邻苯二甲酸二乙基己酯体外对大鼠卵巢颗粒细胞Bax和Bcl-2基因表达的影响

【目的】通过对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯（di-2-ethylhexylphthalate,DEHP）染毒,探讨DEHP体外对大鼠卵巢颗粒细胞Bax和Bcl-2基因表达及细胞凋亡的影响。【方法】体外分离和原代培养未成熟大鼠卵巢颗粒细胞,用不同浓度的DEHP（10、50、nnmol／L）染毒24h。荧光定量PCR法检测Bax和Bcl-2基因mRNA表达水平,Weas[ernblot检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。【结果】与对照组比较,大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2基因mRNA和蛋白表达下降（P〈0．05）,Bax基因mRNA和蛋F1表达增加（P〈0．05）,同时细胞凋亡率增加（P〈0．05）,呈浓度依赖关系。【结论】DEHP可通过下调Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达而诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵巢功能。     

紫杉醇对人卵巢癌细胞凋亡的影响

目的 :探讨紫杉醇 (PTX)对人卵巢细胞凋亡的影响。方法 :应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪、活细胞视频观察和蛋白印迹免疫法进行检测和观察。结果 :癌细胞在PTX作用下 ,首先表现为G2 /M期阻滞 ,一定时间后出现细胞凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质凝聚或断裂。细胞DNA裂解片段呈现典型的“阶梯状”排列的条带。凋亡抑制基因Bcl- 2在细胞凋亡过程中呈低表达并发生修饰反应 ,而调亡诱发基因Bax先呈高表达后表达降低。结论 :PTX诱发人卵巢癌细胞的凋亡与细胞分裂阻滞密切相关 ,Bcl- 2和Bax在PTX引起人卵巢癌细胞凋亡中可能起着重要的调控作用。     

苦参素诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡及细胞周期的影响

目的：探讨苦参素对卵巢癌细胞株H08910的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法：用苦参素处理H08910细胞，采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用，倒置显微镜观察细胞形态学改变；琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解，以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果：在苦参素作用下，H08910细胞呈凋亡改变，DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时，细胞周期发生特定的改变。结论：苦参素能抑制卵巢癌细胞增殖，能诱导卵巢癌细胞凋亡。     

腺病毒介导AMP激活的蛋白激酶的过表达诱导肝星状细胞株LX2凋亡

目的 探讨在肝星状细胞株LX2中,用腺病毒介导AMP激活的蛋白激酶(AMPK)过表达对细胞凋亡的影响.方法 病毒感染细胞后,用免疫印记的方法检测外源基因的表达;流式细胞仪分析细胞的凋亡;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带,免疫印迹检测caspase-3以及Bcl-2、Bax表达的变化.结果 免疫印迹结果显示表达组成性激活的AMPK的腺病毒感染LX2细胞72 h,AMPK过表达.过表达AMPK的LX2细胞用流式细胞仪检测到有凋亡的亚二倍体峰出现;DNA断裂出现梯状条带,casepase-3被激活,Bcl-2在LX2中是低表达的,而Bax表达水平升高.结论 腺病毒介导AMPK的过表达可以诱导LX2细胞发生凋亡,其可能的机制之一是上调促凋亡基因bax的表达.     

天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表达的影响

目的:研究天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响。方法:不同浓度天花粉蛋白分别处理Hela细胞24~72h后,MTT法检测细胞的生长活性,显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期,WesternBlot检测凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的表达。结果:天花粉蛋白对HeLa细胞的生长具有抑制作用,显微镜下观察到细胞圆缩,染色体凝聚等凋亡细胞的形态学改变,流式细胞仪直方图上亦出现特征性的亚二倍体峰,随着天花粉蛋白浓度的增加,Bax基因的表达增加而Bcl-2的表达减少。结论:天花粉蛋白可诱导宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,Bcl-2蛋白的减少与Bax蛋白表达增多可能是HeLa细胞凋亡的机制之一。     

马钱苷对结肠癌SW480细胞增殖的影响及机制初探

目的研究马钱苷对结肠癌SW480细胞增殖的影响及作用机制。方法 MTT法检测细胞增殖和生存活力;Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡;半定量RT-PCR法检测与细胞凋亡相关的Bax基因和Bcl-2基因mRNA的表达水平。结果与对照组比较,不同浓度药物组均对SW480细胞有抑制作用,且呈一定的量效和时效关系;Hoechst 33258染色可见较多凋亡细胞,流式细胞仪检测显示马钱苷能显著增加细胞凋亡率;半定量RT-PCR测得马钱苷对Bax mRNA的表达无影响,但会引起Bcl-2 mRNA的表达下调。结论马钱苷能抑制SW480细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与影响Bcl-2基因的表达有关。     

二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡及对Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨二烯丙基三硫（dially trisulfide，DATS）对人胃癌MGC-803细胞凋亡和凋亡调控基因Bcl-2和Bax的影响。方法用光学显微镜，荧光显微镜，流式细胞术检测凋亡，免疫组化研究人胃癌MGC-803细胞Bcl-2，Bax表达的变化。结果在光学显微镜及荧光显微镜下，通过DATS作用后的胃癌细胞出现了凋亡的典型形态学改变；流式细胞术检测可见亚G1峰出现。免疫组化显示，经DATS处理后，Bax的表达增强（P〈0．05），Bcl-2表达未见明显改变。结论Bcl-2基因家族可能参与了DATS诱导的MGC-803细胞凋亡。     

白藜芦醇对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究白藜芦醇抑制人上皮性卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡的作用及机制。方法:将人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3细胞随机分为5组,即正常对照组、白藜芦醇高剂量组(40 mg·L~(-1))、白藜芦醇中剂量组(20 mg·L~(-1))、白藜芦醇低剂量组(10 mg·L~(-1))和顺铂组(40 mg·L~(-1))。干预48 h后,通过光学显微镜观察各组细胞形态,MTT比色法检测各组细胞增值抑制率。通过流式细胞仪分析细胞周期的改变、流式细胞术检测细胞凋亡并计算细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达并计算Bax/Bcl-2比值,Western blot法检测细胞caspase-3蛋白表达。结果:与正常对照组比较,白藜芦醇高、中剂量组细胞出现变圆、脱壁、细胞间接触松散等状态,细胞抑制作用明显、增殖抑制率显著升高(P0.01);白藜芦醇各剂量组细胞周期被阻滞于G2/M期,白藜芦醇高、中剂量组细胞凋亡率显著升高(P0.01),同时可明显下调Bcl-2 mRNA而上调Bax mRNA表达,显著提高Bax/Bcl-2值(P0.05,P0.01),上调caspase-3蛋白表达(P0.01)。结论:白藜芦醇能够通过抑制增殖并促进凋亡对人上皮性卵巢癌SKOV3细胞生长起到一定的抑制作用,其机制可能与白藜芦醇调节凋亡相关基因蛋白表达有关。     

大鼠CB1基因真核表达载体的构建及其对CaSki细胞凋亡的影响

目的 构建大鼠CB1(rCB1)基因真核表达载体 ，检测rCB1基因在细胞中的表达，研究rCB1对Caski细胞凋亡的影响。方法 从大鼠脑组织中提取总RNA，RT-PCR扩增rCB1基因, 通过酶切、纯化、连接PCR纯化产物与pCDNA3.1( )质粒，构建pcDNA3.1( )-rCB1。脂质体法将其转染到HEK293和Caski细胞，Western blot及细胞免疫荧光联合激光扫描共聚焦方法检测CB1的表达及定位，流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blot与实时荧光定量PCR检测rCB1、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果 酶切重组质粒获得5300bp的载体片段和1500bp的目的片段，测序结果和rCB1基因序列（NM_012784.4）一致。转染HEK293细胞后， rCB1在HEK293细胞细胞膜和细胞质表达。转染Caski细胞后， rCB1使细胞凋亡率增加（P<0.05）； rCB1基因上调Bax、Bad的表达，同时抑制Bcl-2的表达，与空白组比较，其差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 成功构建了pcDNA3.1( )/rCB1真核表达载体, rCB表达于细胞膜和细胞质， rCB1可以明显促进宫颈癌Caski细胞的凋亡，其机制是上调Bax、Bad和抑制Bcl-2的表达。     

苦参素诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡的形态学观察

目的：探讨苦参素对卵巢癌细胞株H08910的细胞凋亡作用。方法：用苦参素处理H08910细胞,采用透射电镜观察细胞形态学改变以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果：在苦参素作用下,H08910细胞呈凋亡改变,细胞表面突起减少或脱失,部分细胞核染色凝聚,边移。细胞凋亡的同时,细胞周期发生特定的改变。结论：苦参素不能抑制卵巢癌细胞增殖,而且能诱导卵巢癌细胞凋亡。     

脐带间充质干细胞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)抑制人卵巢癌SKOV3细胞增 殖及促进其凋亡的作用。方法：采用Transwell共培养观察UC-MSCs向卵巢癌细胞靶向归巢的作用;MTT 实验检测UCMSCs 条件培养基抑制SKOV3细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染法检测其凋亡率;实时PCR检测与SKOV3细胞增殖 和凋亡相关基因Ki-67,Bax,Bcl-2的表达。结果：UC-MSCs体外向SKOV3细胞靶向归巢。MTT 结果显示UC-MSCs条件 培养基明显抑制SKOV3细胞的增殖(P<0.01)。Annexin V-FITC/PI双染法提示75%条件培养基组的凋亡率明显高于对照 组(P<0.05)。实时PCR发现增殖相关基因Ki-67的表达明显下降(P<0.01),凋亡相关基因Bcl-2的表达明显降低(P<0.01), Bax的表达明显增加(P<0.01)。结论：UC-MSCs体外能向卵巢癌细胞靶向归巢,通过调节增殖相关基因Ki-67的表达, 抑制SKOV3细胞增殖;通过调节凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,促进SKOV3细胞凋亡。     

Bcl—2和Bax蛋白在子宫内膜异位症的表达

目的：研究凋亡调节蛋白Bcl—2和Bax在子宫内膜异位症发生中的病理生理作用。方法：应用免疫组织化学ABC法检测16例子宫腺肌病的正位和异位子宫内膜、12例卵巢内异症的异位内膜及17例正常子宫内膜中Bcl—2和Bax的免疫定位和染色强度。结果：①在正常和正位子宫内膜中，Bcl—2或Bax表达相同(P＞0．05)，主要见于腺上皮细胞，具有明显周期性变化。②子宫腺肌病异位内膜中，Bcl—2或Bax均持续表达，无周期性变化。②卵巢内异症的异位内膜，Bcl—2和Bax极少表达。结论：①Bcl—2或Bax在正常和正位子宫内膜的周期性表达；提示它们可能参与月经周期调节；②子宫腺肌病异位内膜腺上皮细胞Bcl—2持续存在，使之得以长期增殖而发病，为研究腺肌病的发病机制和寻找防治对策提供了新的理论依据。③卵巢内异症极少表达Bcl—2可能是促成凋亡形成，引起巧克力囊肿的原因。     

Bcl-2和Bax蛋白在子宫内膜异位症的表达

目的 :研究凋亡调节蛋白Bcl 2和Bax在子宫内膜异位症发生中的病理生理作用。方法 :应用免疫组织化学ABC法检测 16例子宫腺肌病的正位和异位子宫内膜、12例卵巢内异症的异位内膜及 17例正常子宫内膜中Bcl 2和Bax的免疫定位和染色强度。结果 :①在正常和正位子宫内膜中 ,Bcl 2或Bax表达相同 (P >0 .0 5 ) ,主要见于腺上皮细胞 ,具有明显周期性变化。②子宫腺肌病异位内膜中 ,Bcl 2或Bax均持续表达 ,无周期性变化。③卵巢内异症的异位内膜 ,Bcl 2和Bax极少表达。结论 :①Bcl 2或Bax在正常和正位子宫内膜的周期性表达 ,提示它们可能参与月经周期调节 ;②子宫腺肌病异位内膜腺上皮细胞Bcl 2持续存在 ,使之得以长期增殖而发病 ,为研究腺肌病的发病机制和寻找防治对策提供了新的理论依据。③卵巢内异症极少表达Bcl 2可能是促成凋亡形成 ,引起巧克力囊肿的原因。     

5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素通过活化过氧化物酶体增殖因子激活受体γ诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡的研究

目的探讨5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素（ADFMChR）通过活化过氧化物酶体增殖因子激活受体（PPARγ）诱导人卵巢癌细胞凋亡作用的分子机制。方法采用MTT法测定ADFMChR对卵巢癌（CoC1）细胞系细胞增殖抑制作用;碘化丙啶染色流式细胞术（FCM）检测ADFMChR诱导CoC1细胞凋亡程度;DNA琼脂糖凝胶电泳证实ADFMChR诱导CoC1细胞凋亡作用。Western印迹检测ADFMChR对CoC1细胞PPA脚,NF-κB,Bcl-2,Bax蛋白表达的影响。结果MTY法显示ADFMChR呈剂量依赖性抑制CoC1细胞增殖作用,IC50值为7．76μmol／L;FCM分析ADFMChR呈剂量依赖性诱导CoC1细胞凋亡,ADFMChR（10．0,30．0μmol／L）处理CoC1细胞48h,凋亡率分别为33．07％和73．70％,均高于相应浓度白杨素诱导凋亡率（21．70％、40．00％）;ADFMChR（30μmol／L）处理CoC1细胞48h的DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型梯形条带,加用PPARγ／阻断剂（GW9662）后条带消失;Western印迹分析ADFMChR以剂量依赖方式上调CoC1细胞PPA脚和Bax蛋白表达,下调NF-κB和Bcl-2蛋白表达。结论ADFMChR通过活化PPARκ抑制NF-κB和Bcl-2表达,上调Bax,诱导CoC1细胞凋亡。     

Foxo3a基因调控大鼠卵巢颗粒细胞体外发育及预防顺铂对卵巢的毒性作用

目的研究Foxo3a基因对大鼠卵巢颗粒细胞体外发育的调控及其预防顺铂卵巢毒性作用。方法大鼠原代颗粒细胞体外 培养,利用HE染色法及免疫荧光法进行原代颗粒细胞鉴定;构建携带Foxo3a基因的重组腺病毒AD-rFoxo3a,利用RT-PCR及 Western-blot法检测Foxo3a表达;实验分为3组：实验组（AD-rFoxo3a组）、阴性对照组（rAD组）及空白对照组（Control组）,分别 绘制各组细胞生长曲线,Western-blot法检测各组cyclin D1、p27、Bax、Bim蛋白表达,利用流式细胞术、Hoechst33342/PI法分别 检测细胞周期及细胞凋亡情况,流式细胞术检测各组细胞加入最适浓度顺铂后细胞凋亡情况。结果（1）体外分离培养大鼠原 代卵巢颗粒细胞存活率>90%,细胞纯度>95%;（2）重组腺病毒AD-rFoxo3a感染颗粒细胞36 h后Foxo3a基因在mRNA水平高 表达,感染48 h后在蛋白水平高表达;（3）实验组细胞增殖受到抑制,G1期细胞比例及细胞凋亡率较空白对照组及实验对照组增 加（P<0.01）,后两组差异无统计学意义;（3）实验组Bim、p27、cyclin D1蛋白较对照组高表达,而各组Bax蛋白表达无明显差异; （4）加入顺铂24 h后实验组细胞凋亡率高于空白对照组及实验对照组（P<0.01）,后两组细胞凋亡率差异无统计学意义。结论 过表达Foxo3a基因在体外可能通过促进cyclin D1和p27蛋白表达诱导大鼠卵巢颗粒细胞静止在G1期,通过增加Bim蛋白表达 诱导颗粒细胞凋亡;同时过表达Foxo3a基因在体外不能逆转顺铂导致的颗粒细胞凋亡,其对于卵泡发育的调控及预防顺铂对 卵巢的毒性作用还有待体内实验进一步研究。     

薤白总皂苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的观察薤白总皂苷对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响,并探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的薤白总皂苷(25、50、100、250、500、1000μg/ml)于不同作用时间(24、48、72 h)处理宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同浓度的薤白总皂苷在不同作用时间下对HeLa细胞增殖率的影响;用100和200μg/ml的薤白总皂苷处理宫颈癌HeLa细胞48 h后,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果薤白总皂苷对HeLa细胞的生长抑制作用呈明显的时间一剂量依赖性;薤白总皂苷(100和200μ/ml)处理能显著降低HeLa细胞线粒体膜电位,抑制HeILa细胞增殖,促进其凋亡(P<0.05,P<0.01);上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P<0.05,P<0.01)。结论薤白总皂苷有显著的抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能与其降低HeLa细胞线粒体膜电位,上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性有关。     

紫草素诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其机制的研究

目的 研究紫草素(shikonin, SK)诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其作用机制。方法 不同浓度紫草素作用于肺腺癌A549细胞后,CCK-8法检测细胞的增殖情况;DAPI荧光染色法和FCM检测细胞凋亡;Western blotting检测紫草素处理48h后Bax、Bcl-2、p-Akt、p-ERK1/2的蛋白水平。结果 紫草素显著抑制肺腺癌A549细胞的增殖活性(P<0.05),诱导细胞凋亡,与空白对照组比较,紫草素处理组Bax表达上调(P<0.05),Bcl-2、p-Akt、P-ERK1/2表达下调(P<0.05)。结论 紫草素可以显著抑制肺腺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡途径,PI3K/Akt信号通路和ERK 1/2信号通路有关。     

褪黑素联合卡铂对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖及凋亡的影响

目的: 探讨褪黑素(MLT)、卡铂(CBP)单独及联合应用在体外对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,阐明MLT和CBP的药物协同作用。 方法: 将体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、MLT组(1和2 mmol·L^-1)、CBP组(12.5、25.0和50.0mg·L^-1)、联合用药组(不同浓度MLT及CBP联合用药)。应用MTT比色法、流式细胞术(FCM)测定各组SKOV3细胞的增殖抑制率及凋亡情况,并应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定各组SKOV3细胞中Bcl-2和Bax基因表达水平。 结果: MTT法检测,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率高于MLT组,且高于 50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2 mmol·L^-1MLT联合50mg·L^-1CBP 组效果最佳,增殖抑制率为(70.7±4.2)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05)。流式细胞术检测,联合用药组SKOV3细胞凋亡率高于MLT组,且高于50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2mmol·L^-1MLT 联合50mg·L^-1CBP组SKOV3细胞凋亡率为(58.9±2.0)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。与同浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞中Bax基因表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2基因表达水平明显降低(P<0.05)。 结论: MLT可增强CBP在体外对卵巢癌SKOV-3细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用,通过增强Bax基因表达及下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。     

Cyt-c、Bax、Bcl-2在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义

目的探讨凋亡相关因子Cyt-c、Bax、Bcl-2蛋白在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义。方法应用免疫组织化学SP法及Image-ProPlus图像分析软件检测Cyt-c、Bax、Bcl-2蛋白在15例正常卵巢组织、15例卵巢上皮性良性肿瘤、15例卵巢上皮性交界性肿瘤及30例原发性上皮性卵巢癌中的表达情况。结果 Cyt-c、Bax、Bcl-2在恶性组中的阳性表达显著高于其它三组。Cyt-c蛋白表达与临床分期及淋巴结转移有关,Bax、Bcl-2蛋白表达与临床分期有关。Bax与Bcl-2在上皮性卵巢癌中的表达呈负相关。结论 Cyt-c、Bax、Bcl-2与上皮性卵巢癌的发生有关;Cyt-c、Bcl-2的高表达提示预后不良。