有丝分裂蛋白激酶及其上游调节信号在人肝癌组织中的表达

目的探讨有丝分裂原蛋白激酶(MAPK)通路在调控细胞的增殖和凋亡过程中所起到的作用.方法手术切除16份肝癌及癌旁组织标本,Western印迹检测ERK1、ERK2、JNK1、p38和MEK1、MEK2的蛋白含量.结果在本组的16例患者中,每例患者肝癌组织中的ERK1、ERK2、JNK1、p38蛋白表达显著高于癌旁组织,ERK1积分光密度值(Integral optic density IOD)在肝癌和癌旁组织中分别为300±98和98±48,差异有显著意义(P＜0.01).ERK2的IOD值在肝癌和癌旁组织中分别为587±83和232±96,差异有显著意义(P＜0.01);p38的IOD值在肝癌和癌旁组织中分别为270±85和107±88,差异有显著意义(P＜0.01);肝癌组织中的JNK1蛋白表达显著低于癌旁组织;JNK1的IOD值在肝癌和癌旁组织中分别为111±93和292±109,差异有显著意义(P＜0.01);MEK1、MEK2蛋白表达显著高于癌旁组织,MEK1的IOD值在肝癌和癌旁组织中分别为1418±244和806±90,差异有显著意义(P＜0.01),MEK2的IOD值在肝癌和癌旁组织中分别为1041±122和468±40,差异有显著意义(P＜0.05).结论在肝癌组织中细胞分裂增殖的信号传导通路ERK1、ERK2、MEK1、MEK2激酶处于高表达,JNK1激酶在肝癌组织中处于低表达,它们的失衡导致肝癌细胞生长失控和无限增殖的重要原因之一.JNK1和p38在肝癌组织中可能存在不同的激活途径.     

有丝分裂蛋白激酶及其上游调节信号在人肝癌组织中的表达

目的本研究检测了肝癌和癌旁肝组织中ERK1、ERK2、JNK1、p38及其上游MEK1、MEK2的蛋白表达量.方法手术切除16例肝癌及癌旁肝组织标本,Western印迹检测ERK1、ERK2、JNK1、p38和MEK1、MEK2蛋白含量.结果每例患者肝癌组织中ERK1、ERK2、p38蛋白表达显著高于癌旁肝组织,在肝癌和癌旁肝组织中ERK1积分光密度值(integralopticdensity,IOD)分别为300±98和98±48(P＜0.01);ERK2的IOD值分别为587±83和232±96(P＜0.01);p38的IOD值分别为270±85和107±87(P＜0.01);JNK1的IOD值分别为111±93和292±109(P＜0.01);肝癌组织中JNK1蛋白表达显著低于癌旁肝组织,MEK1、MEK2蛋白表达显著高于癌旁肝组织,MEK1的IOD值在肝癌组织中JNK1蛋白表达显著低于癌旁肝组织,分别为1*!418±244和805±90(P＜0.01),MEK2的IOD值分别为1*!041±122和468±40(P<0.005).结论在肝癌组织中细胞分裂增殖的信号传导通路ERK1、ERK2、p38、MEK1、MEK2激酶处于高表达,JNK1激酶在肝癌组织中处于低表达,它们的失衡是导致肝癌细胞生长失控和无限增殖的重要原因之一.     

mTOR基因在人肝癌组织中的表达

目的 观察人肝癌组织哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因的表达.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测10例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中mTORmRNA的相对表达量,并采用Western blot检测上述组织中mTOR蛋白产物表达.结果 90%(9/10)的肝癌组织中mTOR mRNA和蛋白表达增强,而癌旁组织中80%(8/10)该基因表达缺失和蛋白表达减少,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 中晚期肝癌中mTOR表达处于活化状态,可能在肝癌的发生、发展过程中发挥重要作用.     

利用组织芯片技术研究酪氨酸蛋白激酶在肝癌组织中的表达及意义

目的 观察酪氨酸蛋白激酶ERK、P38、C-jun、JAK2、STAT3、STAT5在肝癌组织中的表达及相互关系,探讨酪氨酸蛋白激酶表达与肝癌病人临床特征之间的关系.方法 收集原发性肝癌手术切除标本30例,制作组织芯片,以肝硬化组织作对照,采用免疫组化SP法研究酪氨酸蛋白激酶ERK、P38、C-jun、JAK2、STAT3、STAT5在肝癌组织与肝硬化组织中的表达.结果 ERK、P38、C-jun、JAK2、STAT3、STAT5在肝癌组织中的表达平均光密度值分别为(0.220±0.033,0.174±0.024,0.183±0.064,0.192±0.044.0.197±0.078,0.181±0.066),显著高于肝硬化组(0.065±0.028,0.058±0.028,0.042±0.016,0.070±0.030,0.052±0.024,0.052±0.023,P＜0.01).ERK与C-jun、JAK2、STAT3、STAT5在肝癌组织中表达呈显著正相关,(P＜0.01或P＜0.05),与P38呈显著负相关(r=0.404,P＜0.05).JAK2的过度表达与肝癌组织中细胞的分化程度有关,在低分化肝癌组织中表达显著率高于高中分化肝癌组织.结论 MAPK和JAK-STAT通路的过度活化在肝癌发生发展过程中起重要作用,细胞信号转导系统失去正常的协调平衡可能是导致肿瘤发生的重要原因.     

死亡相关蛋白激酶在甲状腺乳头状癌中的表达及其意义

目的 观察死亡相关蛋白激酶(DAPK)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达,探讨DAPK在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用.方法 采用免疫组织化学SP法和Western blot免疫印迹法检测甲状腺乳头状癌42例、癌旁组织42例(正常甲状腺组织21例和结节性甲状腺肿21例).免疫组织化学SP法检测蛋白表达位置,Western检测蛋白表达的差异.结果 免疫组织化学结果显示DAPK基因表达于细胞质及胞膜,癌旁组织中表达率73.81%(31/42)高于癌组织40.48%(17/42).Western结果显示甲状腺乳头状癌组织中DAPK阳性表达率为35.71%(15/42),癌旁组织中为66.67%(28/42),癌旁组织的表达显著高于癌组织(χ~2=8.052,P＜0.01).淋巴结癌转移阳性的癌组织DAPK阳性表达率17.65%(3/17)低于淋巴结转移阴性的病例48.00%(12/25),(χ~2=4.061,P＜0.05).DAPK的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小情况无明显相关(P＞0.05).结论 DAPK参与细胞凋亡,其低表达或不表达可能参与了甲状腺乳头状癌的发生发展过程.     

Twist基因在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的探讨转录因子Twist在人肝细胞肝癌、癌旁和肝硬化组织中的表达及其意义。方法利用免疫组化方法检测26例肝细胞肝癌标本（癌和癌旁组织）和10例肝硬化标本中Twist的表达情况;利用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western蛋白印迹方法检测其中10例标本中的Twist mRNA和其蛋白的表达情况,分析其临床病理意义。结果免疫组化显示：Twist蛋白在肝癌、癌旁和肝硬化组织中的阳性率分别为84．6％、19．2％和20．0％,Twist在肝癌组织中的表达明显强于癌旁或肝硬化组织（P〈0．05）;大多数癌旁和肝硬化组织无Twist表达,癌旁与肝硬化组织相比阳性率无差别（P〈0．05）。与癌旁组织相比,Twist mRNA和其蛋白在肝癌组织中表达明显上调（P〈0．05）。结论Twist在肝细胞肝癌组织中的过高表达与肝癌的发生发展相关。     

人肝癌组织中血小板活化因子的表达及其临床意义

目的 观察人肝癌组织血小板活化因子(PAF)的表达.方法 应用免疫组织化学染色法检测PAF在10例晚期肝癌及其癌旁正常组织中的分布,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析PAF受体mRNA表达水平.结果 90%(9/10)的肝癌组织中PAF受体mRNA和PAF表达增强,而癌旁组织中80%(8/10)PAF受体mRNA和PAF表达减少,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 中晚期肝癌中PAF表达增强,可能在肝癌的发病过程中发挥重要作用.     

CD95、JNK1、JNK2和c-Jun在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨CD95和JUK因子在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义。方法采用免疫组化方法检测CD95、JNK1、JNK2和c-Jun蛋白在58例肝癌组织及其对应的癌旁肝组织中的表达水平。结合肝癌临床病理指标分析相关性。结果 CD95、JNK1、JNK2和c-Jun蛋白在癌旁肝组织中的阳性表达率为74.1%(43/58)、72.4%(42/58)、67.2%(39/58)、79.3%(46/58),高于在癌组织中的阳性表达率25.9%(15/58)、27.6%(16/58)、32.8%(19/58)20.7%(12/58),差异均具有统计学意义(P0.05);CD95蛋白的表达与JNK1(r=0.693,P=0.013)、JNK2(r=0.357,P=0.007)和c-Jun(r=0.670,P=0.021)蛋白的表达呈正相关。CD95、JNK1、JNK2和c-Jun蛋白表达水平和肝癌分化程度呈负相关(分别为r=-0.516,P=0.003;r=-0.364,P=0.006;r=-0.383,P=0.004;r=-0.508,P=0.003)。与性别、年龄、结节数目和有无肝硬化无关(P0.05)。结论 CD95蛋白肝癌组织中的表达下调,通过下游重要信号传导分子JNK1、JNK2和c-Jun的表达,导致肝癌细胞增殖和免疫逃逸是肝癌发生发展的重要分子机制。     

Pokemon在肝细胞癌及癌旁、癌以远组织、肝硬化组织及正常肝组织中的表达

目的检测和分析Pokemon在肝细胞癌及癌旁组织、癌以远组织、肝硬化组织及正常肝组织中的表达。方法40例肝癌组织、距癌组织1cm以上的癌旁组织、距癌组织5 cm以上癌以远组织取自肝细胞癌合并乙型肝炎后肝硬化行肝移植患者切除病肝。20例肝硬化组织取自肝硬化行断流手术患者。20例正常肝组织取自健康供体标本。用real-time PCR(实时定量PCR,RT- PCR)法检测Pokemon蛋白mRNA在这些组织中的表达。结果肝癌组织、癌旁组织的Pokemon蛋白tuRNA的表达水平显著高于癌以远组织、肝硬化组织、正常肝组织(P<0.05)。肝癌组织与癌旁组织则差异无统计学意义(P>0.05)。癌以远组织、肝硬化组织及正常肝组织之间差异也无统计学意义(P>0.05)。结论Pokemon在肝细胞癌中存在异常高表达。癌旁组织可能存在着亦有Poke- mon蛋白mRNA高表达的的癌前病变。癌以远组织、肝硬化组织Pokemon蛋白mRNA表达水平与正常肝组织差异无统计学意义。     

活化蛋白激酶在骨肉瘤中的表达及其意义

[目的]探讨细胞分裂素活化蛋白激酶（MAPK）中细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、c-jun氨基末端激酶（JNK）、P38三条通路在骨肉瘤发生中的作用。[方法]用免疫组织化学技术EnVision^TM法检测48例骨肉瘤标本及25例成骨性良性肿瘤标本中ERK、JNK、P38蛋白的表达，并比较他们的差异。[结果]ERK、JNK、P38三种蛋白在骨肉瘤组的阳性率分别为83．3％（40／48），72．9％（35／48）和85．4％（41／48），在成骨性良性肿瘤组中的阳性率分别为16．0％（4／25），12．0％（3／25）和20．0％（5／25），骨肉瘤组织中ERK、JNK、P38蛋白阳性率及阳性强度均明显高于成骨性良性肿瘤（P〈0．01）。[结论]MAPK中ERK、JNK、P38三条通路在骨肉瘤发生中均发挥了重要作用，用免疫组织化学方法检测MAPK，可为临床骨肉瘤与良性骨肿瘤的诊断与鉴别诊断提供参考指标。     

下游调控元件拮抗调节子基因在人肝癌组织中的表达及其意义

目的 观察人肝癌组织下游调控元件拮抗调节子(DREAM)的表达.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测10例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中DREAMmRNA基因的相对表达量,并采用免疫组织化学法检测DREAM在上述组织中的表达情况.结果 80%(8/10)的肝癌组织中DREAM表达缺失,而癌旁组织中仅30%(3/10)该基因表达缺失,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 中晚期肝癌中DREAM表达处于失活状态,可能在肝癌的发生、发展过程中发挥重要作用.     

PI3Kp110beta和前强啡肽在人肝癌组织中的表达

目的 观察人肝癌中磷脂酰肌醇激酶-3(PI3K)p110beta和前强啡肽的表达.方法 应用半定量逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测10例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中PI3Kp110beta和前强啡肽mRNA基因的相对表达量.结果 PI3Kp110beta和前强啡肽在中晚期肝癌中的表达高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(90%比10%;80%比20%,P<0.05).结论 中晚期肝癌中PI3Kp110beta和前强啡肽处于过度表达状态,参与肝癌的发生、发展.     

人乳腺癌组织中血小板活化因子的表达及临床意义

目的 观察人乳腺癌组织血小板活化因子(PAF)的表达.方法 应用免疫组织化学染色检测PAF在10例晚期乳腺癌及其癌旁正常组织中的分布和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析PAF受体mRNA表达水平.结果 90%(9/10)的乳腺癌组织中PAF受体mRNA和PAF表达增强,而癌旁组织中80%(8/10)PAF受体mRNA和PAF表达减少,两者差异有统计学意义(P<0.05).结论 中晚期乳腺癌中PAF表达增强,可能在乳腺癌的发病过程中发挥作用.     

肝细胞癌抗原基因在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的　探讨肝细胞癌抗原 (HCA)基因mRNA在肝细胞癌 (HCC)组织中的表达。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法对HCC患者的癌组织和相应癌旁组织及肝硬化和正常肝组织中的 4种HCAmRNA的表达进行检测 ;结合临床病理资料进行分析。　结果　 46例HCC患者中 ,HCA90、HCA51 9、HCA52 0、HCA587基因mRNA阳性率分别是 65 2 %、76 1 %、45 7%和 32 6 % ;至少表达一种HCA者达 82 6 % ;而癌旁组织中仅HCA51 9基因有 6 5 %mRNA表达为阳性。 1 0例肝硬化和正常肝组织中 4种HCA基因均不表达。 4种HCA的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清AFP水平、HBV和HCV感染无显著相关性 (P >0 0 5)。在部分AFP正常的患者中存在HCA基因的表达。　结论　HCA基因在HCC中呈高比例、高特异性表达 ,为HCC免疫治疗提供了新的潜在靶位     

细胞外信号调节激酶及应激活化蛋白激酶通路蛋白在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达

目的通过比较瘢痕疙瘩及正常皮肤中细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、应激活化蛋白激酶(c-Jun amino-terminal kinase,JNK)信号通路的表达,探讨其在瘢痕疙瘩形成中的作用。方法取四川大学华西医院烧伤整形科收治的26例患者皮肤组织,其中行瘢痕疙瘩切除患者(实验组)16例,瘢痕疙瘩形成时间8个月～10年;胸部6例,耳垂4例,会阴部2例,肩部3例,腹部1例;均经病理检查确诊为瘢痕疙瘩。10例整形手术患者自愿捐赠的正常皮肤作为对照组,腹部4例,大腿3例,肩部2例,背部1例。取标本采用Envision二步法行免疫组织化学染色,观察磷酸化及非磷酸化JNK和ERK表达情况,并采用Image Pro Plus 4.5图像分析系统测定积分吸光度(IA)值,观察阳性染色强度。结果免疫组织化学染色观察显示,对照组正常皮肤成纤维细胞中未见明显的磷酸化及非磷酸化ERK、JNK阳性表达;而实验组主要在成纤维细胞中表达,阳性颗粒主要位于细胞质和细胞核内。实验组磷酸化ERK及JNK的IA值明显高于对照组(P<0.05),非磷酸化ERK及JNK两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论磷酸化JNK、ERK信号通路蛋白在瘢痕疙瘩中异常高表达,提示该通路可能与瘢痕疙瘩形成密切相关。     

CT9和CT10基因在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的检测肿瘤睾丸抗原CT9和CT10基因mRNA在肝细胞癌（HCC）中的表达情况。方法用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法对HCC病人的癌组织和相应癌旁组织及对照（肝硬化和正常肝组织）中CT9和CT10mRNA的表达进行了检测,随机选取每一种抗原RT-PCR呈阳性的产物4例进行DNA序列测定,结合AFP、抗HCV、HgsAg、肿瘤直径、分化程度等临床指标进行分析。结果56例HCC病人中,CY9、CT10基因mRNA阳性率分别是51．8％（29／56）和44．6％（25／56）,至少表达一种CTA者达66．1％（37／56）,表达两种者为30．4％（17／56）;电泳显示PCR产物与阳性对照大小一致;而癌旁组织中仅有CT9基因nRNA表达为阳性,阳性率为7．1％（4／56）,但表达强度明显弱于在癌组织中的表达,进一步的病理检查未发现CY9表达呈阳性的癌旁组织中有癌细胞。所测10例肝硬化和10例正常肝组织均未检测到CT9和CT10的表达。DNA测序结果表明RT-PCR产物确为CT9和CT10cDNA。CT9和CT10的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、AFP水平、HBV和HCV感染无显著相关性（P〉O．05）。而在部分AFP正常（〈25ng／L）HCC病人中存在CT9和CT10基因的表达。结论CT9和CT10基因在HCC中呈高比例、高特异表达,为HCC免疫治疗提供了新的理想靶位;CT9和CT10同时在HCC中表达,为应用以这些肿瘤抗原为基础的多价瘤苗治疗HCC提供了实验依据。     

极化调节蛋白aPKC-ι与cyclin E在肝癌中的表达及意义

目的 探讨细胞极化调节蛋白aPKC-ι与Cyclin E在肝细胞肝癌(HCC)及其癌旁组织中表达情况及关系.方法 采用RT-PCR方法 检测aPKC-ι基冈在9例正常肝、43例HCC及其癌旁组织中的表达}免疫组化检测aPKC-ι,Cyclin E蛋白的表达,对所得结果 进行分类和统计分析.结果 aPKC-ι在HCC中的基因表达值为0.844±0.315,明显高于癌旁0.530士0.217及正常肝组织0.372±0.130(P=0.009);aPKC-ι蛋白在HCC、癌旁组织阳性率分别为58.1%(25/43)、23.6%(10/43),分化程度越低、分级越晚表达越高,表达有显著性差异(P<0.05);Cyclin E蛋白在HCC、癌旁组织阳性率分别为65.1%(28/43)、51.6%(22/43),分化程度越低、分级越晚表达越高,表达有显著性差异(P<0.05);aPKC-ι蛋白的表达与Cyclin E蛋白的表达呈正相关(P<0.05).结论 aPKC-ι和Cyclin E在HCC的表达提示其在HCC侵袭、转移中发挥重要作用;两者在HCC中共表达,为进一步研究肝癌侵袭转移机制提供了理论依据.     

大肠癌中Caspase-8和Caspase-10的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨大肠肿瘤中Caspase-8和Caspase-10的表达及其与细胞凋亡的关系.方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测121例大肠癌、52例腺瘤和121例癌旁组织中Caspase-8和Caspase-10 mRNA表达,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果 与癌旁组织比较,腺瘤中Caspase-8 mRNA表达上调,Caspase-10 mRNA表达下调(P<0.05);大肠癌中Caspase-10 mRNA表达下调(P<0.01),下调程度与肿瘤的分化程度有关(P<0.05).大肠癌、腺瘤和癌旁组织中的凋亡指数分别为1.63%、2.42%和2.98%,各组间差异有统计学意义(P<0.05).大肠癌中凋亡指数与Caspase-10 mRNA表达呈正相关(r=0.408,P<0.01),与Caspase-8mRNA表达无明显相关.结论 Caspase-8 mRNA在腺瘤中表达上调,与肿瘤细胞凋亡无明显相关.Caspase-10与大肠癌的凋亡相关,并与肿瘤恶性程度关系密切.