抗多种致病菌的特异性卵黄免疫球蛋白的制备研究

目的:探讨一种新的获得IgY多克隆抗体的方法和效果。方法:用三种常见的细菌病原体金黄色葡萄球菌(SA)、大肠埃希氏菌(EC)、铜绿假单胞菌(PA)制备复合抗原,并经过灭活后免疫来亨蛋鸡产生IgY多克隆抗体。从免疫后的蛋中提取出IgY多克隆抗体,ELISA法测IgY抗体特异性及浓度滴度。SA、EC、PA三种标准菌株体外抑制实验检测IgY抗体抑菌效果。结果:用SA、EC、PA复合抗原成功地免疫来亨蛋鸡产生IgY多克隆抗体,ELISA法检测抗体浓度滴度为100,000;IgY抗体明显抑制SA、EC、PA三种标准菌株的生长。结论:SA、EC、PA三种细菌复合抗原可以刺激来亨蛋鸡产生高浓度滴度抗体IgY,该抗体能明显抑制SA、EC、PA三种标准菌株的生长。     

人血清氧化低密度脂蛋白自身抗体的提取和初步鉴定

目的提取和鉴定人血清氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)自身抗体.方法采用溴化氰活化的Sepharose 4B交联Ox-LDL制备免疫吸附层析柱,从正常人血清中提取抗Ox-LDL自身抗体,采用ELISA法鉴定其免疫反应性,散射免疫比浊法分析自身抗体种类.结果用NaHCO3、醋酸盐和KCNS溶液洗脱,分别收集洗脱峰.8份正常人血清中均收集到Ox-LDL自身抗体,与Ox-LDL均具有良好的反应性.自身抗体种类中以IgG为主,其次为IgM.结论此法提取的抗Ox-LDL自身抗体同Ox-LDL具有良好的反应能力.     

液态芯片技术分析RA患者血清免疫复合物对滑膜细胞分泌细胞因子的影响

目的 用液态芯片技术研究类风湿关节炎(RA)患者血清免疫复合物(IC)对关节成纤维样滑膜细胞(FLS)分泌细胞因子的影响.方法 用聚乙二醇(PEG)沉淀法分别提取10份抗环瓜氨酸肽抗体(ACCP)阳性的RA患者及健康人对照血清IC,间接ELISA法测定IC中ACCP特异性IC水平.体外培养RA患者关节FLS,分别用RA...     

抗变形链球菌卵黄抗体的初步研制

目的通过用变形链球菌作为疫苗免疫蛋鸡,从鸡蛋中获得抗变形链球菌特异性抗体(抗S.mutans抗体).方法以变形链球菌Ingbritt珠(血清型c型)作为抗原免疫蛋鸡,取鸡蛋卵黄以水溶-硫酸铵沉淀-超滤提取纯化的卵黄抗体(IgY),以直接凝集法测定鸡血清及蛋黄中的抗体.结果血清中首先产生抗变形链球菌的抗体,在初免后2周逐步增高,在4～5周达到高峰,而后抗体转移到卵黄中,制备的卵黄抗体经电泳检测,相对分子质量约为210 000,纯度达到75%以上,每只鸡蛋中能提取约150 mg的IgY.结论变形链球菌菌苗免疫蛋鸡可使鸡蛋产生高效价IgY.     

用基因免疫方法制备小鼠抗人OAT1多克隆抗体

[目的]用基因免疫方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白1(hOAT1)多克隆抗体.[方法]提取人肾组织总RNA,用RT-PCR方法扩增hOAT1基因中免疫源性较强的细胞内亲水序列片段,克隆到载体pBQAP-TT中,鉴定正确后用基因枪与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-FIT3L同时免疫小鼠,12周后ELISA方法测定血清抗体滴度,鉴定抗体的特异性和定位表达.[结果]扩增出207 bp的hOAT1细胞内亲水序列片段,构建的基因免疫载体经酶切及序列分析鉴定正确.Western blot结果显示小鼠抗hOAT1多克隆抗体识别人肾皮质膜蛋白55 kD的hOAT1.免疫组化结果提示hOAT1定位表达在人近端肾小管上皮细胞基底侧细胞膜.[结论]用基因免疫的方法可以成功制备高滴度和特异性抗hOAT1多克隆抗体.     

用淋菌抗原免疫鹌鹑从蛋黄提取抗体的研究

用淋菌抗原免疫鹌鹑从蛋黄提取抗体的研究王德春，朱忠勇，徐元斌，黄梁浒目前，在免疫学检测中所用的多为哺乳动物抗体，此类抗体大部能激活标本中的补体系统或产生非特异性结合，常影响试验结果。用抗原免疫鸡并从鸡蛋黄中提取抗体，可消除上述干扰现象，且不需抽血，即...     

原发免疫性血小板减少症患者抗可提取性核抗原抗体分析

目的 探讨原发免疫性血小板减少症(ITP)患者抗可提取性核抗原(ENA)抗体分布状况.方法采用免疫印迹法检测76例ITP患者和30例健康者抗ENA抗体.结果 76例ITP患者抗ENA抗体总阳性率23.68%,30例健康者均为阴性,二者阳性率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 抗ENA抗体检测有利于判断ITP患者由于伴发或有可能发展至SLE或其他自身免疫性疾病,对探讨 ITP与SLE、自身免疫性疾病之间相互联系及ITP发病机制有重要有意义.     

ENA多肽抗体对进行性全身性硬皮病的临床意义

为探讨可提取核抗原(ENA)多肽抗体对进行性全身性硬皮病(PSS)的诊断价值,我们选择确诊PSS患者用免疫印迹法测定了ENA多肽抗体.     

人心肌线粒体肌酸激酶的提纯及抗体制备

目的从人心肌中分离纯化肌小节型线粒体肌酸激酶(sMtCK),制备抗血清,从抗血清中制备对sMtCK有特异免疫反应的抗体,建立酶联免疫吸附试验(ELISA),测定血清sMtCK.方法采用超低温高速离心、硫酸铵分级提取、Sepharose CL6B层析等技术分离纯化sMtCK,免疫新西兰大白兔.应用自制抗sMtCK建立ELISA检测健康体检者、心肌炎及急性心肌梗死(AMI)患者血清sMtCK.结果经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot鉴定,纯化的sMtCK为单一蛋白质条带.制备的抗sMtCK多克隆抗体在琼脂糖免疫扩散实验和ELISA中的抗体效价分别为1∶32和1∶800.自制抗体建立的ELISA检测心肌炎和AMI患者的血清sMtCK阳性率分别为51.6%(16/31)和54.1%(20/37),与健康对照组相比差异有显著性(P<0.01).结论经离心、提取、纯化所得的sMtCK是免疫纯.建立的ELISA检测血清sMtCK有助于心肌炎和AMI的诊断.     

类风湿关节炎患者血清免疫复合物的提纯及对人脐静脉内皮细胞增殖能力的影响

目的提纯并鉴定类风湿关节炎(RA)患者血清中免疫复合物(s-IC),并研究其对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖功能的影响。方法用G蛋白亲和层析法分别从抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)阳性(ACPA+)RA患者、SLE患者及健康人对照血清中提取IC,用SDS-PAGE对提取的s-IC进行纯度鉴定,用化学发光免疫分析法测定s-IC中ACPA含量,用western blot法鉴定纯化IC中的瓜氨酸化蛋白质。体外培养HUVEC,分别用RA患者血清IC(RA-IC)、SLE患者血清IC(SLE-IC)、健康人血清IC(C-IC)刺激HUVEC,培养24 h后,用CCK-8细胞增殖法检测细胞的增殖水平。结果用G蛋白亲和层析法可自血清中提取出纯度较高的IC,ACPA+RA患者血清经G蛋白柱纯化后,IC中ACPA的回收率可达56.85%。western blot结果显示,RA患者s-IC中在相对分子质量(Mr)25 000~55 000间出现较多SLE-IC和C-IC中未有的条带。用s-IC刺激体外培养的HUVEC,当s-IC浓度为50μg/mL时,RA-IC与SLE-IC组HUVEC的增殖水平均显著高于C-IC组(P均0.01);当IC浓度为100μg/mL时,RA-IC组的HUVEC增殖水平显著高于SLE-IC与C-IC组(P均0.01)。结论成功提取ACPA+RA患者s-IC,RA-IC能显著促进HUVEC增殖。     

高流行血液透析诊所中丙肝病毒传染的高发生率

用第二代和第三代酶联免疫(EIAs)和免疫印迹试验,对委内瑞拉的加拉加斯4所透析诊所中的227例血液透析病人丙型肝炎病毒(HCV)的感染情况进行了调查。用重组第二代酶试剂(Abbott和Ortho)从162例(71％)病人检测出HCV抗体,用合成肽EIA试剂(UBI)从161名病人检测出HCV抗体。以上162份HCV抗体阳性血清标本中,用RIBA3确认161份为阳性。68例血清阳性病人中的49例(72％)和21例血清阴性中的5例(24％)检测出HCV RNA。HCV RNA不一定与ALT水平的增高相关。其中20例HCV RNA和HCV抗体阳性病人     

促丝裂原活化淋巴细胞诱导抗双链NDA抗体生成

抗双链DNA(ds-DNA)抗体是系统性红斑狼疮(SLE)的特征性和致病性抗体,但该自身抗体的诱生机理至今不明.我们用刀豆蛋白(Con A)和脂多糖(LPS)活化的小鼠淋巴细胞为自身抗原,分别免疫同系小鼠,均能诱导出IgG类抗ds-DNA抗体,并且小鼠肾脏有IgG类免疫复合物沉积形成.结果提示活化淋巴细胞的核内成分是诱生抗ds-DNA抗体的自身抗原.     

多发性骨髓瘤患者血清自身抗体的跟踪测定

应用间接荧光免疫试验和免疫印迹两种方法,对经多项试验确证的59例多发性骨髓瘤(MM)患者分别检测血清抗核抗体(ANA)和抗可提取核抗原(ENA)抗体.结果表明,ANA阳性率为39/59(66.1%), 其中ANA出现动态变化者占27/39(69.2%),ANA阳性者中抗ENA阳性率为12/39(30.8%),提示自身免疫在MM的发病机制中有一定的作用.     

抗凝血酶Ⅲ对蕲蛇毒抗凝活性影响的兔试验观察

<正> 中国蕲蛇毒系从蕲蛇粗毒中提取的一组含类凝血酶的组分,它具有促凝作用。在体外促凝(使纤维蛋白原转变成不交联的纤维蛋白凝块),在体内表现出抗凝效应(去纤维蛋白原状态)。已报道正常人的去纤维蛋白原血浆在体外能抑制蕲蛇毒的凝血活性,抑制效应与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)有关。本文探讨静注 ATⅢ在兔体内是否有抑制中国蕲蛇毒类凝血酶(CAAV)的抗凝活性。     

类风湿关节炎患者血清瓜氨酸化蛋白差异表达分析

目的血清抗环瓜氨酸化蛋白抗体(抗CCP抗体)检测对类风湿关节炎(RA)诊断具有高度的敏感性及特异性,是一种RA早期诊断指标。尽管抗体已被发现多年,但是其所针对的天然靶抗原仍不十分清楚。本试验通过合成兔抗CCP抗体免疫亲和层析柱,提取RA患者及健康人血清中瓜氨酸化相关抗原,并通过蛋白质组学技术对提取的具有差异性的瓜氨酸化蛋白进行鉴定。方法抗CCP抗体阳性血清取自2010年12月至2011年7月本院门诊及住院RA患者,正常血清取自健康献血者及体检者。体外人工合成CCP肽(HQCHQESTXGRSRGRCGRSGS),制备并纯化兔抗CCP多克隆抗体。将纯化的兔抗CCP抗体与高流速NHs-活化琼脂糖偶联制作免疫亲和柱,提取RA患者抗CCP抗体阳性血清及正常血清中的瓜氨酸化蛋白质,通过二维电泳将提取蛋白分离,分析并筛选二者有差异蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行质谱分析进行蛋白鉴定。结果通过兔抗CCP抗体-高流速NHs-活化琼脂糖免疫亲和层析纯化、二维电泳和基质辅助激光解吸电离飞行质谱分析,获得了差异性及重复性很好的差异蛋白图谱,将RA患者ACCP阳性血清和正常血清亲和层析提取蛋白2-D图谱比对发现,RA提取蛋白二维凝胶电泳图谱中共312蛋白点,正常血清提取蛋白有274个蛋白点,其中有166个具有差异表达的蛋白点。在差异蛋白点中,有101个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达上调,65个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达下调。52个蛋白点RA患者血清提取蛋白中表达而在正常血清提取蛋白缺失,16种蛋白在RA患者血清提取蛋白中表达而在正常血清提取蛋白缺失。挑选其中差异明显并且灰度值较高的的51个点进行鉴定分析,并与IPI和Swiss-Prot数据库进行比对,共鉴定出多种可能与RA发病相关的蛋白。在选取的51个蛋白点中,有30个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达上调,21个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达下调。结论在RA患者与健康者血清蛋白中发现部分差异表达的瓜氨酸化蛋白,这些差异蛋白可能成为涉及RA发病机制的自身抗原,为进一步研究RA的发病机制奠定了基础。     

地方性甲状腺肿时免疫性B-系统的某些指数

作者研究了167例(男17、女150)地方性甲状腺肿患者血清Ig含量和抗甲状腺球蛋白抗体效价.患者年龄16～70岁.病程从数月至28年.甲状腺Ⅱ度肿大者42例,Ⅲ度肿大者94例,Ⅳ度肿大者25例,Ⅴ度肿大者6例.诊断为弥漫性甲状腺肿者88例,结节性肿大57例和混合性肿大22例.伴有甲亢者123例,甲状腺功能正常者44例.用琼脂放射免疫扩散法测定血清Ig含量,用补体消耗实验(?)测定甲状腺球蛋白的循环抗体.将实验组与对照组?之差达20%者定为阳性,达40%以上者为强阳性.以80名19～56岁之男女健康者血清Ig含量和30名健康者抗甲状腺球蛋白抗体效价作为正常指标(对照组).     

构建兔抗人凝血因子XIIIA亚单位多克隆抗体及特异性鉴定

背景:关于凝血因子XIII(FXIII)抑制物作用于FXIII的具体结合表位,目前尚无报道。目的:用免疫动物方法制备针对FXIIIA亚单位多克隆抗体,并对其特异性和活性进行鉴定。方法:用人工合成的FXIIIA亚单位多肽免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;应用Dotblot鉴定抗体特异性,并用抗体中和/尿素溶解实验检测多克隆抗体活性;Westernblot方法检测2例获得性FXIII缺乏症患者的血浆FXIII水平,再应用Dotblot分析这2例患者血浆FXIII抑制物作用的抗原表位。结果与结论:Dotblot证实兔血清中已产生抗FXIII抗体,此抗体不仅可特异性与人FXIII及转氨酶活性位点多肽结合,且在体外可抑制人FXIII的活性;用此抗体可检测出获得性FXIII缺乏症患者的血浆FXIII缺乏,分析出转氨酶活性位点是病例2血浆FXIII抑制物的作用位点。证实动物免疫法可成功制备兔抗人FXIIIA亚单位转氨酶活性位点的多克隆抗体,此抗体可用于人FXIII的检测和抗原表位分析。     

尿素可溶性虫卵抗原在血吸虫病免疫诊断中的应用

用8mol/L 尿素从提取血吸虫卵水溶性抗原(SEA)的废弃沉渣中,提取尿素可溶性虫卵抗原(JEU),用于酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接血凝试验(IHA)和酶标记抗原对流免疫电泳(ELCIE)检测血吸虫抗体,用常规的水溶性虫卵抗原作平行对照.ELISA 法 JEU 的出率为100%,SEA为98.5%;IHA 法 JEU 为99.3%,SEA 为97.1%,ELCIE 法 JEU 检出率为95.8%,SEA为91.7%.两种抗原对同批病人的检出率无显著差异(P>0.05).ELISA 和 IHA 法用 JEU 时,抗体几何平均滴度都较高.上述结果表明,从废弃的虫卵沉渣中提取的尿素可溶性抗原,具有实用价值。     

人心肌线粒体肌酸激酶的提纯及抗体制备

目的　从人心肌中分离纯化肌小节型线粒体肌酸激酶 (sMtCK) ,制备抗血清 ,从抗血清中制备对sMtCK有特异免疫反应的抗体 ,建立酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,测定血清sMtCK。方法　采用超低温高速离心、硫酸铵分级提取、SepharoseCL6B层析等技术分离纯化sMtCK ,免疫新西兰大白兔。应用自制抗sMtCK建立ELISA检测健康体检者、心肌炎及急性心肌梗死 (AMI)患者血清sMtCK。结果　经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和Westernblot鉴定 ,纯化的sMtCK为单一蛋白质条带。制备的抗sMtCK多克隆抗体在琼脂糖免疫扩散实验和ELISA中的抗体效价分别为 1∶32和 1∶80 0。自制抗体建立的ELISA检测心肌炎和AMI患者的血清sMtCK阳性率分别为 5 1.6 % (16 / 31)和 5 4 .1% (2 0 / 37) ,与健康对照组相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　经离心、提取、纯化所得的sMtCK是免疫纯。建立的ELISA检测血清sMtCK有助于心肌炎和AMI的诊断。     

抗sAPRIL抗体的制备及细胞增殖抑制功能分析

本研究旨在通过免疫小鼠制备抗人可溶性增殖诱导配体(soluble a proliferation-inducing ligand,sAPRIL)的多抗,检测其对人sAPRIL促细胞增殖活性的抑制作用.以丧失天然生物学活性,但保留良好免疫原性的sAPRIL 重组突变体蛋白为免疫原,加上佐剂免疫人化SCID小鼠,6周后取血清,用间接ELISA法测定抗体滴度,Western blot测定抗体特异性,MTT法检测所获抗血清抑制sAPRIL促Raji和Jurkat细胞增殖的作用.结果表明,免疫小鼠,获得特异性的小鼠抗人sAPRIL抗体,抗血清滴度达到1:640.功能实验显示,抗sAPRIL血清可明显降低sARPIL刺激Raji和Jurkat细胞增殖的作用(p<0.05).结论:成功制备了抗人sAPRIL多克隆抗体,该抗体可以在体外抑制sAPRIL促Raji和Jurkat细胞增殖活性.