人外周血中树突状细胞的诱导及鉴定

目的：从健康人外周血诱导高纯度树突状细胞（dendritic cell,DC)方法：用贴壁法从健康人外周血获取单核细胞，对传统的诱导方法加以改进，经GM－CSF（100ng/ml)和IL－4（500U/ml)持续诱导7天，在此期间不再补充新的细胞因子，新鲜培养基和促成熟因子，以获取高纯度DC，结果：经上述方法处理后，从健康人外周血中诱导出了大量高纯度DC，其能高表达HLA－I，Ⅱ类分子，共刺激分子和粘附分子，显示出成熟DC的特征，这些DC能强烈诱导同种体淋巴细胞的增殖，其内吞能力在第3天达最高，之后明显下降，结论：本研究所建立的从外周血获取大量成熟DC的方法经济，简便，为DC的深入研究和临床应用奠定了基础。     

人外周血树突状细胞的分离培养及鉴定

目的从外周血中分离单个核细胞 ,经体外诱导培养获取高纯度的树突状细胞。方法淋巴细胞分离液分离外周血的单个核细胞 ,经贴壁 2h后加入GM CSF、IL 4诱导 7天 ,观察细胞形态 ,用流式细胞仪检测其表面标志 ,采用混合淋巴细胞培养法检测其刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结果经诱导生成的细胞具有典型的DCs形态特征 ,高表达CD83 、CD86和MHCⅠ、Ⅱ类分子 ,在体外能诱导强烈的同种异体淋巴细胞增殖反应。结论本研究所建立的经济、简便的从外周血获取大量成熟DCs的方法 ,为DCs的进一步研究奠定了基础。     

脐血及外周血树突状细胞的体外诱导及比较研究

目的 :体外诱导扩增具典型形态、表型及功能的树突状细胞 (DC) ,以进行相关基础研究及临床应用。方法 :取正常人外周血及脐血 ,以 Ficoll分离取白细胞 ,去除悬浮细胞后 ,分别在以加入 GM- CSF,TNF-α(脐血 )及GM- CSF,IL- 4 (外周血 )的完全培养基中培养 ,在第 3,7,9天表型 (CD1a,CD80 ,CD83,HL A- DR)分析及形态观察 ,1周左右分别做同种异体混合淋巴细胞培养 ,比较激发细胞增殖的能力。结果 :脐血诱导的 DC细胞数大于外周血来源的 DC细胞数 ,两者有显著差异。两种来源的 DC在形态及细胞表型 (第 9天 CD1a脐血 6 7.2± 3.6 % ,外周血 6 9.3± 6 .8% ;CD83脐血 73.7± 5 .5 % ,外周血 75 .6± 4 .9% )无显著差异 ,两者的刺激同种异体淋巴细胞增殖能力无显著差异。结论 :脐血可成功诱导功能性 DC,脐血诱导比外周血诱导效率高 ,且与外周血所诱导的 DC在形态及功能方面差异无显著性     

人外周血树突状细胞的体外培养扩增

目的：P在体外从人外周血中培养坟拉树突状细胞。方法：从正常人外周血分离PBMC,经两次孵育粘附,弃去悬浮细胞后加细胞因子（GM-CSF,IL-4）和培养液进行培养,并对培养过程进行观察鉴定。结果：培养1周后即可培养出典型的树突状细胞,经FITC-CD1a单抗标记a表达率为65%,并能刺激同种淋巴细胞增殖反应,结论：利用GM-CSF和IL-4可以从人外周血中扩增出大量DC,可为后续研究做准备。     

人外周血树突状细胞的体外诱导培养及其表面CDl37、CDl37L的表达特点

目的：建立人外周血树突状细胞(DCs)的体外扩增培养技术，并初步探讨其表面CDl37、CDl37L的表达特点。方法：利用贴壁方法自正常人外周血单个核细胞(PBMC)分离获得单核细胞，体外经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合诱导培养，对培养过程中的细胞进行形态学观察及表型分析，并检测CDl37及CDl37L的表达。结果：诱导培养5-7天后的非贴壁细胞具有典型的DCs形态，无明显的增殖趋势；流式细胞仪分析显示，MHCⅡ-类分子HLA-DR表达率为64．02％，单核-巨噬细胞系特异性表面标志CDl4表达率仅为2．34％；人类DCs表面CDl37L表达率为41．03％；CDl37表达率为9．77％，LPS刺激后表达率增加为36．06％。结论：人外周血单核细胞，体外经GM-CSF、IL-4诱导，可获得大量的未成熟DCs，其中含有少量的单核-巨噬细胞；此DCs增殖能力很弱，表明单核细胞为DCs的非增殖性前体；体外培养的人类DCs可中等量表达CDl37L，并有CDl37的表达，LPS刺激可诱导CDl37表达的增加。为进一步研究DCs以及CDl37、CDl37L的生物学特性和功能奠定了基础。     

人外周血树突状细胞的体外分离、培养和表型鉴定

目的：建立从人外周血分离、纯化、培养树突状细胞的方法，研究细胞因子对树突状细胞体外增殖、分化成熟的影响。方法：取正常人外周血，经淋巴细胞分离液梯度分离，取中间白膜层细胞，通过贴壁处理，获得单个核细胞，加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）1μg／ml和重组人白细胞介素-4（rhIL-4）410ng／ml，体外培养7d后，加入肿瘤坏死因子α（TNF-α）促进其分化成熟。第8天收获悬浮细胞，用相差显微镜和电镜观察其形态，经树突状细胞（DC）单克隆抗体染色后用流式细胞仪进行表型测定。结果：从正常人外周血分离获得的单个核细胞经rhGM-CSF、rhlL-4和TNF-α联合作用1周左右获得大量高纯度树突状细胞，树突状细胞特征：悬浮生长；具有树突状或裙褶状突起；高表达HLA-DR、CD1a、CD80、CD83、CD86和低表达CD14。结论：用rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α联合作用可以从人外周血诱导培养出大量的树突状细胞，经形态学观察及表型鉴定得以证实。该培养技术为进一步研究树突状细胞肿瘤疫苗的临床应用奠定了物质基础。     

小鼠骨髓树突状细胞体外扩增方法的建立

目的建立小鼠骨髓树突状细胞(DC)体外大量扩增方法。方法应用粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子联合白细胞介素-4诱导培养小鼠骨髓细胞，应用相差显微镜观察形态学变化，’H-TdR掺入法检测细胞增殖能力，FACS检测细胞表面分了，ELISA检测细胞因子。结果体外诱导培养8天后可获得大量形态学典型的DC，具有强烈的激活同种异体或自体T细胞增殖反应能力。FACS检测表明，扩增的DC表达IaK^b、CDllc、CD80、CD86、ICAM-1分子。DC接受LPS刺激后，可以促使DC成熟，分泌IL-12(p70)、IL-6、TNF-a和IL-1β水平增强。结论小鼠骨髓细胞体外诱导培养，可生成大量功能成熟的DC，为进一步开展DC基础和临床研究打下基础。     

人脐血树突状细胞体外扩增的研究

目的 探讨人脐血来源的树突状细胞(dendritic cells，DC)的体外培养、增殖情况。方法 采用密度梯度离心法获得界面细胞，贴壁培养2小时，获得单个核细胞，体外以重组hGM-CSF(50ng/m1) hIL-4(10n g/ml) hTNF-α(50ng／m1)诱导培养2周。在DC发育过程中，在光镜下观察其生长情况，流武细胞仪检测DC表型。结果 体外培养的DC在第四天由贴壁状态变为悬浮毛刺状细胞，随着培养时间的延长。此类细胞数量增多。第八天为形态不规则的毛刺状，为典型树突状细胞形态。流式细胞仪显示体外培养成熟的De高表达共刺激分子CD80、黏附分子CD54、MHC Ⅱ类分子HLA-DR。结论 人脐血经hGM-CSF hIL-4 hTNF-α体外培养，能诱导出DC,本研究为DC的深入研究与临床应用奠定了基础。     

人外周血树突状细胞的体外诱导培养及其表面CD137、CD137L的表达特点

目的:建立人外周血树突状细胞(DCs)的体外扩增培养技术,并初步探讨其表面CD137、CD137L的表达特点。方法:利用贴壁方法自正常人外周血单个核细胞(PBMC)分离获得单核细胞,体外经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合诱导培养,对培养过程中的细胞进行形态学观察及表型分析,并检测CD137及CD137L的表达。结果:诱导培养5～7天后的非贴壁细胞具有典型的DCs形态,无明显的增殖趋势;流式细胞仪分析显示,MHCⅡ-类分子HLA-DR表达率为64.02%,单核-巨噬细胞系特异性表面标志CD14表达率仅为2.34%;人类DCs表面CD137L表达率为41.03%;CD137表达率为9.77%,LPS刺激后表达率增加为36.06%。结论:人外周血单核细胞,体外经GM-CSF、IL-4诱导,可获得大量的未成熟DCs,其中含有少量的单核-巨噬细胞;此DCs增殖能力很弱,表明单核细胞为DCs的非增殖性前体;体外培养的人类DCs可中等量表达CD137L,并有CD137的表达,LPS刺激可诱导CD137表达的增加。为进一步研究DCs以及CD137、CD137L的生物学特性和功能奠定了基础。     

大鼠骨髓造血干细胞体外定向诱导、扩增树突状细胞及其功能鉴定

目的：以大鼠骨髓造血干细胞为来源，建立体外诱导、扩增树突状细胞(dendritic cells，DC)的方法，并进行表型鉴定及功能检测。方法：从大鼠骨髓细胞中分离出造血干细胞，加入rGM-CSF、rIL-4和nrhTNF-α培养12天获得大量DC，经标抗大鼠OX62单抗免疫磁珠分离纯化后的DC，进行形态学观察、表型检测及刺激T细胞增殖能力分析。结果：大鼠骨髓造血干细胞经诱导培养12天后，倒置显微镜和电镜下显示典型的DC形态和超微结构；流式细胞术分析显示细胞表面抗原高表达，其中OX62为62．19％；MHCⅠ为70．40％；MHCⅡ为78．28％；CDSO为55．58％；CD86为68．38％，是典型的大鼠DC表型特征，同种混合淋巴细胞反应结果显示，DC具有高效的刺激T淋巴细胞活化增殖的能力。结论：大鼠骨髓造血干细胞可成功诱导为具有典型形态特征及功能的DC，为进一步研究其在肿瘤免疫治疗中的应用打下基础。     

外周血来源树突状细胞的体外诱导及鉴定

目的 建立人外周血树突状细胞(dendritic cell,DC)的分离方法,观察其形态学和免疫组织化学的特点,为下一步研究提供DC来源.方法 用重组人GM-CSF、IL-4从人外周血单个核细胞诱导分离DC,流式细胞仪检测所得细胞的纯度,光镜、电镜观察其形态,SP免疫细胞化学方法检测DC的分子表达.结果 此纯化方法所得细胞纯度可达到80%以上,形态学观察可见纯化细胞具有典型的DC特征,该细胞高表达HLA-DR和S-100分子.结论 此种方法可获得较高纯度典型的DC,为进一步研究及临床应用提供了可能.     

人外周血树突细胞的分离与提纯

目的 从人外周血中分离、培养及鉴定树突细胞（ＤＣ）。方法 从正常人外周血分离获得单个核细胞,培养２小时后,取会细胞,在无血清培养基中加入不同的细胞在子,于２的第１,６,８天对形态,表型和功能分擀行测定,并在光镜、电镜下观察ＤＣ的纯度与得率。结果 体外培养６～８天可获得高纯度大量的ＤＣ,较高表达ＨＬＡ ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ８３和ＣＤ８６,能强烈激发同种慢体Ｔ淋巴细胞增殖。结论 上述方法可以从人外周血     

喉癌患者外周血树突状细胞的体外培养

目的探讨从喉癌患者外周血大量诱导树突状细胞(Dendritic cells,DCs)的有效方法。方法直接从喉癌患者外周血分离DCs;用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)刺激喉癌患者外周血贴壁单核细胞(PBMCs);检测培养前后DCs表面HLA-DR、B7-2表达水平及DCs诱导T细胞增殖能力。结果联合应用GM-CSF及IL-4可以从PBMCs中诱导大量高免疫活性的DCs,并通过增加其表面HLA-DR、B7-2表达而增强DCs免疫功能。结论用GM-CSF及IL-4可以从喉癌患者外周血中诱导出大量高免疫活力DCs。     

人外周血单核细胞体外诱导树突状细胞及鉴定

目的：建立从人外周血单核细胞体外诱导培养树突状细胞（dendritic cell,DC)的方法。方法：分离人外周血单个核细胞,以细胞因子粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）,白细胞介素－4（IL－4）,肿瘤坏死因子α（TNF－α）诱导培养获得DC,电镜及共聚集显微镜观察其形态,流式细胞术检测细胞表面抗原,体外同种混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞的增殖活性。结果：从正常外周血分离得到的单核细胞,体外经重且人GM－CSF,IL－4,TNF－α的共同诱导培养,得到大量成熟DC,形态学观察可见典型DC特征,荧光激少在细胞分离器（FACS）检测表明,诱导的DC高表达HLA－DR（96％）,CD83（94．2％）,CDla(94.2%)分子,同时也高表达CD40（97．7％）,CD80（98．2％）分子,同种混合淋巴细胞反应显示,诱导的DC具有很强的激发同种T细胞增殖的能力。结论：人外周血单核细胞体外经细胞因子贯序诱导培养,可以生成大量功能成熟的DC,为进一步开展DC的基础研究和临床应用提供了可能。     

人外周血树突状细胞的体外培养及鉴定

目的在体外从人外周血中培养、鉴定树突状细胞。方法取正常健康人新鲜外周血,经密度梯度离心法分离,获得单个核细胞,取贴壁细胞加入重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4,体外培养第7天,加入肿瘤坏死因子-α促进其分化成熟。用倒置显微镜观察其形态,用流式细胞仪进行表型测定。结果从正常人外周血分离获得的单个核细胞经rhGM-CSF,rhIL-4和TNF-α联合培养,获得大量树突状细胞。具有典型的树突状细胞形态和免疫表型,高表达HLA-DR,CD83,CD80,CD86、HLA-DR CD83 及CD80 CD86 。结论用rhGM-CSF,rhIL-4和TNF-α联合培养可以从人外周血诱导培养出大量的树突状细胞且高表达HLA-DR,CD80,CD83,CD86、HLA-DR CD83 及CD80 CD86 。     

从脐血单个核细胞诱导树突状细胞

探讨了从脐血单个核细胞定向诱导 DC的方法以进一步研究树突状细胞的功能与特性。从脐血中获取单个核细胞 ,在培养液中加入 GM- CSF、TNF- α、IL- 3、IL- 4,培养 1 4d后流式细胞仪分析细胞表面标志 CD1 a;培养末期加入 LPS,流式细胞仪分析细胞表面标志 CD83及 HLA- DR。发现用 GM- CSF+TNF-α+IL - 4可获得 ( 3 6 .79± 3 .1 5 ) % CD1 a+ 细胞 ,LPS可使 CD83及 HLA- DR的比例从 ( 0 .5 7± 0 .5 6 ) %及 ( 40 .2 7± 6 .3 3 ) %分别升至 ( 3 2 .79± 1 2 .90 ) %及 ( 95 .5 2± 3 .45 ) %。实验证明脐血单个核细胞作为另一种主要来源 ,经特定细胞因子诱导可生成大量 DC,并能通过 LPS刺激 DC成熟     

人外周血来源树突状细胞诱导培养及鉴定的实验研究

目的探讨树突状细胞(DC)体外培养的方法。方法用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素4、重组人肿瘤坏死因子α等细胞因子自外周血单个核细胞诱导分离DC,流式细胞仪检测其表面标志,四氮唑蓝法测定其刺激同种异体淋巴细胞增殖能力。结果体外培养第10天,大量细胞出现典型的树突状形态;流式细胞仪检测高表达CD80、CD86、CD83、CD40、CD1a、人白细胞DR抗原;在体外能强烈刺激同种异体混合淋巴细胞增殖反应。结论该方法可获得较高纯度典型的DC,为DC的临床免疫治疗提供实验依据。     

人外周血单核细胞和脐血CD34+细胞来源的树突细胞比较

目的比较从人外周血单核细胞及脐血CD34+细胞诱导树突细胞(DC)的方法及其特性.方法用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,贴壁法获得单核细胞;经GM-CSF及IL-4诱导获得DC.磁性活化细胞分选系统(MACS)分选脐血CD34+细胞,以GM-CSF、IL-4、TNF-α、SCF、FL、TPO等细胞因子诱导获得DC.用电镜、普通显微镜观察DC形态;流式细胞仪分析DC表型;同种混合淋巴细胞反应(allo-MLR)观察DC刺激T淋巴细胞增殖的能力.结果外周血单核细胞在因子GM-CSF、IL-4、TNF-α,脐血CD34+细胞在GM-CSF、IL-4、TNF-α、SCF、FL、TPO等因子作用下,可生成DC,并表达相应的DC分化抗原CD14、CD80、CD83、CD86、HLA-DR.脐血CD34+细胞具有较强的扩增能力,经2周诱导,体系细胞数可增加173.8士26.7倍,两种来源的DC均能刺激同种异体淋巴细胞的增殖反应.结论外周血单核细胞与脐血CD34+细胞,在体外均可诱导成DC,并具有相应的DC分化抗原和功能.     

人外周血树突状细胞体外诱导培养及表型鉴定

目的从健康人外周血中分离单个核细胞（peripheral blood mononuclearcell,PBMC）,经体外诱导培养获取成熟树突状细胞（dendritic cell,DC）.方法取健康人新鲜外周血,经密度梯度离心法分离,获得单个核细胞,在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养.置37℃、5%CO2培养箱内静置培养2 h后除去悬浮细胞.培养液中加入rhGM-CSF和rhIL-4继续培养贴壁细胞5 d,然后加入TNF-α促进其分化成熟.倒置显微镜下观察DC形态,流式细胞仪（flowcytometer,FCM）对其进行表型鉴定.结果显微镜下观察DC细胞形态不规则,表面有大量的毛刺状突起;成熟DC细胞表面CD83、CD80分子表达明显增高.结论用rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α联合培养可以从健康人外周血诱导培养出成熟的树突状细胞.     

严重感染患者外周血中树突状细胞的变化及意义

严重感染及感染性休克是全身性感染（sepsis）导致的以器官功能损害为特征的复杂临床综合征,在ICU患者的发病率高达25％。近年来,尽管抗感染治疗及器官功能支持技术取得了长足的进步,但严重感染的病死率仍高达30％～70％。严重感染的发病机制复杂,免疫功能的紊乱参与严重感染的发生与发展。树突状细胞（DCs）在启动机体免疫应答中发挥关键性作用。近年研究显示,严重感染患者外周血DCs数量及功能呈现明显动态改变,并与病情严重程度及预后相关。因此监测严重感染的危重病患者外周血DCs改变具有重要的临床意义。