细胞的早期、晚期凋亡率逐渐增高,中、高剂量组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),趋势检验表明,早期凋亡率增高具有剂量依赖性.随B(a)P染毒浓度的增加,神经细胞线粒体膜电位下降,低、中、高剂量组神经细胞膜电位分别为5.02±1.32、4.36±1.26、3.15±1.47,与对照组(8.89±2.18)比较,差异均有统计学意义(P<0.05),线粒体膜电位与早期凋亡率之间呈负相关(r=-0.763,P<0.05);随着B(a)P浓度的增加,胞质中Cyt C蛋白的表达逐渐升高,Cyt C蛋白表达与早期凋亡率间呈正相关(r=0.831,P<0.01).结论 B(a)P可致神经细胞凋亡,线粒体膜电位降低以及Cyt C的释放可能是诱发凋亡的主要因素.     

叔丁基对苯二酚对锰致神经细胞毒性的保护作用

目的 研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)对锰致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞毒性的保护作用.方法 以不同终浓度(300、600、900μmol/L)的MnCl2分别处理PC12细胞24、48、72 h,用噻唑蓝(MTT)法检测PC12细胞毒性.MnCl2组予600μmol/L MnCl2处理72 h;tBHQ组予40 μmol/L tBHQ处理细胞84h;tBHQ+MnCl2组予40μmol/L tBHQ预处理12h后,600 μmol/LMnCl2处理72 h,用MTT法检测细胞毒性,MnCl2处理剂量为300 μmol/L时用Annexin V-FITC/PI法流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡.结果 与对照组比较,300、600、900μmol/LMnCl2处理24、48、72h,细胞增殖相对比值降低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);300、600、900 μmol/L MnCl2处理组各组间相互比较,有剂量一效应关系,差异均有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,600 μmol/L MnCl2组抑制PC12细胞增殖,抑制率为40%,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组及MnCl2组比较,tBHQ组和tBHQ+MnCl2组的细胞出现增殖效应,细胞增殖相对比为1.8,差异均有统计学意义(P＜0.01).300μmol/L MnCl2处理组PC12细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),tBHQ+MnCl2组细胞凋亡率低于300μmol/L MnCl2处理组,差异有统计学意义(P＜0.01),细胞凋亡抑制率61%.结论 锰可抑制PC12细胞增殖作用,可诱导细胞凋亡;tBHQ可减弱锰抑制PC12细胞的增殖作用并可削弱锰致PC12细胞凋亡的作用.     

氢醌对人支气管上皮细胞DNA损伤及细胞周期的影响

目的探讨氢醌(HQ)对体外培养人支气管上皮细胞DNA损伤及细胞周期的影响。方法将HBE细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80、160、320μmo/lL)的氢醌作用24 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定16HBE细胞的相对存活率,用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA的损伤情况,流式细胞术检测细胞周期分布。结果在0～40μmo/lL范围内HQ作用24 h后,16HBE细胞的存活率未见明显变化(P>0.05);当染毒剂量超过80μmo/lL时,细胞存活率明显下降(P<0.01)。SCGE显示随着HQ浓度的升高,16HBE细胞的DNA断裂程度加重。HQ作用浓度在10～320μmo/lL范围内,16HBE细胞的细胞周期表现为G2期阻滞,G1期比例下降。结论 HQ会对16HBE细胞的DNA产生损害,并且引起G2期细胞阻滞。