葛根素抗rds小鼠视网膜光感受器细胞凋亡及其机制探讨

目的 观察葛根素对遗传性视网膜色素变性rds小鼠的治疗作用,并探讨其抗视网膜光感受器细胞凋亡的作用机制.方法 rds新生小鼠随机分为两组,实验组和对照组.实验组小鼠从出生时开始,ip盐酸葛根素80mg/kg,每天2次,至生后35 d,对照组同时ip等量生理盐水.分别在用药后0、3、7、14、21、28、35d取眼球,立即经10%中性甲醛固定,常规病理切片.另取眼球经2.5%戊二醛溶液固定,电镜观察.用TUNEL,方法检测视网膜光感受器细胞的凋亡,用免疫组化方法测定Bcl-2在视网膜的表达.结果 病理结果显示,经葛根素治疗后14、21、28、35 d,rds小鼠光感受器细胞层数与对照组比较,明显增加(P<0.01).电镜结果显示,葛根素治疗组与对照组比较,在7、14、21、28、35 d可减轻rds小鼠光感受器细胞及其外段盘膜部位的线粒体、盘膜和外界膜的破坏.rds小鼠经葛根素药物治疗后3、7、14、21、28、35 d,光感受器细胞的凋亡率与对照组比较明显减少(P<0.01);在7、14、21、28、35 d,Bcl-2在视网膜光感受器细胞基质及其内外段的表达明显增强(P<0.01).结论 葛根素可减轻rds小鼠视网膜光感受器细胞的病变,其作用机制可能是通过上调视网膜光感受器细胞及其内外段Bcl-2的表达延缓rds小鼠视网膜光感受器细胞的凋亡.     

川芎嗪对rd和rds小鼠视网膜光感受器细胞干预作用的光镜观察

目的通过rd和rds小鼠视网膜光感受器细胞的病理变化探讨盐酸川芎嗪对遗传性视网膜色素变性小鼠可能的治疗作用。方法rd和rds新生鼠各84只,随机分为两组,实验组和对照组,每组42只小鼠。实验组小鼠从出生当天开始,ip盐酸川芎嗪80mg/kg,每日2次,至出生后35d;对照组ip等量生理盐水。分别于0d和注射后3、7、14、21、28、35d取眼球,立即经10%中性甲醛固定,光学显微镜下观察水平视网膜近赤道部位光感受器细胞的厚度。结果病理结果显示,经盐酸川芎嗪治疗后14、21、28、35d,与未用药的对照组相比较,rd和rds小鼠光感受器细胞层数明显增加(P<0.01)。结论川芎嗪可延缓rd和rds小鼠视网膜光感受器细胞的破坏。     

温肾活血方对RCS大鼠视网膜感光细胞凋亡的影响

目的观察温肾活血方对RCS大鼠视网膜感光细胞凋亡的影响。方法纯合子RCS大鼠16只在出生后14 d随机分为2组,即模型组、治疗组,每组8只,另8只SD大鼠作为正常对照组。治疗组予温肾活血方灌胃治疗,而模型组及对照组予蒸馏水灌胃治疗,连续治疗28 d。HE染色观察视网膜各层细胞形态和结构的变化,TUNEL荧光染色观察视网膜外核层细胞凋亡情况。免疫组化荧光染色测定视网膜Caspase-3,Bax,Bcl-2的表达。结果(1)HE染色:治疗后28 d,RCS大鼠各组视网膜外核层较对照组明显变薄,感光细胞数量明显减少,但治疗组较模型组视网膜更厚,感光细胞数更多。(2)TUNEL检测:治疗后28 d,RCS大鼠各组视网膜外核层凋亡细胞计数较对照组明显增多,3组间比较差异有显著统计学意义(F=71.58,P=0.000);与模型组比较,治疗组凋亡细胞计数显著减少(t=4.74,P=0.001)。(3)免疫组化:治疗后28 d,3组间比较,视网膜Caspase-3(F=59.37,P=0.000)、Bcl-2(F=31.35,P=0.000)表达水平差异有统计学意义;与模型组比较,治疗组Caspase-3表达显著减少(t=2.36,P=0.040),Bcl-2表达显著增多(t=3.15,P=0.010),均有统计学意义。结论温肾活血方可以抑制RCS大鼠视网膜感光细胞凋亡,其作用可能与抑制Caspase-3的表达并促进Bcl-2的表达有关。     

白蒺藜抗光损伤小鼠光感受器细胞凋亡及保护视网膜功能的研究

目的探讨白蒺藜对光损伤小鼠光感受器细胞凋亡及受损视网膜功能的影响。方法 BALB/c小鼠随机分为正常对照组、光损伤模型组、白蒺藜给药组。暗适应24 h后,白蒺藜给药组腹腔注射白蒺藜水煎液100μl(每20 g体质量100 mg生药),给药后30 min进行光照造模。造模采用白色荧光灯,光强度为10 000 lux,持续照射30 min。正常对照组和光损伤模型组同时腹腔注射等量0.9%NaCl溶液。(1)光照1 d、3 d后,摘取眼球制备冰冻切片,采用TUNEL法标记凋亡的光感受器细胞。(2)光照6 d后采用视网膜电流图(ERG)检测小鼠视网膜功能。结果 (1)TUNEL结果显示,正常对照组的外核层光感受器细胞核TUNEL染色为阴性。与正常对照组比较,光损伤后模型组小鼠的视网膜外核层TUNEL阳性光感受器在1 d开始显著增加,3 d达到高峰(P0.001);与光损伤模型组比较,白蒺藜给药组外核层仅见少量散在的TUNEL阳性光感受器细胞(P0.05)。(2)ERG结果显示,与正常对照组比较,光损伤模型组小鼠视网膜a波、b波振幅显著降低(P0.05),白蒺藜给药组a波、b波振幅显著高于模型组(P0.05)。结论白蒺藜能显著地减轻光损伤引起的光感受器细胞凋亡,对光损伤小鼠视网膜功能具有保护作用。     

四种补益药方对光感受器细胞凋亡大鼠的治疗观察

目的观察临床常用的4种补益方剂对N-甲基-N-亚硝脲（MNU）诱导的光感受器细胞凋亡的影响。方法SD大鼠分为正常组、模型对照组、四物汤组、杞菊地黄汤组、四君子汤组和肾气丸组。TUNEL法检测光感受器细胞的凋亡，常规HE染色测量视网膜外核层的厚度。结果与模型对照组相比，四君子汤和肾气丸组大鼠在细胞凋亡和外核层厚度方面无差异，而四物汤和杞菊地黄汤组大鼠光感受器细胞凋亡百分率有不同程度下降，同时外核层厚度显著增厚。结论四物汤和杞菊地黄汤能抑制MNU诱导的光感受器细胞凋亡，且杞菊地黄汤疗效优于四物汤。     

川芎嗪注射液对高眼压大鼠视网膜Bcl-2、Bax蛋白表达和视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的观察川芎嗪注射液对高眼压大鼠模型视网膜Bcl-2、Bax蛋白表达和视网膜神经节细胞凋亡的影响并探讨其机制。方法应用前房注射羟丙基甲基纤维素的方法建立高眼压大鼠模型,随机分为模型组、川芎嗪组,并设立空白对照组,每组10只。造模成功3 d后开始给药,川芎嗪组给予盐酸川芎嗪注射液7.2 mg/kg腹腔注射。模型组和空白对照组每天用等体积的0.9%氯化钠注射液腹腔注射。每日1次,共2周。观察川芎嗪注射液对高眼压模型大鼠Bcl-2、Bax蛋白表达和视网膜神经节细胞凋亡的影响。结果川芎嗪组视网膜Bcl-2蛋白的表达增高,与模型组和空白对照组比较其间差别有统计学意义(P0.01);川芎嗪组视网膜Bax蛋白的表达低于模型组,两组间的差异有统计学意义(P0.01)。川芎嗪组的Bcl-2/Bax比值最高,与模型组和空白对照组比较其间差别有统计学意义(P0.01)。川芎嗪组视网膜神经节细胞凋亡指数低于模型组,两组间的差异有统计学意义(P0.01)。结论川芎嗪注射液能够减少高眼压大鼠模型视网膜神经节细胞的凋亡,其机制可能是通过升高视网膜Bcl-2蛋白的表达、降低Bax蛋白的表达、改变Bcl-2/Bax的比值而实现的。     

肾精亏虚对小鼠视网膜细胞凋亡相关基因Bcl-2 Bax的影响

目的：肾精亏虚对小鼠视网膜细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax的影响。方法：将30只雄性昆明小鼠用计算机取随机数法随机分为正常对照组、模型组和补肝组3组。其中模型组和补肝组采用惊恐加房劳的复合伤肾法制造肾精亏虚模型。补肝组每天给予0.3mL/10g体重的一贯煎浓缩液灌胃。正常对照组及模型组予等量生理盐水灌胃,连续给药21天。制备小鼠视网膜石蜡切片行免疫组化ABC法染色,并对染色结果进行计算机图像分析系统观察分析。结果：Bcl-2和Bax在正常组阳性反应少见,且只出现于节细胞血管;模型组小鼠视网膜神经节细胞层（GCL）和内核层（INL）可见大量的阳性细胞;补肝组小鼠视网膜神经节细胞层（GCL）和内核层（INL）可见少数阳性反应细胞。各组小鼠视网膜细胞Bcl-2和Bax表达的阳性细胞率比较：模型组与正常组及补肝组比较有非常显著的差异（P〈0.01）;正常组与补肝组比较无显著的差异（P〉0.05）。结论：凋亡相关基因Bal-2和Bax在“惊恐、房劳”因素复制的肾精亏虚模型小鼠视网膜的表达增强,二者在肾精亏虚模型小鼠视网膜细胞凋亡中起重要作用。     

珍珠丸对兔视网膜缺血再灌注的神经保护作用及Bcl-2基因的表达

目的:观察珍珠丸对兔视网膜缺血再灌注损伤Bcl-2基因表达的影响,探讨珍珠丸对视神经的保护作用。方法:采用升高兔眼压到14.63Kpa持续1小时的方法制作视网膜缺血再灌注模型。将35只日本大耳白兔随机分为正常组、缺血再灌注组及治疗组。采用光镜观察再灌注后不同时间段视网膜组织学变化,运用免疫组化SABC法观测不同时间段治疗组与对照组视网膜组织中Bcl-2基因的表达,进行图像分析。结果:光镜下,缺血再灌注组神经节细胞比正常组明显减少,空泡形成和核固缩现象多见,内网状层、内核层轻度变薄,内核层细胞排列紊乱,外核层变化不明显。Bcl-2基因表达有所增高。而珍珠丸组内核层、神经节细胞层厚度及神经节细胞数目与正常组比较无明显差异,内核层和节细胞层细胞排列比较规整。Bcl-2基因表达量比缺血再灌注组明显增加(P<0.05),与维生素E组比较有显著性差异(P<0.05),但168小时后缺血再灌注组与正常组比较无显著性差异,各组两个时间段Bcl-2基因的表达均有显著性差异。结论:珍珠丸能减少神经元细胞凋亡的数目,并能促成Bcl-2基因的表达,有保护神经元细胞的作用。对于视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用,提示珍珠丸可能用于临床上视网膜缺血再灌注损伤的治疗。     

低氧预适应对小鼠视网膜光损伤防护作用的形态学观察

目的观察低氧预适应对小鼠视网膜感光细胞光损伤的防护作用并探讨其可能的机制。方法将50只BALB/C小鼠随机分为正常对照组、单纯低氧预适应组、单纯光照组和低氧预适应光照组,其中后两组再分为6小时、12小时、36小时和7天亚组。建立小鼠低氧预适应模型和光损伤模型。各组小鼠处死后,制作视网膜的光镜和电镜切片,观察视网膜的形态学变化,并比较外核层的厚度。结果1.组织学改变:光镜下小鼠视网膜光照后出现视杆细胞外节空泡样变,外核层变薄。电镜下小鼠视网膜光照后视杆细胞外节膜盘叠状结构解离,内节线粒体肿胀、空泡样变,外核层出现凋亡性改变。低氧预适应光照组较单纯光照组感光细胞形态结构损伤明显减轻。2.正常对照组与单纯低氧预适应组外核层厚度(μm)分别为41.79±0.88和40.56±1.05,差异无显著性(P>0.05);光照后6小时、12小时、36小时和7天单纯光照组外核层厚度(μm)分别为31.78±1.20、28.59±1.06、24.82±0.94和18.33±1.01,与正常对照组比较明显变薄,差异具有显著性(P<0.05);低氧预适应光照组外核层厚度(μm)分别为41.35±0.97、39.62±1.25、39.01±1.47和37.10±1.12,在各对应时间点与单纯光照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论光照射可引起小鼠视网膜光损伤;低氧预适应对小鼠视网膜光损伤有良好的防护作用,可能是低氧预适应干扰了视细胞凋亡的基因调控。     

益气明目丸对视网膜色素变性大鼠视网膜BaxmRNA、Caspase-3mRNA表达的影响

目的：观察益气明目丸对RCS大鼠视网膜BaxmRNA、Caspase-3mRNA表达的影响。方法：24只RCS大鼠随机分为3组,分别为：空白组、模型组、益气明目丸组。空白组：RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠共8只,雌雄各4只,灌胃生理盐水;模型组：RCS（rdy-/,p-/-）大鼠共8只,雌雄各4只,灌胃生理盐水;益气明目丸组：RCS（rdy-/,p-/-）大鼠共8只,雌雄各4只,灌胃益气明目丸悬浊溶液。灌胃30天后,HE染色观察视网膜各层结构,RT-qPCR法及Western Blot法分别测定各组视网膜组织中BaxmRNA、Caspase-3mRNA的表达水平。结果：HE染色显示：益气明目丸组大鼠视网膜厚度明显较模型组大鼠视网膜增厚,视网膜色素上皮条带部分可见,部分外核层光感受器感觉纤毛层部分可见,光感受器细胞核数目较模型组多,外从状层、外核层、视杆视锥层较模型组结构清晰且增厚,RT-qPCR检测显示：益气明目丸组BaxmRNA、Caspase-3mRNA相对表达量明显低于模型组,差异有显著统计学意义（P < 0.01）,WB检测显示：益气明目丸组Bax蛋白、Caspase-3蛋白相对表达量明显低于模型组,差异有统计学意义（P < 0.01）。结论：益气明目丸对RP视网膜的超微结构具有保护作用;益气明目丸可抑制视网膜上BaxmRNA、Caspase-3mRNA的表达,进而减轻视网膜感光细胞的凋亡,达到保护视细胞的目的。     

针刺调控感光细胞凋亡大鼠视网膜JAK2及STAT3表达作用机制

目的:观察感光细胞凋亡模型大鼠视网膜JAK2和STAT3蛋白表达,探讨针刺对感光细胞凋亡引起的视网膜退行性病变的保护机制.方法:75只SD大鼠随机分为空白组、模型组、维生素A组、假针刺组和针刺组,每组15只.采用N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)方法建立感光细胞凋亡大鼠模型.各组干预1次/d,6次/周,共4周后,HE染色...     

川芎嗪对视网膜缺血电生理及视网膜小动脉平滑肌细胞cAMP表达的影响

目的探讨川芎嗪对正常兔眼视网膜急性缺血模型视网膜电图（ERG）最大反应、振荡电位（OPs）的影响及对兔视网膜小动脉平滑肌细胞环腺苷酸（cAMP）表达的影响。方法新西兰大白兔20只,随机分为川芎嗪组和模型组,每组10只,均予结扎右眼视神经lh制作兔视网膜急性缺血模型．造模前记录右眼ERG最大反应和OPs。川芎嗪组于视网膜缺血造模后0h、24h、48h及72h给予耳缘静脉注射川芎嗪注射液,复查ERG指标,模型组同期进行ERG检查,不予其他处理。视网膜缺血造模后72h处死动物,取右眼,免疫荧光技术观察cAMP在视网膜小动脉平滑肌细胞上的表达情况。结果视网膜缺血造模后24～72h,2组实验兔的最大反应振幅同期比较无明显差异（P〉0．05）,川芎嗪组OPs振幅在缺血造模后24h、72h时明显高于模型组,差异有统计学意义（P〈0．05）。川芎嗪组缺血造模后72h时血管平滑肌细胞的cAMP表达强于模型组。结论川芎嗪对缺血视网膜的Ops振幅有改善作用,可能与促进视网膜小动脉平滑肌细胞cAMP表达,改善视网膜血循环有关。     

强精煎对实验小鼠睾丸Bcl-2及Bax蛋白表达影响研究

目的:研究强精煎对实验小鼠睾丸Bcl-2、Bax蛋白表达及Bcl-2/Bax比值的影响。方法:80只成年健康雄性小鼠随机分成正常组、模型组、强精煎组和黄精赞育胶囊组各20只。除正常组外,其余3组采用环磷酰胺腹腔注射建立小鼠生精障碍模型,造模结束后第1天开始正常组和模型组灌胃给蒸馏水,其余两组分别给强精煎冲剂、黄精赞育胶囊混悬液,连续30天。结果:与模型组相比,正常组、强精煎组和黄精赞育胶囊组睾丸生殖细胞凋亡基因Bax蛋白表达率较低(P0.01)、Bcl-2蛋白表达率较高(P0.01)、细胞内Bcl-2/Bax比值较高(P0.01),正常组、强精煎组和黄精赞育胶囊组各组间比较睾丸生殖细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值相近(P0.05)。结论:强精煎治疗小鼠睾丸生精障碍的疗效与Bcl-2、Bax蛋白表达率及Bcl-2/Bax比值密切相关。     

川芎嗪液对大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型的影响

目的观察中药川芎嗪液对实验性高眼压致视网膜缺血再灌注损害模型的治疗作用。方法32只SD大鼠随机分为4组:川芎嗪组、维生素E组、模型组和正常组。采用短暂升高大鼠前房压至110mmHg制作视网膜缺血再灌注模型。川芎嗪组采用川芎嗪液,维生素E组用维生素E作灌胃治疗,疗程7d。模型组和正常组灌胃等量蒸馏水。光镜、电镜观察结构的改变,并测定SOD、MDA含量变化。结果缺血60min再灌注48h以上,光镜下可见视网膜视神经节细胞层(RGCL)和内核层(INL)细胞明显变薄;电镜下可见RGCL、INL层环核状核固缩及凋亡小体出现;SOD活力下降、MDA含量上升。经川芎嗪液治疗后,RGCL、INL两层形态学有明显改善,SOD活力也有所提高,MDA含量下降。证明川芎嗪液具有一定抗缺血、抗缺氧及稳定细胞膜的功效。结论川芎嗪液对治疗视网膜缺血性疾病有疗效。     

针刺对感光细胞凋亡大鼠视网膜形态学的影响

目的:观察针刺对感光细胞凋亡大鼠视网膜形态学的影响,明确针刺对感光细胞凋亡的干预作用。方法:N-甲基-N-亚硝基脲以50mg/kg腹腔注射于8周龄SD大鼠,造成感光细胞凋亡动物模型,将大鼠分为4组:针刺组,正常组,阴性对照组,维生素A治疗组。针刺组每日选取新明,睛明,承泣,球后,肝俞,肾俞针刺治疗,各穴位平补平泻,留针30min,连续治疗14天;维生素A组每日给予维生素A治疗;正常组,阴性对照组不做特殊处理。各组14天后用HE染色观察形态学改变,用TUNEL检测凋亡结果。结果:治疗后针刺组与正常对照组比较,平均光密度增加,提示感光细胞发生凋亡,差异有统计学意义(P<0.05);与阴性对照组及维A对照组比较,平均光密度显著降低,提示感光细胞凋亡减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:针刺能显著抑制感光细胞凋亡大鼠视网膜形态学的损害,提示针刺是治疗感光细胞凋亡的有效方法。     

和厚朴酚抑制视网膜新生血管形成的实验研究

目的:观察和厚朴酚对视网膜新生血管形成的抑制作用。方法:氧诱导幼鼠建立视网膜NV模型。治疗组分别腹腔注射和厚朴酚100 mg/kg和50 mg/kg,每日2次共5 d;对照组注射等量BSS。视网膜铺片了解血管改变;组织切片计数突破视网膜内界膜血管内皮细胞核;免疫组化检测视网膜VEGF和MMP-2表达。结果:治疗组视网膜血管密度降低,新生血管数减少。治疗组突破内界膜胞核数较对照组明显减少;大剂量组减少更显著。治疗组视网膜VEGF和MMP-2表达较对照组明显减少;大剂量组更少,两者差异显著。结论:和厚朴酚可以有效抑制视网膜新生血管形成,呈剂量依赖关系。