脓毒血症中肝脏结构和功能关系的研究

目的：探讨脓毒症时TNF—α与肝细胞调亡的关系以及对肝功能的影响。方法：采用盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症模型，动物随机分为正常对照组和脓毒症组。分别于术后30分钟、60分钟、120分钟、180分钟处死动物，测定肝组织和血浆TNF-α和Bcl-2蛋白的含量，并检测肝细胞凋亡的情况。同时测定肝脏的功能。结果：CLP后肝组织和血浆中TNF-α持续升高（P〈0.01），但30分钟与60分钟的变化不明显（P〉0．05），Bcl-2变化则与此相反。肝组织细胞凋亡数目呈进行性增加（P〈0．01）。同时丙氨酸转氨酶ALT＼天冬氨酸转氨酶AST也呈现异常改变，肝脏功能恶性发展（P〈0．01）。结论：CLP后肝脏产生大量TNF-α，与肝细胞凋亡有密切关系，使肝功能受到损伤。     

脓毒血症过程肝脏结构和功能关系的研究

目的：研究脓毒血症时肝吐功能降低的机制及糖皮质激素的作用机制。方法：将24只雄性Wistar大鼠随机分为4组，其中6只作为对照组，另外18只采用盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒血症模型，其中12只于术后60、180min时限又分为2组作实验组，另6只于术后即给予糖皮质激素地塞米松（5mg／kg）作为干预组。各组均测定肝组织TNF—α和Bcl-2蛋白表达及肝细胞凋亡的情况，同时测定肝脏功能的变化。结果：CLP术后肝组织中TNF—α水平持续升高，与对照组相比有统计学差异（P〈0．01）。血清TNF—α含量变化与肝组织TNF—α的表达具有一致性。CLP术后肝细胞凋亡数目与对照组相比有统计学差异，并呈进行性增加（P〈0．01）。肝细胞的凋亡数目与肝组织TNF—α的表达也呈现一致性。CLP术后肝组织Bcl-2蛋白与TNF—α蛋白相比表达较弱，但与对照组仍有统计学差异（P〈0．01）。血浆中ALT／AST呈异常改变，同时术后肝脏组织结构紊乱。结论：由CLP所致的脓毒血症过程中，肝脏组织TNF-α蛋白的表达和血浆中TNF—α蛋白的含量进行性增加，通过激活促细胞凋亡的程序，相对抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达而诱导肝细胞凋亡。与肝脏结构受损、功能下降是一致的。早期应用地塞米松处理脓毒血症对肝脏有一定的保护作用，其机制可能是抑制了脓毒血症早期细胞因子TNF-α的释放，以及由此导致的细胞凋亡的发生。     

雷帕霉素对脓毒症大鼠肝损害的保护作用

目的探讨雷帕霉素对脓毒症大鼠肝损害的保护作用及其机制.方法采用盲肠结扎穿刺法(CLP)制作脓毒症模型,采用雷帕霉素[(1mg/(kg·d)]或生理盐水(PBS)处理大鼠,在3、6、12、24小时监测大鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST),血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)浓度.结果相对于PBS处理,应用雷帕霉素处理显著下调CLP术后血清TNF-α和IL-6的浓度,并显著降低ALT和AST的水平.结论雷帕霉素对脓毒症大鼠肝损害具有保护作用,其机制可能与其抑制炎症因子的释放有关.     

脓毒症早期大鼠肝脏Toll样受体4基因表达及干预性研究

目的:探讨严重腹腔感染所致脓毒症大鼠肝脏Toll样受体4(Tolllikereceptor4,TLR4)基因表达变化规律及对其调节机制进行初步探讨。方法:采用大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)模型造成脓毒症。将96只大鼠随机分为正常对照组、假手术组、CLP组、地塞米松(DXM)干预组,于CLP后2、4、6、12、24h处死动物,留取肝脏标本,以半定量逆转录多聚酶链反应技术及相关软件分析不同组TLR4mRNA、TNF鄄αmRNA的表达,检测血清丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及肝脏组织病理,评估肝脏损伤情况。结果:CLP组2h后肝脏TLR4mRNA、TNF鄄αmRNA及血清ALT、AST比正常对照组明显增多(P﹤0.01);DXM干预组各时间点TLR4mRNA、TNF鄄αmRNA的表达及血清ALT、AST较单纯CLP组显著降低(P﹤0.01),24h病理切片显示肝损伤轻于CLP组。结论:严重腹腔感染可致大鼠肝脏TLR4mRNA持续高表达,与肝脏的损伤密切相关;早期应用DXM可抑制TLR4mRNA的表达,减轻肝脏损伤。DXM抑制腹腔感染所致的炎症反应可能与抑制TLR4的表达有关。     

急性肝损伤中肝细胞胀亡与肿瘤坏死因子-α的关系

目的 探讨急性肝损伤中肝细胞胀亡与肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的关系.方法 应用D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导大鼠急性肝损伤模型,同时设立正常对照组,于不同时相检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量,肝组织中TNF-α mRNA表达,观察肝细胞胀亡情况,计算胀亡指数(oncosis index,OI).结果 与正常对照组比较,致伤后大鼠血清ALT、AST明显升高(P＜0.05),肝组织中TNF-α mRNA表达增强,细胞胀亡增多,OI值增高.结论 急性肝损伤中存在细胞胀亡,其发生与TNF-α的表达有一定关系.     

氯胺酮对脓毒症大鼠及血清TNF-α、IL-6和NO水平及生存率的影响

目的探讨氯胺酮在盲肠结扎穿孔术（CLP）脓毒症中的作用及可能的作用机制．方法120只雄性sD大鼠随机分为正常对照组、对照组、氯胺酮组；每组各分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4个亚组．对照组和氯胺酮组建立CLP脓毒症模型．术毕半小时开始给药，氯胺酮组肌肉注射氯胺酮50mg／kg，q12h，正常对照组与对照组给予等容积生理盐水，直至大鼠死亡或5d观察期结束．每组的Ⅰ亚组大鼠观察5d的生存情况；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ亚组的大鼠于术前0h、术后4h，及以对照组的Ⅳ亚组各只大鼠的临终时刻为观察时相点，分别处死每组中一个亚组的大鼠测定血中TNF-α、IL-6及NO的水平．结果与正常对照组比，对照组血清TNF-α、IL-6在CLP术后4h及临终时点均明显升高（P〈0．01）；且TNF-α在CLP术后4h较临终时点高；IL-6在临终时点较CLP术后4h高；而NO在CLP术后的临终时点才明显升高（P〈0．01）．与对照组比，氯胺酮组血清TNF-α和IL-6在CLP术后4h及临终时点均明显降低（P〈0．01）；NO仅在CLP术后的临终时点明显降低（P〈0．01）．正常对照组5d生存率100％，对照组5d生存率0，氯胺酮组5d生存率60％；与对照组相比，氯胺酮组的5d生存率明显升高（P〈0．01）．结论氯胺酮能够抑制CLP脓毒症大鼠血清TNF-α、IL-6和NO的水平，从而提高大鼠的生存率．     

大鼠后肢缺血/再灌注后肝细胞损伤及乌司他丁的保护效应

目的探讨乌司他丁对大鼠后肢缺血再灌注后肝脏功能保护作用及可能机制。方法建立健康SD大鼠后肢缺血/再灌注模型,将24只健康SD雄性大鼠随机分为3组,每组8只。检测肝功能、血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-10浓度,电镜观察肝脏线粒体结构及光镜观察肝脏病理结构。结果肝功能指标测定,对照组、实验组较假手术组丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶升高,实验组较对照组丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶降低;炎性因子TNF-α、IL-10测定,对照组、实验组较假手术组TNF-α升高,实验组较对照组TNF-α降低,对照组、实验组较假手数组IL-10升高,实验组较对照组IL-10升高;以上各项比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。线粒体结构:假手术组0级,对照组2～3级,实验组1级。结论乌司他丁对下肢缺血/再灌注损伤后引起的肝脏损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能是降低促炎性因子TNF-α、提升抑制炎性因子IL-10,减轻炎性反应,保护肝细胞,减轻因下肢缺血/再灌注损伤所导致的肝脏损伤。     

凝血酶敏感蛋白-1对脓毒症肝损伤影响的实验研究

目的利用RNA干扰(RNA)i方法探讨凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)对脓毒症肝损伤的影响及机制.方法选用雄性Balb/c小鼠随机分为4组(n=10):假手术组(sham)、CLP对照组、阴性片段对照组、有效片段组.利用流体尾静脉注射法予以TSP-1特异性的siRNA片段进行RNAi,下调肝脏TSP-1表达,采用盲肠结扎穿刺(CLP)制作脓毒症模型,检测血清转氨酶、血清TNF-α含量,观察肝细胞凋亡,检测肝脏JNK蛋白表达变化.结果与假手术组相比,CLP组和阴性对照组转氨酶ALT和AST含量、TNF-α含量、凋亡细胞比例明显升高(P<0.05),磷酸化JNK蛋白表达明显降低(P<0.05),予以有效片段进行RNAi后,ALT和AST含量、TNF-α含量、凋亡细胞比例明显降低(P<0.05),磷酸化JNK蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 TSP-1参与介导脓毒症肝损伤,导致血清转氨酶及血清TNF-α含量升高、肝细胞凋亡增加,其机制与JNK通路的抑制有关.     

大鼠急性酒精性肝损伤肝细胞凋亡及其发病机制研究

目的探讨急性酒精性肝损伤与肝细胞凋亡的关系,并对其发病机制进行初步探讨。方法将60只大鼠随机分两组,实验组30只按体重15g／kg给予浓度为47．5％的酒精一次性灌胃。对照组30只按体重15g／kg给予生理盐水一次性灌胃。灌胃后48h取肝组织,观察两组大鼠的肝脏大体形态并检测ALT、AST、肿瘤坏死因子一α（TNF-α）及丙二醛（MDA）等指标。结果实验组大鼠肝组织呈现片状坏死,且ALT、AST、TNF—α及MDA均显著高于对照组（P均〈0．05）。结论急性酒精性肝损伤时可发生肝细胞凋亡,可能与ALT、AST、TNF—α及MDA等因子有关。     

TNF-α在大鼠脓毒症肝损伤发病机制中的作用及丹参的干预影响

目的采用大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)复制脓毒症模型造成急性肝损伤,探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)在脓毒症肝损伤发病机制中的作用及丹参的干预影响。方法将W istar大鼠随机分为对照组(Control)、假手术组(Sham)、模型组(CLP)及丹参干预组(Salvia)。动态观察血清丙氨酸转氨酶(ALT)、血清及肝组织中TNF-α的变化。结果CLP组与Sham组相比,血清和肝组织TNF-α水平在12 h升高,于24 h达到峰值。Salvia组峰值滞后于CLP组,在48 h达其峰值,并在12 h及24 h分别显著低于CLP组。结论脓毒症所致的肝细胞损伤与TNF-α增加有关,丹参对脓毒症肝细胞损伤保护作用可能与抑制TNF-α生成有关。*     

脓毒症模型大鼠循环内皮细胞与肝功能状态间关系的相关性研究

目的 探讨大鼠脓毒症中循环内皮细胞(circulating endothelial cells, CEC)数量的变化及其与肝功能改变的关系.方法 利用盲肠结扎穿孔模型(CLP)在大鼠制作脓毒症模型.观察CEC数量、白细胞数量的变化、以及肝组织病理组织学、血天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)的改变.并探讨CEC数量与AST和ALT的相关关系.结果 CLP 6 h后动物肝细胞明显肿胀,24 h组肝细胞大量空泡变性,乃至坏死.CLP 3 h组白细胞和CEC数量比对照组明显升高.而CLP 6 h后AST、ALT才出现明显增高.CEC数量与AST和ALT水平呈负相关,Pearson相关系数(r)分别为-0.774 和-0.734(P＜0.01).用非线性回归分析CEC数量与AST和ALT的关系,发现CEC数量对ALT的最佳拟合曲线为幂函数(P＜0.05),其方程为ALT=33.052 681 24.097 309 CEC -1.CEC数量对AST的最佳拟合曲线为对数函数,但无统计学意义(P=0.607).结论 在大鼠脓毒症模型中,比起常规肝功能指标,CEC数量更能敏感反映肝脏病理进程.当肝功能指标高于正常阈值时肝细胞已经出现了显著损伤.因此,早期监测CEC数量结合已有的肝功能指标有助于早期提示肝功能损害,及时针对治疗.     

青蒿素对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用

目的 观察青蒿素(artemisinin, ART)对脓毒症大鼠肺组织损伤的影响.方法 采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture, CLP)制作大鼠脓毒症模型,动物分为正常对照组、CLP组和青蒿素治疗(ART)组,分别于CLP术后2、6、12、24、48、72 h活杀大鼠取肺组织,匀浆后动态浊度鲎试验法检测内毒素(lipopolysaccharide, LPS)水平,ELISA法检测TNF-α和IL-6的含量,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测肺组织TNF-α和IL-6 mRNA的表达,光镜下观察肺组织的病理改变.结果 CLP术后,ART组大鼠肺组织匀浆LPS、TNF-α和IL-6含量较CLP组明显降低(P＜0.05,P＜0.01),TNF-α和IL-6 mRNA的表达也显著低于CLP组(P＜0.05,P＜0.01),24 h肺组织的病理损伤明显减轻.结论 青蒿素可能通过降低脓毒症大鼠肺组织局部的LPS水平,抑制和减少了TNF-α和IL-6等促炎细胞因子的表达和释放,进而减轻肺组织的损伤.     

门腔静脉转位术对大鼠肝脏血清酶的影响

目的 探讨门腔静脉转住术对大鼠肝功能的影响及其变化规律.方法 72只SD大鼠按随机法分为缺血对照组和实验组,分别于术后6、12、24、72 h、1周、4周处死各组动物(n=6),检测血清丙氨酸氨基转移酶(ahnine aminotramferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(totalbilirubin,TBIL)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL),HE染色做病理组织学检查.结果 门腔静脉转位血流开放术后6、12、24 h内实验组大鼠血清ALT、AST水平明显高于正常(P＜0.05),24 h后实验组大鼠血清ALT、AST水平与缺血对照组无明显差异(P＞0.05).各时段TBIL、DBIL皆处于正常值范围.结论 门腔静脉转流术近期内对大鼠肝功能会造成一定的损害.但不会影响大鼠长期的肝功能,在门腔静脉转位的条件下,肝脏血清酶能恢复完全正常或接近于正常.     

谷氨酰胺对急性肝损伤的保护作用及临床意义

目的探讨谷氨酰胺(GLN)在急性肝损伤中的保护作用及临床意义.方法 SD大鼠分为3组:模型组、GLN干预组、对照组.采用四氯化碳(CCl4)腹腔注射诱导急性肝损伤模型.分别于致伤后4、8、12、16、24 h取大鼠血清,全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;光镜下观察大鼠肝脏病理学改变;电镜下观察肝组织超微结构及细胞胀亡;免疫组织化学染色法检测肝组织核因子-κB(NF-κB)的表达;RT-PCR方法检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT) 介导的2dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测肝细胞凋亡.结果模型组各时相ALT、AST、NF-κB、TNF-α mRNA与对照组相比均明显增高(P<0.01),GLN干预组较模型组明显减低(P<0.05).光镜下发现模型组大鼠肝组织结构紊乱,有不同程度的肝细胞损伤和炎性细胞浸润.GLN干预组与模型组同时相相比损伤较轻.透射电镜下发现肝细胞出现细胞质肿胀、核溶解性坏死等胀亡样改变及细胞质萎缩、核固缩等凋亡样改变,GLN干预组肝细胞胀亡指数(OI)及凋亡指数(AI)明显低于模型组(P<0.05).结论 GLN可保护CCl4所致大鼠急性肝损伤,降低血清ALT、AST水平,抑制肝组织NF-κB及TNF-α的表达,保护肝细胞结构及功能完整,减少肝细胞的凋亡及胀亡.     

核因子-κB与感染性休克大鼠肝细胞凋亡的关系

目的探讨核因子-κB(NF-κB)与感染性休克大鼠肝细胞凋亡的关系,了解感染性休克时肝功能减退的机制。方法将20只大鼠随机分为2组,每组10只,实验组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备感染性休克大鼠模型;对照组大鼠不进行盲肠结扎穿孔术。2组均测定肝脏细胞NF-κB蛋白、肝功能及肝细胞凋亡的情况。结果与对照组比较,实验组肝细胞凋亡指数明显升高(P<0.01),肝细胞中NF-κB蛋白表达明显增强,血清谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶含量明显升高(P<0.01)。结论CLP所致的感染性休克过程中,NF-κB蛋白表达升高,可能导致肝细胞凋亡增加,以致肝功能减退。     

梗阻性黄疸形成中肿瘤坏死因子与肝细胞凋亡关系的实验研究

目的 :探讨梗阻性黄疸形成中肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)与肝细胞凋亡的变化。方法 :72只Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组和胆总管结扎手术组 ,以结扎胆总管 (ligatingcommonbileduct ,LCD)的Wistar大鼠为模型 ,采用放射免疫法 ,测定血清中TNF -α含量 ;TUNEL法检测大鼠肝细胞凋亡状态。结果 :LCD术后 3、7、14dTNF -α含量明显高于正常组和假手术组 ,并于LCD术后 7～ 14d达到高峰。结论 :Wistar大鼠在梗阻性黄疸形成中TNF -α明显增高诱导肝细胞凋亡 ,对肝功能损害起着一定作用。     

抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体减轻大鼠移植肝缺血再灌注损伤的实验研究

目的研究抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体(Anti-TNF-αmAb)对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的作用及机制。方法SD大鼠80只,体重(250±20)g,随机分为受体组与供体组。两两随机配对后再随机分为实验组和对照组,建立原位肝移植模型。实验组供肝经门静脉冷灌注20ml4℃的生理盐水+抗TNF-α单克隆抗体(0.1mg/kg);对照组供肝经门静脉冷灌注20ml4℃的生理盐水。采用全自动生化分析仪,酶联免疫吸附实验(ELISA)法,HE染色,TUNEL法分别测定血肝功能酶(ALT,AST),血浆TNF-α,肝组织病理改变及肝细胞凋亡情况。结果实验组应用抗TNF-α单克隆抗体后血ALT,TNF-α水平显著低于对照组(P<0.01),血AST水平低于对照组(P<0.05),肝组织形态学无明显改变,细胞凋亡显著减少。结论抗TNF-α单克隆抗体能有效减轻大鼠移植肝脏缺血再灌注损伤,缓解肝功能下降。     

盲肠结扎穿孔脓毒症大鼠心肌损伤的相关研究

【摘要】目的 通过盲肠结扎穿孔脓毒症大鼠心肌细胞凋亡率的变化,探讨心肌细胞凋亡与心肌损伤的关系。方法 将40只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（SH组,n=20）及脓毒症组（CLP组,n=20）,采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备脓毒症动物模型,24小时后,检测各组的血清脑钠肽(BNP)、肌钙蛋白I(cTnI)水平。观察心肌组织病理变化、心肌组织TNF-α的表达水平及心肌细胞凋亡率。结果 CLP组出现明显的心肌损伤,CLP组血清BNP、cTnI高于SH组（P＜0.01）,心肌组织TNF α、心肌细胞凋亡率高于SH组（P＜0.01）。结论 心肌细胞凋亡在脓毒症心肌损伤发病机制中可能起着重要的作用。     

川芎嗪预处理在预防大鼠移植肝缺血再灌注损伤中的作用探讨

目的:探讨川芎嗪预处理对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的作用及可能的机制.方法:将125只雄性SD大鼠随机分成3组:假手术组、对照组(生理盐水作为肝脏灌注液)、实验组(川芎嗪预处理,生理盐水作为肝脏灌注液).假手术组仅结扎肝动脉,对照组和实验组行大鼠原位肝移植,分别于术后1、6、24、72h剖杀各组大鼠各5只,检测各组大鼠血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量以及血清内毒素水平;检测肝脏组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)的含量,观察大鼠肝脏组织病理学和Kuffer' s细胞超微结构改变.结果:实验组大鼠的ALT、AST、TNF-α、IL-1β的表达明显低于对照组,但高于假手术组(P<0.05);实验组炎症反应及Kuffer's细胞活跃程度明显轻于对照组.结论:川芎嗪预处理能抑制kuffer's细胞吞噬活性,减轻大鼠移植肝缺血再灌注损伤.