大骨节病区FA对软骨细胞ALPase活性的影响

为探明大骨节病病区黄腐酸（Ｆｕｌｖｉｃａｃｉｄ，ＦＡ）对软骨内成骨过程中矿化的影响，采用４－甲基伞形酮磷酸酯（４－ＭｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌＰｈｏｓｐｈａｔｅ，４－ＭＵＰ）为碱性磷酸酶（ＡｌｋａｌｉｎｅＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬａｓｅ）作底物，并结合Ｇｏｍｏｒｉ染色法，研究了ＦＡ对体外培养的肥大软骨细胞及基质在矿化过程中ＡＬＰａｓｅ活性影响。发现与视黄酸（Ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ     

兔软骨细胞培养方法研究

Manning 和 Bonner1967年首先把胰蛋白酶和细菌胶原酶结合使用消化关节软骨基质获得大量纯度高的软骨细胞,此后,软骨细胞培养研究工作得到很大发展并取得丰硕成果。现这一方法经改进后在国外已被广泛使用,在我国尚未见有关这方面报导。本文以体外单层兔软骨细胞培养为例,简要介绍用透明质酸酶、胰蛋白酶和胶原酶消化分离兔关节软骨细胞的实验材料准备,操作方法步骤,并对实验结果作了简要讨论。希望通过这一方法介绍,对从事软骨疾病研究、大骨节病病因研究人员有所助益。     

结缔组织生长因子与软骨细胞及成骨细胞的增殖分化

肥大带软骨细胞和功能活跃的成骨细胞均可高水平表达结缔组织生长因子(CTGF),CTGF可促进软骨细胞和成骨细胞的增殖,促进软骨细胞(如X型胶原)和成骨细胞相关表型(如碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原)的发生,在骨和软骨的发育以及骨量维持方面发挥重要作用。另外,CTGF还参与了骨折愈合及病变软骨的修复过程。转化生长因子-β、前列腺素E2等可能参与了CTGF基因表达的调控。     

结缔组织生长因子与软骨细胞及成骨细胞的增殖分化

肥大带软骨细胞和功能活跃的成骨细胞均可高水平表达结缔组织生长因子(CTGF)，CTGF可促进软骨细胞和成骨细胞的增殖，促进软骨细胞(如X型胶原)和成骨细胞相关表型(如碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原)的发生，在骨和软骨的发育以及骨量维持方面发挥重要作用。另外，CTGF还参与了骨折愈合及病变软骨的修复过程。转化生长因子-β、前列腺素E2等可能参与了CTGF基因表达的调控。     

兔关节软骨细胞原代培养及生物学鉴定

目的探讨兔膝关节软骨细胞体外分离培养及鉴定方法,分析软骨细胞在体外不同阶段的生物学特性。方法取4周龄健康新西兰兔膝关节软骨,以机械分离和酶消化相结合的方法获取膝关节软骨细胞,经体外培养、传代。观察不同培养阶段细胞形态和生长,CCK-8法测定细胞增殖并绘制生长曲线,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞。结果兔软骨细胞经两步消化,可获取高纯度的软骨细胞,细胞活性率可达95%以上,甲苯胺蓝染色及免疫荧光呈阳性结果。原代细胞和第一代细胞呈多角形,传代4~5代后,细胞形态逐渐由多角形变为梭形,基质分泌氨基多糖和胶原染色变浅。结论成功建立了简单易行的软骨细胞分离、培养方法,通过传代可以获取大量实验细胞,但仅限于5代以内软骨细胞适用于组织工程研究。     

家兔去卵巢后血清酶和骨元素变化的相互关系

目的　研究去卵巢后家兔血清酶和骨元素的变化。方法　新西兰家兔１２ 只,７ 月龄。术前取血,测定血清碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和骨特异性碱性磷酸酶的活性作为术前组。手术摘除二侧卵巢,饲养８ 个月后,取血清测定上述三种酶活性作为术后组。家兔处死,取髂骨作为实验组。另取１５ 个月龄完整家兔１２ 只,处死,取髂骨作为对照组,用中子活化方法测定髂骨的钙、镁、钠、锰、锶和钾元素的含量。结果　术前血清碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和骨特异性碱性磷酸酶的活性分别为（２０ ．０６ ±８ ．２０）Ｕ／Ｌ、（１９．０６±５．４６）Ｕ／Ｌ和（１４．０４±１．６７）Ｕ／Ｌ,术后血清碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和骨特异性碱性磷酸酶的活性分别为（１４．６０±４．６４）Ｕ／Ｌ、（１１ ．０４ ±４．１０）Ｕ／Ｌ和（４ ．４４±２ ．１０）Ｕ／Ｌ,摘除卵巢后上述各项生化指标均显著降低（ Ｐ＜ ０ ．００１）。家兔切除卵巢后实验组髂骨镁元素含量为（４．４４±０．１９）ｍｇ／ｇ,对照组髂骨镁元素含量为（５．４０±０ ．３２）ｍｇ／ｇ。实验组髂骨镁元素含量显著低于对照组（Ｐ＜ ０．００１） 。钙、钠、锰、锶和钾元素含量二组比较无显著差别。结论　成年家兔去卵巢８ 个月后,血清碱性磷酸酶     

白细胞介素——1促进肥大软骨细胞PG的分解代谢

本文了白细胞介素－１和硫代腺苷蛋氨酸对培养的肥大软骨细胞蛋白多糖分解代谢及其质金属蛋白水解酶活性的影响。ＩＬ－１β能够明显促进培养的肥大软骨ＰＧ分解，释放到培养液中的ＰＧ其分子量明显降低，缺乏透明质酸结合区。     

软骨细胞无血清培养

细胞培养一般需要在基础培养液内加入一定比例小牛血清,细胞才能生长繁殖。Sato1975年提出血清在细胞培养中主要作用是提供激素和生长因子。我们于 DMEM 培养液中加入50ng/ml 纤维母细胞生长因子、10μg/ml 胰岛素和10~(-7)M 地塞米松,配制成无血清合成培养液,对软骨细胞进行培养获得成功,并完成微量元素 Se 对软骨细胞影响的课题研究。     

FA促进培养软骨细胞及基质发生异常矿化

采用视黄酸（Retinoicacid，RA）、抗坏血酸（VitaminC，Vc）比较研究大骨节病病区黄腐酸（Fulvicacid，FA）对体外培养肥大软骨细胞及基质的作用，发现病区FA可促进贴壁单层培养的软骨细胞形成异常的胞外基质，促进异常矿化。病区FA刺激软骨细胞产生的活性氧[1]使近细胞膜的软骨囊内蛋白颗粒减少，细蛋白纤维消失；粗长的胶原蛋白变细，胶原蛋白连接方式由正常的束状排列变为杂乱的网状；造成蛋白多糖结构散乱，使矿化位点混乱，而在伤损基质上发生片状不均匀较大量的钙化区。这种异常矿化过程与大骨节病人软骨损伤及修复性的病理矿化有相似之处，支持了大骨节病的自由基致病机理。     

氟对体外培养软骨细胞超微结构的影响

目的观察氟化物对体外培养乳鼠软骨细胞超微结构的影响。方法采用细胞培养的方法,原代培养昆明乳鼠软骨细胞,传第3代后按染氟剂量不同分为0（对照）、5、10、20、40mg／L组,染氟培养10d后,制备乳鼠软骨细胞超薄切片,透射电镜下观察软骨细胞的超微结构改变。结果电镜下5、10mg／L组软骨细胞增殖,双核细胞数量增多,细胞器发达,可见囊池扩张;20、40mg／L组细胞表面微绒毛减少,部分细胞染色质固缩,并凝结成块状,聚集在核膜周边,核基质密度下降,核膜迂回曲折,胞浆内线粒体空泡化,有些细胞胞浆内可见大量的囊泡,泡内含有电子致密物质;在40mg／L组中可见到凋亡细胞。结论高氟可以引起乳鼠软骨细胞超微结构的损伤。     

ALP与冠状动脉斑块稳定性的相关性分析

目的:探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者中血清碱性磷酸酶(ALP)水平与血管内超声(IVUS)检测的斑块形态及钙化的相关性。方法:回顾性分析2017年1月-2018年12月行IVUS检查的ACS患者的影像学资料,排除既往PCI病史、癌症和肝脏疾病患者后,234例患者纳入本研究。采用受试者工作特征曲线(ROC)评估ALP预测钙化能力,并进行相关性分析。通过三分位法将患者分为高ALP(>80 IU/L)组、中ALP(68～80 IU/L)组和低ALP(<68 IU/L)组,观察不同水平ALP与钙化特征和斑块形态之间的相关性。结果:ROC曲线显示ALP预测钙化的AUC面积是0.65(P<0.001);相关性分析提示ALP与斑块负荷(PB)相关(r_s=0.38,P<0.001);高ALP组点状钙化、最小管腔面积(MLA)≤4.0 mm²及PB>70%较中、低ALP组明显增高(P<0.05),但薄层纤维帽(TCFA)和钙化长度在不同ALP组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ALP>80 IU...     

硒锌对培养软骨细胞生长代谢的影响

本文报告了硒、锌对培养软骨细胞生长代谢的影响。本实验在培养液中加入一定量硒、锌对一代人胚关节软骨细胞进行培养192h。结果显示:(1)补锌和补硒均能促进软骨细胞的生长。(2)同时补充适量的硒和锌比单独补充效果好,但不能超过正常人血清含量的中等水平,若过多补充则可能适得其反。(3)在同一阶段,软骨细胞的分裂增殖与其产生基质的量不一致。(4)体外培养软骨细胞的基质代谢能很快进入平衡状态。胶原较蛋白多糖的代谢为慢。     

一氧化氮在兔生长板软骨细胞终末分化中的生物学作用

原代分离及培养兔肋软骨生长板软骨细胞,添加不同浓度的全反式维甲酸(AT-RA)诱导软骨细胞的终末分化。酶动力学法检测碱性磷酸酶(AKP)及细胞培养上清液中一氧化氮合酶(NOS)活性;硝酸还原酶法检测所培养软骨细胞上清液中一氧化氮(NO)浓度;AT-RA分别联合NOS抑制剂L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)及可以产生NO的S-亚硝基谷胱甘肽(SNOG)作用于原代培养的生长板软骨细胞,分别检测AKP活性。结果发现随着AT-RA浓度的递增,AKP、NOS活性及NO浓度明显增加(P<0.05);L-NAME明显抑制所培养的生长板软骨细胞AKP的活性(P<0.05),SNOG可以提高所培养的生长板软骨细胞AKP的活性(P<0.05)。认为NO可以促进兔肋软骨生长板软骨细胞的终末分化。     

硒对体外培养大骨节病软骨细胞生长及凋亡的影响

目的 观察硒对体外培养大骨节病(KBD)患者和正常人关节软骨细胞增殖和凋亡的影响,探索补硒防治KBD的作用,并为硒对正常软骨细胞生长的影响提供依据.方法 依据<大骨节病临床诊断标准>(GB 16003-1995),选择Ⅱ度和Ⅲ度KBD患者5例和非病区正常人意外事故者5例的关节软骨进行体外分离、培养.KBD组和对照组分别给予不同剂量的硒(0、0.0125、0.0250、0.0500、0.1000、0.2500、0.5000、1.0000 mg/L)进行干预,采用四氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪和免疫组化法观察细胞生长和凋亡情况.结果 对照组第6天时各剂量组的细胞增殖率(0.086±0.025、0.077±0.012、0.073±0.027、0.071±0.017、0.058±0.028、0.052±0.028和0.046±0.037)比0 mg/L组(0.138±0.026)明显降低(P均＜0.05);0.1000～1.0000 mg/L剂量组的平均细胞增殖率为负值(-0.001±0.001、-0.003±0.000、-0.003±0.001和-0.004±0.001),显著低于0 mg/L组(0.025±0.003,P均＜0.05);KBD组,与0 mg/L组(0.115±0.011)比较,0.2500 mg/L剂量组促进细胞增殖(0.128±0.037,P＜0.05),1.0000 mg/L剂量组细胞生长受到抑制(0.071±0.019,P＜0.05).对照组0.0500～1.0000mg/L剂量组的细胞凋亡率[(18.88±0.02)%、(17.58±0.01)%、(17.09±0.04)%、(56.00±0.02)%、(57.85±0.03)%]比0 mg/L组[(13.51±0.01)%]增高(P均＜0.05);KBD组,与0 mg/L组[(25.84±0.02)%]比较,0.0250～0.2500 mg/L剂量组的细胞凋亡率[(13.69±0.02)%、(15.96±0.03)%、(16.68±0.03)%、(16.67±0.02)%]降低,0.5000、1.0000 mg/L剂量组的细胞凋亡率[(59.58±0.03)%、(73.48±0.04)%]明显增高(P均＜0.05).KBD组0.0500～0.2500 mg/L剂量组的Fas表达[(41.2±1.5)%、(40.3±2.0)%、(50.2±2.5)%]低于同剂量硒干预的对照组[(52.4±1.0)%、(67.2±4.0)%、(75.1±5.0)%,P均＜0.05],0.0500、0.1000 mg/L剂量组的Caspase-3表达[(40.8±1.1)%、(45.1±2.1)%]低于同剂量硒干预的对照组[(68.0±3.0)%、(70.6±3.5)%,P均＜0.05].结论 适宜的补硒剂量(0.1000～0.2500 mg/L)具有促进KBD软骨细胞生长的作用,降低细胞凋亡率,但补硒剂量＞0.5000 mg/L时具有损伤作用;促进KBD软骨细胞生长的硒剂量并非也能促进正常人活体软骨细胞的生长.     

FA促进培养软骨细胞及其质发生异常矿化

采用视酸（Ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ）、抗坏血酸（ＶｉｔａｍｉｎＣ，Ｖｃ）比较研究大骨节病病区黄腐（Ｆｕｌｖｉｃａｃｉｄ，ＦＡ）对体外培养肥大软骨细胞及基质的作用，发现病区ＦＡ可促进贴壁单层培养的软骨细胞形成异常的胞外基质，促进异常矿化。病区ＦＡ刺软骨细胞产生的活性氧使近细胞膜的软骨囊内蛋白颗粒减少，细胞白纤维消失；粗长的胶原蛋白变细，胶原蛋白连接方式滨束状排列变炒杂乱的网状；造成蛋白多糖结构     

榆林大骨节病区水中黄腐酸对培养软骨细胞作用的观察

目的；本实验观察黄腐酸（ＦＡ）对软细胞，结构，生长，代谢和功能的影响，方法：用大骨节病病区水中ＦＡ，以不同浓度（５ｍｇ／Ｌ，１０ｍｇ／Ｌ，２０ｍｇ／Ｌ）作用于体外培养的兔关节软骨细胞，检测结果作Ｆ检验进行统计学处理，结果：显示实验组织细胞膜功能，蛋白质，ＤＮＡ，蛋白聚糖等不低于对照组或高于对照组，结论：ＦＡ对培养软骨细胞的ＤＮＡ合成，分裂增殖和细胞结构等没有影响。