B7-1基因修饰的胃癌细胞诱导抗胃癌主动免疫研究

目的　探讨B7 1基因转染胃癌细胞是否具有抗肿瘤主动免疫增强作用。方法　采用重组腺病毒载体将B7 1基因导入人胃癌细胞SGC 790 1,G4 18阳性克隆筛选 ,流式细胞分析显示B7 1的表达 ;将携带B7 1基因的胃癌细胞 (命名为SGC 790 1/B7 1)接种于C5 7BL/ 6小鼠背部皮下 ,观测其致瘤性能 ;SGC 790 1/B7 1致敏的小鼠对野生型瘤细胞是否具有免疫保护作用 ;用SGC 790 1和SGC 790 1/B7 1细胞分别经腹腔免疫小鼠 ,得到腹腔浸润淋巴细胞及致敏脾细胞 ,MTT法检测其体外杀伤实验。结果　B7 1基因在胃癌细胞中获得高表达 ;SGC 790 1/B7 1诱导的CTL(cytotoxicTlymphocyte)对SGC 790 1的杀伤活性显著高于野生型SGC 790 1诱导的CTL对相同靶细胞的杀伤活性 (P <0 0 5 ) ;SGC 790 1/B7 1诱导的CTL对SGC 790 1/B7 1的杀伤率显著高于对野生型SGC 790 1的杀伤率 (P <0 0 5 )。结论　B7 1促进抗胃癌CTL的增殖、活化 ,能诱导抗胃癌主动免疫功能。     

5-Aza-CdR对胃癌细胞系p27kip1基因异常甲基化的影响

目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌细胞系SGC7901的p27kip1基因异常甲基化及表达的影响。方法选择不同浓度的5-Aza-CdR处理体外培养的SGC7901细胞后,用MSP法检测用药前后细胞中p27kip1基因的甲基化状态;RT-PCR法检测用药前后细胞中p27kip1的mRNA及蛋白表达的变化。结果 p27kip1基因的甲基化状态得到了逆转,p27kip1基因的mRNA和蛋白表达得到增加。结论 SGC7901细胞中p27kip1基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关。     

银杏外种皮多糖对人宫颈癌细胞系Siha增殖及侵袭的影响

目的研究银杏外种皮多糖(Ginkgo biloba exocarppolysaccharides,GBEP)对宫颈癌细胞生长及增殖的影响。方法通过经典方法提取银杏外种皮多糖,通过MTT方法检测GBEP对处理宫颈癌细胞增殖的影响;Transwell检测GBFP对宫颈癌细胞迁移的作用;通过Real time PCR和ELISA检测细胞迁移相关蛋白MMP-2的表达。结果银杏外种皮多糖处理后的宫颈癌细胞增殖抑制率上升,与对照组比较,差异有统计学意义。银杏外种皮多糖用药后,迁移能力降低,MMP-2基因表达下降。结论银杏外种皮多糖对宫颈癌细胞的增殖和迁移可能会起到抑制作用。     

维生素E琥珀酸酯抑制人胃癌细胞DNA合成

目的　研究维生素E琥珀酸酯 (VES)对人胃癌细胞(SGC 790 1)生长以及DNA合成的影响。方法　以体外培养的人胃癌细胞 (SGC 790 1)作为研究对象 ,用活细胞计数方法绘制生长曲线。Giemsa染色方法计数细胞形成集落数。用流式细胞仪检测VES对SGC 790 1细胞周期的影响。并用3H TdR参入方法研究VES对SGC 790 1细胞DNA合成的影响。结果　VES可抑制SGC 790 1细胞的生长和集落形成 :5mg·L-1、10mg·L-1和 2 0mg·L-1VES处理SGC 790 1细胞 7d后 ,细胞生长抑制率分别为 41 2 %、98 3%和 10 0 % ;同样剂量的VES处理SGC 790 1细胞 2 4和48h后 ,集落形成抑制率分别为 6 7%、5 0 4%、87 2 %和2 4 7%、73 4%、10 0 %。细胞周期分析显示VES作用细胞48h后 ,G2 M期细胞比例降低 ,并呈一定的剂量效应关系 ;同时S期细胞比例升高。在培养 2 4和 48h后VES对SGC 790 1细胞3H TdR参入均有明显抑制作用 ,且呈剂量效应关系。结论　VES在体外可通过抑制细胞DNA合成来抑制人胃癌细胞生长     

银杏外种皮多糖对胃癌的临床及超微结构研究

目的：观察银杏外种皮多糖制剂对胃癌的临床疗效及超微结构的影响。方法：28例胃癌患者给予银杏外种皮多糖胶囊,po,每次2粒,bid,30d为1个疗程,连服1－3个疗程。治疗前后用电子胃镜观察并测量瘤体大小,用透射电子显微镜观察瘤细胞的超微结构,用图像分析仪对瘤细胞进行图像分析,计算核质比及异染色质面密度,同时观察患者的主要临床表现。结果：银杏外种皮多糖可使胃癌患者的疼痛减轻、食欲增强,可使胃癌瘤体缩小,抑制率为48％,有效率为78.5%。超微结构观察提示银杏外种皮多糖有诱导癌细胞凋亡和分化迹象。结论：银杏外种皮多糖制剂对胃癌有治疗作用。诱导癌细胞凋亡和分化可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

基于miRNAs的知母水提物体外抑制胃癌细胞SGC7901增殖作用机制

目的 从微小核苷酸（miRNAs）的角度研究知母水提物（aqueous extract from Anemarrhenae Rhizoma,ARAE）体外抑制SGC7901细胞增殖的作用机制。方法 采用MTT法检测ARAE对SGC7901细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测ARAE对SGC7901细胞凋亡的影响;采用高通量测序法检测细胞中miRNAs的表达丰度差异;采用miranda、mirbase和targetscan 3个数据库信息比对,预测差异miRNAs的靶基因,并通过KEGG分析靶基因的相关功能;采用实时荧光定量PCR法验证主要靶基因的表达变化。结果 ARAE能明显抑制SGC7901细胞的增殖并诱导其凋亡,调节细胞miR-16-5p、miR-20a-5p、miR-26b-5p和miR-15b-5p的表达水平;并提示这些miRNAs所调控的靶基因主要富集于PI3K-Akt、JAK-STAT和MAPK等信号通路。结论 ARAE可能通过调节SGC7901细胞内miRNAs的表达从而抑制SGC7901细胞增殖,并诱导其凋亡。     

紫杉醇体外诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的　研究紫杉醇对人胃癌细胞诱导凋亡作用及端粒酶活性变化。方法　 0 .0 0 1～ 1μmol/L的紫杉醇处理SGC 790 1细胞后 ,用MTT法测定胃癌细胞的生长抑制率 ,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率 ,半定量TRAP -银染法测定端粒酶活性变化。结果　不同浓度的紫杉醇对胃癌细胞均有明显抑制作用 ,且呈时间依赖性及剂量依赖性 ,光镜及流式细胞术分析表明 ,0 .0 1μmol/L的紫杉醇处理后 2 4h ,细胞即出现明显的凋亡形态特征及凋亡峰 ,对端粒酶活性的同步检测结果显示 ,紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调 ,且随紫杉醇浓度增大 ,抑制作用逐渐增强 ,2 4h酶活性即显著受抑制 ,72h变为阴性。结论　紫杉醇对胃癌细胞具有明显抑制作用 ,诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一 ,端粒酶可作为肿瘤化疗的敏感性指标。     

桔梗多糖对U-14宫颈癌抗肿瘤作用的研究

目的研究桔梗多糖抑制U14宫颈癌实体瘤小鼠肿瘤生长的作用及相关机制。方法建立小鼠宫颈癌(U14)实体瘤模型,观察小鼠桔梗多糖(20,40和60mg·kg-1)灌胃给药15d后,对肿瘤生长抑制作用的影响;用原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞的凋亡情况;利用免疫组织化学法分析与细胞凋亡密切相关的基因(突变型p53,p19ARF,Bax)蛋白表达的情况。结果桔梗多糖体内有显著抑制小鼠宫颈癌U14实体瘤生长的作用,桔梗多糖上调了p19ARF和Bax蛋白表达量,诱导突变型p53蛋白表达显著下降。结论桔梗多糖具有抑制实体瘤U14生长的作用,推测该多糖可能是通过调节细胞凋亡相关基因的表达,进而促进肿瘤细胞的凋亡而发挥其抗肿瘤作用。     

10—羟基喜树碱对人肝癌Hep G2细胞的分化诱导作用

目的:研究羟基喜树碱HCPT对人肝癌Hep G2细胞分化诱导作用的机制。方法:用免疫细胞化学染色检测增殖细胞核抗原表达;流式细胞仪检测细胞周期和野生型p53蛋白表达;端粒重复扩增法检测端粒酶活性。结果:以诱导分化剂量(5-20μg·L~(-1))的HCPT处理6 d,人肝癌Hep G2细胞明显受阻于G_2/M期,PCNA阳性表达率降低。经HCPT 5μg·L~(-1)处理6 d,Hep G2细胞的野生型p53蛋白表达明显增强,但端粒酶活性没有改变。结论:HCPT诱导人肝癌Hep G2细胞分化的作用与细胞阻滞于G_2/M期、PCNA表达降低及野生型p53蛋白表达增强有关。     

抑制PI3K/PKB信号通路提高胃癌细胞化疗敏感性的研究

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002提高胃癌耐药细胞SGC7901/VCR和亲代细胞SGC7901对化疗药物敏感性的作用及其机制。方法MTT法分别检测胃癌细胞SGC7901和SGC7901/VCR对化疗药长春新碱(VCR)的敏感性;RT-PCR法和免疫细胞化学法检测LY294002处理前后多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein-1,MDR1)和X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis,XIAP)基因和蛋白水平;Westernblot法检测LY294002处理前后细胞PKB总蛋白水平和磷酸化水平;并用流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果2×10-5mol·L-1 LY294002能明显增加SGC7901和SGC7901/VCR细胞对VCR的敏感性(P<0.01),其IC50分别由(0.20±0.03)和(8.09±0.60)mg·L-1降至(0.05±0.006)和(1.70±0.20)mg·L-1;降低细胞MDR1和XIAP的基因和蛋白水平;降低磷酸化PKB水平,而对其总蛋白水平无影响;LY294002联合VCR用药后细胞凋亡率明显高于单独VCR处理(P<0.01)。结论LY294002通过降低耐药基因MDR1和抗凋亡基因XIAP的表达,提高耐药和非耐药胃癌细胞对化疗药物的敏感性,此过程与抑制PI3K/PKB通路密切相关。     

藤茶双氢杨梅树皮素对SGC-7901细胞端粒酶活性的影响

目的研究双氢杨梅树皮素（DHM）对人胃癌SGC-7901细胞端粒酶活性的影响。方法应用酶联免疫分析法检测端粒酶活性。结果双氢杨梅树皮素（6．7～10μg·mL^-1,48h）能抑制人胃癌SGC-7901细胞端粒酶活性。结论双氢杨梅树皮素抑制SGC-7901细胞增殖的作用机制可能与对端粒酶活性的抑制作用有关。     

VES对人胃癌细胞中细胞周期调控因子蛋白表达的影响

本研究采用免疫细胞化学方法检测了维生素Ｅ琥珀酸酯（ＶＥＳ）处理人胃癌（ＳＧＣ－７９０１）细胞４８小时后某些细胞周期调控因子及细胞凋亡调控基因的蛋白表达。结果表明ＶＥＳ能明显抑制ＳＧＣ－７９０１细胞的ｐ１６、ｐ５３、ｐ２１和ＰＣＮＡ的蛋白表达并均有明显的剂量－效应关系。以ｐ１６的降低作用最为明显，依次顺序为ｐ２１、ｐ５３和ＰＣＮＡ。与此相反，在ＶＥＳ处理后ｃ－ｆｏｓ蛋白表达被明显诱导。上述结果提示在离体试验条件下ＶＥＳ具有潜在的抗癌作用。     

白藜芦醇诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的研究

目的：探讨白藜芦醇诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的作用。方法：以Res（10、20、40μg／mL）作用人胃癌SGC7901细胞,同时设DMSo和培养液作用为对照组。采用MTT法检测Res对人胃癌SGC7901细胞的生长抑制情况．荧光染色法观察细胞形态变化。琼脂糖凝胶电泳法分析SGC7901细胞的DNA片断化。结果：Res对SGC7901细胞生长有明显抑制作用,且随着剂量的增高（10～40μg／mL）而增高,最大抑制率达（53．39±5．32）％;荧光染色结果发现Res48h凋亡细胞增多,镜下可见较为典型的凋亡形态学变化：细胞变小,核皱缩,荧光强度增强．呈囊月或环状．核仁消失,新月体样改变,凋亡小体形成等;琼脂糖电泳出现明显的“梯状”条带,而对照组未出现梯状务带。结论;Res能押制人胃癌SGC7901细胞的生长并诱导其凋亡。     

三氧化二砷(As_2O_3)诱导人胃腺癌SGC7901细胞程序化死亡并降低c-myc基因的表达

目的：探讨Ａｓ２Ｏ３对胃腺癌ＳＧＣ７９０１细胞系的生物学效应及机制。方法：通过ＭＴＴ还原法检测Ａｓ２Ｏ３对该细胞系存活率的影响,从光学显微镜形态观察,流式细胞仪分析,ＤＮＡ凝胶电泳,细胞凋亡原位检测（ＴＵＮＥＬ）进行细胞凋亡的检测。半定量ＲＴＰＣＲ检测基因表达。结果：Ａｓ２Ｏ３处理ＳＧＣ７９０１细胞后,细胞的存活率明显降低,光学显微镜下可见到明显的凋亡细胞,流式细胞仪测定细胞周期的Ｇ１期前有亚２倍体的凋亡峰,ＤＮＡ凝胶电泳显示出典型的凋亡特征：ＤＮＡ有规律断裂形成的梯状图谱,细胞凋亡原位检测发现ＤＮＡ的断裂,并降低细胞ｃｍｙｃ基因的表达。结论：Ａｓ２Ｏ３能诱导人胃腺癌ＳＧＣ７９０１细胞程序化死亡并可能通过降低ｃｍｙｃ基因的表达。     

幽门螺杆菌培养液对SGC7901胃癌细胞表达hTERT和Bcl-2的影响

目的 研究幽门螺杆菌(HP)培养滤液对SGC7901胃癌细胞表达hTERT、Bcl-2蛋白的影响.方法 在HP培养滤液诱导前后,采用流式细胞仪检测SGC7901胃癌细胞hTERT、Bcl-2蛋白的表达.结果 对照组SGC7901胃癌细胞表达hTERT和Bcl-2蛋白的阳性细胞数和荧光指数显著低于经HP培养滤液诱导的SGC7901胃癌细胞组(P<0.05).经HP培养滤液处理的SGC7901胃癌细胞24、36、48 h表达hTERT和Bcl-2蛋白的阳性细胞数和荧光指数呈递增趋势,且相互间有显著差异(P<0.05).结论 HP感染不仅通过激活端粒酶促进细胞永生化,而且通过促进Bcl-2表达使细胞凋亡减少,进而促进胃癌的发生、发展,这可能是HP感染致癌的重要机制之一.     

Effect of curcumin on multidrug resistance in resistant human gastric carcinoma cell line SGC7901/VCR

AIM: To investigate the reversal effects of curcumin on multidrug resistance (MDR) in a resistant human gastric carcinoma cell line. METHODS: The cytotoxic effect of vincristine (VCR) was evaluated by MTT assay. The cell apoptosis induced by VCR was determined by propidium iodide (PI)-stained flow cytometry (FCM) and a morphological assay using acridine orange (AO)/ethidium bromide (EB) dual staining. P-glycoprotein (P-gp) function was demonstrated by the accumulation and efflux of rhodamine123 (Rh123) using FCM. The expression of P-gp and the activation of caspase-3 were measured by FCM using fluorescein isothiocyanate (FITC)-conjugated anti-P-gp and anti-cleaved caspase-3 antibodies, respectively. RESULTS: Curcumin, at concentrations of 5 micromol/L, 10 micromol/L, or 20 micromol/L, had no cytotoxic effect on a parent human gastric carcinoma cell line (SGC7901) or its VCR-resistant variant cell line (SGC7901/VCR). The VCR-IC50 value of the SGC7901/VCR cells was 45 times more than that of the SGC7901cells and the SGC7901/VCR cells showed apoptotic resistance to VCR. SGC7901/VCR cells treated with 5 micromol/L, 10 micromol/L, or 20 micromol/L curcumin decreased the IC50 value of VCR and promoted VCR-mediated apoptosis in a dose-dependent manner. Curcumin (10 micromol/L) increased Rh123 accumulation and inhibited the efflux of Rh123 in SGC7901/VCR cells, but did not change the accumulation and efflux of Rh123 in SGC7901 cells. P-gp was overexpressed in SGC7901/VCR cells, whereas it was downregulated after a 24-h treatment with curcumin (10 micromol/L). Resistant cells treated with 1 mumol/L VCR alone showed 77% lower levels of caspase-3 activation relative to SGC7901 cells, but the activation of caspase-3 in the resistant cell line increased by 44% when cells were treated with VCR in combination with curcumin. CONCLUSION: Curcumin can reverse the MDR of the human gastric carcinoma SGC7901/VCR cell line. This might be associated with decreased P-gp function and expression, and the promotion of caspase-3 activation in MDR cells.     

尿激酶型纤溶酶原激活剂在小白菊内酯抑制胃癌细胞转移中的作用

目的：探讨小白菊内酯（Par）抑制人胃癌SGC7901细胞转移活性及对尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）的调控作用。方法：MTT法检测SGC7901细胞增殖能力的变化;倒置显微镜下观察细胞形态;transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测细胞uPA蛋白表达;RT-PCR法检测uPA的RNA表达。结果：在100-200μmol/L浓度范围内,Par以浓度和时间依赖方式抑制胃癌细胞增殖,倒置显微镜下见到细胞生长明显受到抑制,细胞的迁移能力和侵袭力均显著下降,穿过人工基底膜的细胞数逐渐减少。随着Par作用时间的延长,SGC7901细胞表达uPA水平逐渐下降。结论：Par可以抑制SGC7901的增殖和转移,uPA在Par降低胃癌细胞转移活性中起重要作用。     

API-2抑制胃癌细胞株SGC7901生长及其机制探讨

目的检测不同浓度API-2作用后磷酸化AKT（p-AKT）在胃癌细胞株SGC7901中的表达及细胞生长情况,并探讨Akt信号转导通路与消化道肿瘤发生发展的机制。方法胃癌细胞株SGC7901传代培养;MTT方法检测不同浓度API-2（0,2,4,6,8μmol/L）对胃癌细胞SGC7901的增殖抑制作用;免疫细胞化学染色和Western blot检测经API-2作用24h后胃癌细胞株SGC7901中p-AKT的表达。结果不同浓度API-2均可抑制SGC7901细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性;不同浓度API-2作用24h后,p-AKT蛋白表达均减少。结论API-2作用Akt信号转导通路的位点,减少p-AKT的表达。Akt信号转导通路与胃癌细胞株SGC7901的发生、发展有关。