骨髓间充质干细胞对氧诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的 探讨骨髓间充质干细胞（MSC）对缺氧诱导心肌细胞凋亡的保护作用及可能机制。方法 分离培养成年大鼠MSC和乳鼠心肌细胞,将培养的乳鼠心肌细胞进行缺氧处理后,加入MSC或其条件培养液继续在无氧（95％N2＋5％CO2,持续缺氧组）或正常氧（缺氧／复氧组）条件下共培养72h,采用Hoechst细胞核染色,计算凋亡细胞百分率;采用蛋白质免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果持续缺氧可以诱导心肌细胞凋亡,凋亡率为51．6％±2．4％,与MSC或其条件培养液共培养,心肌细胞凋亡率显著减低,分别为15．1％±5．4％和24．0％±4．2％（均P〈0．01）;缺氧／复氧损伤可以引起心肌细胞凋亡,凋亡率为20．9％±2．7％,心肌细胞与MSC共培养,凋亡率显著减低（11．5％±3．7％,P〈0．05）;心肌细胞与MSC条件培养液共培养,凋亡率略有减低（20．1％±4．2％,P〉0．05）。蛋白质免疫印迹显示凋亡时心肌表达Bax水平较高,与MSC或其条件培养液共培养时,Bax表达水平呈不同程度降低,与心肌细胞凋亡发生率减低一致,Bcl-2无明显变化。结论 MSC对体外缺氧诱导的心肌细胞的凋亡有保护作用,其作用机制可能是通过细胞间直接接触和旁分泌细胞因子,影响了Bcl-2家族部分蛋白分子在心肌细胞的表达。     

K-Cl协同转运子1在宫颈癌组织中的表达及意义

目的探讨K—Cl协同转运子1（KCCl）在宫颈癌组织中的表达及在宫颈癌发生、发展中的作用。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Western印迹及免疫荧光染色方法测定40例宫颈癌、10例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）和10例慢性宫颈炎组织中KCCl mRNA及蛋白的表达及定位情况。结果宫颈癌组织中KCCl mRNA和蛋白的表达（灰度比值分别为1．29±0．17,1．18±0．27）均明显高于慢性宫颈炎（0．59±0．27,0．33±0．18）、CIN组织（0．50±0．28,0．27±0．15）,差异有统计学意义（均P〈0．05）。宫颈低、中分化癌组织中KCCl mRNA及蛋白的表达（灰度比值分别为1．39±0．12,1．37±0．15）明显高于高分化组（1．16±0．14,0．96±0．19）,差异有统计学意义（P〈0．05）;KCClmRNA及蛋白在晚期宫颈癌组织中的表达与早期组差异无统计学意义,KCCl蛋白在宫颈癌及对照组织中的分布定位在细胞膜上。结论KCCl基因可能在宫颈癌的发生发展中起重要的作用。     

尾加压素Ⅱ mRNA在正常肾上腺髓质和嗜铬细胞瘤组织中的表达

目的　研究尾加压素Ⅱ (UrotensinⅡ ,UⅡ )mRNA在正常肾上腺髓质和嗜铬细胞瘤组织中的表达。方法　正常肾上腺髓质组织取自 9例意外死亡的中青年 ,嗜铬细胞瘤组织取自 19例患者手术切除标本 ,分别提取组织总RNA ,用逆转录 聚合酶链反应方法进行研究 ,以UⅡ和内参照GAPDH(甘油醛 3 三磷酸脱氢酶 )进行同管扩增 ,以扩增的目的条带灰度和内参照条带灰度比值UⅡ /GAPDH进行UⅡmRNA表达的半定量分析。结果　UⅡ的PCR扩增产物长度为 385bp ,测序结果与GeneBank所登记碱基序列相同率为 99.7%。正常肾上腺髓质和嗜铬细胞瘤组织UⅡ /GAPDH比值分别为 0 .6 9± 0 .2 9和 0 .2 2± 0 .18(P <0 .0 5 )。结论　UⅡmRNA在正常肾上腺髓质和嗜铬细胞瘤组织中均有表达 ,嗜铬细胞瘤组织中的表达低于正常肾上腺髓质组织。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路研究南葶苈子水提液对心衰大鼠心室重构的影响

目的：观察南葶苈子水提液对压力后负荷性 心衰大鼠心室重构的影响并探索PI3K/Akt/mTOR信号通路在其中的作用。方法：雄性SD大鼠15只,随机分为正常组、模型组、南葶苈子组。4周后处死大鼠,测定各组大鼠心室肥厚指数;HE染色法和电镜观察心室组织病理变化;Western blot检测各组左室心肌组织Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3、P-Akt、Akt、P-mTOR、mTOR蛋白表达。结果：南葶苈子组心室肥厚指数为0.0033±0.0002,较模型组0.0037±0.0001降低（P＜0.05）;HE染色和电镜显示南葶苈子组心肌纤维排列不规则和心肌细胞肥厚程度较模型组减轻;Western blot证实,南葶苈子组Bcl-2/Bax蛋白表达灰度值比值0.75±0.20,较模型组0.54±0.18上调（P＜0.05）;Caspase-3/GAPDH蛋白表达灰度值比值1.31±0.22,较模型组1.62±0.26下调（P＜0.05）;而P-Akt/Akt和P-mTOR/mTOR蛋白表达灰度值比值分别为1.50±0.18、1.36±0.32,较模型组1.18±0.21、1.16±0.12上调（P＜0.05）。结论：南葶苈子水提液具有改善压力后负荷性心衰大鼠心室重构的作用,其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制心肌细胞凋亡有关。     

脑利钠肽后处理能减少在体大鼠缺血再灌注后的心肌损伤

目的 通过建立在体大鼠心肌缺血再灌注模型,在大鼠心肌缺血后给予脑利钠肽,探讨脑利钠肽后处理对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌的保护作用。方法 24只Sprague-Dawley（SD）大鼠,雄性,随机分为：（1）假手术组（SHAM）：只开胸,不结扎冠状动脉;（2）缺血再灌注组（I/R）：结扎冠状动脉左前降支45分钟、再灌注 3小时;（3）脑利钠肽组（BNP）：结扎冠状动脉左前降支45分钟、再灌注 3小时,在再灌注前10分钟、开始静脉予以BNP 0.01µg·kg - 1·min - 1, BNP静脉恒速维持至再灌注结束。用2,3,5,氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrzolium chloride, TTC)检测缺血再灌注心肌的梗死面积;用TUNEL方法检测缺血再灌注心肌的凋亡;检测心肌组织SOD、MDA的浓度以评估缺血再灌注心肌活性氧的水平。结果 假手术组心肌无梗死,缺血再灌注组的大鼠心梗面积为（44.02±10.15）%,脑利钠肽组的心梗面积为（21.53±9.08）%(P<0.05)。假手术组、BNP组与缺血再灌注组的心肌细胞凋亡指数分别为(3.13±1.62)%、(19.45±9.62)%、(38.46±12.31)% (P<0.05)。与缺血再灌注组相比,BNP组的缺血再灌注心肌组织中MDA减少(P<0.05)、而SOD的增多(P<0.05)。结论 BNP后处理能减少在体大鼠缺血再灌注的心肌损伤,其机制与其减少心肌缺血再灌注损伤导致的心肌细胞凋亡及降低心肌缺血再灌注损伤时的活性氧水平相关。     

三羟异黄酮上调肝癌HepG2细胞PTEN基因的表达及其诱导凋亡作用

 【目的】探讨三磷酸肌醇（IB）和PTEN蛋白变化在三羟异黄酮（genistein）诱导肝癌细胞凋亡中的作用。【方法】以肝癌HepG2细胞培养72h为对照组，实验各组以60Ixmol／L三羟异黄酮作用于HepG2细胞不同时间后，应用同位素试剂盒检测细胞嵋含量，Western blot分析细胞PTEN蛋白表达，流式细胞仪检测细胞凋亡率。【结果】对照组Ib含量为（29．2±0．6）pmol／10^6 cells，PTEN蛋白与内参actin蛋白灰度和面积之积的比值V-PTEN／V-actin为0．12±0．00；细胞凋亡率为（2．6±0．1）％。三羟异黄酮作用于肝癌HepG2细胞12、24、48、72h后珉分别为（12．0±1．4）pmol／10^6cells，（7．5±0．8）pmol／10^4 cells，（5．6±0．5）pmol／10^6cells，（3．3±0．6）pmol／10^6 cells；V-PTEN，V-actin分别为13．13±0．20，19．17±1．09，28．51±2．18，41．12±3．80；细胞凋亡率分别为（2.7±0．2）％。（7．4±0．5）％，（20．5±2．0）％，（30．7±1．6）％。与对照组比，三羟异黄酮作用于肝癌HepG2细12h后各时相珉显著降低（P〈0．01），PTEN蛋白表达显著增高（P〈0．01），24h后各时相细胞凋亡率显著增高（P〈0．01）。【结论】三羟异黄酮能减少瑕生成，上调PTEN基因表达，诱导肝癌细胞凋亡。     

1,6-二磷酸果糖治疗小儿急性偏瘫42例

目的观察1 ,6 二磷酸果糖治疗小儿急性偏瘫的临床疗效。方法在常规综合治疗基础上对42例小儿急性偏瘫患儿采用1,6 二磷酸果糖治疗 ,并观察疗效 ,同时与36例常规综合治疗组患儿进行比较。结果治疗组颅内高压征较对照组明显改善(治疗组2 3±0 46天 ,对照组3 92±0 60天 ,P0 01)。两组病人瘫痪完全恢复时间有明显差异(治疗组9 24±0 24天 ,对照组13 84±0 86天 ,P0 01)。结论1,6 二磷酸果糖对急性期的脑瘫治疗及脑功能恢复确有疗效。     

OGGl基因表达的半定量RT-PCR检测方法的建立

目的培养的犬肾细胞（MDCK）内8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶（OGGl）基因表达的半定量RT-PCR检测体系的建立。方法培养MDCK细胞后提取总RNA,经优化进行RT-PCR反应,检测细胞内OGGl基因的表达。扩增产物经测序同GenBank中OGGl基因序列比对验证产物的准确性,条带经ImageJ软件分析并与内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）相比,对体系的重复性进行分析。结果扩增产物证实与GenBank中该细胞的OGGl基因序列一致;重复性测定发现,MDCK细胞OGGl与GAPDH灰度值比值的均值为（0．84±0．025）,CV值为2．99％。结论本方法的准确性、重复性均较好,可用于半定量检测培养细胞尤其是MDCK细胞内OGGlmRNA的表达量。     

丹参-果糖治疗新生儿缺氧缺血性脑病的疗效评价

目的：对１２６例新生儿缺氧缺血性脑病治疗资料进行回顾性分析,评价复方丹参－１．６二磷酸果糖在治疗本症的临床疗效．方法：采用复方丹参－果糖治疗缺氧缺血性脑病。观察治疗前后患者意识、反射、肌张力恢复的情况。结果：治疗组与对照组的总有效率分别为８９．７ ％和７４．１％（Ｐ＜０．０５）;意识恢复天数分别为３．８６±０.８３和５.８７±１．１８（Ｐ＜０．０１）;反射恢复天数分别为４．４２±１．１４和５．９６±１．５２（Ｐ＜０．０１）;肌张力恢复天数分别为４．２０±１．１４和５．１１±１．１４（Ｐ＜０．０１）;住院天数分别为９．５７±２．７３和１２．８９±３．１６（Ｐ＜０．０１）．均有显著性差异。结论：采用复方丹参－ｌ．６二磷酸果糖治疗新生儿缺氧缺血性脑病,疗效显著。     

脑利钠肽和呼吸指数在心脏直视手术围术期的变化及临床意义

目的研究脑利钠肽和呼吸指数在心脏直视手术围术期的变化及临床意义。方法对首次择期行心瓣膜置换术患者45例分别于术前30min、转机30min、停机时、停机1h、术后1d、术后7d各时点同步监测脑利钠肽、心肌钙蛋白T、呼吸指数的变化,并进行各指标的相关性研究。结果脑利钠肽水平在体外循环后及手术后均明显升高,至术后1d达到高峰值,术后7d水平脑利钠肽下降,但仍明显高于术前水平（P〈0．01）;呼吸指数在体外循环后及手术后均明显升高,至体外循环10min时达到高峰值（P〈0．05或P〈0．01）,术后7d回落至术前水平（P〉0．05）。脑利钠肽变化与心肌钙蛋白T呈正相关（r=0．48,P〈0．05）;呼吸指数变化与脑利钠肽、心肌钙蛋白T均未显示相关意义（r=0．23,r=0．17,P〉0．05）。结论同步监测脑利钠肽和呼吸指数的变化为围术期如何保护心肺功能提供依据。     

3,3-diindolylmethane enhances the inhibitory effect of idarubicin on the growth of human prostate cancer cells

OBJECTIVE: To study the effects of idarubicin (IDA) combined with 3, 3-diindolylmethane (DIM) on the growth inhibition of human prostate cancer cells. METHODS: Human prostate cancer cells of the line PC-3M were cultured and then divided into the following groups: control group with solvent added into the culture fluid; IDA groups, with IDA of the terminal concentrations of 0.5, 1 or 5 mg/L added into the culture fluid; DIM groups, with DIM of the terminal concentrations of 30, 60 or 100 micromol/L added into the culture fluid; and DIM + IDA groups, with 0. 5 mg/L IDA and DIM 30, 60 or 100 micromol/L added into the culture fluid. 48 h later the cell growth inhibition rate was detected by MTT assay. Flow cytometry and acridine orange staining were used to detect the cell cycle and apoptosis. RT-PCR and Western blotting were used to detect the mRNA and protein expression of caspase 9, an apoptosis gene. RESULTS: Both IDA and DIM dose-dependently inhibited the growth of the PC-3M cells. The growth inhibition rate of the 60 micromol/L DIM + 0.5 mg/L IDA group was 69.9%, almost 10 times as that of the 0.5 mg/L IDA group. The apoptosis rate of the 60 micromol/L DIM + 0. 5 mg/L IDA group was 47.0%, significantly higher than that of the 0.5 mg/L IDA group (3.2%, P < 0.05). RT-PCR and Western blotting showed that the combination of DIM and IDA significantly enhanced the mRNA and protein expression of caspase 9. CONCLUSION: DIM enhances the growth inhibition effect of IDA on human prostate cancer cells by the mechanism of induction of apoptosis.     

DIM增强去甲氧柔红霉素对人前列腺癌细胞生长的抑制作用

目的 观察3,3-二吲哚基甲烷(DIM)与去甲氧柔红霉素(IDA)联合应用对人前列腺癌细胞(PC-3M)的生长抑制的作用并探讨其机制.方法 应用MTT法检测生长抑制率;流式细胞术及吖啶橙染色分析PC-3M细胞凋亡及细胞周期变化;分别用RT-PCR和Western印迹检测凋亡相关的半胱氨酸蛋白水解酶9(caspase 9)基因和蛋白的表达.结果 0.5 mg/L的IDA与60 μmol/L的DIM联用,使0.5 mg/L的IDA对肿瘤细胞生长抑制率由27.8%提高到69.9%;诱导凋亡的效应由3.2%提高到47.0%,相当10倍剂量(5 mg/L)IDA产生的效应.RT-PCR和Western印迹结果显示,两药联用明显增强caspase 9基因和蛋白的表达水平.结论 DIM能显著增强IDA对PC-3M细胞的生长抑制作用,其机制与凋亡诱导效应有关.     

生存素表达与肺癌多药耐药株H460/cDDP化疗敏感性的关系

目的探讨生存素（survivin）与人肺癌多药耐药株H460／cDDP获得性耐药的关系。方法采用RT-PCR、Western印迹法检测耐药株H460／cDDP与敏感株H460的生存素表达;用针对生存素的小干扰RNA（siRNA）经脂质体介导转染入耐药株H460／cDDP,抑制生存素表达;用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测顺铂（DDP）、紫杉醇（Taxol）对耐药株H460／cDDP的细胞毒作用。结果耐药株H460／cDDP的生存素mRNA和蛋白质表达均高于敏感株H460。生存素siRNA转染耐药株H460／cDDP后72h,生存素蛋白质的抑制率为92、3％。耐药株H460／cDDP和敏感株H460对DDP的Ic50分别为（6.3±0．6）mg／L、（0.8±0．1）mg／L,对Taxol的Ic50分别为（12．7±1．2）mg／L、（1．5±0．3）mg／L;生存素siRNA作用后,H460／cDDP对DDP、Taxol的IC50分别为（4．0±0.9）mg／L（P=0．002）、（8．1±1．7）mg／L（P=0．003）。结论生存素高表达与耐药株H460／cDDP的获得性耐药有关,生存素有可能成为逆转肺癌耐药性的有效靶点。     

1,6-二磷酸果糖对缺血性脑损伤保护机制的研究

目的　探讨 1,6 二磷酸果糖 (FDP)对缺血性脑组织损伤的保护机制。方法　利用大鼠局灶性脑缺血模型 ,采用TTC染色、免疫组织化学染色、Western印迹法和TUNEL染色技术 ,观察FDP对脑梗死面积、缺血区脱嘌呤 /脱嘧啶核酸内切酶 (APE/Ref 1)表达水平以及缺血区细胞凋亡程度的影响。结果　 1,6 二磷酸果糖可显著性减少脑梗死面积 (31 0mm2 ± 2 9mm2 与 4 7 3mm2 ± 6 0mm2 )。可减少缺血半暗带TUNEL阳性细胞数量 ,缺血 2 4h组与FDP干预组分别为 6 9 3± 2 4个 /mm2 与4 2 8± 1 7个 /mm2 。上调缺血半暗带APE/Ref 1蛋白的表达 :缺血 2 4h组与FDP干预组比较APE/Ref 1免疫阳性细胞数分别为 2 6 3± 2 9个 /mm2 与 4 7 0± 3 4个 /mm2 ;Western印迹法光密度扫描值分别为 5 3± 3 2与 13 8± 5 4。结论　FDP可通过上调脱嘌呤 /脱嘧啶核酸内切酶表达水平 ,增强脑组织对缺血损伤的修复能力 ,减少缺血半暗带细胞凋亡发生 ,阻止脑梗死范围进一步扩大 ,因而对缺血性脑损伤具有保护作用     

三七总皂苷对高糖诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察三七总皂苷(PNS)对高浓度葡萄糖致大鼠视网膜微血管内皮细胞(RRCECs)损伤的保护作用和对细胞黏附分子-1(ICAM-1)的影响。方法体外原代培养RRCECs,并通过免疫荧光化学方法鉴定;用PNS作用于4~6代的RRCECs,实验分为正常组、高糖组(30 mmol/L)和高糖不同浓度PNS(20、50、100 mg/L)组,分别使用MTT比色法和台盼蓝计数法观察PNS对细胞活力及数目的影响,使用Western blotting检测药物作用前后ICAM-1的表达变化。结果 MTT比色法结果显示,PNS 50、100 mg/L作用48 h和72 h可明显减轻高糖造成的RRCECs损伤,提高RRCECs活力(P0.01);台盼蓝计数结果显示,在PNS作用48 h后PNS 100 mg/L组细胞数目明显增加(P0.01),72 h后PNS 50、100 mg/L组细胞数目均明显增加(P0.05)。Western blotting检测显示,随着PNS药物浓度的增高,高糖环境下RRCECs中的ICAM-1表达量逐渐减少(P0.05)。结论PNS可以减轻高糖引起的RRCECs损伤,减少高糖环境下RRCECs中ICAM-1表达。PNS对RRCECs的保护作用与ICAM-1表达调节之间的关系有待进一步研究。     

小干扰RNA抑制胃癌细胞肝素酶表达及侵袭的实验研究

目的 利用RNA干扰（RNAi）技术封闭胃癌细胞系SGC7901肝素酶表达,观察其对肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法 体外转录合成小干扰RNA（siRNA）,经脂质体转染胃癌细胞系;结合逆转录（RT）-PCR,Western印迹检测类肝素酶mRNA及蛋白质表达;通过体外侵袭实验评价肝素酶RNAi后胃癌细胞系的侵袭能力变化。结果 肝素酶siRNA分子可以特异性地抑制SGC7901细胞肝素酶mRNA,抑制率达（70±6）％;肝素酶RNAi后SGC7901细胞的侵袭抑制率达（61±36）％。结论 靶向肝素酶基因的siRNA分子能特异性抑制其蛋白表达水平,降低肿瘤细胞的侵袭能力。肝素酶是促进胃癌细胞侵袭转移的关键分子,并可为抑制胃癌侵袭转移提供新策略。     

褐藻素通过调控Nrf2/Keap1通路缓解糖尿病大鼠心肌肥大

目的 探索褐藻素（FX）对糖尿病心肌病的保护效应和作用机制。方法 腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,进行分组：糖尿病组（DM）、褐藻素干预糖尿病组（DM+FX）和二甲双胍干预糖尿病组（DM+Met）,另取正常大鼠给予正常喂养作为正常组（Con）。造模成功后连续12周每日灌胃给药,褐藻素组每日给予200 mg/kg褐藻素灌胃,二甲双胍组每日给予230 mg/kg灌胃,糖尿病组同步灌胃生理盐水。HE染色观察各组大鼠心脏细胞肥大情况;Western blot法检测大鼠心脏中纤维化蛋白TGF-β1和FN蛋白表达水平。H9C2细胞分为3组：正常糖组（NG,5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（HG,45 mmol/L葡萄糖）和褐藻素干预高糖组（HG+1 μmol/L FX）。FITC标记的鬼笔环肽检测大鼠心肌细胞H9C2表面积变化;qRT-PCR法测定各组细胞肥大因子ANP、BNP和β-MHC基因表达变化;Western blot法检测各组大鼠心脏组织和H9C2细胞中Nrf2、Keap1、HO-1、SOD1蛋白表达水平;DCFH-DA探针检测细胞内活性氧水平变化。结果 褐藻素改善糖尿病大鼠心肌纤维化和心肌细胞肥大,同时上调心脏组织中Nrf2和HO-1蛋白表达,抑制Keap1蛋白表达（P<0.05）。褐藻素可抑制高糖诱导H9C2心肌细胞表面积增加,降低ANP、BNP和β-MHC的mRNA表达水平（P<0.05）。褐藻素可促进高糖诱导的H9C2细胞中Nrf2入核,上调下游靶蛋白SOD1和HO-1蛋白表达（P<0.05）来增强细胞抗氧化能力,降低细胞内活性氧的水平。结论 褐藻素具有良好的抗糖尿病心肌纤维化和心肌细胞肥大作用,同时上调Nrf2信号通路并促进下游抗氧化蛋白SOD1和HO-1的表达,降低活性氧水平。     

罗格列酮对高糖大鼠肾小管上皮细胞表达转化生长因子β1和纤维连接蛋白的影响

目的:观察罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)转化生长因子β1(TGF_β1)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响,初步探讨罗格列酮对糖尿病肾病的保护作用。方法:体外培养大鼠肾小管上皮细胞,分成正常对照组NG(含1000mg/LD_葡萄糖)、高糖组HG(含4500mg/LD_葡萄糖)、HG+RGZ(5μmol/L)组、HG+RGZ(10μmol/L)组和HG+RGZ(15μmol/L)组,用蛋白印迹的方法(Westernblotting)检测TGF_β1和FN蛋白表达的改变。结果:HG组细胞TGF_β1和FN的蛋白水平较NG组显著升高,加入罗格列酮后,TGF_β1和FN的表达较HG组降低。结论:罗格列酮可以抑制高糖诱导的小管细胞TGF_β1和FN高表达,具有一定的肾保护作用。     

骨髓间充质干细胞的肌源性诱导分化及转染VEGF基因的表达

OBJECTIVE: To induce the differentiation of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) into myogenic cells in vitro, and to investigate the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) gene in AdTrackCMV-hVEGF165- transfected MSCs. METHODS: Twenty rabbits were divided equally into control group and experimental group, and MSCs were isolated and purified from their bone marrow by Percoll (1.073 g/ml) followed by cell culture in low-glucose DMEM supplemented with 10% fetal bovine serum. 5-azacytidine (5-Aza) was added into the cell culture of the experimental group on the third day. The expression of troponin I in MSCs was assayed by immunohistochemistry on the 28th day. AdTrackCMV- hVEGF165 eukaryotic expression vector was constructed and transfected into the MSCs, and subsequent VEGF expression was detected by Northern blotting and Western blotting while enzyme-linked immunosorbent assay (ILISA) was employed to examine the VEGF concentration in the supernatant of the culture medium. RESULTS: Following successful isolation and culture of the MSCs from rabbit bone marrow, 5-Aza-induced differentiation of the cells into myogenic cells was demonstrated by their positive staining for cardiac troponin I (cTnI). Northern blotting showed that the expression of VEGF 165 mRNA was much higher in the VEGF165 gene-transfected cells than in the control cells. Western blotting showed VEGF expression in the transfected cells. The concentration of VEGF in the supernatant mounted to the peak level 3-5 d after VEGF165 gene transfection (1,011-1,027 pg/ml) and decreased gradually thereafter, but still maintaining higher levels than those in the control group and pAdTrackCMV group (349 pg/ml vs 116 pg/ml and 125pg/ml, respectively, P<0.01). CONCLUSION: MSCs can be induced to differentiate into myogenic cells in vitro and express VEGF after VEGF gene transfection, and this success may provided a basis for combining MSC transplantation with gene therapy for regeneration of the damaged myocardial cells.     

果糖二磷酸钠对柔红霉素诱导的急性白血病患儿血浆脑钠素浓度的影响

目的：通过观察急性白血病患儿应用柔红霉素（DNR）化疗后其血浆脑钠素（BNP）水平的改变及应用不同心肌保护药后BNP水平的变化,探讨能早期监测DNR心肌毒性并可筛选出更好保护心肌药的指标.方法：选择2004/2008年新诊断的急性白血病患儿31例,均采用DNR＋长春新碱＋左旋门冬酰胺酶＋泼尼松（DVLP）方案诱导化疗,化疗期间分别使用果糖二磷酸钠（实验组）或参麦注射液（对照组）保护心肌.在应用DNR前后用酶联免疫吸附试验测定患儿血浆BNP水平,并同时常规检测患儿化疗前后心肌酶谱（LDH1,CPK-MB）及心电图（ECG）.结果：实验组患儿化疗后血浆BNP浓度从（3.89±1.43）ng/L增加到（15.12±4.38）ng/L（P〈0.001）.对照组从（3.72±1.38）ng/L增加到（18.45±5.29）ng/L（P〈0.001）.两组化疗前BNP水平无显著差异（P〉0.05）,而化疗后FDP组患儿血浆BNP水平较对照组低（P〈0.001）.两组化疗前后ECG及LDH1,CPK-MB均无明显变化.结论：在急性白血病患儿应用DNR化疗时,BNP可用于监测D多NR对心脏的早期影响和判断心肌保护药的效果.