磷脂转运蛋白在高密度脂蛋白代谢和胆固醇逆向转运中的生物学作用

磷脂转运蛋白(PLTP)活性与糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化等疾病明显相关的作用机制主要与其参与脂蛋白代谢有关。其中最引人注目的是PLTP在高密度脂蛋白(HDL)代谢和胆固醇逆向转运(RCT)中发挥的复杂生物学作用。PLTP可否通过影响HDL和RCT而发挥对动脉粥样硬化的作用?本文通过近年的文献复习并结合我们的相关工作与读者一同寻找答案和线索。     

脂蛋白血管外循环与胆固醇逆向转运

胆固醇逆向转运是机体周围组织细胞胆固醇转运至肝脏转化排泄的重要生理过程，它在维持机体胆固醇平衡和防止动脉粥样硬化的发生和发展过程中起着重要的作用。脂蛋白是胆固醇的载体，血浆脂蛋白可以透过血管壁进入间质组织，通过与组织细胞直接接触接受细胞释出的胆固醇，再经淋巴液或直接返回血浆，并运至肝脏代谢。因此，脂蛋白血管外循环是胆固醇逆向转运重要组成部分。研究脂蛋白血管外循环的过程、特征以及代谢变化的规律，对心血管病的防治具有重要的理论和实践价值。     

B类Ⅰ型清道夫受体与胆固醇的双向转运

B类Ⅰ型清道夫受体是一种细胞膜的糖蛋白,具有广泛的配基识别谱,在多种组织中高度表达。它是一种高密度脂蛋白(HDL)的高亲和力受体,在细胞水平上介导高密度脂蛋白和低密度脂蛋白选择性摄取胆固醇酯。在介导游离胆固醇的双向转运,参与动脉壁胆固醇的清除中起着重要作用。     

B类I型清道夫受体与胆固醇的双向转运

B类I型清道夫受体是一种细胞膜的糖蛋白,具有广泛的配基识别谱,在多种组织中高度表达.它是一种高密度脂蛋白(HDL)的高亲和力受体,在细胞水平上介导高密度脂蛋白和低密度脂蛋白选择性摄取胆固醇酯.在介导游离胆固醇的双向转运,参与动脉壁胆固醇的清除中起着重要作用.     

磷脂转运蛋白与脂蛋白代谢和动脉粥样硬化

动脉粥样硬化性心脑血管疾病是困扰人类健康的首要慢性炎症性疾病。而脂蛋白代谢异常是公认的动脉粥样硬化主要危险因素。2001年哥伦比亚大学的研究人员发现磷脂转运蛋白可以通过影响脂蛋白代谢进而改变动脉粥样硬化的易感性,从而开启了长达十多年的磷脂转运蛋白热点研究。　从动物实验到人群调查使得人们对磷脂转运蛋白在脂蛋白代谢和动脉粥样硬化中作用的认识不断深入。     

B类I型清道夫受体过表达对J774细胞胆固醇转运以及肿瘤坏死因子α表达的影响

目的通过构建人B类Ⅰ型清道夫受体真核表达载体、使细胞瞬时过表达B类Ⅰ型清道夫受体，观察其对肿瘤坏死因子（tmnor neerosis factor,TNF）α和单核细胞趋化因子1（monocyte chemoattractant protin MCPI）表达的影响，初步探讨单核-巨噬细胞B类Ⅰ型清道夫受体抗动脉粥样硬化的作用机制，     

氧化型低密度脂蛋白中不同氧化产物对小鼠腹腔巨噬细胞溶酶体胆固醇蓄积的影响

为研究氧化型低密度脂蛋白中不同氧化产物对小鼠腹腔巨噬细胞溶酶体胆固醇蓄积的影响。分别用1 0 0mg L的铜氧化的低密度脂蛋白和次氯酸钠氧化的低密度脂蛋白处理小鼠腹腔巨噬细胞 2 4h ,分别测定巨噬细胞溶酶体中胆固醇和总蛋白的含量以及溶酶体中组织蛋白酶L的活性。结果发现 ,铜氧化型低密度脂蛋白和次氯酸钠氧化型低密度脂蛋白均可引起总胆固醇和总蛋白在溶酶体蓄积 (实验组总胆固醇分别为 1 6 .90± 0 .1 5 μg和1 5 .1 1± 0 .5 4 μg ,对照组为 3.2 8± 0 .0 8μg ,P <0 .0 1 ;实验组总蛋白分别为 1 7.93± 1 .6 6 μg和 2 1 .0 0± 1 .6 8μg ,对照组为 1 3.39± 2 .6 4 μg ,P <0 .0 1 )。但蓄积的胆固醇类型有所不同 ,前者以游离胆固醇为主 (游离胆固醇为 1 4 .1 3± 0 .1 4μg ,胆固醇酯为 4 .77± 0 .33μg) ;后者则以胆固醇酯为主 (游离胆固醇为 5 .0 1± 0 .30 μg ,胆固醇酯为 1 0 .1 0± 0 .4 8μg)。铜氧化低密度脂蛋白可造成溶酶体组织蛋白酶L活性明显下降 (1 1 .1± 2 .3kau g比 73.2± 1 5 .0kau g ,P <0 .0 1 ) ,而次氯酸钠氧化低密度脂蛋白的作用不明显 (73.6± 9.5比 73.2± 1 5 .0 ,P >0 .0 5 )。以上结果提示 ,不同氧化产物引起溶酶体胆固醇蓄积的种类不同 ,而蛋白降解受阻可     

普罗布考对体内巨噬细胞胆固醇逆转运的作用

目的 测定不同剂量普罗布考干预后小鼠体内胆固醇逆转运效率,探讨普罗布考影响小鼠体内胆固醇逆转运的机制.方法 32只C57BL/6小鼠随机分为4组,给予不同剂量普罗布考(0,0.1％,0.5％,1.0％ W/W)添加饲料饲养4周后,腹腔注射经ac-LDL及3 H-胆固醇处理过的RAW264.7小鼠巨噬细胞悬液,48小时后测定粪便3H-胆固醇含量;提取肝脏和小肠组织RNA及细胞膜蛋白,分别检测肝脏胆固醇7 α-羟化酶、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B I)和ABCG5及小肠ABCG5基因与蛋白的表达.结果 普罗布考干预各组(0.1％,0.5％,1.0％)小鼠粪便中3H的总含量显著增多;0.5％与1.0％普罗布考两组之间差异无统计学意义.普罗布考干预后肝脏胆固醇7α-羟化酶、ABCG5 mRNA呈剂量依赖性地表达增多;肝脏、小肠ABCG5 mRNA及其蛋白呈剂量依赖性地表达增加;0.5％与1.0％普罗布考两组之间差异无统计学意义.普罗布考干预后肝脏SR-B Ⅰ的mRNA与蛋白表达没有明显变化.结论 普罗布考剂量依赖性地促进小鼠体内巨噬细胞的胆固醇逆转运,其机制可能是通过上调肝脏胆固醇7α-羟化酶、肝脏和小肠ABCG5的表达.     

脂质转运阻断剂BLT4对小鼠腹膜巨噬细胞B类I型清道夫受体表达及其介导的胆固醇转运的影响

目的观察脂质转运阻断剂BLT4对小鼠腹膜巨噬细胞B类I型清道夫受体表达及其介导的胆固醇转运的影响。方法以载脂蛋白E-/-小鼠腹膜巨噬细胞 DMSO溶媒对照或 100μmol/L BLT4为I组、II组,具有相同遗传背景的C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞 DMSO溶媒对照或 100μmol/L BLT4为III组、IV组     

磷脂对高密度脂蛋白3介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出的影响

为了研究卵磷脂和鞘磷脂对高密度脂蛋白 3介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出的影响 ,测定了细胞内胆固醇含量、磷脂含量及游离胆固醇 -胆固醇酯平衡的变化。结果发现 ,各组细胞内胆固醇含量从 79.75 μg/皿变为 42 .79、37.16、31.5 3μg/皿 ;高密度脂蛋白 3组和卵磷脂组中卵磷脂磷含量分别为 13.95和 16 .2 8μg/皿 ;高密度脂蛋白和鞘磷脂组中鞘磷脂磷含量分别为 5 .0 3和 7.0 1μg 皿。细胞与BSA、卵磷脂、鞘磷脂单独孵育后 ,细胞内胆固醇含量分别为 75 .30、74.6 5和 73.0 9μg/皿 ,游离胆固醇 /总胆固醇比值分别为 5 9.42 %、5 6 .95 %和 6 4.77%。结果提示卵磷脂和鞘磷脂均能促进高密度脂蛋白 3介导细胞内胆固醇流出 ,后者强于前者 ,而卵磷脂和鞘磷脂单独不能促进细胞内胆固醇的流出。鞘磷脂促进细胞内胆固醇酯向游离胆固醇转化 ,卵磷脂促进细胞内游离胆固醇向胆固醇酯转化     

体内巨噬细胞来源的胆固醇逆向转运效率监测方法

目的测定小鼠血清、肝脏及粪便中3H-胆固醇占经腹腔注射3H-胆固醇总量的百分比,探讨直接检测活体内巨噬细胞来源的胆固醇逆向转运方法。方法16只C57BL/6小鼠随机分为两组,分别经腹腔注射普通培养基(对照组)或乙酰化低密度脂蛋白及3H-胆固醇处理过的RAW264.7细胞悬液(实验组),单独笼养12 h和24 h后取血,酶法测定血清脂质;收集血清、肝组织、0~24 h粪便,用液闪计数仪测定各样本的3H-胆固醇含量(以占注射总量百分比计算)。结果24 h后实验组小鼠血清、肝脏和粪便中均可检测到3H的放射活性,分别占注射总量的2.810%±0.060%、0.680%±0.030%及0.690%±0.030%,且明显高于对照组。结论经腹腔注射乙酰化低密度脂蛋白及3H-胆固醇处理过的RAW264.7小鼠巨噬细胞悬液,24 h后可以分别检测到小鼠血清、肝组织、0~24 h粪便中3H-胆固醇含量,是一种直接检测小鼠体内巨噬细胞来源的胆固醇逆向转运的可行方法。     

NgBR对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运的影响

目的通过转染小干扰RNA(siRNA)沉默RAW264.7细胞源性泡沫细胞神经轴突生长抑制因子B受体(Ng BR)表达,研究Ng BR对泡沫细胞胆固醇逆转运(RCT)的影响,探索从RCT途径抗动脉粥样硬化(As)的新方法,为冠心病的临床防治提供新思路。方法利用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞,油红O染色进行鉴定。将泡沫细胞分为四组:空白对照组、siRNA阴性对照组、Ng BR-siRNA1转染组(si Ng BR-1组)、Ng BR-siRNA2转染组(si Ng BR-2组)。利用siRNA沉默泡沫细胞Ng BR基因表达,并利用real-time PCR和Western blot对其进行干扰效率鉴定。随后采用real-time PCR检测各组细胞肝X受体α(LXRα)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)及三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)mRNA表达,Western blot检测各组细胞相应蛋白含量,液闪计数仪检测胆固醇流出率。结果 ox-LDL成功诱导泡沫细胞形成;si Ng BR-1组和si Ng BR-2组Ng BR mRNA及其蛋白明显下调(P0.05);si Ng BR-1组和si Ng BR-2组LXRα、ABCA1和ABCG1的mRNA及其蛋白表达显著降低(P0.05),胆固醇流出显著减少(P0.05)。结论 Ng BR可以增加巨噬细胞源性泡沫细胞RCT的调控基因LXRα及其下游基因ABCA1、ABCG1的表达,从而减弱或者避免As的发生和发展,为冠心病的临床防治提供理论依据。     

葡萄糖对巨噬细胞不同脂蛋白受体表达的影响

目的研究不同浓度葡萄糖对巨噬细胞高密度脂蛋白受体(SR-BI)及凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体(LOX-1)表达的影响。方法2003年5月至2005年1月在中国医科大学附属第一医院将5.6mmol/L、11.1mmol/L、16.7mmol/L和33.3mmol/L葡萄糖与诱导分化48h后的U937细胞共同孵育24h及16.7mmol/L葡萄糖与诱导分化48h后的U937细胞作用0,12,24,48,72h后,用Western印迹法检测SR-BI及LOX-1蛋白的表达。结果葡萄糖对巨噬细胞SR-BI蛋白表达量无显著影响(P>0.05)。葡萄糖浓度升高及作用时间延长可使LOX-1蛋白表达增加。结论葡萄糖诱导LOX-1蛋白表达增加并呈浓度和时间依赖性。     

ATP结合盒转运子调节细胞内胆固醇流出及对动脉粥样硬化的影响

ATP结合盒转运子是细胞内胆固醇流出至贫脂或无脂的高密度脂蛋白前体载脂蛋白AⅠ的调节子，在高密度脂蛋白合成和胆固醇逆转运过程中起重要作用。ATP结合盒转运子基因表达受核受体的高度调节。通过对ATP结合盒转运子调节，增加高密度脂蛋白浓度和胆固醇的逆转运，为预防和治疗动脉粥样硬化提供新思路和新方法。     

胆固醇酯转运蛋白TaqIB基因多态性对脂蛋白水平的影响

胆固醇酯转运蛋白 (CETP)介导高密度脂蛋白(HDL)中的胆固醇酯与低密度脂蛋白 (LDL)及极低密度脂蛋白 (VLDL)中的甘油三酯等量交换 ,在胆固醇逆向转运中起关键作用 ,调节各种脂蛋白颗粒大小和脂质组成 ,与动脉粥样硬化的发生和发展密切相关。CETP在多个位点有基因多态性 ,目前研究较多的是CETP基因第 1内含子限制性片段多态性 ,根据是否有TaqI作用位点划分等位基因B1和B2 ,由此测定 3种CETP基因型B1B1、B1B2、B2B2[1] 。研究表明 ,CETP TaqIB多态性是一普遍存在于白种人群中的遗传学变异 ,等位基因B2与血浆高密度脂蛋白胆…     

胆固醇转运复合物囊泡素1/环胞菌素A在氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞荷脂过程中的作用

目的观察胆固醇转运复合物囊泡素1/环胞菌素A在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达变化及其与细胞内胆固醇蓄积的关系,进而探讨胆固醇转运复合物囊泡素1/环胞菌素A在动脉粥样硬化形成中的作用机制。方法实验采用75mg/Lox-LDL与RAW264.7巨噬细胞共同孵育     

烟酸对小鼠体内胆固醇逆转运的影响及其机制

目的观察烟酸干预后对小鼠体内胆固醇逆转运的影响,并探讨其机制。方法14只C57BL/6小鼠随机分为两组,分别给予普通饲料、烟酸添加饲料喂养4周后,腹腔注射经乙酰化-低密度脂蛋白及3H-胆固醇处理过的小鼠巨噬细胞悬液(0.5mL/鼠,细胞数为5.0×106),单独笼养24h后测定粪便中的3H-胆固醇含量(占注射总量的百分比);逆转录聚合酶链反应测定小鼠肝脏和小肠三磷酸腺苷结合盒转运体G5、肝X受体α mRNA及肝脏胆固醇7α羟化酶mRNA表达并用Western blot印迹检测肝脏和小肠的三磷酸腺苷结合盒转运体G5和肝X受体α蛋白表达。结果与对照组比较,烟酸组小鼠肝脏和小肠的三磷酸腺苷结合盒转运体G5、肝X受体α,肝脏胆固醇7α羟化酶mRNA水平和肝肠的三磷酸腺苷结合盒转运体G5、肝X受体α蛋白质水平均增高,粪便中的胆固醇流出率增加21%。结论烟酸可能通过上调体内肝X受体α,从而刺激三磷酸腺苷结合盒转运体G5、胆固醇7α羟化酶表达来发挥促进小鼠体内胆固醇逆转运作用。     

低密度脂蛋白受体基因敲除鼠极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分诱导J774巨噬细胞胆固醇酯蓄积

为探讨低密度脂蛋白受体基因敲除鼠血浆极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分致动脉粥样硬化的作用,采用密度梯度超速离心法从低密度脂蛋白受体基因除鼠血浆分离极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分,用日立７４５０自动分析仪测定其脂含量,琼类糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其电泳迁移率和载脂与鼠腹腔巨噬细胞共同孵育,观察它与巨噬细胞的相互作用。结果发现,低密度脂蛋白受体基因扈除鼠血浆极低密度脂收白和中间密度脂收     

磷脂对高密度脂蛋白3介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出的影响

为了研究卵磷脂和鞘磷脂对高密度脂蛋白３介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出的影响,测定了细胞内胆固醇含量、磷脂含量及游离胆固醇－胆固醇酯平衡的变化。结果发现,各组细胞内胆固醇含量从７９．７５μｇ／皿变为４２．７９、３７．１６、３１．５３μｇ／皿;高密度脂蛋白３组和卵磷脂组中卵脂磷含量分别为１３．９５和１６．２８μｇ／皿;高密度脂蛋白和鞘磷脂组中鞘磷脂磷含量分别为５．０３％和７．０１μｇ／皿,细胞与ＢＳ