蓖麻毒素A链细胞内转运机制研究

蓖麻毒素是从大戟科植物蓖麻(Ricinus communus)的种子中提取的蛋白质,其分子量约为60 Kd,由A、B两条链组成.蓖麻毒素A链(ricin A chain,RTA)是毒性链;B链有凝集素的活性,可识别末端含半乳糖基的受体.把单克隆抗体与毒素分子结合,可制成对肿瘤细胞有特异杀伤作用的导向药物--免疫毒素[1],可克服化疗药物非特异性的不良反应[2].本文就RTA的结构及其在细胞内的转运机制研究进展,及临床应用作一综述.     

eEF1A基因与肿瘤

真核细胞延长因子1A广泛存在于真核细胞内,是在核糖体上催化氨基酸链的延伸,推动、控制蛋白质的合成等方面起到重要作用的蛋白质。近年来研究发现其不仅将GPT和氨酰基tRNA运至核糖体上,在细胞中还发挥着其它许多作用,因此eEF1A正成为研究热点。作者通过复习文献,从生理、病理作用方面对eEF1A与肿瘤可能存在的关系进行了综述。     

采用蛋白质组学技术鉴定肝癌细胞株HepG2的G1 期细胞的hnRNPA2/B1蛋白

[目的]采用蛋白质组学技术鉴定肝癌细胞株HepG2的G1期细胞内的不均一性核糖核蛋白A2/B1 (hnRNPA2/B1)蛋白.[方法]提取肝癌细胞株HepG2的G1期细胞的蛋白质,采用双向电泳方法分离蛋白质,应用图像扫描仪及质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定HepG2的G1期细胞表达的蛋白质.[结果]采用双向电泳技术分离,并用质谱成功鉴定出HepG2的G1期细胞的hnRNPA2/Bl.[结论]肝癌细胞株HepG2的G1期细胞内的hnRN-PA2/B1蛋白的成功鉴定,为探讨其在肝癌细胞生长和增殖中的作用奠定了基础,并为临床上肿瘤的治疗提供参考依据.     

人参皂甙 Rh2 联合顺铂对食管癌细胞的杀伤作用

目的：体外观察低剂量人参皂甙Rh2（ginsenoside Rh2,GS-Rh2）对抗肿瘤药顺铂（cisplatin,DDP）杀伤人食管癌细胞株Eca109的影响,并探讨其可能的作用机制.方法：人食管癌细胞Eca109经培养符合条件后,分别加用0.3μg/ml DDP（A组）、20μmol/ml GS-Rh2（B组）、0.3μg/ml DDP＋20μmol/ml GS-Rh2（C组）、对照组（D组）处理48小时.流式细胞仪检测各组细胞凋亡率和死亡率.高效液相色谱检测各组细胞内DDP的药物浓度.蛋白质印迹法检测各组细胞中p53表达.结果：细胞凋亡率和死亡率C组显著高于A、B两组（P＜0.05）;C组细胞内DDP的药物浓度显著高于A组细胞（P＜0.05）;C组细胞p53表达水平低于A组（P＜0.05）.结论：体外低剂量GS-Rh2能增强DDP对人食管癌细胞Eca109的杀伤作用,其作用机制可能与降低细胞内p53表达有关.     

植物毒素及其免疫毒素的抗肿瘤作用

蓖麻毒素和相思豆素均为由 A、B 两链通过二硫键连接而成的糖蛋白,对肿瘤细胞和正常细胞均有较强的杀伤作用,但如以单克隆抗体与其 A 链相交联形成免疫毒素,则可替代 B链与靶细胞的结合,既可保持毒素原有的杀伤能力,又可解决非特异性作用问题。本文对植物毒素及其免疫毒素的抗肿瘤研究动态作了综述。     

文拉法辛预防奥沙利铂所致神经毒性的临床观察

目的:探讨文拉法辛对奥沙利铂所致神经毒性的预防作用.方法:将103例接受含奥沙利铂方案化疗的恶性肿瘤患者随机分成文拉法辛组(58例)和对照组(45例),文拉法辛组(随机分为A、B两组)化疗同时给予口服文拉法辛,其中A组28例给予文拉法辛37.5 mg,1次/d,B组30例给予文拉法辛75.0 mg,1次/d,对照组化疗同时给予口服安慰剂.按照NCI-CTC 3.0奥沙利铂神经毒性分级标准,观察不同组别急、慢性神经毒性以及不良反应发生的差异.结果:A组急性神经毒性的发生率(57.1％)稍高于B组(56.7％),但A、B两组均明显低于对照组的80.0％,A组与对照组发生率比较差异有统计学意义,P=0.036;B组与对照组发生率差异有统计学意义,P=0.03;而A组与B组发生率差异无统计学意义,P=0.971.化疗3个周期时,A组、B组和对照组Ⅰ～Ⅱ度神经毒性的发生率分别为35.7％、40.0％和42.4％,差异无统计学意义,P＞0.05.化疗6个周期时,A组Ⅰ～Ⅱ度神经毒性发生率为48.0％,低于B组的53.6％,差异无统计学意义,P=0.685;而A组慢性神经毒性发生率低于对照组的76.9％,差异有统计学意义,P=0.017；B组慢性神经毒性发生率低于对照组,差异有统计学意义,P=0.022.化疗9个周期时,A组慢性神经毒性发生率为59.1％低于B组的62.5％,但差异无统计学意义,P=0.813;而A组Ⅰ～Ⅱ度神经毒性发生率低于对照组的87.9％,差异有统计学意义,P=0.027.B组慢性神经毒性发生率低于对照组,差异有统计学意义,P=0.046.A、B两组恶心、呕吐、乏力不良反应的发生率均较对照组明显增多,差异有统计学意义,P＜0.05.结论:文拉法辛能明显减少奥沙利铂所致急慢性神经毒性发生.     

氧化苦参碱逆转多药耐药细胞系K562/A02耐药性的研究

目的: 观察非细胞毒性浓度(生长率>95%)氧化苦参碱对耐阿霉素的人白血病细胞系K562/A02多药耐药性的逆转作用,并探讨其逆转机制。 方法: 采用MTT法测定氧化苦参碱的细胞毒性及其对K562/A02细胞敏感性的影响,用流式细胞仪检测非细胞毒性浓度的氧化苦参碱处理后K562/A02细胞膜表面糖蛋白P170表达的变化与细胞内柔红霉素的浓度,应用SPSS13.0软件包对实验结果进行统计学处理。 结果: 氧化苦参碱对K562/A02细胞有一定的细胞毒作用,其非细胞毒性浓度为50μg/ml,低细胞毒性浓度(生长率为85%～90%)为135μg/ml,把非细胞毒性剂量的氧化苦参碱作为最佳逆转浓度,非细胞毒性浓度氧化苦参碱可显著降低阿霉素对K562/A02细胞的IC₅₀,使K562/A02细胞的IC₅₀由原来的(34.9±0.21)μg/ml降低至(13.3±0.21)μg/ml,其逆转倍数为2.62倍;氧化苦参碱作用于K562/A02细胞后,细胞膜糖蛋白P170的表达从90.22%下调至44.24%(P<0.01);柔红霉素外渗试验显示,氧化苦参碱作用于K562/A02细胞后,细胞内化疗药物的浓度明显增加。 结论: 氧化苦参碱可部分逆转人白血病K562/A02细胞对阿霉素的耐药性,氧化苦参碱通过下调K562/A02细胞膜糖蛋白P170的表达,使其将化疗药物泵出细胞外的功能受到了抑制,使化疗药物在白血病细胞内能达到有效浓度,从而可以杀灭耐药的白血病细胞,达到逆转白血病细胞耐药性的目的。     

延长奥沙利铂输注时间预防其外周神经毒性的临床研究

目的:在胃肠道肿瘤患者应用奥沙利铂+亚叶酸钙+氟尿嘧啶(FOLFOX方案)化疗后,观察延长奥沙利铂输注时间对其外周神经毒性的预防作用。方法:98例肿瘤患者随机分为三组,A组在使用奥沙利铂时将滴注时间延长至6小时;B组延长至4小时;C组奥沙利铂滴注时间为2小时。在化疗6周期及化疗12周期后分别比较三组神经毒性的总发生率及外周神经毒性级别。结果:6周期化疗后A组神经毒性的总发生率明显低于C组(P=0.0003);B组神经毒性的总发生率亦低于C组(P=0.034); A组神经毒性发生率低于B组(P=0.027),均具有统计学意义。12周期化疗后A组神经毒性的总发生率明显低于C组(P=0.002);B组神经毒性的总发生率亦低于C组(P=0.025);而A组和B组之间比较无统计学差异(P=0.371)。结论:使用奥沙利铂时将滴注时间延长至4-6小时可以有效减少神经毒性发生。     

癌瘤细胞中的收缩蛋白质

细胞为保持或改变其形态,必须借助于细胞膜联结的细胞骨架或细胞内收缩蛋白质的作用。癌细胞的形态、机能往往与正常细胞不同,其中重要原因之一,是细胞内收缩蛋白质有量和质以及功能的改变。     

HMBA诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中hnRNP A2/B1的表达与定位

背景与目的:核基质蛋白的差异表达与细胞癌变和增殖分化调控关系密切.本研究观察了hnRNP A2/B1在诱导分化处理前后人成骨肉瘤MG-63细胞核基质巾的存在和分布,及其与Actin、Prohibitin的共定位关系.方法:选择性抽提经环六亚甲基双乙酰胺(hexamethylene bisacetamide, HMBA)诱导处理前后的MG-63细胞核基质,并运用双向电泳、质谱分析、蛋白质印记杂交、免疫荧光、激光共聚焦等技术检测hnRNP A2/B1在核基质中的表达与定位变化,及其与相关蛋白的共定位关系.结果:双向电泳及蛋白质印迹杂交结果证实hnRNP A2/B1存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,并在HMBA处理后细胞核基质中表达下调;免疫荧光显微镜观察显示hnRNP A2/B1定位在核基质上,经HMBA处理后hnRNP A2/B1 表达减弱.激光共聚焦显微镜观察结果显示,hnRNP A2/B1与细胞核基质蛋白组分Actin、细胞增殖相关调控因子Prohibitin具有共定位关系,但在诱导处理后细胞内的共定位关系减弱.结论:hnRNP A2/B1 在MG-63细胞诱导分化过程中的表达分布,及其与Actin、Prohibitin的共定位关系的改变对MG-63细胞分化具有重要影响,值得进一步探索和研究.     

预防乳腺癌术后辅助化疗心脏毒性初探

目的比较复合辅酶加镁极化液、镁极化液、磷酸肌酸钠预防乳腺癌术后辅助化疗所致心脏毒性的效果。方法90例女性需辅助化疗的乳腺癌术后患者随机分成A组、B组、C组（复合辅酶加镁极化液组、镁极化液组、磷酸肌酸钠组）;16例女性乳腺癌改良根治术后志愿患者作为对照。各组患者均给予紫杉醇联合表阿霉素的化疗方案,紫杉醇剂量175 mg/m2,d1,表阿霉素75 mg/m2,d1,21天为1周期,共行6周期化疗;每周期评价心脏毒性。结果入组病例中A组完成30例,B组完成29例,C组完成30例;对照组完成16例。对照组、A组、B组、C组患者化疗后心脏毒性比较差异有统计学意义（P〈0.05）。心脏毒性发生率高低为：对照组〉B组〉A组=C组。4组患者化疗后肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）异常的差异无统计学意义（P=1.000）。结论复合辅酶加镁极化液、磷酸肌酸钠均比镁极化液明显减轻化疗所致的心脏毒性,且两者减轻化疗所致的心脏毒性作用相当。     

半乳糖结合点被封闭的免疫毒素研究

本文介绍一种免疫毒素的制备方法,利用抗体大分子封闭毒素的半乳糖结合位置,减小毒素的非特异性毒性,同时,较之抗体—毒素A链结合物,对靶细胞具有更高的毒性。经放免和酶免分析证明,抗体—毒素结合物中抗体和毒素各自的特性没有改变。体外细胞毒性试验结果显示,在10~9M浓度,抗体—毒素抑制靶细胞的~3H亮氨酸参入52％,其毒性高于抗体—A链结合物的10倍,同样浓度,对非靶细胞无毒性。     

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶对肺癌细胞增殖及铁死亡的影响

目的 探讨6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGD)对肺癌细胞增殖及铁死亡影响,分析6PGD在肺癌中的生物学功能。方法 蛋白质印迹法检测6PGD在人肺癌细胞(PC9、H1975、A549、H1299、H460)和人正常肺支气管上皮细胞(BEAS-2B)中的表达。选取肺癌A549和H460细胞进行慢病毒转染以敲低6PGD的表达,分别获得A549 sh-NC、A549 sh-6PGD、H460 sh-NC和H460 sh-6PGD组。采用不同浓度(0、20、40和60μmol/L)6PGD活性抑制剂大黄素甲醚分别处理肺癌细胞。采用铁死亡抑制剂ferrostatin-1处理A549 sh-6PGD和H460 sh-6PGD细胞,分别获得A549 sh-6PGD-ferrostatin-1和H460 sh-6PGD-ferrostatin-1组。CCK8法检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞内脂质过氧化物及活性氧水平,蛋白质印迹法检测细胞内GPX4及SLC7A11水平,组间比较采用t检验。结果 6PGD在肺癌细胞PC9、H1975、A549、H1299和H460的表达量均高于正常肺支气管上皮细胞BEA...     

草酸铂神经毒性的防治

目的评价卡马西平、葡萄糖酸钙防治草酸铂神经毒性的疗效.方法草酸铂130 mg/m2,静滴,第1天;醛氢叶酸(CF)200 mg/m2,静滴,第1～5天;5-Fu 300 mg/m2,静滴,第1～5天.21 d为1周期.60例大肠癌患者随机分成3组,每组20例.分别观察卡马西平组(A组)、葡萄糖酸钙防治组(B组)、对照组(C组)的草酸铂神经毒性.结果 A组、B组、C组的草酸铂神经毒性发生率分别为45.0%、50.0%和85.0%.A组神经毒性Ⅰ级9例,B组神经毒性Ⅰ级9例、Ⅱ级1例,C组神经毒性1级14例、Ⅱ级2例、Ⅲ级1例,其中C组3例累积剂量神经毒性用卡马西平治疗缓解,平均累积剂量A、 B、 C组分别为720 mg/m2、650 mg/m2和480 mg/m2,A、B组与C组的神经毒性发生率比较差异有显著性(P＜0.05).结论卡马西平、葡萄糖酸钙可以减少草酸铂的神经毒性发生,缓解神经毒性症状,增加累积剂量,值得进一步研究.     

泛素-蛋白酶体途径与恶性肿瘤关系的研究进展

细胞内蛋白质的产生和降解必须保持着动态平衡,才能维持细胞的稳态和正常功能。泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)是细胞内蛋白质选择性降解的重要途径,泛素分子主要通过泛素活化酶、泛素结合酶和泛素-蛋白连接酶与靶蛋白结合形成一条多泛素链,将底物蛋白泛素化,使靶蛋白被26S蛋白酶体所识别和降解。UPP可高效并高选择性地降解细胞内蛋白质,尤其是一些短寿命的细胞周期调节蛋白、癌基因和抑癌基因产物以及变性变构蛋白等。泛素化过程是真核细胞内重要的蛋白质质控系统,参与细胞的多种生理活动过程,比如细胞凋亡、MHCⅠ类抗原的递呈、细胞周期以及细胞内信号传导等,对维持细胞正常的生理功能具有十分重要的意义。当泛素-蛋白酶体系统对靶蛋白的降解功能失常时,可以引起癌蛋白聚集、抑癌蛋白异常降解、突变细胞凋亡受阻和增殖加速,从而导致肿瘤的发生。UPP的异常改变不仅与恶性肿瘤的病因学有着直接关素,并且与恶性肿瘤的发展和预后有着密切的关系。     

PP2A B56α亚基介导镉诱导的细胞毒性

目的： 探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)B56α亚基在调控CdCl2诱导的细胞毒性中的作用及其机制。方法：利用病毒感染法在人胚肾上皮细胞HEK上构建PP2A B56α表达降低的细胞株模型(HEK-SHB56α-1和HEK-SHB56α-2),采用改良四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CdCl2诱导的细胞毒性。用不同浓度(0、10、20、40和80 μmol/L)CdCl2联合或不联合c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125染毒细胞不同时间(0、2、6、12和24 h),采用免疫印迹检测B56α亚基、金属硫蛋白(MT)的表达和JNK的磷酸化水平。结果：免疫印迹结果证实细胞株HEK-SHB56α-1和HEK-SHB56α-2构建成功。与对照组比较,PP2A B56α表达抑制导致镉诱导的细胞毒性减小,JNK的磷酸化水平和MT的表达水平均显著增加。用不同剂量CdCl2处理细胞株12 h,发现B56α表达抑制导致JNK磷酸化(p-JNK)分别增加了2.78和1.26倍(P<0.05),MT的表达也分别增加了1.36和1.19倍(P<0.05)。用p-JNK抑制剂SP600125作用时,p-JNK的表达降低了35%~38%(P<0.05),MT的表达下降了13%~35%(P<0.05), CdCl2诱导的细胞毒性显著增加(P<0.05)。此外,用CdCl2处理细胞不同时间点,B56α的表达逐渐降低(P<0.05),而p-JNK和MT的表达水平呈逐渐增加趋势(P<0.05)。结论：PP2A B56α在调控CdCl2诱导的细胞毒性中起着重要作用,其作用机制可能通过介导JNK的去磷酸化调控MT的表达而发挥作用。本研究揭示了PP2A参与重金属应激的关键靶点和信号通路的调控。     

环孢菌素A逆转白血病多药耐药机制的实验研究

目的：研究环孢菌素A（CsA)持续作用7天后,K562／AO2细胞多药耐药性的变化及其变化机制,方法：细胞毒性试验采用MTTI地,细胞内柔红霉素（DNR）浓度用流式细胞术检测,多药耐药基因（mdrl)的表达水平用RT－PCR方法检测,结果：K562／AO2耐药性降低2．2倍,K562／AO2细胞内DNR浓度明显升高,mdrl表达降低,佛伯酯（TPA）可拮抗CsA升高细胞的DNR浓度的作用,结论：CsA可下调mdrl的表达和细胞内DNR浓度进而逆转MDR,其作用可能与CsA抑制蛋白激酶D（PKC）活性有关。     

阿克拉霉素B临床前药理、毒理研究总结(摘要)

蒽环类抗肿瘤抗生素在目前肿瘤化疗中所起的作用越来越引人注目,而其中人CM族又以其心脏毒性较低受到重视。 1977年,我所也从加利利链霉菌思文变种(stroptomyces galilaeus var siw ensis)培养液中分离到阿克拉霉素A(ACMA)和     

肿瘤相关蛋白质S100A6结构和功能的分析与预测

目的:分析S100A6蛋白分子结构和功能,预测其在肿瘤发生发展过程中可能的分子机制。方法:利用计算机软件,生物信息学工具,查询国际通用的生物信息学数据库,对S100A6氨基酸序列、二级结构域功能域、酶切位点、转录后修饰、亚细胞定位、跨膜结构域、分子功能、蛋白质相互作用等进行分析,并对其生物学功能进行分析和预测。结果:S100A6蛋白为酸性、小分子、稳定性蛋白质、亲水性评估-0.289;该蛋白的二级结构显示为非球状蛋白质,存在两个结构域及两个钙结合区域,没有跨膜区域;该蛋白为非信号肽类型的分泌蛋白,有16个酶切位点,亚细胞定位于核膜、胞质和细胞膜;有10个蛋白质与S100A6蛋白质存在直接的相互作用关系,存在3个磷酸化位点、可能存在2个赖氨酸糖化作用位点、可能存在乙酰化作用,没有糖基化位点。该蛋白质的功能区域存在4个自然突变位点。该蛋白存在钙传感器、介导细胞内钙信号释放,并与其它蛋白相互作用,间接的重组肌动蛋白细胞骨架及在细胞能动性上发挥作用,S100A6蛋白可能调控细胞周期及细胞分化,同时可能刺激Ca2+依赖的胰岛素释放,刺激催乳素分泌及胞外分泌。结论:S100A6蛋白是钙周期蛋白,很可能在肿瘤发生发展过程中对诱导细胞分化及信号转导方面发挥十分重要的作用。     

CAF方案和CAP方案治疗晚期乳腺癌疗效

目的　比较CAF方案和CAP方案治疗晚期乳腺癌的疗效以及毒性反应。方法　选择 42例晚期乳腺癌患者随机分为两组 ,A组接受CAF方案治疗 (CTX、ADM、FUDR)。B组接受CAP方案治疗(CTX、ADM、DDP)。结果　A、B两组有效率分别为 6 8 1%和 6 0 0 % ,无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;两组毒性反应主要是骨髓抑制、消化道反应和心脏毒性 ,而消化道反应A组明显低于B组有显著性差异 (P<0 .0 1)。结论　CAF方案和CAP方案均为治疗晚期乳腺癌的有效方案 ,但CAF方案的毒性小 ,病人易于耐受。