去整合素抑制兔晶状体上皮细胞增殖的实验研究

目的 探讨去整合素(Kistrin)对兔眼后发性白内障发生过程中晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)增殖的抑制作用.方法 雄性新西兰大白兔36只,随机分为对照组:A组,实验组:B、C、D组,每组各9只兔9眼(右眼).4组均行透明晶状体囊外摘出术,术毕A组兔眼前房注入林格液0.2 mL,B、C、D组分别注入40 μg·L-1、80μg·L-1和160 μg·L-1 Kistrin溶液0.2 mL.术后第14天采用免疫组织化学法对4组兔后发性白内障发生过程中LEC增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达进行检测,计算增殖指数(proliferative index,P1)值,PI=PCNA阳性细胞数/50×100%;通过HE染色及透射电镜观察角膜改变情况.结果 (1)术后第14天PI值A组:0.320±0.020、B组:0.175±0.030、C组:0.065±0.020、D组:0.190±0.050,B、C、D组较A组PI值均明显降低(均为P＜0.01);C组较B、D组PI值均明显降低(均为P＜0.01),B组与D组PI值比较差异无统计学意义(P＞0.05);(2)术后第14天赤道部PI值A组:0.390±0.060、B组:0.230±0.040、C组:0.110±0.030、D组:0.240±0.080;中央部PI值A组:0.250±0.050、B组:0.120±0.030、C组:0.060±0.020、D组:0.140±0.040,4组赤道部较中央部PCNA阳性表达均明显升高(均为P＜0.01).(3)实验组C组与A组比较:角膜内皮细胞超微结构无明显改变.结论 40～160μg·L-1的Kistrin灌注液可有效地抑制制兔眼后发性白内障的发生;赤道部LEC增殖能力强于中央部;80μg·L-1可作为进一步研究Kistrin抑制后发性白内障形成的较适宜浓度.     

体外培养人晶状体上皮细胞整合素的表达

目的:研究体外培养人晶状体上皮细胞整合素的表达。方法:对人晶状体上皮细胞株SRA01/04进行培养并传代,经间接免疫荧光标记法处理细胞后上流式细胞仪检测各整合素的阳性表达率。结果:整合素α2,α3,α5,β1,β2在SRA01/04的阳性表达率分别为85.3%,97.6%,74.0%,97.7%,3.65%。整合素α3与β1之间无统计学差异(P>0.05),其余两两间比较均有显著统计学差异(P<0.01)。结论:人晶状体上皮细胞株SRA01/04整合素呈阳性表达。     

去整合素对人眼晶状体上皮细胞的粘附移行作用

目的研究去整合素对体外培养的人眼晶状体上皮细胞生长的抑制作用。方法对先天性白内障患者术中环行撕前囊膜,进行原代培养并传代,取第2代细胞用于实验。抗粘附实验:将悬浮的细胞与不同浓度的去整合素(5μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1、40μg·L-1、80μg·L-1)在37℃、50mL·L-1CO2条件下一起孵育30min。然后接种于涂有鼠尾胶原的96孔培养板。8h后,用HBSS轻洗各孔2次,MTT法测定粘附细胞的吸光度。抗移行实验:对融合的细胞进行划线,80μg·L-1的去整合素进行干预,24h、48h、72h后,细胞计数法观察裸露区内细胞的移行数量。结果不同浓度的去整合素(20μg·L-1、40μg·L-1、80μg·L-1)对晶状体上皮细胞的粘附均具有抑制作用且呈剂量依赖性。与对照组相比,24h、48h、72h内80μg·L-1的去整合素可显著抑制晶状体上皮细胞的移行。结论去整合素抑制体外培养的人眼晶状体上皮细胞的粘附及移行。     

MG132对体外培养人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的 研究蛋白酶体抑制荆MG132对晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞增殖的影响,探讨其抑制细胞增殖的有效药物浓度及分子机制.方法 不同浓度的MG132分别处理SRA01/04细胞36h,通过MTT法检测MG132对SRA01/04细胞增殖的影响,通过流式细胞术检测MG132对SRA01/04细胞凋亡的影响,通过Annexin V-FITC/PI双染法在荧光显微镜下观察SRA01/04细胞早期凋亡形态.结果 随着MG132浓度的升高,对SRA01/04细胞增殖的抑制作用逐渐增强,半数有效抑制浓度IC50为2.48μmol·L-1.MG132可诱导SRA01/04细胞凋亡;流式细胞术结果表明:浓度为2.5μmol·L-1、5.0μmol.L-1的MG132作用SRA01/04细胞36h后,细胞早期凋亡率分别为6.55%±0.35%和13.75%±3.18%,而0μmol·L-1为0.75%±0.21%,差异均有统计学意义(均为P<0.05).凋亡细胞被Annexin V-FITC单独染色(绿色荧光),活细胞不被染色,坏死细胞被Annexin V-FITC和PI(红色荧光)同时染色.结论 蛋白酶体抑制剂MG132可通过诱导细胞凋亡来抑制SRA01/04细胞的增殖,起到防治后发性白内障的作用.     

去整合素对人眼品状体上皮细胞的粘附移行作用

目的研究去整合素对体外培养的人眼晶状体上皮细胞生长的抑制作用。方法对先天性白内障患者术中环行撕前囊膜,进行原代培养并传代,取第2代细胞用于实验。抗粘附实验:将悬浮的细胞与不同浓度的去整合素(5μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1、40μg·L-1、80μg·L-1)在37℃、50mL·L-1CO2条件下一起孵育30min。然后接种于涂有鼠尾胶原的96孔培养板。8h后,用HBSS轻洗各孔2次,MTT法测定粘附细胞的吸光度。抗移行实验:对融合的细胞进行划线,80μg·L-1的去整合素进行干预,24h、48h、72h后,细胞计数法观察裸露区内细胞的移行数量。结果不同浓度的去整合素(20μg·L-1、40μg·L-1、80μg·L-1)对晶状体上皮细胞的粘附均具有抑制作用且呈剂量依赖性。与对照组相比,24h、48h、72h内80μg·L-1的去整合素可显著抑制晶状体上皮细胞的移行。结论去整合素抑制体外培养的人眼晶状体上皮细胞的粘附及移行。     

兔眼晶状体上皮细胞的体外培养

目的 建立兔晶状体上皮细胞体外培养的模型。方法 采用组织块培养法,对兔眼晶状体前囊膜进行培养,并利用形态学检查方法和免疫组化技术鉴定。结果 组织块接种２４ｈ后即可见细胞生长,且保持上皮细胞形态,１ｗｋ左右细胞融合,在体外可传至７代,５代以后细胞呈成纤维细胞状,α－晶状体蛋白间接免疫荧光呈阳性反应。结论 成功地建立晶状体上皮细胞体外培养模型,可用于后发性白内障发病机制的研究。     

鼠晶状体上皮细胞的体外培养

目的:建立鼠晶状体上皮细胞体外培养的模型。方法:应用组织块贴片法和酶逐步消化法对10~14d的SD大鼠晶状体上皮细胞进行体外培养,在相差显微镜下观察其生长规律。结果:组织块贴片法在加入培养基4~5d后见细胞生长,2wk细胞融合。而酶逐步消化法在加入培养基后7d左右见细胞贴壁,2wk左右见细胞融合。结论:鼠晶状体上皮细胞体外培养较困难,本试验采用酶逐步消化方法和组织块贴片法。成功地建立了鼠晶状体上皮细胞体外培养的模型,为研究后发性白内障发病机制提供了基础。     

巨噬细胞对体外培养兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的探讨白内障术后后囊混浊的发病机制。方法观察巨噬细胞对兔晶状体上皮细胞（rabbitlensepithelialcells，RLEC）增生的影响。结果实验组加有巨噬细胞，BLEC增殖活跃。巨噬细胞上清液48及72小时能明显促进BLEC的生长。结论巨噬细胞促进晶体上皮细胞的增生，可能是引起白内障术后后囊混浊的原因之一。     

高浓度葡萄糖体外对人晶状体上皮细胞整合素连接激酶表达的影响

目的:观察体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04在高浓度葡萄糖条件下细胞的增殖活性及整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的表达变化。方法:用人晶状体上皮细胞系SRA01/04,在培养液中加入不同浓度的葡萄糖溶液,使糖浓度分别为5.5mmol/L(正常对照组),15.5mmol/L,30.5mmol/L和50.5mmol/L,并设立5.5mmol/L葡萄糖+25mmol/L甘露醇组(甘露醇对照组)。细胞经过处理0,6,12,24,48,72h后,用MTT法检测晶状体上皮细胞的增殖活性,并用Western blot法检测细胞在30.5mmol/L葡萄糖处理6,12,72h后ILK蛋白表达量的变化。结果:高糖作用下晶状体上皮细胞的增殖活力高于正常对照组和甘露醇组,在30.5mmol/L组最为明显,而且随高糖暴露时间的延长,在48,72h时细胞的增殖活力增加更显著。30.5mmol/L葡萄糖作用6,72h,晶状体上皮细胞ILK蛋白的表达明显增高,分别是正常组的1.25和1.28倍,而甘露醇并不引起ILK的表达增加。结论:高浓度的葡萄糖促进人晶状体上皮细胞的增生,使细胞中ILK的表达量增加,这些变化并不依赖于高糖引起的高渗透压改变。     

细胞因子与晶状体上皮细胞增殖

后发性白内障是白内障手术后较严重的并发症。人们通过对其发生机制的研究发现,生长因子类物质与晶状体上皮细胞的增殖、胶原的产生有密切的关系,对这些因子进行适当的调控可能对于防治后发性白内障有重要意义。     

人晶体上皮细胞的体外培养

目的:提供一种简单可行,易于掌握的体外培养人晶体上皮细胞的方法。方法:用无齿显微镊子将晶体囊膜分离出来,剪碎后直接移至细胞培养瓶中培养,当细胞长出融合后,用胰蛋白酶消化传代。结果:接种培养4天后,可见晶体上皮细胞开始长出,并以贴壁方式生长。结论:用此方法体外培养人晶体上皮细胞,具有简单、快捷、成功率高的优点。眼科学报1997;13:170—172。     

The Biological Study of the Cultured Human Lens Epithelial Cells in Vitro

The human lens epithelial cells (HLE) cultured in vitro was established in normal and cataractous lenses. The biological feature, histological characteristics and the ultrastructure of the cultured HLE cells were investigated. The results reveal that the proliferative capacity of the culutured HLE cells is reversely proportional to the donour age; the cultured HLE cells has the limited proliferative capacity in vitro. The relieve of the contact inhibition is the effective trigger of the HLE cell proliferation. This research work is possible to make a basis for the further study of the regeneration of the lens and the roles of the lens epithelial cells in the development of the cataract. Eye Science 1994; 10:27-31.     

Effects of Calcium on Human Lens Epithelial Cells In Vitro

Purpose To analyze the effect of calcium on human lens epithelial cells (LECs) in vitro.Methods Human LECs were obtained from the anterior lens capsule during a cataract operation, and were cultured in minimum essential medium (MEM) containing 12% fetal bovine serum for a week at 37°C, 5% CO₂. The LECs were then isolated with trypsin and placed in culture dishes. To analyze the effects of calcium, the LECs were incubated in MEM with calcium concentrations of 0, 2, 10, or 20mM. After H&E staining for 72h, the LECs were analyzed with the Scion imaging program.Results The LECs proliferated rapidly and their shapes were uniform in 2-mM-calcium MEM. The LECs proliferated more slowly and had irregular shapes in MEM with lower and higher concentrations of calcium.Conclusions Calcium affects both the proliferation and the shape of human LECs in culture. Abnormal (hyper- or hypo-) calcium concentrations in the lens and aqueous humor may change the homeostasis of LECs, resulting in cataracts and secondary posterior capsular opacification. Jpn J Ophthalmol 2004;48:97–100 © Japanese Ophthalmological Society 2004     

Inhibition Effect of Cyclosporin A on Human Retinal Pigment Epithelial Cells in Vitro

Purpose: To select effective drugs against cellular proliferation in the vitreous. Methods: Cyclosporin A (0. 125mg/l - 4.0mg/l) was added to cultures of human retinal pigment epithelial (RPE) cells with or without macrophage - conditioned medium (MCM) . Proliferation rate of the cells was measured with (3H) - thymidine incorporation and liquid scintillation techniques on days 3 and 5.Results: Cyclosporin A at a dosages of 0. 125mg/l had a slight inhibition on human RPE cells proliferation (-3.8%-4.1%, P>0.05).Cyclosporin A at a dose ranging from 0.25mg/l to 4.0mg/l inhibited cellular proliferation effectively and in a dose - dependent manner (8.7% -95.1%, P<0.05 r=0.94, P<0.001) with its ID50 of 1.49mg/l. In the culture of RPE with MCM, the inhibition on day 5 was more effective than that on day 3. Conclusion : Cyclosporin A had an effective inhibition on human RPE cell proliferation and it may be of potential use clinically. Eye science 1998; 14 : 41 - 44.     

生长抑素对体外培养的人晶体上皮细胞的增殖和胶原合成的抑制作用

目的研究生长抑素ｓｔｉｌａｍｉｎ（ＳＳ－１４肽）和ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ（ＳＳ－８肽）对人晶上皮细胞（ＨＬＥＣ）增殖及胶原合成的影响。方法采用ＭＴＴ比色法和３Ｈ－脯氨酸（３Ｈ－Ｐｒｏｌｉｎｅ）掺入法检测了ＳＳ－１４肽和ＳＳ－８肽对人晶体上皮细胞（ＨＬＥＣ）增殖及胶原合成的抑制作用。结果ＳＳ－８肽浓度为１０－１０ｍｏｌ／Ｌ、ＳＳ－１４肽浓度为１０－９ｍｏｌ／Ｌ时能明显抑制ＨＬＥＣ增殖和胶原合成，且呈剂量依赖关系，５０％抑制浓度（ＩＤ５０）ＳＳ－８肽为１０－８ｍｏｌ／Ｌ，ＳＳ－１４肽为１０－７ｍｏｌ／Ｌ。结论ＳＳ－１４肽和ＳＳ－８肽可以通过抑制ＨＬＥＣ的增殖及胶原的合成而抑制后囊混浊。     

盖玻片辅助人晶状体上皮细胞原代培养法

目的：建立人晶状体上皮细胞原代培养的简便方法并比较不同来源人品状体上皮细胞的生物学特性。方法：取胎龄20周合法引产胚胎眼晶状体囊膜、中山眼科中心眼库眼晶状体囊膜和白内障患者术中撕取的前囊膜，分别在培养皿中铺平，加10乩10％DMEM培养液润湿后加盖盖玻片防止卷曲并促进粘贴．添加培养液浸没盖玻片，37℃培养。同时取相同来源的囊膜按照组织块法培养。观察细胞增殖情况并比较原代人晶状体上皮细胞与人晶状体上皮细胞系SRA01／0413晶体蛋白的表达差异。结果：在盖玻片辅助下，胚胎眼晶状体囊膜第2天即可见明显的增殖细胞由囊膜缘长出，眼库眼囊膜和白内障患者术中撕取的囊膜在3～4d的潜伏期后亦可见增殖细胞长出；组织块法培养出现部分组织块漂浮，且胚胎眼囊膜潜伏期延长至3-4d，眼库眼囊膜和白内障患者晶状体囊膜潜伏期延长至4-5d。结论：盖玻片辅助的改良组织块培养法能尽快获得体外培养的原代晶状体上皮细胞，且操作简便，值得推广应用于品状体病的研究。     

高三尖杉酯碱对兔眼晶体上皮细胞的作用

目的:研究高三尖杉酯碱(Hh)对兔眼晶体上皮细胞(LEC)的作用,以探讨白内障防治的可能性。方法:在9只新西兰大白兔的右眼(用药眼)作晶体超声乳化术时,用含有Hh(20μg/ml)的平衡盐溶液作灌注液。除了术前术后眼部检查以外,并于术后30分钟、3天和60天取出眼球作LEC的光学和电子显微镜检查,同一兔子的左眼(对照眼)作晶体超声乳化术时使用平衡盐溶液作灌注液。结果:手术后3天用药眼晶体上皮细胞的增殖明显轻于对照眼。虽然在手术后60天双眼均出现后发白内障-Soemmering环,但用药眼晶体上皮细胞可见细胞浆有空泡形成等超微结构改变。结论:提出如果在晶体超声乳化术时增加Hh在灌注液的含量或延长其在房水的停留时间,可能增加对晶体上皮细胞的抑制作用。此初步研究在探索后发性白内障方面具有一定的意义。眼科学报 1995;11:192—196。     

蛋白酶体β5过表达对人晶状体上皮细胞抗氧化能力的影响

目的:研究蛋白酶体β5(PSMB5)过表达对人晶状体上皮细胞抗氧化能力的影响。方法:实验研究。构建重组质粒pcDNA3.1-PSMB5,将其转染入人晶状体上皮细胞株SRA01/04中,形成稳定表达(作为实验组),设pcDNA3.1空载体作为对照组。将2组细胞置于40 μmol/L H 2O 2环境下,Hoechst 33342荧光染色观察2组细胞核形态的变化;流式细胞仪检测2组细胞凋亡率的变化。数据采用独立样本 t检验。 结果:40 μmol/L H 2O 2环境下,Hoechst 33342荧光染色可见,与实验组相比,对照组的细胞核明显皱缩、变形;流式细胞仪检测发现,实验组和对照组的细胞凋亡指数分别为(9.3±0.9)%和(15.7±1.9)%,均高于处理前的(5.9±0.8)%和(7.1±1.1)%,对照组凋亡指数比实验组的凋亡指数更高( t=3.742, P=0.008)。 结论:PSMB5基因过表达能有效提高人晶状体上皮细胞的抗氧化能力。     

EGF联合KGF促进人角膜上皮细胞生长

目的:寻找促进角膜上皮损伤修复,治疗持续性角膜上皮缺损的有效药物方法:用~3H—胸腺嘧啶核苷(~3H—TDR)掺入及液体闪烁技术,观察外源性表皮生长因子(EGF)联合角蛋白细胞生长因子(KGF)对体外培养的角膜上皮细胞DNA合成的影响,并计算细胞倍增时间。结果:10ng/mlEGF,10ng/mlKGF单独或联合应用均有明显促进人角膜上皮细胞DNA合成的作用(与对照组比较 P<0.01),联合用药,作用更强(P<0.05)。应用EGF与KGF明显缩短了细胞倍增时间。结论:外源性EGF与KGF对体外培养的人角膜上皮细胞有明显的促细胞增生作用,联合用药,效果更佳。表明EGF与KGF具有应用于临床,促进角膜上皮损伤修复的可能性。眼科学报1996; 12:107-109。     

Lens Epithelial Cell Proliferation and Cell Density in Human Age—relat

Purpose: To discuss the potential effect of the lens epithelial cell proliferation inage-related cataract.Methods: In vitro cell proliferation was assayed by MTT method to evaluate the lensepithelial cell density, index, and proliferation capacity in normal lens and all kinds ofage-related cataract. Capsulotomy specimens from all kinds of patients who underwentcataract phacoemulsification extraction surgery were compared with the lens epithelialspecimens from non-cataract lenses of Eye Bank eyes.Results:Lens epithelial cell density of central anterior capsule(LECD) in female normallens was higher than that in male, LECD in nuclear cataract (> NⅢ) was higher thanthat in normal lens, but in the mature cortical cataract, LECD was lower. Mitotic indexof three kinds of age-related cataracts in vivo had no statistical difference, neither didcell proliferation capacity of cultivated cells in vitro.Conclusion: The individual difference of lens epithelial cell density and proliferationcapacity in vivo may be an