苦参碱诱导人肝癌细胞BEL-7402自吞噬性死亡

目的研究苦参碱诱导人肝癌BEL-7402细胞自吞噬和自吞噬性死亡作用。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡,自噬体标记物LC3免疫荧光定量检测自吞噬,透射电镜分析细胞自吞噬死亡超微结构改变。结果苦参碱抑制细胞增殖呈质量浓度依赖性,作用48h的IC50值为1.1mg/mL;0.6～1.6mg/mL苦参碱作用12h可诱导BEL-7402细胞凋亡逐渐增多,1.2mg/mL作用12h时细胞凋亡率达(44.88±0.78)%;1.2mg/mL苦参碱持续作用可以诱导自吞噬阳性细胞逐渐增多,作用12h时自吞噬阳性细胞达(63.16±0.29)%;超微结构显示细胞凋亡呈现自噬性细胞死亡特点。结论苦参碱体外能诱导BEL-7402细胞自吞噬和自噬性死亡。     

蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用

[目的]观察蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用。[方法]肝癌细胞BEL-7402体外培养,采用MTT法检测蜂毒素对其增殖抑制作用,流式细胞术测定蜂毒素对细胞增殖核抗原表达和细胞周期的影响。[结果]蜂毒素体外能够抑制BEL-7402肝癌细胞的增殖活性;并抑制细胞增殖核抗原的表达,呈剂量依赖性;干扰细胞周期,使S期细胞增加,G2/M期细胞减少。[结论]蜂毒素具有抑制BEL-7402肝癌细胞增殖的作用,机制可能与抑制细胞增殖核抗原表达和干扰细胞周期有关。     

干扰素-α对人肝癌细胞的抑制作用的研究

目的研究人干扰素-α对人肝癌细胞系BEL-7402增殖及转移的抑制作用，探讨其抗肿瘤作用的机制。方法常规培养的人肝癌细胞株BEL-7402细胞加入人干扰素-α共同孵育，作用24h后，以MTr法检测干扰素-α对肿瘤细胞增殖的影响；Boyden小室法检测肝癌细胞侵袭能力的变化。体内实验中以BEL-7402细胞10^6个皮下接种于BALB／C裸鼠，肉眼可见成瘤后以干扰素-α隔天瘤旁皮下注射，观察小鼠的一般状态并测量肿瘤体积的变化；小鼠处死后，HE染色检测肿瘤细胞向附近淋巴结及其它脏器的转移情况，免疫组化法检测肿瘤细胞增殖核抗原的表达：Tunel法检测肿瘤细胞的凋亡。结果人干扰素-α可以明显抑制体外BEL-7402细胞的增殖（抑制率为20．2％）；干扰素-α作用后在Boyden小室穿膜的肿瘤细胞数明显减少；干扰素-α治疗组荷瘤小鼠肿瘤体积明显小于对照组；所有小鼠都有近侧腋窝淋巴结的肿瘤转移，未见有其它脏器的转移；干扰素-α组裸鼠生长肿瘤细胞增殖核抗原的表达明显下降，凋亡明显增加。结论干扰素-α可以直接抑制体内、外肝癌细胞株BEL-7402的增殖，对BEL-7402细胞的侵袭有明显的抑制作用；可以抑制裸鼠移植肿瘤细胞增殖核抗原的表达并诱导细胞凋亡；但对BEL-7402细胞局部淋巴结转移无抑制作用。     

奥曲肽对人肝癌BEL-7402细胞生长调控的实验研究

目的 观察生长抑素类似物奥曲肽(OCT)对人肝癌BEL-7402细胞生长调控的影响.方法 培养人肝癌细胞株BEL-7402至对数生长期.MTT比色分析法测定OCT对BEL-7402细胞增殖的影响;流式细胞术分析OCT在10～6mol/L时对BEL-7402细胞周期和凋亡的影响;HE染色观察10-6mol/L OCT作用后BEL-7402细胞形态学改变.结果 1)OCT在一定浓度范围内呈剂量依赖性方式抑制肝癌BEL-7402细胞的生长;2)BEL-7402细胞经10-6mol/L OCT作用后细胞周期发生明显改变.3)10-6mol/L OCT作用后BEL-7402细胞形态学发生明显改变.结论 OCT在抑制肝癌细胞增殖,促进凋亡中起着重要的作用.     

绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞株BEL-7402的杀伤效应

目的探索绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402的杀伤效应。方法采用MTT法检测不同浓度的绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402增殖的作用,同时利用电子显微镜、透射电镜观察细胞BEL-7402的形态学变化。结果MTT检测表明：绿脓杆菌制剂为10×107/mL、5×107/mL、2.5×107/mL时对肝癌细胞生长杀伤作用与对照组比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）;电子显微镜、透射电镜观察发现肝癌细胞BEL-7402于12、24 h出现凋亡形态学改变,40 h形态学表现为凋亡与坏死并存。结论绿脓杆菌制剂对肝癌细胞BEL-7402生长有抑制作用,诱导细胞凋亡及坏死可能是主要作用机制。     

甘草查尔酮类化合物对人肝癌Bel-7402细胞的抗癌活性研究

目的以天然查尔酮类化合物异甘草素(ILG)为先导物进行结构修饰,制备3-甲氧基异甘草素(3-MO-ILG),并研究ILG与3-MO-ILG的体外抗癌活性。方法利用酸催化的羟醛缩合反应制备ILG与3-MO-ILG目标化合物;应用人肝癌Bel-7402细胞为体外模型,用MTT法观察2种化合物对肝癌细胞增殖的抑制活性;用流式细胞仪测定促Bel-7402细胞凋亡能力;用张氏肝细胞(chang liver)测定对正常细胞的毒性。结果化合物ILG和3-MO-ILG对正常肝细胞无明显毒性,而对肝癌Bel-7402细胞的增殖有一定的抑制活性,浓度在5～200μg/mL范围内,对肝癌Bel-7402细胞的抑制率分别为23.28%～80.01%及41.96%～86.10%;2种化合物对肝癌细胞有明显的促进凋亡作用,最高凋亡率分别可达85%和93.5%。结论人肝癌Bel-7402细胞对甘草查尔酮类化合物具有较高的敏感性;ILG衍生物对人肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制活性呈浓度依赖性,而对正常细胞的毒性明显小于对癌细胞的毒性;其抗癌作用机制可能是通过增殖抑制和促进凋亡来产生。本研究为甘草查尔酮类化合物中筛选抗肝癌候选药物奠定一定基础。     

雄黄抗人肝癌BEL-7402细胞作用

目的:观察雄黄体外抗人肝癌BEL-7402细胞作用和作用机制.方法:采用MTS法和细胞克隆实验法观察雄黄对BEL-7402细胞增殖的影响,应用PI/Hoechest33258双染法和流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光分光光度计检测细胞内钙和线粒体膜电位.结果:与阴性对照组比,雄黄能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞的生长和...     

17-羟-岩大戟内酯B对肝癌BEL-7402细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的 研究17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人肝癌BEL-7402细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法 将BEL-7402细胞分为空白对照组、HJB 10μg/mL组、20μg/mL组和40μg/mL组。采用MTT实验检测各组细胞存活率。采用流式细胞术检测HJB对BEL-7402细胞周期和凋亡的影响;AO/EB双染色法检测细胞凋亡形态的变化;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白表达的变化。结果 HJB可呈浓度-时间依赖趋势抑制BEL-7402细胞增殖。不同浓度HJB作用24小时后,各HJB处理组主要表现出S期和G2/M期阻滞;早、晚期细胞凋亡率均明显增加(P<0.05或P<0.01)。随着HJB浓度的增加,晚期凋亡细胞数量逐渐增加,呈固缩或圆珠状。各HJB处理组Bcl-2的蛋白表达均明显下调,40μg/mL组细胞Bax的蛋白表达明显上调,此外,各组细胞Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白的表达均显著上调(P<0.05)。结论 17-羟-...     

紫花茄皂苷Ⅰ-2对人肝癌细胞的细胞毒影响

目的 探讨紫花茄皂苷Ⅰ-2对人肝癌BEL-7402细胞的细胞毒作用.方法 用酸性磷酸酶(APA)法测定不同浓度紫花茄皂苷Ⅰ-2处理人肝癌BEL-7402细胞后的增殖抑制率和IC50.结果 紫花茄皂苷Ⅰ-2对BEL-7402细胞有明显的增殖抑制作用,在皂苷作用72 h后,实验组与对照组的A405比较差异有显著性(P＜0.05),半数抑制浓度IC50为6.2 μg/ml.结论 紫花茄皂苷Ⅰ-2对人肝癌细胞的细胞毒作用呈明显的浓度依赖性.     

三氧化二砷对肝癌细胞株的体外抑制作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测用As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长及抑制率的影响;凋亡电泳检测电泳条带,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡率变化。结果在0.1~50.0μmol/L的浓度范围内As2O3对BEL-7402、HepG2细胞的生长均有明显的抑制作用,且有时间和浓度的依赖性;凋亡电泳显示5μmol/L As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402凋亡率分别是46.7%和53.1%;流式细胞仪DNA组方图上可见细胞G1前期出现亚二倍峰。结论As2O3可抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的生长,且在一定的范围内,抑制率具有一定的浓度和时间依赖性;As2O3对BEL-7402细胞株的生长抑制作用大于HepG2;As2O3抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长的作用与细胞凋亡有关。     

斑蝥水提液体外细胞毒性研究

目的通过体外细胞培养技术,探讨斑蝥水提液对肿瘤细胞和人正常细胞的增殖抑制作用。方法将斑蝥水提液作用于人肝癌细胞Hep G-2、人肝癌细胞BEL-7402、人肺癌细胞A549、人正常肝细胞LO-2、人胚肾细胞293A,采用CCK-8法测定斑蝥水提液对上述细胞生长的抑制作用。结果斑蝥水提液对上述细胞均有明显毒性作用,能抑制细胞的生长增殖,呈量效关系。斑蝥水提液对Hep G-2、BEL-7402、A549、LO-2、293A细胞的IC50依次为331、287、523、397、443μg/m L。结论斑蝥水提液具有抗肿瘤效果,体外抗肿瘤的同时对正常肝肾细胞也有毒性抑制作用。     

肝力注射液逆转人肝癌细胞获得性多药耐药的体外研究

目的研究肝力注射液体外逆转人肝癌细胞5-Fu获得性多药耐药的作用。方法MTT法检测肝力注射液对人肝癌BEL-7402/5-Fu耐药细胞株的增殖抑制率及对5-Fu获得性多药耐药的逆转指数,倒置显微镜及Wright-Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞内阿霉素荧光强度。结果人肝癌BEL-7402/5-Fu细胞株对临床常用化疗药物显示出不同程度的交叉抗药性,肝力注射液(以苦参碱计)在0.230、0.115、0.058mg/mL3个质量浓度对人肝癌BEL-7402耐药细胞株72h的增殖抑制率分别为(9.25±2.38)%、(8.46±1.90)%、(4.23±2.05)%,对5-Fu的逆转指数分别为5.50、3.83、2.25,肝力注射液在0.230mg/mL质量浓度预处理细胞2h能提高细胞内阿霉素的量约38.61%。结论肝力注射液在体外具有逆转人肝癌细胞5-Fu获得性多药耐药的作用。     

小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响

目的观察小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法体外培养人肝癌Bel-7402细胞,台盼兰活细胞计数及集落形成抑制实验观察不同浓度小檗碱对Bel-7402细胞的增殖抑制作用,Hochest33258染色观察凋亡形态学变化,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率.结果小檗碱可显著抑制Bel-7402细胞生长,使集落形成能力明显下降,均呈时间、剂量依赖性.小檗碱处理后72 h,Hochest33258染色可观察到细胞核边集、固缩,有明显凋亡小体形成,流式细胞仪检测出现明显Sub-G1峰.结论小檗碱可以抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,小檗碱可能具有治疗人肝细胞癌的潜在应用价值.     

重型肝炎患者血清对人类肝癌Bel-7402细胞存活率的影响

目的 观察重型肝炎患者血清对人肝癌Bel-7402细胞生长抑制率的影响.方法 重型肝炎患者血清与Bel-7402细胞共同培养,应用四氮唑蓝比色分析法(MTT法)检测细胞生长抑制率,并检测细胞培养上清液中ALT、LDH.结果 1、Bel-7402细胞的生长抑制率随添加的重型肝炎患者血清浓度升高而增加.当血清浓度为50%、培养48小时细胞生长抑制率为73%,与对照组比较有显著差异.2、25%血清浓度作用下,各培养时间细胞培养上清液中ALT、LDH水平,实验组与对照组无显著性差异.结论 重型肝炎患者血清中的物质对肝癌细胞的生长有明显的抑制作用.     

汉防己甲素对肝癌耐药细胞抑制作用机制研究

目的:应用汉防己甲素(tetrandrine,TET)作用于肝癌耐药细胞系,探讨TET及其联合抗癌药物抑制肝癌耐药细胞系增殖的可能机制。方法:肝癌耐药细胞株BEL-7402/DOX经TET或联合多柔比星(doxorubicin,DOX)处理后,MTT法检测肝癌耐药细胞抑制率,荧光分光光度计测定的D值计算细胞内DOX的浓度,Fura-2/AM方法测细胞内Ca2+的浓度。结果:TET对BEL-7402/DOX细胞的增殖有一定的抑制作用,并可增加DOX对BEL-7402/DOX细胞的抑制作用,且呈剂量相关性。不同浓度的TET与DOX合用均可显著增加BEL-7402/DOX细胞内的DOX浓度(P<0.05～0.01)。浓度为5.0 mg/L、10.0 mg/L的TET均可显著降低BEL-7402/DOX细胞内的Ca2+浓度(P<0.05,P<0.01)。结论:TET及其联合抗癌药抑制肝癌耐药细胞系增殖的机制,可能与其降低细胞内Ca2+浓度,阻抑信息传递,提高细胞内DOX浓度有关。     

亚砷酸对肝癌细胞增殖及PCNA,c-Myc蛋白表达的影响

目的:探讨亚砷酸对人肝癌BEL-7402细胞增殖及增殖细胞核抗原(PCNA),c-Myc蛋白表达的影响.方法:应用四氮唑盐(MTT)比色法、细胞群体倍增时间(TD)、细胞集落形成试验观察亚砷酸对BEL-7402细胞增殖的影响,免疫组织化学法观察亚砷酸对BEL-7402细胞PCNA,c-Myc蛋白表达的影响.结果:亚砷酸处理后BEL-7402细胞生长抑制率上升(2.0,4.0,8.0 μmol/L的亚砷酸作用24,48,72 h后抑制率分别为27.13%,42.65%,47.74%;35.52%,53.24%,60.41%;50.61%,65.88%,70.81%;与对照组比较P＜0.05),TD逐渐延长[2.0,4.0,8.0 μmol/L的亚砷酸作用48h后TD分别为(24.68±3.99);(32.42±4.46);(36.95±8.91);与对照组比较P＜0.05及P＜0.01],集落形成率下降(0,8.0 μmol/L的亚砷酸作用7d后集落形成率分别为46.00%,18.80%;P＜0.05),免疫组化结果显示亚砷酸处理后的BEL-7402细胞PCNA,c-Myc蛋白的表达明显减弱.结论:亚砷酸能抑制BEL-7402细胞增殖,其机制可能与PCNA,c-Myc蛋白的表达下调有关.     

冬凌草甲素抑制人肝癌BEL-7402细胞生长及诱导细胞凋亡的机制研究

目的探讨冬凌草甲素体外对肝癌BEL-7402细胞生长抑制作用及诱导细胞凋亡作用机制。方法以8、16、24、32μmol/L冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法和DNA凝胶电泳观察细胞凋亡时的形态学变化。应用Westernblotting观察caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果冬凌草甲素可显著地抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用60h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时Westernblotting显示32000的caspase-3酶原蛋白的激活,出现20000的亚单位,凋亡过程中伴有Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白上调。结论冬凌草甲素能通过降低Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白诱导细胞发生凋亡,抑制BEL-7402细胞的生长;冬凌草甲素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

人参皂苷肠道代谢物诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的探讨一种新的人参稀有皂苷20-O-(β-D-吡喃葡萄糖)-20(S)-原人参二醇皂苷(IH-901)对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡作用。方法以0、6.25、12.5、25、50、75、100μmol/L的IH-901作用于体外培养的BEL-7402细胞,通过MTT法检测IH-901对细胞生长的抑制作用,相差显微镜观察细胞形态变化,AO/EB的荧光核染色观察凋亡细胞形态,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果MTT实验显示IH-901抑制BEL-7402细胞的生长,呈时间及浓度依赖的方式;显微镜下观察到典型的凋亡形态变化和生化特征:细胞固缩,核染色质凝聚,出现凋亡小体;AO/EB的荧光核染色后,观察到典型的凋亡细胞;流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在G0/G1期。结论IH-901能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制人肝癌BEL-7402细胞的生长,稀有人参皂苷IH-901可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

买麻藤乙醇提取物抗氧化和抑制肿瘤作用的研究

目的 研究买麻藤50%和95%乙醇提取物对小鼠体内抗氧化作用及其对人肝癌BEL-7402细胞、人白血病HL-60细胞的体外抑制活性.方法 D-半乳糖造成实验性衰老小鼠模型,通过定试血清、肝、脑等组织内的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和ATP活性来观察买麻藤乙醇提取物对小鼠抗氧化能力的影响;MTT和SRB法测定买麻藤乙醇提取物对两种癌细胞的体外抑制作用.结果 买麻藤乙醇提取物对衰老小鼠各组织中的SOD、CAT、ATP活性都有明显升高;买麻藤乙醇提取物在质量浓度为1 mg/mL时,对BEL-7402细胞株的抑制活性最高为89.6%;在质量浓度为0.063 mg/mL时,对HL-60细胞株的抑制活性最高为87.0%.结论 买麻藤50%和95%乙醇提取物具有较好的小鼠体内抗氧化作用和体外抑制HL-60和BEL-7402肿瘤细胞生长的作用.     

生长激素促进体外培养的Bel-7402肝癌细胞增殖

【目的】了解重组人生长激素（rhGH）对体外培养的Bel-7402肝癌细胞增殖的影响。【方法】应用放射性配体法了解GHR在Bel-7402肝癌细胞株的表达情况;采用肿瘤细胞计数、噻唑蓝比色法和集落形成实验了解Bel-7402肝癌细胞株在不同浓度rhGH（0、1、10、100、1000、10000ng／mL）作用下的药物敏感性,计算细胞生长率,集落形成率;并用,H—TdR渗入法了解肿瘤细胞DNA代谢情况。【结果】放射配体法发现Bel-7402肝癌细胞表达GHR,rhGH对体外培养的7402肝癌细胞的生长具有一定程度的刺激作用,表现为rhGH在100ng／mL的浓度时促进肝癌细胞的增殖较为显著,而rhGH在其它浓度时（1、10、1000、10000ng／mL）的部分时段,对肝癌细胞的增殖虽也能表现出一定程度的促进作用,但总体效果较rhGH在100ng／mL浓度时为弱。【结论】一定浓度范围的rhGH对7402肝癌细胞的增殖有促进作用,原因可能与7402肝癌细胞表达GHR有关。