不同方式的碱烧伤对诱导兔角膜新生血管生成的比较

目的评价碱烧伤后角膜新生血管(CNV)模型的成功率及角膜的形态学变化,来探讨理想的角膜新生血管模型。方法采用不同浓度的NaOH局部作用于兔中央角膜或周边角膜来诱导兔CNV形成。记录碱烧伤后第14天时角膜混浊及水肿的程度、CNV面积及溃疡的面积,进行统计学分析。结果角膜混浊程度与NaOH浓度成正相关,NaOH浓度越低,混浊程度越低。高浓度的NaOH,其烧伤位置为周边角膜时,CNV模型的成功率最高,此时CNV的面积最大,而角膜溃疡的面积最小。CNV的面积与角膜溃疡的面积呈相反趋势。结论烧伤位置为角膜缘时,NaOH浓度越高,越有利于兔CNV模型的建立。     

角膜缝线与碱烧伤诱导兔角膜新生血管的实验观察

目的利用角膜缝线、碱烧伤两种常用方法来诱导兔角膜新生血管（CNV）产生。观察CNV产生早期的过程中,其生长情况及血管内皮生长因子（VEGF）在兔角膜中的表达情况。方法将新西兰白兔75只随机分为3组,A组-正常对照组5只;B组-角膜缝线组35只;C组-碱烧伤组35只。每日裂隙灯显微镜观察角膜炎性反应情况与混浊程度,检测第3天、7天、14天角膜新生血管长度和数量并摄影记录;B、C两组分别于实验后第1、2、3、5、7、10、14天观察、取材。免疫组织化学（IHC）检测VEGF在兔角膜中的表达情况。结果伤后3 d,新生血管开始侵入角膜;7 d,新生血管生长活跃;10 d,新生血管达到生长高峰;14 d后B组与C组新生血管均出现回退迹象。角膜缝线组CNV面积明显小于碱烧伤组（P〈0.01）,10 d后VEGF在碱烧伤组的表达明显高于缝线组（P〈0.01）。结论碱烧伤组相对于缝线组可以诱导产生更多的新生血管（CNV面积）,且CNV退化的时间晚,这些可能与VEGF的表达有关;但角膜缝线更容易控制CNV产生的范围。     

表皮生长因子治疗兔角膜碱烧伤研究

本试验制成兔角膜碱烧伤模型，应用重组表皮生长因子（ｒｈＥＧＦ）滴眼剂对碱烧伤后的兔角膜溃疡创面进行治疗。６３只纯种新西兰白兔分为７组，每组９只，其中５组为治疗组，另２组为对照组，治疗组分别用每毫升０．５，５，２０，５０和１００μｇ表皮生长因子滴眼剂滴眼，对照组分别用纤维结合蛋白和氯霉素滴眼。伤后２４，４８，７２，９６及１２０ｈ裂隙灯荧光素染色，照像观察溃疡面积，经计算机图像处理，计算。结果显示５组治疗组创面愈合时间明显短于对照组，（Ｐ＜０．０５）。提示ＥＧＦ对角膜碱烧伤后的溃疡面愈合有促进作用。     

兔角膜碱烧伤后LYVE-1的表达及意义

目的：研究探讨新西兰大白兔角膜碱烧伤后LYVE-1（淋巴管内皮透明质酸盐受体1）的表达及意义,进一步证实角膜新生淋巴管的存在,揭示其与角膜碱烧伤损伤修复的关系。方法：饲养24只健康新西兰大白兔,左眼制作角膜碱烧伤模型作为实验组,右眼不做手术作为对照组。术后1天、3天、7天、14天分别处死6只兔,免疫组化测定两眼LYVE-1的表达情况。结果：实验组于术后第3天出现表达,第7天、第14天表达增加;实验组术后3天、7天和14天LYVE-1表达均高于对照组。结论：角膜新生淋巴管在角膜碱烧伤中扮演重要角色。     

实验性碱烧伤角膜新生血管的观察研究

目的利用碱烧伤诱导实验性角膜新生血管(CRNV)的发生,探讨定量分析CRNV和观察CRNV通透性的方法。方法取36只C57BL/6小鼠,随机分为:实验组(n=30):采用浸润l mol/L NaOH的滤纸片接触角膜5 s,诱导碱烧伤CRNV;对照组(n=6):不进行任何处理。于碱烧伤后第4、7、10、14天测量CRNV面积;第3、7、10、16、28天取眼球做切片的HE染色行组织学检查;第10天使用CD31抗体标记CRNV并计数,行荧光血管造影观察CRNV的通透性;每日观察角膜溃疡和前房积血等情况。结果实验性碱烧伤CRNV存在生长和消退的过程。无菌性角膜溃疡和前房积血较为常见,发生率分别为6.7%和10.0%。眼球切片的HE染色可观察到不同时间角膜组织的病理变化。碱烧伤后第10天,CD31抗体免疫组化标记并记数CRNV,荧光血管造影可观察到显著的CRNV渗漏。结论CD31抗体免疫组化标记、记数CRNV及联合CRNV面积测量,是CRNV定量分析较为客观的方法;荧光造影是观察和记录CRNV通透性可行的方法。     

实验性碱烧伤角膜新生血管的观察研究

目的 利用碱烧伤诱导实验性角膜新生血管(CRNV)的发生,探讨定量分析CRNV和观察CRNV通透性的方法.方法 取36只C57BL/6小鼠,随机分为:实验组(n=30):采用浸润l mol/L NaOH的滤纸片接触角膜5 s,诱导碱烧伤CRNV;对照组(n=6):不进行任何处理.于碱烧伤后第4、7、10、14天测量CRNV面积;第3、7、10、16、28天取眼球做切片的HE染色行组织学检查;第10天使用CD31抗体标记CRNV并计数,行荧光血管造影观察CRNV的通透性;每日观察角膜溃疡和前房积血等情况. 结果 实验性碱烧伤CRNV存在生长和消退的过程.无菌性角膜溃疡和前房积血较为常见,发生率分别为6.7%和10.0%.眼球切片的HE染色可观察到不同时间角膜组织的病理变化.碱烧伤后第10天,CD31抗体免疫组化标记并记数CRNV,荧光血管造影可观察到显著的CRNV渗漏.结论 CD31抗体免疫组化标记、记数CRNV及联合CRNV面积测量,是CRNV定量分析较为客观的方法;荧光造影是观察和记录CRNV通透性可行的方法.     

诺帝滴眼液对碱烧伤诱导角膜新生血管的抑制作用

目的 观察自制诺帝滴眼液（Nordy eye drop）对Long．Evans大鼠角膜碱烧伤后新生血管（CRNV）有无抑制作用及其对正常角膜有无毒副作用。方法 采用0．025％、0．1％两个不同浓度诺帝滴眼液滴眼21d,通过裂隙灯、光镜、电镜观察检测诺帝滴眼液的毒副作用。建立角膜碱烧伤后角膜新生血管模型,0．025％、0．1％两个不同浓度诺帝滴眼液4次／d滴眼治疗,0．1％地塞米松磷酸钠滴眼液作为阳性对照、空白溶液作为阴性对照,观察诺帝治疗效果。结果 诺帝滴眼液滴眼21d后观察正常大鼠,无畏光、结膜充血等刺激症状,组织学检查显示结构正常,未见炎性细胞浸润。大鼠角膜碱烧伤后1d时仅见角膜缘血管网扩张,3d时新生血管长入,7～14d达高峰,14d时治疗组和地塞米松组新生血管开始退化;比较各组CRNV面积与角膜面积的比值,治疗组和阳性对照组均小于阴性对照组并有非常显著性差异（P〈0．01）。治疗组与阳性对照组间、0．025％与0．1％治疗组间均无显著性差异（P〉0．05）。结论 0．025％、0．1％的诺帝滴眼液局部滴眼无明显毒副作用,并且对CRNV有显著抑制作用。     

碱烧伤后小鼠角膜新生血管表达vasohibin mRNA其蛋白

目的:探讨碱烧伤后的小鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)是否表达vasohibin mRNA及其蛋白.方法:15只小鼠采用碱烧伤的方法制备角膜新生血管模型.6只小鼠为正常对照组.分别于烧伤后1、3、6、9d裂隙灯显微镜观察CNV情况并拍照,以NIH ImagJ 图像软件分析角膜照片,计算新生血管的面积比(新生血管占全角膜的比值).分别在这四个不同时间点提取烧伤组各3个角膜的总mRNA,另取3个正常对照组角膜作为对照,用半定量逆转录酶链式反应(RT-PCR)检测 vasohibin mRNA在CNV中的表达水平.在烧伤后9d采用免疫荧光染色法检测vasohibin蛋白在烧伤和正常角膜组织中的表达异同.结果:vasohibin蛋白在烧伤组角膜中的新生血管内皮呈强荧光信号,而在正常角膜组织中没有荧光信号;碱烧伤后1、3、6和9d,新生血管面积比分别为0%、(12.72±1.95)%、(30.45±5.40)%、(53.09±9.14)%,vasohibin mRNA相对GAPDH mRNA的表达量为2.11±0.32、2.39±0.76、3.72±0.54 and 8.94±1.21.在观察期内,新生血管面积比值和vasohibin mRNA的表达水平逐渐升高,二者呈现明显的相关性(r=0.930,P<0.05).结论:碱烧伤后小鼠角膜新生血管表达vasohibin mRNA及其蛋白,但正常角膜组织中不表达.Vasohibin蛋白表达与角膜新生血管的形成关系密切.     

羊膜移植后碱烧伤兔眼角膜PEDF和VEGF的表达

目的探讨羊膜移植对兔眼碱烧伤角膜色素上皮衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法新西兰白兔角膜碱烧伤模型被建立,左眼行羊膜移植,右眼作为对照。照相法观察兔眼碱烧伤角膜CNV及免疫印迹法检测不同时间点碱烧伤兔眼角膜中PEDF和VEGF的表达水平。结果羊膜移植组与对照组比较:羊膜移植组兔眼角膜碱烧伤后新生血管的生长速度较对照组慢(P<0.05);羊膜移植组兔眼角膜PEDF的表达水平较对照组高,而VEGF的表达水平较对照组低。结论羊膜移植上调PEDF的表达、下调VEGF的表达抑制兔眼角膜碱烧伤后CNV的形成。     

自体角膜缘移植治疗兔单眼碱烧伤的实验研究

目的探讨角膜碱烧伤后行自体角膜缘移植术的疗效,并评估其对健康眼的影响。方法在32只兔右眼上制作碱烧伤模型,烧伤1周后行自体角膜缘移植,作1/4、1/2、3/4周和全周范围移植者各8只,术后4周观察疗效。结果作全周自体角膜缘移植的8只兔患眼全部恢复正常眼表,作3/4、1/2、1/4周移植的患眼分别有87.5%(7/8)、37.5%(3/8)和0.00%恢复正常眼表;而作全周切取角膜缘的8只供眼均未恢复正常眼表(100%),角膜糜烂,有新生血管和假性胬肉长入,而切取3/4、1/2周角膜缘的供眼分别有75%(6/8)和12.5%(1/8)未恢复正常,切取1/4周角膜缘的供眼均恢复正常。结论行自体角膜缘移植可有效地治疗眼碱性烧伤,可作临床推广,但要注意供体眼取材范围不宜超过1/2范围,以免损伤健康眼。     

角膜干细胞对大鼠角膜碱烧伤后的保护性作用

探讨角膜干细胞对角膜烧伤后的保护性作用。分别对大鼠角膜不同区域进行碱烧烧灼，造成不同程度的角膜干细胞损害，连续观察五周。结果：缘部干细胞完全破坏者，角膜以新生血管化愈合，而保留全部或部分干细胞者，角膜无新生血管化。提示角膜干细胞对碱烧伤后阻止角膜的新生血管化，并重建角膜表面的完整性具有重要意义，可能与产生某些抗新生血管因子有关。     

环氧化酶-2和VEGF在角膜新生血管中的表达和相关性研究

目的观察环氧化酶-2（COX～2）和血管内皮生长因子（VEGF）在碱烧伤诱导的兔角膜新生血管（CNV）中的表达，分析其相关性，探讨CNN形成的有关机制。方法采用碱烧伤建立兔CNV模型，伤后每日裂隙灯显微镜观察CNV生长情况并计算其面积，并于第3、7、10、14天各时段，免疫组化S—P法检测COX-2和VEGF蛋自在角膜组织中的表达，分析其相关性。结果CNV生长面积在伤后第3、7、10、14天逐渐增大，COX-2和VEGF的表达逐渐增加，主要分布于炎症细胞胞质及新生血管内皮细胞，相关性分析显示二者呈显著正相关（r=0．995，P〈0．05）。结论COX-2和VEGF参与炎症相关CNV形成，其机制可能与COX-2上调VEGF表达有关。     

贝伐单抗对兔角膜新生血管作用的影响

目的研究贝伐单抗(Bevacizumab)在治疗兔角膜新生血管中的作用及药物浓度与作用的相关性。方法通过碱烧伤建立角膜新生血管模型,将48只健康大耳白兔随机分成A、B两组:A组为生理盐水对照组,B组为不同浓度贝伐单抗处理组(1.25、3.75、6.25、12.5、25.0 mg/ml),在裂隙灯下动态观察兔角膜新生血管生长情况,免疫组化定性观察血管内皮生长因子(vasocular endothelial growth factor,VEGF)的表达,RT-PCR基因水平下观察VEGF mRNA的表达。结果贝伐单抗对兔角膜新生血管(CNV)有抑制作用,CNV面积6.25、1.25、25.0 mg/ml贝伐单抗组与对照组、1.25、3.75 mg/ml贝伐单抗组相比,差异均有统计学意义(P<0.01),但此三组之间相比差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化和Real-time PCR结果显示,1.25、3.75 mg/ml贝伐单抗组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);6.25 mg/ml及以上浓度贝伐单抗组与对照组、1.25、3.75 mg/ml贝伐单抗组相比,差异均有统计学意义(P<0.01),但6.25 mg/ml以上浓度贝伐单抗组之间相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论贝伐单抗(Bevacizumab)对兔角膜新生血管有抑制作用,且随着药物浓度增加抑制作用逐渐增强,达到一定浓度后作用趋于稳定。     

地塞米松药物棉片对早期兔角膜碱烧伤的疗效观察

目的 观察结膜囊内放置地塞米松药物棉片与常规点眼比较,治疗兔角膜碱烧伤的疗效差异. 方法 选取16只成年家兔,随机分为点眼组和棉片组,每组8只,制作右眼角膜碱烧伤模型.点眼组为地塞米松点眼联合结膜下注射维生素C;棉片组为结膜囊内放置浸有地塞米松药液的棉片联合结膜下注射维生素C.碱烧伤后0,12,24,36,48,60 h角膜荧光素钠染色,计算角膜上皮修复率;不同时点制作病理切片,观察光镜和电镜下角膜的组织病理学改变. 结果 角膜碱烧伤后12h,24 h,36 h,48 h,60 h棉片组与点眼组角膜上皮修复率比较,差异均有统计学意义(P<0.05),棉片组角膜上皮修复率均较点眼组高.病理组织学结果 显示:棉片组中性粒细胞细胞浸润较点眼组轻,角膜上皮修复较好且基质胶原纤维排列较整齐.结论 结膜囊内放置地塞米松药物棉片组治疗角膜碱烧伤,其效果优于点眼组.     

局部应用全反式视黄酸对兔角膜新生血管的影响

目的 :观察全反式视黄酸点眼对兔角膜新生血管的影响。方法 :32只日本大白兔随机分成A、B、C、D 4组 ,每组 8只兔 (8只眼 ) ,制成角膜碱烧伤模型。治疗组 (A、B、C组 )伤后即分别滴用 15 ,30及 6 0mg·L-1的全反式视黄酸滴眼 ,对照组 (D组 )滴赋形剂 ,裂隙灯观察角膜新生血管的生长情况并计算伤后第 6 ,9,12 ,15 ,18,2 1,2 5 ,2 8d的角膜新生血管面积。连续用药 2 8d后处死兔并取下角膜做组织病理学检查。结果 :伤后B组和C组角膜新生血管开始出现的时间明显较A组和D组延长 ,且角膜新生血管生长面积均明显较A组和D组减少 ,组织病理学检查显示CNV面积与角膜后膜和炎性细胞数均有明显相关性。结论 :局部应用全反式视黄酸对由碱烧伤引起的兔角膜新生血管的生长有明显的抑制作用。     

盐酸多西环素对兔角膜新生血管生长的影响

目的:研究基质金属蛋白酶抑制剂盐酸多西环素对兔角膜新生血管生长的影响.方法:角膜囊袋法诱导新生血管模型,28只新西兰白兔随机分为空白对照组、角膜新生血管对照组、盐酸多西环素腹腔注射组和结膜下注射组.比较第3,7,14,21天各组新生血管生长面积和抑制率,行角膜组织病理学观察并采用免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)在角膜组织中的表达.结果:盐酸多西环素腹腔注射和球结膜下注射均明显抑制了角膜新生血管的生长,以后者更为显著;免疫组织化学染色结果显示,VEGF在正常角膜不表达或在上皮基底细胞有弱表达,新生血管对照组染色明显强阳性,球结膜下注射组表达呈弱阳性.结论:盐酸多西环素球结膜下注射较全身应用更有效地抑制了角膜新生血管的生长,抑制金属蛋白酶活性可能只是盐酸多西环素治疗角膜新生血管机制的一部分.     

角膜新生血管治疗的研究进展

角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)可能是角膜对各种刺激的生理性反应,也可发展成病理性新生血管,是潜在的致盲因素。本综述简要回顾角膜新生血管的危险因素和发病机制,重点对新生血管的治疗进行综述。在内科治疗方面,概述了激素、非甾体抗炎药、血管内皮生长因子抑制剂、环孢霉素、维生素C、细胞凋亡诱导因子、纤维蛋白溶酶原、过氧化物酶-6和基因治疗。在外科治疗方面,概述了激光治疗、光动力治疗、浅表角膜切除术和细针透热疗法。     

大鼠角膜碱烧伤后黏附分子变化的研究

目的 探讨大鼠角膜碱烧伤后不同时期ICAM-1、VCAM-1和CD44在角膜的表达和分布，了解与角膜碱烧伤病理损害的关系，完善角膜碱烧伤免疫机制的研究。方法 Wistar大鼠80只，制备角膜中度碱烧伤动物模型。分别于角膜碱烧伤后8h、1天、3天、1周、2周、4周、7周处死大鼠，分别采用链酶亲和素-过氧化物酶法（SABC法）和RT-PCR方法检测大鼠角膜局部ICAM-1，VCAM-1和CD44的表达。结果 碱烧伤3天组角膜上皮细胞ICAM-1和VCAM-1呈强阳性，角膜上皮细胞和角膜缘的毛细血管内皮细胞CD44呈中度阳性。2周组角膜上皮细胞ICAM-1表达减弱，基质细胞仍呈强阳性，角膜上皮细胞、基质细胞和基质内新生血管内皮细胞VCAM-1和CD44呈中度表达。碱烧伤3天组ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达量增加，差异显著，CD44 mRNA表达量无显著变化。碱烧伤2周组ICAM-1 mRNA量均较3天时明显减少，两者有显著差异（P〈0．01），VCAM-1 mRNA表达量增加，比3天时增多，同正常对照组相比差异极显著（P〈0．001），CD44 mRNA表达量增加，同正常对照组相比差异显著（P〈0．01）。结论 ICAM-1、VCAM-1和CD44在角膜碱烧伤的不同阶段其表达不同。急性期ICAM-1和VCAM-1的抗原表达和mRNA合成增加，说明角膜碱烧伤的炎性反应重，预后差。随病程延长，CD44 mRNA表达量逐渐增加，证明CD44及其配体在角膜碱烧伤的愈合过程中发挥重要作用。