NGS技术检测中国原发性肺癌患者的EGFR、KRAS、BRAF和PIK3CA基因突变

目的评估下一代测序(NGS)技术在原发性肺癌临床分子诊断中应用的可行性。方法本研究应用Ion Torrent NGS平台,一次性检测30例肺癌病理样本EGFR、KRAS、BRAF和PIK3CA基因的突变情况,并与实时荧光定量核酸扩增检测(q PCR)技术检测结果进行对比。结果 NGS检测方法技术参数稳定,且与q PCR技术检测结果完全一致(100%)。结论经过更多临床样本的方法验证后,NGS技术有望得到临床推广,并将原发性肺癌分子诊断和个体化诊疗提高到一个新的水平。     

SAT技术用于快速检测肺结核的临床意义

目的探讨RNA恒温扩增实时荧光检测技术(SAT)快速检测肺结核的效果。方法对2015年9月~2016年4月在我院临床确诊100例肺结核患者和100例疑似肺结核的患者的痰液分别用SAT法,并与其他方法进行对比。结果 100例BD-960阳性患者中TB-SAT阳性例数为98例;100例BD-960阴性患者中TB-SAT阳性例数为13例。结论 SAT技术用于实验室检测结核分枝杆菌临床价值较高。     

三种检测解脲脲原体方法对比分析

目的:对比分析尿素-精氨酸肉汤显色法、实时荧光定量PCR方法(FQ-PCR)及RNA恒温扩增实时荧光方法(SAT)检测解脲脲原体(Uu)结果的一致性和最低检测下限.方法:采集300例疑似Uu感染患者的生殖道分泌物标本.标本同时用尿素-精氨酸肉汤显色法、FQ-PCR方法及SAT方法检测Uu.采用Kappa检验分析三种方法...     

Xpert MTB/RIF在诊断结核病中的临床应用评价

目的探讨Xpert MTB/RIF检测技术对诊断肺结核的临床应用价值。方法收集506例疑似结核病患者的样本,通过与结核菌培养,抗酸杆菌显微镜检测,及临床诊断相比较来评价Xpert MTB/RIF试验的诊断效能。结果79.4%(402/506)的患者被临床诊断为结核病,其中肺结核为315例,肺外结核为87例。Xpert MTB/RIF、结核菌培养、抗酸杆菌显微镜检测及3种方法相结合诊断,在肺结核患者的检出率分别是52.4%(165/315)、49.5%(156/315)、36.8%(116/315)和57.1%(180/315);在肺外结核患者的检出率分别为13.8%(12/87)、18.4%(16/87)、3.4%(3/87)和25.3%(22/87);Xpert MTB/RIF试验在诊断肺结核以及肺外结核的特异性均为100%。结论对于肺结核的诊断,Xpert MTB/RIF与结核诊断金标准分枝杆菌培养有着很高的阳性一致率,且特异性更好,但是对于肺外结核的诊断,其敏感性较差,3种方法相结合比单独一种方法能获得更好的敏感度,更有利于临床的诊治。     

RD区Esp J蛋白在结核分枝杆菌感染巨噬细胞中的作用

目的:探究Rv3878基因编码的Esp J蛋白在结核分枝杆菌感染巨噬细胞中的作用。方法:构建Rv3878基因原核表达载体,诱导纯化并鉴定GST-Esp J重组蛋白。重组蛋白免疫小鼠,获得血清多克隆抗体并检测其滴度。重组蛋白刺激巨噬细胞,重组分枝杆菌感染巨噬细胞后检测小鼠巨噬细胞I型干扰素的表达水平。结果:成功构建Rv3878基因原核表达载体,经诱导提取并纯化后获得GST-Esp J重组蛋白。重组蛋白免疫小鼠血清多克隆抗体效价为1∶204 800。重组蛋白刺激小鼠巨噬细胞和重组分枝杆菌感染小鼠巨噬细胞后,Ⅰ型干扰素表达水平均明显升高。结论:结核分枝杆菌RD-1区基因Rv3878编码的Esp J蛋白能促进巨噬细胞产生I型干扰素,增强结核分枝杆菌的毒力并促进细菌在胞内的生存。     

多重PCR技术在诊断南阳地区志贺菌引起的腹泻患者中的应用

目的研究多重PCR技术在对南阳地区志贺菌感染导致腹泻的诊断及血清分型中的应用。方法收集医院腹泻患者粪便,进行分离培养、生化鉴定和血清学分型,将初筛的志贺菌通过多重PCR技术对毒素基因shet A、shet B、ial和ipa H进行扩增检测。结果结合临床症状和生化鉴定初筛的志贺菌共有83株,血清学鉴定为福氏志贺菌的有50株,宋内志贺菌28株,鲍氏志4株,痢疾志贺菌1株。通过多重PCR对取得的83株志贺菌进行扩增后在423bp(ipa H)处出现了条带,与常规方法鉴定得到的结果一致。结论南阳地区细菌性痢疾感染者以福氏志贺菌为主要感染菌,多重PCR技术能够快速、简便、特异敏感地对志贺菌进行检测。     

肺结核耐药患者结核分枝杆菌菌型分布及耐药情况研究

目的探讨肺结核耐药患者结核分枝杆菌菌型分布及耐药情况。方法收集本院2012年6月至2014年6月收治的568例肺结核患者的病灶标本进行细菌培养和鉴定,并进行药物敏感试验,分析结核分枝杆菌菌型分布和耐药情况。结果 214株结核分枝杆菌菌株中,人结核分枝杆菌198株,牛结核分枝杆菌4株,非结核分枝杆菌(nontuberculoaus mycobacteria,NTM)12株,三种类型结核分枝杆菌所占百分比比较差异具有显著性(P<0.05);人结核分枝杆菌耐药58株,牛结核分枝杆菌耐药1株,NTM耐药1株,三者比较差异显著(P<0.05);人结核分枝杆菌耐多药12株,牛结核分枝杆菌与NTM均无耐多药病例,三者比较差异显著(P<0.05);10种药物耐药率最高的为链霉素,最低的为对氨基水杨酸,二者耐药率比较差异显著(P<0.05);Logistic回归分析发现治疗时间与耐药率呈显著相关性(P<0.05)。结论结核分枝杆菌耐药状况较为严重,应加强耐药性监测,并依据药物敏感试验选择合理有效化疗方案。     

实时荧光定量PCR检测HBV-DNA临床指导意义的研究

目的探讨实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA结果与临床疾病状态关系。方法采用实时荧光定量PCR技术对518例乙肝患者血清进行HBV-DNA测定,同时进行肝功能指标及乙肝两对半的检测。结果 518例乙肝病毒感染者血清h BV-d NA阳性率为67.8%(351/518),慢性乙肝阳性率为69.4%(283/408),肝硬化阳性率为67.9%(57/84),原发性肝癌阳性率为60%(6/10);162例HBs Ag、HBe Ag、抗-HBc阳性标本,实时荧光定量PCR检测HBV-DNA有152例为阳性,阳性率为93.8%,平均HBVDNA浓度为2.84×107;在261例HBs Ag、抗HBe、抗-HBc阳性的标本中,实时荧光定量PCR检测HBV-DNA阳性128例,阳性率为64.3%,平均HBV-DNA浓度为3.29×104。结论实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA更能真实反映乙肝病毒在体内的复制和感染程度。     

结核分枝杆菌膜囊泡RNA表达谱分析及功能研究

目的 描绘结核分枝杆菌膜囊泡(mycobacterium tuberculosis membrane vesicles,MVs)的RNA特征表达谱,分析其主要的生物功能,初步探索其诱导巨噬细胞凋亡的作用。方法 分离结核分枝杆菌MVs,提取总RNA,采用illumina Hiseq 2500-SE50平台进行双端测序。使用BWA软件进行序列比对,通过COG数据库对基因进行功能注释。通过MTT试验检测细胞存活率,采用Annexin-V联合PI染色法检测细胞凋亡。结果 本研究通过RNA测序及生物信息学分析描绘了结核分枝杆菌MVs中RNA的种类及含量,COG数据库功能注释结果显示这些RNA主要富集的生物学功能包括脂质转运代谢、氨基酸转运代谢、能量产生与转化、次级代谢物合成转运与代谢和转录等。生物分析显示富集的主要功能包括脂质转运代谢、氨基酸转运代谢、能量产生与转化、次级代谢物合成转运与代谢和转录等。功能实验表明,结核分枝杆菌MVs可以降低THP-1源巨噬细胞的存活率,促进细胞凋亡。结论 结核分枝杆菌MVs中含有丰富的短片段RNA,具有诱发细胞凋亡的作用。然而其具体作用机制仍需要更深入细致的研究...     

结核分枝杆菌培养阳性、外周血结核感染T细胞斑点试验阴性病例的临床特征分析

目的:分析进行结核分枝杆菌培养结果呈阳性、外周血结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)结果呈阴性病例的临床特征.方法:将宜都市第一人民医院2019年1月至2020年1月收治的65例进行结核分枝杆菌培养结果呈阳性、外周血T-SPOT.TB结果呈阴性的患者设为观察组,将同期在该医院进行结核分枝杆菌培养结果呈阳性、外周...     

T-SPOT.TB检测在人群聚集场所结核潜伏感染中的应用

目的通过T-SPOT.TB试验检测了解人群聚集场所人员结核分枝杆菌潜伏性感染状况。方法对人群聚集场所人员组(122名)、结核病相关医护技人员组(64名)和涂阳肺结核组(22名)共208名受检对象分别进行T-SPOT.TB试验,了解结核分枝杆菌潜伏感染状况。结果 208名受检人员中,结核潜伏感染人群90人,总潜伏感染率43.27%。人群聚集场所人员潜伏感染率57.38%(70/122);医护技人员潜伏感染率31.25%(20/64);涂阳肺结核患者阳性率100%(22/22)。结论人群聚集场所人员结核潜伏感染率高,应加强防控措施。     

伴有慢性腹泻的HIV感染患者粪便标本病原学检测分析

目的探讨伴有慢性腹泻的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染患者粪便标本的病原微生物检测结果。方法将医院收取的91例伴有慢性腹泻的HIV感染患者作为研究对象,收集粪便标本进行标本病原微生物检测,分析检测结果。结果检出病原微生物感染标本53份,阳性率为58.2%;真菌、隐孢子虫、结核分枝杆菌、难辨梭状芽孢杆菌、空肠弯曲菌、沙门菌感染率分别为47.2%、24.5%、15.1%、7.5%、3.8%、1.9%。结论真菌、隐孢子虫等病原微生物是HIV感染患者伴发慢性腹泻的主要原因,临床中要针对性加强防范。     

结核分枝杆菌gyrA和gyrB基因突变与莫西沙星耐药水平关系

目的 研究莫西沙星耐药菌株的耐药相关基因突变特征,以及不同突变类型与莫西沙星最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的关系。方法 选取2019—2021年鄂尔多斯市第二人民医院检验科(162株)和首都医科大学附属北京胸科医院细菌免疫室(103株)保存的结核分枝杆菌,采用微孔板稀释法检测这些菌株对莫西沙星的MIC,同时对莫西沙星耐药菌株的DNA拓扑异构酶亚基A (gyrase subunit A,gyr A)和DNA拓扑异构酶亚基B (gyrase subunit B,gyr B)基因进行测序,统计莫西沙星耐药率的差异。结果 本研究总计纳入265株结核分枝杆菌,所有菌株中对莫西沙星耐药82株,耐药率为30.9%。耐多药结核分枝杆菌(multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB)和非MDRTB菌株中,莫西沙星耐药率分别为46.1%(70/152)和10.6%(12/113),MDR-TB菌株耐药率显著高于非MDR-TB菌株(P<0.01)。在82株莫西沙星耐药菌株中,总计有59株(72.0%)和3株(3...     

Xpert MTB/RIF在基层医院肺结核诊断中的应用研究

目的探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(Xpert MTB/RIF)检验技术在基层医院对肺结核的诊断价值。方法选取2015年12月—2016年4月于我院呼吸内科住院疑诊为肺结核的124例患者为研究对象,收集纤维支气管镜灌洗液,进行抗酸染色及Xpert MTB/RIF检验。结果 124例疑诊肺结核的患者,46例确诊为肺结核,其中抗酸染色阳性8例,Xpert MTB/RIF阳性33例,另有5例Xpert MTB/RIF阳性患者,经临床排除肺结核诊断。纤支镜灌洗液抗酸染色及Xpert MTB/RIF检测诊断肺结核的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确度分别为17.4%、100%、100%、67.2%、69.4%;71.7%、93.6%、86.8%、84.9%、85.5%。两种检验方法受试工作曲线下面积(AUC)分别为0.574、0.798。结论 Xpert MTB/RIF检验技术辅助诊断肺结核的临床价值由优于涂片抗酸染色,在基层医院有较好的应用前景。     

溶血和脂血两种因素对HBV-DNA实时荧光定量PCR方法的影响

目的:探讨溶血和脂血这两种因素对HBV-DNA实时荧光定量PCR方法的影响。方法:(1)收集HBV-DNA标本,并依据其浓度划分为Ⅰ水平和Ⅱ水平;需收集HBV-DNA呈阴性、重度的乳糜状脂血标本和正常人标本。把所收集的标本按不同的比例行混合,以制作成极高TG浓度却不同HBV-DNA水平的AⅠ以及AⅡ组;而高TG浓度却不同HBV-DNA水平的BⅠ以及BⅡ组;正常TG浓度HBV-DNA水平却不同的CⅠ以及CⅡ组。而实时荧光定量PCR则呈扩增趋势。(2)收集HBV-DNA标本,每人共需采集3份标本,然后将其中的2份标本在-20℃条件下进行冷冻,但是冷冻的时间则不同,然后把所得标本制作成重度溶血DⅠ以及DⅡ组;中度溶血EⅠ组以及EⅡ组;无溶血对照组FⅠ组以及FⅡ组。(3)使用方差对各个检测结果进行分析。结果:浓度不同的脂血和溶血对两种水平的HBV-DNA荧光定量PCR的相关检测结果的影响程度相比,比较差异均无统计学的意义(P0.05)。结论:溶血和脂血对实时荧光定量PCR检测HBV-DNA均无明显的影响。     

长链非编码RNA在结核分枝杆菌感染的巨噬细胞中的作用机制及研究进展

结核病是由结核分枝杆菌感染导致的一种传染病,是严重威胁人类健康的传染病之一。尽管结核病的诊断和治疗方法取得了重大进展,但目前仍没有适当的工具用于早期筛查和诊断。长链非编码RNA (long non-coding RNA,lnc RNA)可以通过染色质修饰、转录或转录后处理从而调控基因表达,在免疫反应中起重要作用,结核分枝杆菌感染后lnc RNA的差异表达与巨噬细胞炎症、自噬及细胞凋亡等相关。随着研究的深入,lnc RNA在调控宿主对结核分枝杆菌的抗菌反应中的作用逐渐被重视,而巨噬细胞作为先天免疫的重要组成部分,参与结核病的发生发展。因此,阐明巨噬细胞中lnc RNA与结核分枝杆菌感染之间关联的调控机制,可能为结核病诊断、判断疾病进展及治疗提供新策略。     

结核分枝杆菌常见突变位点的克隆及应用

目的克隆结核分枝杆菌rpoB、rpoC、katG、inhA基因突变位点,为核酸薄膜导流杂交技术快速检测提供阳性对照。方法将结核分枝杆菌基因12个单突变位点,包括rpo B基因526、516、511、522、550、572、1001位点,rpoC基因483位点,KatG基因315位点及inhA基因5、8、15位点进行TA克隆。结果成功克隆了rpo B、rpoC、katG、inhA基因上述12个单突变位点片段。结论结核分枝杆菌基因常见突变位点的成功克隆,为核酸薄膜导流杂交技术快速检测临床标本提供了阳性对照,有助于判断临床标本有无结核分枝杆菌感染并可提示有无耐药。     

慢性乙型肝炎患者核苷酸类药物治疗过程HBsAg定量和HBV-DNA相关性研究

目的:探讨ELISA法检测HBsAg定量及实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV-DNA在乙型肝炎病毒(HBV)感染核苷酸类药物诊疗中的应用价值,了解用ELISA法检测HBV-M不同的标志物组合时,其对应的HBV-DNA阴、阳性及阳性的拷贝数.方法:用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法定量检测800例患者的血清HBV-DNA含量(临界值为500 copies/mL),同时用ELISA法测定HBV血清标记物.结果:经FQ-PCR检测,347份HBsAg,HBeAg,抗-HBcAb,ProS 1-Ag都阳性的标本,HBV-DNA阳性率为98.7%,平均拷贝数为1.87×10~8copy/mL,差异具有统计学意义(P0.05).HBAg,HBeAg,ProS 1-Ag一项或多项阳性者的HBV-DNA阳性率和平均拷贝数显高于三项抗原全阴者.结论:HBsA g是肝细胞受到HBV感染的标志,HBsA g清除是肝内HBV感染的免疫控制和抗病毒应答的标志;FQ-PCR可以快速而准确地检测HBV-DNA拷贝数.HBV-DNA可准确、灵敏地反映HBV复制.与HBV血清标记物联合应用可使诊断更准确,治疗更合理.对疾病的诊断,治疗过程的监测,愈后监控及药效评价等都具有很高的实用价值.     

不同结核杆菌检测方法的临床应用价值

目的探讨罗氏培养、荧光聚合酶链反应技术(PCR)、痰涂片试验、增菌聚合酶链反应技术(PCR)四种检测方法对结核杆菌检测的临床应用价值。方法选取我院2015年6月~2016年6月收治的结核病患者60例分为观察组,将同期收治的非结核病患者40例作为对照组。采集所有患者的痰液标本先后进行罗氏培养、PCR技术、痰涂片试验、增菌PCR技术检测,记录检测结果,比较不同检测方法的检测价值。结果观察组患者检测结果显示,罗氏培养检出痰液标本阳性14例,阳性率为23.33%;PCR技术检出痰液标本阳性33例,阳性率为55.00%;痰涂片试验检出痰液标本阳性19例,阳性率为31.67%;增菌PCR技术检出痰液标本阳性40例,阳性率为66.67%。对照组患者检测结果显示,四种检测方法对痰液标本阳性检出率均为0。增菌PCR技术对痰液标本阳性检出率PCR技术罗氏培养痰涂片试验,差异有统计学意义(P0.05)。结论临床检测结核杆菌的方法众多,增菌PCR技术、PCR技术对结核杆菌的特异性强,敏感度高,操作简单,检测时间短,适合作为对结核杆菌检测的实验室首选检测方法。     

基于环介导等温扩增技术的巴戟天检测方法的建立

目的 建立一种可快速检测中药巴戟天的环介导等温扩增(LAMP)检测方法.方法 针对巴戟天二级内部转录空间(ITS2)序列设计LAMP特异引物组,提取DNA后建立基于LAMP技术鉴别巴戟天的目视和实时定量检测方法,同时评估该方法的特异性、灵敏度及其在实践中的应用情况.结果 该检测方法具有良好的特异性,最适反应温度为63℃...