转化生长因子-β1对人眼眶成纤维细胞增殖的影响

目的：观察转化生长因子β1(TGF—β1)对人眼眶成纤维细胞(orbital fibroblasts．OFs)增殖的影响．探讨增殖性玻璃体视网膜病变(proljferative vitreoretinopathy．PVR)的发病机制。方法：OFs体外培养，用不同浓度TGF—β1(0.1、1.0、5．0、10．0、100．0μg／L)对细胞进行处理。计算细胞的数量，绘制细胞生长曲线；椎虫蓝染色计算活细胞比例、MTT比色法测定吸光度(A)值：流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布。结果：0．1、1．0、5、0、10、0μLg／L的TGF-β1作用后OFs生长曲线上移，活细胞数增加，A值上升，处于增殖期(S G2)的细胞比例增多。100.0μg／L的TGF-β1对OFs作用相反。结论：TGF-β1对人眼眶成纤维细胞增殖有双相调节性．其不同作用的发挥依赖TGF—β1的浓度，TGF—β1的促成纤维细胞的增殖作用可能诱发PVR。     

橙皮素对转化生长因子-β_1诱导心肌成纤维细胞增殖的影响

目的探讨橙皮素(HES)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导心肌成纤维细胞增殖的影响,并探讨其可能的机制。方法取SD大鼠30只,取其心肌组织进行成纤维细胞的培养。而后采用TGF-β_1(10 ng/ml)刺激成纤维细胞,采用4种不同浓度梯度的HES(25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L)干预成纤维细胞24 h,以台盼蓝染色检测其对细胞活性的影响;荧光酶标仪检测法用于检测细胞内活性氧(ROS)的水平;活细胞计数试剂盒(CCK-8)用以检测成纤维细胞的增殖情况。结果台盼蓝染色结果提示,HES对成纤维细胞的细胞活性无显著影响,各组活性值分别为空白对照组:100%,HES 25μmol/L组:95%,HES 50μmol/L组:94%,HES 75μmol/L组:93%,HES100μmol/L组:93%。酶标仪检测结果表明,与空白对照组相比,TGF-β_1可增加成纤维细胞内ROS的水平(P<0.01),当HES与TGF-β_1同时作用时,ROS水平随着HES浓度的增加逐渐降低,均存在统计学意义(P<0.05);TGF-β_1可刺激成纤维细胞增殖(P<0.01),当HES(100μmol/L)或N-乙酰半胱氨酸(NAC)(1 mmol/L)与TGF-β_1同时作用时,可明显抑制成纤维细胞增殖(P<0.01)。结论 HES可通过抑制TGF-β_1诱导的氧化应激进而抑制心肌成纤维细胞增殖,提示其对于预防心肌纤维化可能具有潜在效果。     

黄芪对人肾间质成纤维细胞增殖和转化生长因子-β1表达的影响

目的：探讨黄芪对肾间质纤维化改善的作用机制。方法：体外培养人肾间质成纤维细胞（KFB），传至3代后分为3组：对照组（常规培养），血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）培养组（在培养液中分别加入10^-8mol／L、10^-7mol／L和10^-6mol／L的AngⅡ），黄芪注射液干预组（分别于培养液中加入10^-6mol／L的AngⅡ和10mg／L、20mg／L和40mg／L黄芪注射液）。作用48h后，各组用MTT比色法测定细胞增殖情况，用ELISA法测定细胞培养上清液中TGF-β1的水平。结果：AngⅡ可促进KFB增殖，刺激TGF-β1的分泌，且呈剂量依赖性（r分别为0.612和0.723，P〈0.05）；黄芪注射液可抑制AngⅡ的上述作用，且呈剂量依赖性（r分别为-0．561和-0．689，P〈0．05）。结论：黄芪可以通过抑制成纤维细胞增殖和TGF-β1的分泌，延缓肾间质纤维化进展。     

转化生长因子β1诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转分化的机制研究

目的:探讨TGF-β1诱导皮肤成纤维细胞(FB)向肌成纤维细胞转分化的可能途径和调控机制.方法:将野生型和Smad3基因敲除(KO)型小鼠皮肤FB分为9组:野生型FB组、野生型FB TGF-β1组、野生型FB SB431542组、野生型FB SB431542 TGF-β1组、Smad3 KO FB组、Smad3 KO FB TGF-β1组、野生型FB SB203580 TGF-β1组、野生型FB PD98059 TGF-β1组和野生型FB SP600125 TGF-β1组.各组细胞经同步化处理后,直接以TGF-β1刺激或经上述各激酶抑制剂预处理后再以TGF-β1刺激.收集细胞,一部分以单细胞RT-PCR检测α-SMA阳性表达百分比,另一部分细胞抽提总RNA后采用实时荧光定量RT-PCR检测α-SMA的表达水平变化.结果:Smad3 KO组与SB431542组的α-SMA表达水平和阳性百分比显著升高(Smad3 KO FB组vs野生型FB组;野生型FB SB431542 TGF-β1组vs 野生型FB SB431542组;Smad3 KO FB TGF-β1组vs Smad3 KO FB组,P＜0.01),而SB203580组和SP600125组中α-SMA表达水平和阳性百分比升高的作用则被显著抑制(野生型FB SB203580 TGF-β1组、野生型FB SP600125 TGF-β1组vs 野生型FB TGF-β1组,P＜0.05).结论:在TGF-β1诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞的转分化过程中,Smad3途径介导抑制作用,而p38/MAPK、JNK/MAPK途径则介导正向调节作用.     

转化生长因子-β1噬菌体模拟肽促进成纤维细胞增殖的效果

目的从噬菌体随机12肽库中筛选获得转化生长因子β1(TGF-β1)噬菌体模拟肽,评估其促进人正常皮肤成纤维细胞增殖的效果。方法以人TGF-β1单克隆抗体为靶,生物淘选噬菌体模拟肽。选择其中一组与TGF-β1基因序列相似度最高的噬菌体模拟肽,设定4组,阴性对照组、噬菌体M13对照组、TGF-β1对照组和噬菌体模拟肽组。噻唑蓝(MTT)比色法定量测定活细胞数量以检测细胞的增殖。免疫荧光方法检测噬菌体模拟肽与成纤维细胞的亲和力。实时定量PCR分析方法检测成纤维细胞I型胶原蛋白(COL1)、Ⅲ型胶原蛋白(COL3)和结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA表达水平。结果共获得10种噬菌体模拟肽,选择与TGF-β1基因序列相似度最高的第一组噬菌体模拟肽进行实验。MTT结果显示,噬菌体模拟肽组能够促进成纤维细胞增殖(P<0.05)。免疫荧光结果显示,噬菌体上的模拟肽,而非噬菌体本身,能够与成纤维细胞结合;实时定量PCR的结果显示,48 h噬菌体模拟肽组COL1和COL3 mRNA的表达水平较阴性对照组和噬菌体M13对照组均明显增高(P<0.05),而CTGF的mRNA表达水平较阴性对照组和噬菌体M13对照组2 d时明显增高(P<0.05),3 d时表达有所降低(P<0.05)。结论噬菌体模拟肽可能是通过调节CTGF的表达,调节成纤维细胞的增殖。     

转化生长因子β1噬菌体模拟肽抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的实验研究

目的 从噬菌体随机12肽库中筛选获得转化生长因子(TGF)β1噬菌体模拟肽,评估其抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用.方法 以人TGF-β1单克隆抗体为靶,生物淘选噬菌体模拟肽.噻唑蓝(MTT)比色法定量测定活细胞的数量.Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测对成纤维细胞的凋亡作用.免疫荧光测定检测模拟肽与成纤维细胞的亲和力.实时定量PCR分析方法检测成纤维细胞核因子κB(NF-κB),结缔组织生长因子(CTGF)的表达水平.结果 共获得10种噬菌体模拟肽,具有与TGF-β1、TGF-β2、TGF-β受体Ⅱ(TβRⅡ)、TGF-β诱导因子、NF-κB或细胞分裂原素活化蛋白激酶(MAPK)相似的序列.MTT比色测定结果显示4种(第7～10组)噬菌体模拟肽组能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖(P＜0.05).免疫荧光测定显示是噬菌体上的模拟肽,而不是噬菌体本身,能够与瘢痕疙瘩成纤维细胞相结合;凋亡实验显示这4种噬菌体模拟肽能够轻度促使瘢痕疙瘩成纤维细胞发生轻度的晚期凋亡;实时定量PCR的结果显示这4种噬菌体模拟肽NF-κB的表达降低,表达量分别是阴性对照组的0.28、0.26、0.46、0.30倍,4种噬菌体模拟肽CTGF的表达降低,表达量分别是阴性对照组的0.26、0.60、0.34、0.17倍.结论 噬菌体模拟肽可能是通过调节NF-κB及CTGF的表达,调节瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖.     

转化生长因子-β1对大鼠肌成纤维细胞增殖及胞内Smad蛋白磷酸化的影响

目的 探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对大鼠肌成纤维细胞（MFB）增殖及胞内Smad蛋白磷酸化的影响。方法 TGF-β1（0．33～81pmol／L）在不同作用时间（5～120min）的条件下诱导MFB细胞活化,采用免疫吸附和Westernblot方法观察TGF-β1对MFB细胞内pSmad2C、pSmad2L、pSmad3L及Smad2／3蛋白表达的影响;采用M1Tr方法观察TGF-β1对MFB细胞增殖的影响。结果 在0．33—9pmol／L浓度范围内,TGF-β1均呈浓度依赖性刺激MFB细胞内Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化,以9pmol／L最明显,TGF-β1在27、81pmol／L浓度时,Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化仍处于高水平状态,而各组Smad2／3蛋白表达无明显变化。在TGF-β1为9pmol／L浓度条件下,30—60min孵育时间对MFB细胞增殖无明显影响,但可呈时间依赖性刺激MFB细胞内Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化,以30min最明显,TGF-β1在60、120min时间时,Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化仍处于高水平状态,而各组Smad2／3蛋白表达量无明显变化。结论 TGF-β1诱导MFB细胞内Smads磷酸化先于刺激细胞增殖。     

转化生长因子-β1对瘢痕成纤维细胞的调节及意义

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞中纤维粘连蛋白(FN)和肌动蛋白(α—actin)表达的诱导作用，探讨TGF-β1与瘢痕挛缩的关系。方法 采用细胞培养、免疫组化、图像分析技术，观察在不同含量TGF-β1的作用下，瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达情况。结果 不同含量的TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达FN和α—actin的作用不同，分别以25～100μg／L和10～50μg／L为有效；与正常瘢痕组织相比，增生性瘢痕的成纤维细胞在表达FN和α—actin方面，对TGF-β1的反应更为敏感，差异均有显著性意义(P＜0．01)。结论 TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达增加可能与瘢痕挛缩有关。     

青少年特发性脊柱侧凸患者关节突软骨中转化生长因子-β1及碱性成纤维细胞生长因子表达的研究

目的研究青少年特发性脊柱侧凸(AIS)畸形最严重顶椎凸、凹侧下关节突软骨中转化生长因子-β1(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达特点.方法22例AIS患者为研究对象,18例先天性脊柱侧凸(CS)患者作为对照.取两组患者的顶椎和端椎凸、凹侧的下关节突,采用HE染色、免疫组化和原位杂交方法进行研究,观察关节突的病理改变和TGF-β1、bFGF在关节突中分布的特点.将所得的免疫组化和原位杂交图像输入图像分析系统,进行半定量分析.结果TGF-β1、bFGF在AIS和CS中有基本相似的表达特点,免疫组化和原位杂交方法均显示顶椎凹侧的表达高于凸侧(165.4±59.2 vs128.1±50.6,168.3±46.8 vs126.5±47.0;96.4±28.4 vs76.6±29.9,101.8±39.4 vs73.7±31.6;114.4±59.4 vs77.1±52.2,109.8±51.0 vs69.5±40.1;137.2±50.2vs93.4±72.2,138.4±75.8vs80.0±67.6;P＜0.05);上、下端椎的凸凹侧之间及凸、凹侧的上下端椎之间的表达差异无统计学意义.结论AIS顶椎关节突软骨呈现退变及发育不全等征象,凹侧较凸侧明显.AIS中TGF-β1、bFGF在顶椎凹侧表达的增高可能为脊柱畸形后异常的生物力学引起了关节突细胞间基质重建而进行代偿的结果,异常压应力可能起着非常重要的作用.     

抗转化生长因子β_1(anti-TGF-β_1)对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的　探讨抗转化生长因子β1(anti-TGF - β1)对瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的影响及意义。方法　用电镜观察anti-TGF - β1作用后瘢痕成纤维细胞的形态学变化 ,以及用MTT法和3 H -脯氨酸掺入等方法检测anti-TGF - β1对体外培养的瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原蛋白合成的影响。结果　anti -TGF - β1能明显影响成纤维细胞的超微结构 (细胞核、线粒体、粗面内质网等 )。anti -TGF - β1能抑制成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成 (P <0 .0 1) ,在一定范围内 (10 μg/ml)呈剂量 -效应关系。抑制作用在 10 μg/ml时最大 ,抑制率达 72 %。结论　anti-TGF - β1能中和TGF - β1,促进成纤维细胞增殖和胶原合成的作用 ;提示anti-TGF - β1的应用可能为临床瘢痕的治疗提供新的途径。     

转化生长因子β1对人胚肺成纤维细胞结缔组织生长因子及低密度脂蛋白受体相关蛋白表达的影响

目的:探讨体外培养人胚肺成纤维细胞(human pulmonary fibroblasts-1,HPF-1)在外源性转化生长因子β1(transforming growth factor beta, TGF-β1)作用下结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)与低密度脂蛋白受体相关蛋白(low density lipoprotein receptor related proteins, LRP) 的表达变化及意义.方法:将HPF-1用5 μg/L的TGF-β1分别作用0, 3, 6, 12和 24 h.用RT-PCR方法检测CTGF及LRP mRNA的表达;用蛋白免疫印迹检测LRP蛋白表达变化;用免疫沉淀方法检测TGF-β1作用不同时间,与LRP结合的CTGF的数量变化;用细胞免疫荧光检测细胞中LRP表达情况.结果:相关分析显示,以3 h为关键点,CTGF mRNA(131.53±2.86)与LRP mRNA(224.87±7.00)表达变化具有正相关性(r=0.840 2,P＜0.05);LRP蛋白随TGF-β1作用时间不同,表达水平先升高,于3 h达高峰,而后逐渐下降,用免疫印迹法分析,相对于0 h组(190.85±2.86),3 h组(222.45±3.66)表达具有统计学意义(F=18.06,P＜0.05);用免疫荧光标记细胞LRP也得到类似的结果,比较0 h组(27.56±6.72)和3 h组(88.66±15.72)LRP蛋白表达(F=244.36,P＜0.01)差异具有统计学意义.结论:LRP作为CTGF的受体蛋白,在TGF-β1作用不同时间的情况下,表达量发生变化,并与CTGF的表达成正相关,提示其在肺间质纤维发生中发挥作用.     

结缔组织生长因子协同转化生长因子β1的促肾纤维化效应

目的　探讨结缔组织生长因子 (CTGF)和转化生长因子 β1(TGF β1)对肾脏成纤维细胞合成和分泌基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )和细胞表型转化的影响。方法　将大鼠肾成纤维细胞分为对照组、CTGF刺激组、TGF β1刺激组、CTGF加TGF β1联合刺激组 ,以明胶酶谱法和Western印迹方法分别检测细胞上清中MMP 2活性和蛋白的变化 ,实时定量 聚合酶链反应 (PCR)方法检测细胞中MMP 2mRNA的水平。Western印迹方法检测成肌纤维细胞标志蛋白α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的表达水平和细胞上清中细胞外基质成分纤黏连蛋白 (FN)的水平。结果　MMP 2的活性和蛋白水平在刺激 2 4h时 ,各组之间无明显差异 ;刺激 4 8h ,10 0ng/mlCTGF组和 5ng/mlTGF β1组明显属于对照组 (P <0 0 5 ) ;而不同浓度的CTGF加TGF β1联合刺激组分别低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 ,其中 10 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1、5 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1均分别明显低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 (P <0 0 5 )。上述各组细胞刺激 12h ,MMP 2mRNA水平在 10 0ng/mlCTGF组和 5ng/mlTGF β1组均明显高于对照组 (1 72 ,1 6 8vs 1 2 9,P <0 0 1) ,而 10 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1联合组明显低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 (0 6 7v     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对大鼠肾成纤维细胞转化生长因子β1/Smad信号途径的作用研究

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂阻断转化生长因子（TGF）β1致肾间质纤维化作用的机制，探讨其抗肾间质纤维化的潜在作用。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞株（NRK／49F），观察PPARγ配体15d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对TGFβ1诱导的纤维连接蛋白（FN）mRNA表达的影响。利用Western印迹技术观察PPARγ激动剂对TGFβ1诱导的FN和Smad蛋白表达的影响。结果（1）与1ng／ml TGFβ1组比较，5ng／ml TGFβ1组FN mRNA表达量增加了3．6倍（P〈0．01），5ng／ml TGFβ1刺激24h时较刺激前增加了2．4倍（P〈0．01），TGFβ1诱导FN mRNA表达呈一定范围内的剂量（0—5ne／ml）和时间（0—24h）依赖效应。（2）与5ng／ml TGFβ1组比较，10μmol 15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组FN mRNA表达量分别降低37．3％、41．5％和22．7％，FN蛋白表达量分别降低20．6％、38．1％和28．6％。（3）5ng／ml TGFβ1以时间（0．2h）依赖方式诱导p-Smad2／3蛋白表达量增加，作用1h时达到高峰；5ng／ml TGFβ1组p-Smad2／3蛋白表达量较对照组和2ng／ml TGFβ1组分别增加3．42倍和0．97倍。（4）15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组p-Smad2／3蛋白表达量与5ng／ml TGFβ1组比较分别降低61．2％、53．0％和59．S％。3种药物干预组之间p-Smad2／3蛋白表达量比较差异无统计学意义，各组Smad2和Smad3蛋白表达量无显著变化。结论PPART激动剂可以抑制TGFβ1诱导的肾间质成纤维细胞细胞外基质合成，其机制可能与阻断TGF-β1／Smad信号途径有关，提示PPARγ激动剂具有抗肾间质纤维化的潜在作用，可能成为延缓终末期肾功能衰竭的治疗新手段之一。     

通过共培养观察醛固酮活化后的肾小管上皮细胞对肾脏成纤维细胞的作用

目的探讨被醛固酮(ALDO)活化的人近端肾小管上皮细胞系(HKC)对人肾间质成纤维细胞(hRIFs)合成Ⅰ型胶原(ColⅠ)的影响。方法利用体外细胞培养及共培养技术进行如下试验。(1)用不同浓度及不同作用时间的外源性ALDO刺激HKC,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附(ELISA)方法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA及蛋白质表达。(2)用不同浓度及不同作用时间的安体舒通与内皮素-1(ET-1)共同刺激HKC,同上检测TGF-β1mRNA及蛋白质表达。(3)用外源性ALDO活化的HKC与hRIFs共培养(培养液中加或不加抗TGF-β1抗体),ELISA方法检测hRIFs的ColⅠ合成量。结果(1)外源性ALDO使TGF-β1表达呈剂量依赖及时间依赖性增加。1×10-9及1×10-7mol/LALDO刺激组TGF-β1表达量显著高于0mol/LALDO组(P<0.05或0.01);10-7mol/LALDO刺激不同时间后,TGF-β1表达量显著高于0h组(P<0.05或0.01)。(2)安体舒通使TGF-β1表达呈剂量及时间依赖性减少。10-9、10-7mol/L安体舒通组TGF-β1表达量显著低于0mol/L安体舒通组(P<0.05或P<0.01)。10-9mol/LET-1加10-7mol/L安体舒通与单用10-9mol/LET-1刺激不同时间后,两组间TGF-β1表达,差异有显著意义(P<0.05或0.01)。(3)10-7mol/LALDO刺激HKC12h活化细胞后,再与hRIFs共培养48h,hRIFs对ColⅠ的合成量显著增多(P<0.01);1.0、2.0μg/ml抗TGF-β1抗体能部分抑制此反应(P<0.05)。结论外源性ALDO能使HKC合成TGF-β1增加;内皮素刺激HKC产生的内源性ALDO能促进其自身合成TGF-β1;被ALDO活化的HKC能通过“传话”作用促进hRIFs合成Col-1,该作用部分为TGF-β1介导。     

1,25双羟维生素D3及转化生长因子β1对人胚成骨细胞增殖和分化的影响

目的　研究 1,2 5双羟维生素D3 [1,2 5 (OH) 2 VD3 ]及人转化生长因子 β1(hTGF β1)对人胚成骨细胞增殖和分化的影响。方法　体外培养人胚成骨细胞 ,经 1,2 5 (OH) 2 VD3 及hTGF β1作用后 ,通过四唑盐 (MTT)比色法观察细胞增殖 ;检测细胞培养液中碱性磷酸酶 (ALP)活性及骨钙素 (OC)含量 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法观察细胞中TGF β信号传导关键蛋白 SMAD蛋白mRNA水平的变化。结果　MTT比色发现 1,2 5 (OH) 2 VD3 组的吸光度值 (OD值 )较对照组下降 30 6 % (0 0 86±0 0 2 2比 0 12 4± 0 0 31,P <0 0 5 )。细胞培养液中ALP活性在 1,2 5 (OH) 2 VD3 组、hTGF β1组以及二者联合应用组均有显著增高 ,为对照组的 1 3～ 2 0倍 (P <0 0 5 )。其中 ,当hTGF β1浓度为 1× 10 -6g/L时 ,1,2 5 (OH) 2 VD3 及hTGF β1对人胚成骨细胞ALP的分泌存在协同刺激作用。 1,2 5 (OH) 2 VD3 与 1×10 -6g/L和 1× 10 -5g/L浓度的hTGF β1合用使得细胞培养液中OC水平增加 (P <0 0 5 ) ,但未发现二者的协同作用。当 1,2 5 (OH) 2 VD3 与 1× 10 -6g/L的hTGF β1合用时SMAD3mRNA水平达高峰 ,约为对照组的 6倍。结论　 1,2 5 (OH) 2 VD3 抑制人胚成骨细胞增殖 ,促进其分化。 1,2 5 (OH) 2 VD3 及hTGF β1     

转化生长因子及大黄酸对肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白功能的影响

目的对人肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白-1（GLUT1）进行鉴定。研究GLUT1的作用特点,TGF-β1对其影响以及大黄酸的干预作用。方法分别用RT-PCR,免疫荧光染色,流式细胞仪和［3H］-2脱氧葡萄糖摄入率,对系膜细胞GLUT1mRNA表达,蛋白质分布和功能进行鉴定。观察不同浓度TGF-β1在加或不加大黄酸的情况下对系膜细胞葡萄糖摄人以及GLUT1mRNA表达的影响。结果人类肾小球系膜细胞上存在功能性的GLUT1。TGF-β1能刺激系膜细胞GLUT1mRNA的表达,并增加系膜细胞葡萄糖的摄入率[TGF-β1（836±35）％,对照（154±12）％、P＜0.01]。大黄酸对正常糖浓度培养条件下系膜细胞糖摄入无影响,但能明显抑制TGF-β1增加系膜细胞糖摄入的作用［TGF-β1为（198±28）％、大黄酸为（576±12）％,P＜0.01]。结论首次报道人系膜细胞上存在GLUT1,TGF-β1能从转录水平上调控GLUT1的功能,使系膜细胞葡萄糖摄入增加,但该作用能够明显地被大黄酸所抑制。     

ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶对醛固酮促进肾小管上皮细胞合成转化生长因子β1的作用

目的探讨ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导途径在醛固酮(ALDO)促进肾小管上皮细胞系(HKC)合成转化生长因子β1(TGF-β1)中的作用。方法利用体外培养的HKC细胞行如下试验。(1)不同浓度MAPK三种支通路特异性阻滞剂对其分别进行阻断,以酶联免疫吸附方法(ELISA)检测外源性ALDO作用下HKC合成TGF-β1量的改变。(2)不同浓度及不同作用时间的外源性ALDO刺激HKC,以Western印迹方法检测细胞裂解物中磷酸化ERK1/2以及总ERK1/2表达,并对ERK1/2相对表达量(磷酸化ERK1/2/总ERK1/2)与相应刺激条件下TGF-β1合成量进行相关分析。(3)在不同浓度的安体舒通和糖皮质激素受体阻滞剂RU486作用细胞后,以外源性ALDO刺激HKC,同上方法检测细胞裂解物中磷酸化ERK1/2及总ERK1/2表达。结果(1)15μmol/L及25μmol/LERK1/2通路阻滞剂(U0126)分别使TGF-β1的合成量减低至(87±11)pg/ml及(75±19)pg/ml,而仅使用10-7mol/LALDO刺激作用下HKC中TGF-β1的合成量(121±10)pg/ml,与前者比较差异有统计学意义(P<0·05),而JNK和P38两条支通路阻滞剂(SP600125、SB203580)未使TGF-β1合成量出现显著性变化(均P>0·05)。(2)外源性ALDO可使HKC对ERK1/2相对表达量呈现剂量依赖性增加。10-9及10-7mol/LALDO刺激组ERK1/2相对表达量分别为0·67±0·06及0·80±0·05,显著高于0mol/LALDO组(P<0·05或0·01)。相应浓度醛固酮刺激下ERK1/2相对表达量与TGF-β1合成量之间具有显著正相关关系(R=0·793,P<0·01);10-7mol/LALDO刺激HKC15min后,磷酸化ERK1/2开始出现显著性增加并达到高峰(P<0·01),其相对表达量为0·84±0·06,此后逐渐减低,至360min时其表达量为0·49±0·08,与0min比较差异无统计学意义(P>0·05)。(3)10-7mol/LALDO与10-9、10-7mol/L安体舒通共同孵育HKC30min,可使ERK1/2的相对表达量分别为0·62±0·08及0·60±0·04,显著低于0mol/L安体舒通组(P<0·05或P<0·01),但其表达量仍显著高于未加任何刺激的对照组(P<0·05);10-7mol/LALDO与相应浓度的RU486共同刺激HKC30min未使ERK1/2相对表达量显著低于0mol/LRU486组(P>0·05)。结论ERK1/2信号转导通路可能是介导醛固酮促HKC合成TGF-β1的主要通路之一,醛固酮与胞质内受体结合是其通过活化ERK1/2途径而发挥上述病理作用的重要条件。     

转化生长因子β1及其受体基因过量表达与进展期胃癌分化及临床预后的关系

目的明确转化生长因子β1（TGF-β1）及其受体基因和下游Smad基因家族成员在肠型胃癌中的表达变化与临床病理学特征及其预后的关系。方法在建立胃癌差异基因表达谱的基础上,确定胃癌及癌旁形态学正常组织中TGF-β1的mRNA表达水平存在明显差异,进一步利用组织微阵列和免疫组化染色分别检测了胃癌及癌旁形态学正常组织中TGF-β1蛋白表达水平。结果TGF-β1蛋白主要以细胞质着色为主,在90例胃癌组织中32例（36％）阳性表达,58例（64％）为阴性表达。进一步对不同分化程度的胃癌组织中TGF-β1蛋白的表达进行分析,结果表明在39例高中分化组织中23例（59％）呈阳性表达,而51例低分化胃癌中9例（18％）为阳性表达,差异有统计学意义（P〈0．01）。进一步分析了TGF-βR-Ⅰ蛋白的表达,在74例胃癌组织中42例（57％）阳性表达,32例（43％）染色阴性。在38例高中分化组织中26例（68％）呈阳性表达,在36例低分化胃癌中16例（44％）阳性表达,差异有统计学意义（P〈0．05）。对有随访资料的肠型胃癌的TGF-β1及TGF-βR-Ⅰ蛋白的表达情况与临床病理学特征进行分析。应用Kaplan-Meier法分析蛋白阳性和阴性表达组病例的生存时间,确定TGF-β1蛋白阳性表达组病例生存和预后明显好于TGF-β1阴性表达组病例（P=0．0058）。而TGF-βR-Ⅰ蛋白表达与生存和预后无明显关系（P=0．8453）。结论TGF-β1表达水平与胃癌的分化程度有关,表达阳性组病例的预后明显好于表达阴性组的病例,提示TGF-β1表达对中晚期胃癌的再分型和分类具有重要的临床意义。     

TGF-β1对IL-1β诱导人牙周膜成纤维细胞分泌HGF影响的研究

目的研究转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-1β（IL-1β）干预人牙周膜成纤维细胞后HGF的基因表达的水平变化,为HGF网络调控人牙周膜成纤维细胞功能的研究提供新资料。方法分别采用IL-1β梯度浓度、IL-1β最佳干预浓度和TGF-β1梯度浓度干预第5代人牙周膜成纤维细胞,并运用RT-PCR法检测人牙周膜成纤维细胞中HGF的基因表达。结果经IL-1β单独作用,人牙周膜成纤维细胞中HGF的基因表达水平上调,并优选出IL-1β的最佳干预浓度为10ng/ml（P〈0.05）;当一定浓度的TGF-β1和10ng/ml的IL-1β共同作用于人牙周膜成纤维细胞后,该细胞中HGF的基因表达水平比单独IL-1β作用组低（P〈0.05）。结论 TGF-β1能够抑制IL-1β所诱导的人牙周膜成纤维细胞中HGF的基因表达。     

Smad7对转化生长因子β1诱导的肺泡上皮细胞向间质细胞转变的影响

目的检测转化生长因子（TGF）β1能否在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转变（EMT）,以及Smad7基因转染能否阻止此种转变及相关信号转导机制。方法采用脂质体法转染Smad7基因到大鼠肺泡Ⅱ型上皮（RLE-6TN）;实时荧光PCR及免疫印迹法检测转染前后上皮细胞标志物（E—cadherin,CK19）、间质细胞标志物（FN、Vimentin及α—SMA）及Smad信号通路相关蛋白表达变化;相差显微镜观察TGFβ1诱导的肺泡上皮细胞形态改变,其超微结构改变采用透射电镜观察。结果成功转染Smad7到RLE-6TN;转染前,在TGFβ1作用下,RLE-6TN间质标志物的表达在mRNA和蛋白水平上调,而上皮标志物表达下调;转染后,其间质标志物下调的同时上皮标志物上调;转染前RLE-6TN在TGFβ1作用下p-Smad2／3表达上调,转染后其表达无明显改变;形态学上,TGFβ1能诱导肺泡上皮发生EMT,Smad7转染则能阻止EMT;超微结构上,TGFβ1能诱导肺泡上皮特有板层小体变性、肿胀并随其时间延长最终完全消失。结论TGFβ1能在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮向间质细胞转变,其机制部分与Smad信号转导途径相关,Smad7转染能在一定程度上阻止该转变。