TGF-β1调控组织工程瓣膜力学性能机制研究

目的:采用转化生长因子(TGF-β1)联合肌成纤维细胞构建组织工程心脏瓣膜(TEHV),探讨TGF-β1能否改善TEHV的力学性能及其可能机制。方法:分离培养大鼠肌成纤维细胞,细胞鉴定后种植于去细胞瓣叶支架上。将瓣叶置于含10 ng/ml TGF-β1的培养液中,培养14 d构建的TEHV做为实验组,对照组除培养液中不添加TGF-β1外,其余同实验组。检测两组TEHV的赖氨酰氧化酶(LOX)和羟脯氨酸含量,LOX和Ⅰ型胶原(COLL-1) mRNA表达,以及力学性能。结果:实验组TEHV的LOX和羟脯氨酸含量均高于对照组(P<0.05),LOX和COLL-1 mRNA表达均高于对照组(P<0.05),最大负荷、最大应力均高于对照组(P<0.05),而两组的最大应变和弹性模量的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在体外构建TEHV过程中,通过TGF-β1对肌成纤维细胞的调控作用,可以在基因水平增强细胞COLL-1和LOX mRNA的表达,使得胶原蛋白合成和交联程度增加,从而使TEHV的力学强度增加,力学性能得到改善。     

转化生长因子-β1对体外构建组织工程瓣膜的实验研究

目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)在组织工程心脏瓣膜(TEHV)体外构建中的作用。方法经胰酶/EDTA、去污剂Triton X-100和核酸酶处理,去除猪主动脉瓣叶的细胞成分,然后在其表面种植大鼠肌成纤维细胞,构建TEHV。实验组培养基中添加TGF-β1(10ng/ml),对照组采用普通培养基。体外培养2周后取瓣叶,行HE染色和扫描电镜观察,并检测羟脯氨酸、DNA含量及瓣叶最大负荷力,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测瓣膜细胞MMP-13和TIMP-1mRNA的表达。结果HE染色和扫描电镜显示实验组较对照组的细胞联合紧密且细胞外基质更丰富,羟脯氨酸含量和DNA含量增高,最大负荷力提高,MMP-13mRNA和TIMP-1mRNA的表达增强。结论TGF-β1在TEHV体外构建过程中具有积极作用,能为种子细胞生长提供有利因素,促进细胞增殖和细胞外基质分泌,提高瓣膜的最大负荷力。     

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽固定去细胞瓣构建组织工程瓣膜的实验研究

目的：研究促黏附分子精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽对去细胞瓣组织工程心脏瓣膜（TEHV）构建的影响：方法：酶＋去污剂法制备去细胞瓣天然支架，应用化学交联剂Sulfo-LC-SPDP，使GRGDSPC肽与之稳定纳合，然后表面种植大鼠肌成纤维细胞以构建TEHV文验组采用GRGDSPC肽固定去细胞瓣，对照组则为未处理去细胞瓣．体外培养1周后取瓣叶，作苏木精-伊红（H-E）染色和扫描电镜观察，检测羟脯氨酸和DNA含量，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测瓣膜Ⅰ型胶原、赖氨酰氧化酶（LOX）mRNA表达：结果：与对照组比较，实验组形态学显示细胞紧密联合且胞外基质丰富，羟脯氨酸和DNA含量值增高，Ⅰ型胶原、LOX mRNA表达增强：结论：RGD肽表面修饰去细胞瓣，提高天然支架细胞黏附性，促进种子细胞生长、繁殖与细胞外基质分泌，有利TEHV构建。     

人乳在人类精子低温状态下的保护作用

目的研究人乳对人类精子低温状态（0～4℃）下的保护作用。方法取正常人精液30份，每份精液平均分为2个标本，分为实验组（A组）、对照组（B组）。A组中加入等量人乳，B组加入等量冷冻保护液，将两组同时慢速降温（0．8～1℃／min），最终降至0—4℃保存2d。结果实验组精子保存24h，活率、活力分别由（77．7&#177;4．3）％、（70&#177;3．5）％降至（66．5&#177;3．8）％、（62．3&#177;3．4）％。而对照组精子已全部失活。结论人乳对人类精子低温（0-4℃）下有明显保护作用。     

接尘工人血清中TGF-β1表达水平的研究

目的测定转化生长因子β1（transfergrowthfactorbetal,TGF-β1）在接尘工人血清中的表达水平,探讨其作为反映接尘暴露及尘肺早期诊断指标的可能性。方法采用双抗体夹心法,测定72例煤矿接尘工人（分为无尘肺0＋期组32人与接尘组40人）和45例健康对照者血清TGF-β1的表达水平。结果无尘肺0＋者血清TGF-B。含量为（59．71&#177;7．74）ng／ml、接尘组为（48．45&#177;5．45）ng／ml,对照组为（13．89&#177;2．40）ng／ml。0＋期组、接尘组血清TGF-β1含量均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）,0＋期组与接尘组差异亦有统计学意义,0＋期组与接尘组按工龄分层,各组内层之间差异无统计学意义。结论本次研究提示,TGF-β1可以作为监测粉尘暴露的指标,亦可做为早期筛查高危人群的指标。     

各期慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰细胞成分与肺功能的关系

【目的】比较不同时期慢性阻塞性肺病（COPD）患者诱导痰中细胞组成的变化，及其诱导痰中细胞成分尤其中性粒细胞百分比与气流受限的关系。【方法】对110例COPD患者[急性加重期COPD（AECOPD）患者（A1组）62例、稳定期COPD患者（B组）48例]及30例健康对照者（C组）进行肺功能测定及痰诱导，痰液处理后沉渣作细胞学分析。其中AECOPD组在治疗1周后（A2组）再次进行上述指标的测定。【结果】140例受试者中有21例因不能耐受痰诱导过程或痰标本不合格而退出研究，最终有119例受试者完成本研究（A。2组48例，B组43例，C组28例）。A，组、A2组、B组、C组诱导痰中细胞总数（106／mL）分别为（8．8±3．7）、（6．5±2．6）、（5．0±2．8）、（2．8±1．3），细胞分类中A。组、A2组、B组以中性粒细胞为主，分别为66％’15％、60％±10％、55％±11％，而在C组中则以巨噬细胞、中性粒细胞为主。分别为37％±10％、32％±8％；AECOPD患者（A1组、A2组）诱导痰中性粒细胞百分比与肺功能指标（FEV1、FEV1％pre、FVC、FEV1/FVC）呈负相关（r分别为-0．860、-0．682、-0．662、-0．300，P〈0．001）；稳定期组（B组）中性粒细胞与FEV1、FEV1％pre负相关（r分别为-0．346、-0．421，P〈0．05），对照组中性粒细胞与肺功能无相关性（P〉0．05）。【结论】AECOPD、缓解期、稳定期患者诱导痰细胞以中性粒细胞为主，健康者诱导痰细胞以巨噬细胞为主；气道局部中性粒细胞增多与各期COPD患者气流受限存在密切的关系。     

调控microRNA-99b表达对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用

【目的】探讨上调microRNA-99b（miR-99b）表达对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用及可能的机制。【方法】宫颈癌SiHa细胞分正常对照组、阴性对照组和miR-99b调控组。利用siPORT NeoFX Transfection Agent，阴性对照组细胞转染Cy3 dye labeled PremiR Negative Control，miR-99b调控组细胞转染Pre-miR-hsamiR-99b miRNA Precursor。实时定量PCR方法检测miR-99b表达，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot检测靶基因细胞分裂周期25A（CDC25A）蛋白表达。【结果】实时定量PCR结果显示，miR-99b调控组细胞，miR-99b表达增加107．23倍。正常对照组、阴性对照组和miR-99b调控组细胞增殖率分别为（3．26&#177;0．44）％、（3．65&#177;0．47）％和（2．24&#177;0．45）％，细胞凋亡率分别为（8．12&#177;1．54）％、（8．75&#177;1．67）％和（14．26&#177;1．70）％，细胞CDC25A蛋白表达分别为0．50&#177;0．06、0．59&#177;0．05和0.31&#177;0．05。与正常对照组和阴性对照组比较，miR．99b调控组细胞增殖率、凋亡率和CDC25A蛋白表达差异均有统计学意义（P〈0．05）。【结论】上调miR-99b表达可通过降低靶基因CDC25A表达，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，miR-99b可能成为宫颈癌治疗的靶基因。     

血脂康联合贝那普利治疗对高血压患者胶原更新和血管阻力的影响

目的动脉壁细胞外基质的合成和降解紊乱是动脉粥样硬化过程的主要特征。本研究观察3种抗高血压方案下，达到同等血压控制后，循环前胶原更新标志物——Ⅲ型胶原氨基端肽（PⅢNP）的改变和血管阻力的改变。方法轻中度原发性高血压患者120例，随机分为三组，血脂康＋贝那普利组（A组，40例，血脂康1．2g／d）、贝那普利组（B组，40例）、非血脂康-贝那普利干预治疗组（C组，40例，B受体阻断剂或钙拮抗剂），观察10个月，目标血压〈135／85mmHS（1mmHg=0．133kPa）。比较三种治疗方案对心肌胶原更新和外周血管阻力的影响。结果各组均同等有效控制血压，在此前提下，比较减低血清PⅢNP的疗效[A组（2．3±0．2）μg／L比（3．8±0．2）μg／L，P〈0．05；B组（3．4±0．3）μg／L比（3．7±0．3）μg／L，P〉0．05；C组（3．9±2．0）μg／L比（3．2±1．5）μg／L，P〈0．05和减低血管阻力[A组（1064．3±158．6）dyn·s-1，·cm-5比（1358．3±212．5）ayn·s-1·cm-5；B组（1200．8±298．7）ayn·s-1·cm^-5比（1394．0±181．0）ayn·s-1·cm-5；C组（1205．1±206．4）ayn·s-1·cm-5比（1579．9±574．7）dyn·s-1·cm-5，P均〈0．05]，治疗效果A组优于B组，A、B两组均优于C组。结论血脂康联合贝那普利治疗比单纯贝那普利治疗更好地减低血清PⅢNP，使心血管系统间质胶原沉积明显减低，并使血管阻力和顺应性改善，而且该作用不依赖于血压下降。两组均优于非血脂康-贝那普利干预治疗组。     

间充质干细胞构建组织工程瓣膜的生物力学性能研究

目的 采用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)联合间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)构建组织工程心脏瓣膜(tissue engineered heart valve,TEHV),并对其生物力学性能进行研究.方法 分离培养大鼠MSCs,进行细胞鉴定后种植于去细胞瓣叶支架上.将瓣叶置于含5 ng/ml bFGF的培养液中,分别培养7 d和14 d作为实验组A和实验组B.实验组C除培养液中不添加bFGF外,其余同实验组B.对照组为大鼠肌成纤维细胞构建的TEHV.对各组TEHV进行形态学观察,生化检测和生物力学测试.结果 MSCs表达CD29(94.82%)和CD44(93.59%).各组TEHV具有相似的形态结构,DNA和羟脯氨酸含量、最大负荷、最大应力、最大应变和弹性模量的差异无统计学意义(P>0.05).结论 采用MSCs和肌成纤维细胞构建的TEHV具有相同的生物力学性能,而采用bFGF联合MSCs体外构建TEHV能在更短的时间内获得相同的生物力学性能.     

同种带瓣主动脉移植免疫抑制治疗及钙化防治的研究

目的：研究免疫抑制治疗在防治同种带瓣主动脉移植（AVH）供体组织钙化的作用。方法：采用改良大鼠AVH腹主动脉异位移植模型,研究分为异基因组和同基因组。异基因组分别为接受低温保存的AVH移植组,接受低温保存的AVH移植后给予环孢素A（CsA）治疗组,接受树突状细胞（DC）单抗预处理低温保存,移植后给予DC单抗治疗组;同基因组为对照组。异基因组SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体;同基因组受体和供体均为Wistar大鼠。治疗时间为4周。手术后2、4、8、12、16周用流式细胞仪检测大鼠血液中T细胞抗原受体α、β（TCR-α、β）,CD28的表达。观察移植物组织结构形态学变化,用免疫组织化学染色方法检测动脉壁CD54的表达,用原子火焰吸收法测定AVH组织钙的含量。结果：（1）接受深低温保存AVH移植组于术后2、4周其TCR-α、β表达水平为（52．4±3．3）％、（43．8±6．4）％,CD28的表达水平为（51．7±7．5）％、（66．3±4．4）％;CsA治疗组TCR-α、β表达为（34．5±3．5）％、（31、6±2．6）％,CD28表达水平为（41．2±1．6）％、（55．1±5．1）％;DC单抗治疗组TCR-α、β表达水平为（31．6±2．3）％、（29．5±3．0）％;CD28为（36．6±3．6）％、（51．8±5．6）％;对照组TCR-α、β表达为（23．24±1．3）％、（21．6±2．3）％;CD28为（30．7±1．4）％、（33．3±0．9）％。（2）异基因组不同时间的供体组织钙含量自移植后4周开始升高,同基因组各时点的钙含量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：免疫抑制治疗可减轻免疫反应,延缓钙化进程,疗效明显。     

肥胖型多囊卵巢综合征患者临床及内分泌代谢特征的研究

目的分析总结肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)患者的临床及内分泌代谢特征。方法对象为肥胖型PCOS(A组)70例、非肥胖型(B组)122例以及同期就诊的输卵管因素不孕症患者104例(其中单纯肥胖25例,C组;正常体重79例,D组)作为对照。对上述对象进行临床体征评分,内分泌、代谢指标测定。采用雄激素指数(FAI)评估雄激素增多症,用稳态模型指数(HOMA IR)、胰岛素曲线下面积(IAUC)评估胰岛素敏感性,HOMA-IS、ΔI30/ΔG30评估胰岛β细胞功能。结果(1)A组患者的FAI(3.40±1.84)高于B组(1.75±1.20)和C组(1.65±0.90),P均<0.01。B组黄体生成素(LH)/卵泡刺激素(FSH)比值(2.41±1.13)高于A、C、D组,P均<0.01。(2)192例患者总的胰岛素抵抗发生率为43.23%,A、B组分别为82.86%及20.49%。A组黑棘皮症发生率、空腹胰岛素、IAUC、HOMA IR及甘油三酯水平均高于B组(P均<0.01)。A、B、D组间HOMA IS、ΔI30/ΔG30差异无统计学意义(P>0.05)。(3)人体质量指数、腰臀比与FAI、HOMA-IR均呈正相关(P均<0.01);与LH/FSH比值呈负相关(r=-0.345、-0.260,P<0.01)。结论肥胖型PCOS患者较非肥胖型存在更严重的内分泌及代谢紊乱,胰岛β细胞功能处于代偿期,其远期并发症的防治应受到高度重视。     

腹腔镜肌壁间子宫肌瘤剔除术中不同止血方法的评价

目的 评价临床常用腹腔镜肌瘤剔除术中止血方法的有效性和安全性,寻找简便有效的止血方法.方法 将有手术指征的肌壁间子宫肌瘤患者280例随机分成4组,每组70例,分别采用肌瘤蒂部套扎、肌瘤周围肌层注射12 IU垂体后叶素、肌瘤周围肌层注射20 IU缩宫素加蒂部套扎及合用垂体后叶素和蒂部套扎4种止血方法.结果 4组患者术中出血量分别为(171±146)、(115±70)、(184±140)和(106±73)ml,使用垂体后叶素12 IU局部注射的2组患者术中出血量明显少于单独套扎或注射缩宫素组(P＜0.01).合用垂体后叶素和蒂部套扎法术后住院时间明显短于其他3组[(2.9±0.5)d比(3.1±0.7)d、(3.6±0.8)d和(3.3±0.7)d,P＜0.05].合用垂体后叶素和蒂部套扎法组比缩宫素组术后肛门排气时间短[(19.7±5.8)h比(25.9±8.6)h,P＜0.05],血红蛋白含量下降较少[(1.1±0.9)g/L比(1.5±1.0)g/L,P＜0.05].结论 12 IU垂体后叶素肌瘤蒂部注射联合肌瘤蒂部套扎可以明显减少术中出血,加快术后恢复,无明显全身副作用,是简单有效的腹腔镜下肌壁间肌瘤剔除术辅助止血方法.     

环氧氯丙烷对组织工程心脏瓣膜构建中MMP-9表达的影响

目的探讨环氧氯丙烷对组织工程心脏瓣膜构建中基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9;MMP-9)表达的影响。方法采用去垢剂和胰蛋白酶消化制备脱细胞猪主动脉瓣膜支架,用3%环氧氯丙烷处理48h的去细胞支架材料作为实验组;用0.2%戊二醛处理48h的去细胞支架材料作为对照组。将培养的人骨髓基质干细胞(human bone marrow mesenchy-mal stem cells;hBMSCs)种植于脱细胞支架上构建组织工程心脏瓣膜(tissue engineered heart valves;TEHV),分别行石蜡包埋切片HE染色和扫描电镜观察TEHV的组织结构,免疫组化检测MMP-9表达的阳性率。结果hBMSCs在实验组脱细胞瓣膜表面生长良好,MMP-9的表达比对照组降低。结论环氧氯丙烷处理的脱细胞猪主动脉瓣膜支架,可以抑制hBMSCs的MMP-9表达,对防止组织工程心脏瓣膜钙化的形成有一定作用。     

白细胞介素18对豚鼠哮喘模型气道炎症作用的实验观察

目的观察白细胞介素18(IL-18)对豚鼠哮喘模型气道炎症的作用。方法采用卵蛋白(OVA)腹腔注射致敏加雾化吸入激发的方法复制豚鼠哮喘模型。30只豚鼠按随机数字法分成3组(每组10只)进行处理,分别为哮喘模型组(A组)、模型对照组(B组)和IL-18干预组(C组)。光镜下检测各组豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞计数及分类,用酶联免疫吸附法测定BALF中Th1细胞因子IFN-γ、IL-2和Th2细胞因子IL-4、IL-5浓度,并进行3组之间的比较。结果豚鼠BALF中嗜酸粒细胞(EOS)个数A组、B组、C组分别为(98±58)×106/L、(12±10)×106/L、(29±10)×106/L,A组与B组、C组比较差异有统计学意义(P<0.01);中性粒细胞个数A组与B组、C组比较差异有统计学意义(P均<0.05)。IFN-γ和IL-2浓度A组与B组比较差异有统计学意义(P<0.05),与C组比较差异亦有统计学意义(P均<0.01)。IL-4浓度A组与B组、C组比较差异有统计学意义(P均<0.05);IL-5浓度A组与B组、C组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论IL-18可通过调节Th1/Th2细胞因子的平衡而达到控制哮喘气道炎症的作用。     

转化生长因子β1诱导时间对骨髓基质细胞体外成软骨分化的影响

目的：探讨转化生长因子β1（TGF-β1）诱导时间对骨髓基质细胞（BMSC）体外成软骨分化,及构建组织工程化软骨的影响。方法：将体外培养扩增的第二代猪BMSC按5．0×10^7个／ml的密度接种于聚羟基乙酸（PGA）制成的圆柱形支架材料上,第5天开始应用含TGF-β1（10μg/L）、IGF-I（50μg/L）和地塞米松（40μg/L）的软骨诱导液培养。按TGF-β1诱导时间的不同分为A（诱导2周）、B（诱导4周）、C（诱导6周）、D（诱导8周）和E（诱导10周）5组。体外培养10周后取材行大体观察、组织学和组织化学检测、聚合蛋白多糖（GAG）定量分析和生物力学测定,同时利用Western印迹和免疫组织化学进行Ⅱ型胶原表达的分析。结果：随诱导时间延长,软骨陷窝由周边开始逐渐向内部增多,排列渐趋均匀,蛋白聚糖等软骨特异性基质成分积聚。免疫组化染色及Western印迹结果均显示Ⅱ型胶原含量随诱导时间延长逐渐递增。这种情况至诱导6周后逐渐稳定,诱导6周和诱导10周间差异无统计学意义。诱导6周以上组弹性模量和抗压强度均明显高于A、B两组。结论：利用BMSC作为种子细胞构建组织工程化软骨,诱导持续时间与形成的软骨质量相关,6周的诱导时间基本可以形成具有良好组织结构、化学组成和力学性质的软骨组织。     

胰岛素对糖尿病大鼠潜在皮肤病变防护作用的机理研究

目的探讨胰岛素对糖尿病潜在皮肤病变保护作用的机理。方法用链脲佐菌素(STZ)将8周龄雄性SD大鼠诱导成速发型糖尿病大鼠模型,分为应用胰岛素强化控制血糖组(A组)(n=27)和未控制血糖组(B组)(n=27),并以正常大鼠作对照(C组)(n=27),分别于致病后4、8和12周获取大鼠背部中央的皮肤标本。应用HE染色,观察皮肤组织学的改变;应用Beckman′s生化自动分析仪检测皮肤组织匀浆的糖含量;采用F3010荧光分光光度计和免疫组织化学技术测定皮肤中晚期糖基化终末产物(AGE)含量的变化;应用透射电镜观察皮肤微血管超微结构的改变。结果组织学观察,致病后12周B组糖尿病大鼠皮肤明显变薄,表皮细胞层次欠清晰,部分表皮缺乏复层排列;真皮层部分胶原萎缩、肿胀,退化变性,并伴随程度不等的炎性细胞浸润;皮下脂肪进行性萎缩或消失。A组糖尿病大鼠皮肤未出现上述明显的组织学改变。B组糖尿病大鼠皮肤糖含量在各时相点均明显高于A组和C组(P<0.01),而A组与C组之间差异无统计学意义(P>0.05)。B组和A组糖尿病大鼠皮肤胶原提取液的荧光值均高于相应年龄正常大鼠,病程越长,荧光值增加越明显。8周和12周的B组糖尿病大鼠皮肤胶原提取液的荧光值明显高于同期A组的糖尿病大鼠;8周时B组为(34U/mg±4U/mg),A组为(29U/mg±3U/mg,P<0.05);12周时B组为(41U/mg±4U/mg),A组为(32U/mg±4U/mg,P<0.05)。免疫组织化学检查亦显示B组糖尿病大鼠皮肤中AGE表达阳性率于8周和12周均显著高于A组,8周时B组为32%±4%,A组为25%±5%,(P<0.05);12周时B组为39%±5%,A组为27%±4%,(P<0.05)。透射电镜观察A组糖尿病大鼠皮肤血管内皮细胞变性和基底膜增厚程度均明显好于B组。结论皮肤中AGE蓄积和高糖是糖尿病皮肤病变的重要致病因素之一,胰岛素对糖尿病大鼠潜在皮肤病变具有防护作用,其作用机制可能与严格控制血糖、抑制AGE的合成、阻断AGE的作用环节等有关。     

重组人促红细胞生成素预处理对缺血再灌注大鼠心肌保护作用的研究

目的 研究重组人促红细胞生成素（rhEPO）预处理对缺血再灌注（I-R）大鼠心肌的保护作用并谈讨其中可能的机制。方法雄性Sprague-Dawley大鼠共156只,I-R模型采用阻断左前降支30min后再通3h,大鼠于24h前分别腹腔注射生理盐水或rhEPO。结束时测定心肌梗死面积和血浆心肌型肌酸激酶同功酸（CK-MB）水平,观察心肌组织超微结构改变和中性粒细胞浸润情况;酶联免疫吸附试验分别测定再灌注1h和2h时心肌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的含量;凝胶电迁移方法检测心肌核因子-κB（NF-κB）和活化蛋白-1（AP-1）的表达。结果 I-R前24h单次注射rhEPO（静脉滴注,5000U／kg）能显著降低I-R后心肌梗死面积,改善心肌细胞超微结构,削弱血浆CK-MB的水平,减轻心肌组织中中性粒细胞的浸润,降低NF-κB和AP-1的激活以及TNF-α和IL-6的表达。结论 rhEPO预处理有显著的心肌保护作用,该作用可能与抑制NF—KB和AP-1的活化及下调下游促炎细胞因子有关。     

Effects of HS1-associated protein X-1 on the lupus activities: experiment with MRL/lpr lupus-like mice

OBJECTIVE: To investigate the effects of HS1-associated protein X-1 (HAX-1) on the lupus activity of MRL/lpr lupus-like mice. METHODS: Fifteen MRL/lpr mice were divided into 3 equal groups: Group A, injected with phosphate-buffered saline, Group B, injected intraperitoneally with control virus AdEGFP and Group C, injected intraperitoneally with recombinant AdHAX-1 twice a week for 4 weeks. Peripheral blood samples were collected before the injection, and 2 and 4 weeks after the injection to be detected the white blood cell count, antinuclear antibody (ANA), anti-double strand-DNA antibodies, circulating immune complex (CIC), anti-histone antibodies, and interferon (IFN)-gamma. The level of urine protein was measured, too. Then the mice were killed, a kidney underwent direct immunofluorescence (DIF) to observe the deposition of Immune complexes, and the other kidney underwent periodic acid-Schiff (PAS) staining and pathological examination. MTT method was used to detect the proliferation of the lymphocytes in the spleen. Splenocytes were isolated from the other 15 MRL/lpr mice and then divided into 4 groups: Group, transfected with DMRIE-C without plasmid; Group E, as negative control group; Group F, transfected with blank plasmid pGenesil-1; and Group G, transfected with pGenesil-HAX-1. Forty-eight hours later MTT method was used to detect the proliferation rateof the spleen lymphocytes. RESULTS: The urine protein level of Group C was significantly higher than those of Groups A and B (both P < 0.01). Four weeks later the levels of ANA, anti-double strand DNA antibodies, and IFN-gamma were all significantly higher than those of Groups A and B (all P < 0.01). Hypercellularity and increased deposition of IgG in glomeruli were also observed in Group C. The score of glomeruli lesion of Group C (1.50 +/- 0.34) was significantly higher than those of Groups A (0.67 +/- 0.14) and Groups B (0.81 +/- 0.26) (both P < 0.01). MTT method showed that the growth curve of the spleen lymphocytes of Group C was higher than those of Groups A and B. The spleen lymphocyte proliferation rate and the levels of IFN-gamma of Group G was significantly lower than that of Group F (both P < 0.05). CONCLUSION: One of the important factors in apoptosis regulation of SLE, HAX-1 may be involved in the pathogenesis of SLE, and the silence of HAX-1 may be beneficial for the improvement of SLE.     

反义整合素β6基因对结肠癌细胞作用的研究

目的研究反义整合素β6基因对结肠癌细胞生长增殖的作用。方法先构建反义β6基因的表达载体,然后转染结肠癌细胞,使其稳定表达。应用RT—PCR检测细胞中β6mRNA的表达量;应用流式细胞技术检测细胞表面β6蛋白的表达量;检测分析各组细胞与纤连蛋白结合力的改变;检测分析各组细胞增殖能力的改变;将转染细胞及正常细胞分别种植于裸鼠皮下,观察细胞的成瘤能力。将实验组与对照组的检测结果进行比较。结果与对照组相比,转染了反义β6基因的结肠癌细胞,其β6mRNA的量及细胞表面β6蛋白的表达量（30％）均明显减少（P〈0．01）;其与纤连蛋白的结合力降低;其生长及增殖的能力较对照组细胞明显减弱;其在裸鼠皮下的成瘤能力明显减弱（P〈0．01）。结论反义β6基因可以在转录和翻译水平明显抑制β6基因的表达,从而抑制结肠癌细胞的生长增殖,证实了整合素β6对结肠癌细胞的生长增殖具有重要的调控作用。