DNA甲基转移酶在肝癌中的表达及其临床意义

目的 探讨DNA甲基转移酶(DNMTs)在肝癌中的表达及其临床意义.方法 收集2007年7月至2008年4月中山大学附属第一医院行根治性切除的50例肝癌患者的肝癌组织、癌旁组织、肝硬化组织和慢性肝炎组织.采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测肝癌组织及癌旁组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA与蛋白表达水平,采用配对t检验和Mann-Whitney U检验比较肝癌组织与癌旁组织,肝硬化组织与慢性肝炎组织DNMTs mRNA表达的差异,x2检验和Fisher确切概率法分析肝癌组织DNMTs蛋白表达与临床病理因素的相关性,Kaplan-Meier法分析患者无瘤生存时间,不同患者无瘤生存时间的比较采用Log-rank检验.结果 肝癌组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA的表达水平分别为癌旁组织的2.57、2.29和4.86倍(t=3.94,2.72,4.06,P＜0.05).肝癌组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA的表达分别是肝硬化组织和慢性肝炎组织的2.38、2.14、4.66倍和6.12、4.58、12.99倍.DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA在肝癌组织的表达显著高于其在肝硬化组织和慢性肝炎组织中的表达(U=587.5、730.0、562.5,65.5、64.5、71.0,P＜0.05).DNMT1蛋白表达与肿瘤大小、数目、有无血管侵犯、TNM分期有关(x2=5.24,4.08,4.08,14.13,P＜0.05);DNMT3a蛋白表达与肿瘤大小、数目、TNM分期有关(x2=4.08,5.95,4.08,P＜0.05).DNMT1和DNMT3a低表达者平均肿瘤复发时间分别为9.4个月和8.7个月,显著长于高表达者的5.0个月和3.2个月,两者比较,差异有统计学意义(x2=3.89,9.91,P＜0.05).结论 DNMTs在肝癌发生、发展中起重要作用;DNMT1与DNMT3a高表达与肿瘤切除术后复发密切相关,可望成为肝癌预后的重要预测因子.

Abstract：

Objective To investigate the expression of DNA methyltransferases (DNMTs) in liver cancer and its clinical significance. Methods The specimens of liver cancer tissues, adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues were collected from 50 patients who received radical resection at the First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University from July 2007 to April 2008. The mRNA and protein expressions of DNMT1,DNMT3a and DNMT3b in liver cancer tissues, adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues were detected by real-time quantitative PCR and immunohistochemical staining. The mRNA expression of DNMTs in the liver cancer tissues was compared with those in the adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues by using t test and Mann-Whitney U test. The correlation between the protein expression of DNMTs in the liver cancer tissue and the clinicopathological features was analyzed by chi-square test or Fisher exact test, and the tumor-free survival time was analyzed by using Kaplan-Meier method and the difference in tumor-free survival rate between different patients was analyzed by Log-rank test. Results The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b in the liver cancer tissue were 2.57, 2.29 and 4.86 times higher than those in the adjacent tissues (t = 3.94, 2. 72, 4. 06, P ＜ 0.05 ). The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b were 2.38,2.14 and 4.66 times higher than those in the cirrhotic tissues, and 6.12, 4.58 and 12.99 times higher than those in the chronic hepatitis tissues. The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b in the liver cancer tissue were significantly higher than those in the cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues ( U = 587.5,730. 0,562.5; 65.5, 64.5, 71.0, P ＜ 0.05). The protein expression of DNMT1 was correlated with the size, number,TNM stages and vascular invasion of tumors ( x2 = 4.08, 5.95, 4.08, P ＜ 0.05 ). The protein expression of DNMT3a was correlated with the size, number and TNM stages of tumors (x2 = 4.08, 5.95, 4.08, P ＜ 0.05 ).The mean tumor recurrence time of patients with low expressions of DNMT1 and DNMT3a were 9.4 and 8.7 months, which were significantly longer than 5.0 and 3.2 months of those with high expressions of DNMT1 and DNMT3a (x2 =3.89, 9.91, P＜0.05). Conclusions DNMTs play an important role in hepatocarcinogenesis.High expressions of DNMT1 and DNMT3a are correlated with the postoperative recurrence of liver cancer, which are valuable prognostic factors for liver cancer.     

DNA甲基转移酶在肝癌中的表达及其临床意义

Objective To investigate the expression of DNA methyltransferases (DNMTs) in liver cancer and its clinical significance. Methods The specimens of liver cancer tissues, adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues were collected from 50 patients who received radical resection at the First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University from July 2007 to April 2008. The mRNA and protein expressions of DNMT1,DNMT3a and DNMT3b in liver cancer tissues, adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues were detected by real-time quantitative PCR and immunohistochemical staining. The mRNA expression of DNMTs in the liver cancer tissues was compared with those in the adjacent tissues, cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues by using t test and Mann-Whitney U test. The correlation between the protein expression of DNMTs in the liver cancer tissue and the clinicopathological features was analyzed by chi-square test or Fisher exact test, and the tumor-free survival time was analyzed by using Kaplan-Meier method and the difference in tumor-free survival rate between different patients was analyzed by Log-rank test. Results The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b in the liver cancer tissue were 2.57, 2.29 and 4.86 times higher than those in the adjacent tissues (t = 3.94, 2. 72, 4. 06, P ＜ 0.05 ). The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b were 2.38,2.14 and 4.66 times higher than those in the cirrhotic tissues, and 6.12, 4.58 and 12.99 times higher than those in the chronic hepatitis tissues. The mRNA expressions of DNMT1, DNMT3a and DNMT3b in the liver cancer tissue were significantly higher than those in the cirrhotic tissues and chronic hepatitis tissues ( U = 587.5,730. 0,562.5; 65.5, 64.5, 71.0, P ＜ 0.05). The protein expression of DNMT1 was correlated with the size, number,TNM stages and vascular invasion of tumors ( x2 = 4.08, 5.95, 4.08, P ＜ 0.05 ). The protein expression of DNMT3a was correlated with the size, number and TNM stages of tumors (x2 = 4.08, 5.95, 4.08, P ＜ 0.05 ).The mean tumor recurrence time of patients with low expressions of DNMT1 and DNMT3a were 9.4 and 8.7 months, which were significantly longer than 5.0 and 3.2 months of those with high expressions of DNMT1 and DNMT3a (x2 =3.89, 9.91, P＜0.05). Conclusions DNMTs play an important role in hepatocarcinogenesis.High expressions of DNMT1 and DNMT3a are correlated with the postoperative recurrence of liver cancer, which are valuable prognostic factors for liver cancer.     

反义调控DNA甲基转移酶1基因对人胆管癌细胞生长的抑制效应

目的观察转染反义DNMT1基因真核表达载体对人胆管癌细胞QBC-939生长的影响,初步探讨DNMT1基因在胆管癌发生中的表遗传学机制。方法将构建好的反义DNMT1基因真核表达载体用脂质体介导法转入人胆管癌细胞QBC-939,Western blot检测转染前后DNMT1蛋白的表达变化,MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的生长增殖能力,流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化。结果（1）Western blot检测证实转染反义基因能使DNMT1蛋白表达水平降低;（2）转染反义DNMT1基因能抑制QBC-939的生长曲线,并使其软琼脂克隆形成率从（38．020±4．120）％减少至（14．860±2．129）％,差异有显著性意义（P=0．000）;（3）转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从（1．63±0．27）％增加到（6．19±0．78）％,差异亦有显著性意义（P=0．000）。结论通过转染反义DNMT1基因真核表达载体,可下调DNMT1在QBC-939细胞中的表达水平,并能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,促进凋亡的发生,提示DNMT1可能通过甲基化途径与胆管癌的发生有关。     

DNA甲基转移酶在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)、3a(DNMT3a)和3b(DNMT3b)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学检测47例HCC癌组织、42例HCC癌旁肝组织及12例正常肝组织中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达情况,分析三者与临床病理特征的关系.结果 DNMT1、DNMT3a和DNMT3b在HCC中阳性表达率分别为80.9％、68.1％和78.7％,在癌旁组织内分别为50.0％、52.4％和57.1％,均明显高于正常肝组织内的阳性表达(16.7％、16.7％和25.0％).而且DNMT1、DNMT3a和DNMT3b与HCC的病理分化类型及乙肝表面抗原阳性显著相关(P＜0.05).结论 DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的异常表达与HCC的发生发展有紧密的关系.     

膀胱癌中DNA甲基转移酶1表达的实时定量检测

目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMTl)mRNA在膀胱移行细胞癌中的表达水平及其临床意义.方法 膀胱癌手术标本35例.男29例,女6例.年龄24～88岁,平均68岁.初发28例,复发7例.病理分级:G1 12例,G2 14例,G3 9例.临床分期非浸润性膀胱癌(Tis～T1)11例,浸润性膀胱癌(T2～T4)24例.以SYBR green为信号标记,应用实时荧光定量PCR法检测35例膀胱癌组织及10例正常膀胱黏膜中DNMT1 mRNA的表达.结果膀胱癌中DNMT1 mRNA的表达(3.25±0.74)明显高于正常膀胱黏膜(1.53±0.44,P＜0.001).非浸润性膀胱癌标本DNMT1 mRNA表达值为3.14±0.67、浸润性膀胱癌为3.31±0.84(P＞0.05).G1～G3膀胱癌组织DNMT1 mRNA表达值分别为3.13±0.59、3.25±0.64、3.43±0.55,各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).＞40岁患者表达值(3.34±0.50)高于≤40岁者(3.01±0.27),差异有统计学意义(P＜0.05).男性患者表达值(3.31±0.42)高于女性患者(3.01±0.20),差异有统计学意义(P＜0.05).复发者表达值(3.45±0.33)高于初发者(3.21±0.63),但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DNMT1过表达与膀胱癌关系密切,可能足抑癌基因启动子区CpG岛DNA甲基化修饰频率大大提高的原因,导致基因失活,从而参与膀胱癌的发生发展.     

DNA甲基转移酶在肝门部胆管癌中的表达及临床意义

目的 探讨DNA甲基转移酶(DNMTs)在肝门部胆管癌中的表达及其临床意义.方法 收集1997年4月至2007年3月中山大学附属第一医院收治的111例肝门部胆管癌患者(胆管癌组)和39例胆总管囊肿患者(对照组)胆管组织标本,构建组织芯片,采用免疫组织化学方法检测DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的蛋白表达水平;比较胆管癌组与对照组的胆管组织中DNMTs蛋白表达的差异;分析肝门部胆管癌组织中DNMTs蛋白表达与临床病理因素的关系,计数资料的比较采用x2检验或Fisher确切概率法,Kaplan-Meier法绘制生存曲线,生存情况分析采用Log-rank检验.结果 胆管癌组的DNMT1和DNMT3b高表达率分别为54.1％ (60/111)和47.7％ (53/111),显著高于对照组的28.2％ (11/39)和23.1％ (9/39),两组比较,差异有统计学意义(x2=7.740,7.240,P＜0.05).DNMT1的高表达与Bismuth-Corlette分型、T分期存在明显相关性(x2=12.200,17.800,P＜0.05);而DNMT3a在胆管癌组和对照组的高表达率比较,差异无统计学意义(x2=3.370,P＞0.05);DNMT3b的高表达则只与Bismuth-Corlette分型存在明显相关性(x2=8.300,P＜0.05).111例患者中66例行肝门部胆管癌切除术,其中42例获得随访.DNMT1低表达者的术后中位生存时间为23.9个月,明显长于DNMT1高表达者的11.8个月(x2=3.980,P＜0.05).结论 DNMT1和DNMT3b高表达在肝门部胆管癌发生、发展中起重要作用;DNMT1的表达水平与肝门部胆管癌根治性切除术后生存时间明显相关,可望成为有价值的预测因子.     

人精子DNA从头甲基化转移酶及甲基CpG结合蛋白的mRNA表达分析

目的 通过体外分离成熟的精子,利用实时荧光定量PCR(qRealTime-PCR)检测其是否表达DNA从头甲基化转移酶(DNMT1/3a/3b)及甲基CpG结合蛋白(MeCP2),为精子中甲基化表观修饰研究提供依据.方法 体外采集健康男性志愿者的精液标本,利用精子上游收集法获得具有活性的成熟精子.通过SYBR Green/PI双染色法,利用流式细胞术(FCM)检测精子样本的质膜完好性及其活性.抽提精子的总RNA,逆转录PCR获得cDNA,利用qRealTime-PCR鉴定精子甲基化转移酶及甲基CpG结合蛋白的mRNA表达情况.结果 SYBR Green/PI双染色和流式细胞仪检测发现,利用上游收集法可以收集SYBR Green /PI-的精子占总精子数的(94.513±1.120)%,表明该方法可以收集到质膜完好且活性强的精子.qRealTime-PCR结果显示,此样本精子中DNA从头甲基化转移酶的表达比较明显,而甲基CpG结合蛋白的表达量相当低.其中DNMT1的mRNA表达量较高(0.272±0.045,P＜0.05),DNMT3a和DNMT3b的表达水平比较弱[(4.930±0.01)E-006,(6.500±1.7)E-005,P＜0.05],而MeCP2几乎不表达[(2.12±0.91)E-006,p＜0.05].结论 利用qRealTime-PCR可以比较快速方便的检测出此次精子样本中DNA从头甲基化转移酶和甲基CpG结合蛋白的mRNA表达水平.     

膀胱癌DNA甲基转移酶1、3a、3b基因的表达

目的探讨DNA甲基转移酶(DNMT)1、3a、3b mRNA在膀胱癌组织中的表达及其意义.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测DNMT1、3a、3b mRNA在40例人膀胱癌组织及31例人正常膀胱粘膜组织中的表达.结果膀胱癌组织中DNMT1、3b表达的阳性率、表达值均高于正常对照组(P＜0.05);DNMT3a的表达与对照组相比,差异无显著性(P＞0.05);3种基因的表达率与表达值在不同肿瘤分级、分期、生长方式及原发肿瘤与复发肿瘤之间差异无显著性(P＞0.05);DNMT1与DNMT3b表达值明显相关(P＜0.01).结论DNMT1、3b表达升高是膀胱癌形成、发展中的早期、普遍事件,可作为早期诊断和复发监测的有效指标,DNMT1与DNMT3b的表达可能存在共同调节机制.     

DNA甲基化在膀胱癌中的研究进展

DNA甲基化是膀胱癌中的一种常见现象,它与膀胱癌的发生发展有着密切的关系,在膀胱癌组织中和尿沉渣中均能检测到DNA甲基化现象。DNA甲基化导致基因沉默,从临床角度来看抑癌基因的甲基化是非常有意义的,因为其可以被去甲基化药物逆转并恢复基因的功能。本文就DNA甲基化在膀胱癌中的研究进展作一综述。     

DNA甲基转移酶在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用

目的评价DNA甲基转移酶在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用。方法健康雄性C57BL/6小鼠48只, 6～8周龄, 体重20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(Sham组)、假手术+DNA甲基转移酶抑制剂组(Sham+5-Aza组)、脓毒症组(Sepsis组)和脓毒症+DNA甲基转移酶抑制剂组(Sepsis+5-Aza组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型。于CLP后24 h时处死小鼠取肺组织, 提取DNA利用比色法测定全基因组DNA甲基化水平, 提取RNA采用实时荧光定量PCR法检测DNA甲基转移酶(DNMTl、DNMT3a、DNMT3b)的mRNA表达, 确定肺湿重/干重比值, HE染色观察肺组织病理学结果, 采用ELISA法测定IL-6、TNF-α、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、MDA含量、SOD和过氧化氢酶(CAT)活性。结果与Sham组比较, Sepsis组和Sepsis+5-Aza组小鼠CLP后24 h时肺组织全基因组甲基化水平升高, DNMT1和DNMT3a的mRNA表达上调, 肺组织病理学损伤评分和肺湿重/干重比值升高, ...     

DNA甲基化与胃癌抑癌基因研究进展

DNA甲基化是基因表达调控的一种方式,抑癌基因启动子高甲基化可以使其表达失活,最后导致肿瘤发生。胃癌的发生与多基因异常表达密切相关,其中抑癌基因甲基化是胃癌发生、发展的重要机制之一。     

DNA甲基化在肝脏再生中的研究现状与展望

目的总结目前DNA甲基化与肝脏再生关系的研究现状。方法检索国内外相关文献,对肝细胞甲基化水平、基因表达调控、甲基化相关蛋白与肝脏再生关系的研究进行综述。结果 DNA甲基化作为生物体内一种重要的表观遗传调控方式,近年来在肝脏再生中的作用越来越被重视。现有的研究已经发现,在肝脏再生过程中存在基因组低甲基化、相关增殖基因甲基化改变以及DNA甲基化转移酶、含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1调控肝脏再生等表观遗传现象。结论 DNA甲基化与肝脏再生之间存在着诸多的联系,从DNA甲基化水平调节肝脏再生有望在不久的将来成为现实。     

乳腺癌基因甲基化的研究进展

乳腺癌的发生的分子机制仍然不明确。研究显示表观遗传学改变（Epigenetics）所导致的基因表达异常也是乳腺癌发生、发展的重要原因。表观遗传学改变是基因的核苷酸序列不发生改变的情况下基因表达的可遗传的变化,包括DNA甲基化、组蛋白乙酰化、染色质重塑、基因组印记以及非编码RNA等。乳腺腺的DNA甲基化是常见的分子事件,具有独特的DNA甲基化特征,既往的研究发现DNA甲基化可以作为乳腺癌早期诊断、分型、监测药物治疗效果和预后的分子标志物。本文将对DNA甲基化在乳腺癌的研究进展进行综述。     

DNA甲基化与肝细胞癌

肝细胞癌是原发性肝癌的主要类型,也是常见的恶性肿瘤之一,具有较高的发病率和病死率。然而在分子和细胞水平,肝癌的发病机制仍然不清楚。一般来说,肿瘤形成通常被认为是抑癌基因失活或原癌基因激活致DNA突变而诱导人类正常细胞向恶性细胞转化的过程。近年来随着对肿瘤研究的不断深入,人们发现表观遗传学改变与肝癌发生发展密切相关。其中DNA甲基化是人类基因组发生最为常见的一种表观遗传学事件,也是表观遗传学研究最为深入的一种机制。本文将就DNA甲基化在肝癌中的研究进展作一综述。     

DNA甲基化与胆囊癌

DNA甲基化是真核生物的正常修饰方式,异常的DNA甲基化与肿瘤的发生发展密切相关,具有重要生物学意义.胆囊癌中肿瘤相关基因启动子的异常甲基化,作为表观遗传标记物,在胆囊癌的发病、诊治、疗效观察及预后判断等方面可能发挥重要作用.     

腺瘤性息肉病基因DNA甲基化在食管癌患者肿瘤组织及血浆中的表达

目的 探讨食管鳞癌患者肿瘤组织及外周血游离DNA中腺瘤性息肉病（APC）基因甲基化状态与临床病理特征的关系．以及外周血APC甲基化围手术期的动态变化。方法应用实时定量MSP技术检测76例食管鳞癌患者肿瘤组织、配对的癌旁正常组织以及术前1d、术中及术后7d外周血游离DNA中APC基因的甲基化状态。选取60名年龄性别配对的健康志愿者外周血浆DNA作对照。结果食管鳞癌患者肿瘤组织及外周血游离DNA中APC基因甲基化率分别44．74％（34／76）和42．11％（32／76）,明显高于癌旁组织及健康对照组[（6．58％（5／76）和1．67％（1／60）,均P=0．000]。APC基因甲基化率在外周血与肿瘤组织中具有良好的一致性,其ROC曲线Youden指数为0．849（P=0．000）。APC基因甲基化分别与患者病理分期、淋巴结转移、浸润深度及神经脉管浸润有关（P〈0．05）：家族肿瘤史是与外周血游离DNA中APC甲基化有关的独立因素（P〈0．05）。术前、术中、术后血浆中DNA甲基化发生率呈现先升后降的变化趋势。结论食管鳞癌患者外周血游离DNA中APC甲基化率可反映肿瘤进展状态．并随肿瘤实体的摘除而下降。