南药高良姜基因组DNA提取方法的研究

目的 提取高质量的高良姜基因组DNA,用于药材分子鉴定、分子系统分类和分子进化等下游分子生物学研究.方法 在CTAB改良法基础上,采用4个方案提取DNA.结果 用改良CTAB法方案4提取的基因组DNA的OD260/OD280比值在1.8～2.0之间,产率为0.54～1.049 μg/mg干燥叶片.基因组DNA能被限制性内切酶EeoR Ⅰ和Mse Ⅰ完全酶切,经AFLP分析,得到了条带清晰的DNA指纹图谱.结论 用改良CTAB法方案4提取的基因组DNA纯度高,符合分子生物学研究要求.     

枸杞基因组DNA提取及指纹图谱分析

目的建立一种适于RAPD分析的快速提取枸杞叶片基因组DNA的方法,并利用RAPD技术研究枸杞属植物基因组DNA指纹图谱。方法采用改进的CTAB法提取枸杞冷藏幼叶的基因组DNA,利用RAPD技术对其进行指纹图谱分析。结果改进的CTAB法提取的10份枸杞材料基因组DNA均适于RAPD分析;可提供清晰的RAPD指纹图谱,利用筛选出的2个随机引物对供试材料DNA进行随机扩增,共得到56条带,其中多态性条带44条,多态性百分率为78.6%。结论表明改进的CTAB法提取的枸杞基因组DNA不需经氯化铯梯度离心或柱层析纯化,可以直接用于RAPD分析;RAPD对枸杞属植物进行指纹图谱分析是可行的。     

荭草DNA提取方法实验研究

目的利用不同方法对荭草DNA提取,比较提取质量的差异,为研究药材的遗传多样性、种类鉴定和基因指纹图谱的构建等提供优质基础。方法采用改进的CTAB法和SDS法提取荭草叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法测定样品OD260/OD280的比值,检测所提DNA的纯度和质量。结果采用CTAB法提取的荭草基因组DNA样品的纯度和浓度均高于SDS法,其DNA的OD260/OD280值为1.801～1.993,CTAB法所提的DNA泳带分布较集中,无拖尾现象,其DNA浓度能够满足RAPD、SSR/ISSR扩增模板的需求。结论改良CTAB法是提取荭草基因组DNA的最佳方法。     

天麻不同种质的AFLP和SSR分析

目的:研究天麻不同种质DNA指纹图谱,探讨扩增酶切片段长度多态性(AFLP)、简单序列重复(SSR)分子遗传标记技术在天麻遗传变异分析上的应用。方法:采用AFLP、SSR及其聚类树对24份不同天麻种质材料的遗传多样性等进行分析,并对这2种分子标记进行比较。结果:检测到AFLP多态性44%-89%、SSR多态性15%-69%;AFLP聚类相似性系数0.56-0.98,SSR聚类相似性系数0.13-1.00。2种分子标记将天麻变型种质聚类划分的结果相近,但SSR能将野生天麻聚在一类。结论:天麻不同种质AFLP多态性高于天麻SSR,SSR对野生天麻有较强的区分能力。     

野生天麻和栽培天麻的DNA指纹图谱分析

目的:对野生天麻和3种人工栽培天麻进行DNA指纹图谱鉴别研究,了解其间遗传变异的大小,并建立天麻品种的检定方法.方法:采用RAPD技术.结果:从45个引物中筛选出23个扩增稳定且谱带清晰的引物,共得到209个遗传标记.DNA指纹图谱显示,各样品间有遗传差异,具有不同的遗传特征,据此可进行鉴别.结论:RAPD技术可作为天麻鉴别的参考方法.     

鸡血藤类药材种质资源的RAPD分析

目的从DNA分子水平上分析不同居群正品鸡血藤DNA遗传多样性;建立鸡血藤与其常见混淆品的DNA分子鉴别方法及DNA指纹图谱。方法对鸡血藤类药材基因组DNA进行RAPD分析,采用Ntsys 2.10软件,UPGMA法聚类分析不同居群鸡血藤种质间遗传多样性。结果从110条引物中筛选出9条随机引物,8个不同居群鸡血藤的基因组DNA共扩增出100个DNA片断,其中多态性片断40个,占40%。聚类分析结果显示,可将8个不同居群正品鸡血藤归为三类;鸡血藤与其常见混淆品的RAPD分析结果显示,其DNA指纹图谱具有明显差异。结论正品鸡血藤不同居群间DNA基因水平具有丰富的遗传多样性;鸡血藤与常见混淆品可从分子水平鉴别。     

柴胡及其常见伪品的DNA指纹鉴定

目的:建立柴胡及其伪品DNA指纹鉴别方法.方法:采用改良的CTAB法提取柴胡及常见伪品的干根基因组DNA,设计鉴别正品柴胡及其伪品的特异性引物,利用PCR扩增技术对正品柴胡及其伪品进行DNA指纹鉴定.结果:改良的CTAB法提取出大小为23 kb的基因组DNA条带,纯度在(1.71±0.11),且经特异引物PCR扩增,只有正品柴胡能扩增出173bp大小的片段,而伪品未能扩增出目的片段.结论:柴胡DNA具有特异性指纹特征,可作为市售柴胡的真伪鉴定依据.     

紫花白及基因组DNA提取方法的比较

目的比较紫花白及基因组DNA提取方法。方法选择改良CTAB法、TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒、ZOMANBIO植物基因组DNA提取试剂盒、SDS法提取紫花白及叶片基因组DNA,通过UV光谱法、琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量和完整性,利用SPSS20.0软件对DNA得量差异性作统计分析,并进行SSR及ITS2引物扩增分析。结果改良CTAB法所提取的DNA质量明显较高,完整性良好,能满足SSR-PCR要求,并可有效扩增;SDS法所得DNA则不能扩增出ITS2序列。结论改良CTAB法更适合提取紫花白及基因组DNA。     

道地药材五鹤续断基因组脱氧核糖核酸提取方法的改进

目的 为研究道地药材五鹤续断的遗传多样性、种类鉴定和基因指纹图谱的构建等提供基本保证.方法 以中药材五鹤续断药源植物的鲜嫩叶片为材料,采用CTAB法并加以改进从中提取出基因组脱氧核糖核酸(DNA),并检测其提取效果.结果 使用改进的CTAB法从鲜叶中提取五鹤续断的基因组DNA浓度较高,能满足PCR反应的要求.结论 自行改进的CTAB法提取道地药材五鹤续断基因组DNA效果较好.     

适用于SSR分析的广西莪术DNA提取方法考察

目的:获取适用于广西莪术简单序列重复(SSR)分析的高质量DNA,为该品种的遗传多样性研究提供参考。方法:选择广西莪术嫩叶为材料,采用经典十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和改良CTAB法提取广西莪术总DNA,考察手工和机器研磨的差异性,采用UV检测DNA浓度和纯度,DNA作为模板进行聚合酶链反应(PCR)扩增,引物选择clest SSR-01,clest SSR-03,clest SSR-06,clest SSR-08,clest SSR-14,clest SSR-15,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA扩增效果。结果:改良CTAB法所提DNA的A260 nm/A280 nm1.8~2.0,蛋白质、多糖、RNA等物质去除较彻底,DNA符合PCR扩增结果要求,使用姜黄属通用引物能扩增出清晰条带。经典CTAB法所提DNA的A260 nm/A280 nm1.50~1.60,含较多杂质,无法用于PCR扩增等分子生物学研究。结论:改良CTAB法提取所得DNA质量较好,可有效去除次生代谢产物对DNA的干扰,适用于广西莪术SSR分子标记和遗传多样性分析。     

贵州天麻种质资源的RAPD分析

对贵州省境内药用植物天麻的野生和栽培15个样品的基因组DNA遗传多态性的RAPD分析。从40个随机引物中筛选出12个有效引物,共检测到93个位点,其中66个显多态性,总的多态位点百分率(PPB)为70.97%。经NTSYSpc,ver.2.2软件进行UPGMA聚类分析,结果表明野生与栽培天麻之间的遗传变异较大,说明地理分布和生长环境的差异是导致天麻形成丰富的遗传多态性的一个重要的原因。     

天麻简单重复序列与天麻素相关性初探

目的：探讨天麻遗传变异与其品质的关系、为天麻优良种质的选育提供科学途径。方法：采用简单重复序列标记技术和高效液相检测不同种质的天麻,进行相关性分析。结果：本研究特异引物产生的特异带型与天麻素含量具有一定的关系,扩增最大片段为520bp最小片段为320bp,出现单上带及双带的样品天麻素含量≥0．20％,出现单下带的样品天麻素含量约为0．20％或〈0．20％。结论：本研究初步显示出现高分子量条带类型的样品天麻素含量较高,天麻SSR特异带型与天麻素含量的相关性具有进一步探讨的价值。     

党参与天麻对氟哌啶醇致老化大鼠抗氧化酶表达作用的比较研究

目的观察和探讨党参、天麻对氟哌啶醇诱导老化大鼠抗氧化酶表达作用的影响。方法雄性W ister大鼠40只,随机分为对照组、模型组、实验1组、实验2组。除对照组外,模型组、实验组均用氟哌啶醇建立痴呆症(A lzhe im er D isease,AD)动物模型,实验组还分别腹腔注射党参注射液、天麻注射液。测定各组大鼠血、肝、肾、海马、脑皮质中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量。结果与对照组、模型组比较,党参注射液和天麻注射液均能使实验大鼠多种组织SOD、GSH-PX显著升高,差异有非常显著性意义(P<0.001)。结论党参和天麻都能增强抗氧化酶表达作用,但在升高SOD和GSH-PX的表达值上,二者则无明显差别。     

药材天麻ITS2 特异性引物的筛选

目的：药材天麻由于隶属于单子叶植物兰科天麻属,天麻中含有大量多糖、蛋白质以及大量次生代谢物质,使其提取的DNA 质量不高,影响后续的PCR 扩增。且ITS2 通用引物在单子叶植物部分物种通用性很差。本研究通过对DNA 提取过程、PCR 扩增过程进行优化,设计出一对用于鉴别天麻药材的ITS2 引物,为中药材天麻的鉴定提供一种新方法。方法：以通用ITS2 引物扩增出的两条序列为研究对象,经Primer Premier 5.0 设计出3 对特异性引物,通过对22 份样品进行研究,筛选出一条高特异性的ITS2引物。结果：在54益的退火温度下,TM2F-2R 对天麻的鉴定效率高达90.9%。结论：TM2F-2R 可作为天麻ITS2 序列的特异性引物,为天麻的分子鉴定提供了一套准确、稳定的鉴定方法。     

云南昭通天麻松弛血管平滑肌活性成分的筛选

目的:观察天麻血管平滑肌松弛作用,明确其作用物质基础。方法:采用大鼠离体胸主动脉环灌流实验方法,对天麻血管平滑肌松弛作用进行考察,采用柱色谱法、光谱法(MS,NMR)对其活性成分进行了分离鉴定。结果:天麻能够显著抑制KCl引起的大鼠胸主动脉环收缩,从天麻乙酸乙酯提取物中分离并鉴定了5个酯溶性酚性成分(Ⅰ～Ⅴ):对羟基苯甲醛(Ⅰ)、对羟苄基甲醚(Ⅱ)、对羟基苯甲醇(Ⅲ)、4,4′-二羟基二苯基甲烷(Ⅳ)、4,4′-二羟基二苄醚(Ⅴ),明确了天麻的血管平滑肌松弛作用是这5个成分共同作用的结果。结论:天麻具有显著的血管平滑肌松弛作用,其作用主要由5个酯溶性酚性成分共同发挥。     

贵州天麻遗传多态性的ISSR初步分析

目的：构建贵州天麻ISSR指纹图谱，分析彼此间的遗传关系。方法：采用ISSR分子标记技术对贵州省境内的23个野生和栽培天麻居群的样品进行了初步研究，从24个ISSR引物中筛选出4个有效引物，在供试的23个样品中共检测到32个位点，其中29个表现出多态性，占总带数的90．63％，平均每个引物扩增的DNA带数为8条。天麻的多态位点百分率（PPB）在80％和100％之间。用NTSYSpc，vet．2．02软件进行UFGMA聚类分析。结果：23个居群的相似性系数在0．13—1．00之间，同一变型的天麻样品并不严格聚为一类，不同变型天麻样品之间的遗传变异较大。结论：地理分布和生长环境的差异以及人为的选择是导致天麻形成丰富的遗传多态性的一个重要的原因。     

濒危植物岩黄连叶片中基因组DNA的提取及分析

目的获取高质量的岩黄连基因组DNA。方法用改进的SDS-CTAB法从岩黄连叶片中提取基因组DNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、PCR检测其质量,并与传统的CTAB法比较。结果通过改进的SDS-CTAB法提取的DNA优于CTAB法提取的DNA,电泳条带清晰,纯度高,能较好的进行PCR。结论改进的SDS-CTAB法适合岩黄连基因组DNA的提取。     

勉县天麻发展前景之管见

本文回顾了勉县天麻的种植历史，阐述了天麻种植现状、优势与潜力，指出了存在问题与障碍，展望了发展前景，提出了对策与措施。