小儿系统性红斑狼疮贫血与γ-干扰素和肿瘤坏死因子-α及红细胞生成素的相关性

目的探讨小儿系统性红斑狼疮（SLE）伴贫血的特征及其与肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ-干扰素（IFN-γ）和红细胞生成素（Epo）的相关性。方法采用ELISA法检测SLE患儿和正常儿童血清TNF-α、IFN-γ和Epo水平，观察TNF-α、IFN-γ对人红系集落形成单位（CFU—E）和红系瀑式集落形成单位（BFU—E）的影响及SLE患儿自身血清、Epo对SLE骨髓CFU—E的影响。结果与正常儿童相比，SLE伴贫血患儿血清TNF-α、IFN-γ和Epo均显著增高。TNF-α、IFN-γ抑制正常骨髓CFU—E和BFU—E集落形成，且随浓度增加，抑制作用增强。SLE自身血清能抑制其CFU—E形成。rhEpo能纠正TNF-α、IFN-γ和SLE自身血清对红系祖细胞的抑制。结论SLE患儿血清中存在造血干细胞抑制物；TNF-α、IFN-γ可能在贫血的发病中起作用；rhEpo可用于治疗SLE贫血。     

乳腺癌患者外周血中树突状细胞表面标记CD1a、CD83的研究

目的：对乳腺癌患者外周血中培养的树突状细胞（dendritic cells,DC)表面分子CD1a,CD83的表达进行研究。方法：采用密度梯度离心的方法分离人外周血中的单个核细胞，用粒细胞-单核细胞集落刺激因子（GM-CSF），白细胞介素-4（IL-4），肿瘤坏死因子α（TNF-α）细胞因子组合，刺激DC增殖，分化，用标有荧光素的单抗标记培养细胞，在流式细胞仪上分析所培养的细胞。结果：该细胞表达CD1a,CD83分子，但CD1a,CD83在CD3^ T,CD19^ B淋巴细胞上也表达，CD1a,CD83在活化的淋巴细胞上表达水平比未活化的高，CD19^ B细胞上表达水平比CD3^ T细胞高。结论：CD1a,CD83等分子并非DC特有的标记，目前鉴定DC仍然要靠细胞形态，细胞表达CD1a,CD83以及共刺激分子等综合因素来确定DC。     

人外周血中树突状细胞的诱导、培养及其表面标记的初步研究

目的：在人外周血中有效地诱导，培养树突状细胞（dendritic cells,DC)并鉴定其表面分子的表达，方法：采用密度梯度离心的方法分离人外周血中的单个核细胞，在6孔板上贴壁2h，然后吸去悬浮细胞，用粒细胞－巨噬细胞集落群体刺激因子（GM－CSF）、白细胞介素－4（IL－4）、肿瘤坏死因子－α（TNF-α）细胞因子组合，刺激树突状细胞（DC）增殖，分化。用标有荧光素的单抗标记培养细胞，在激光共聚共焦显微镜下拍摄标记有荧光素的细胞，在流式细胞仪上分析所培养的细胞。结果：该细胞直径在10－20μm，培养14天后，CD1a^ 48%,CD83^ 97%,CD40^ 33%，人体主要组织相容性复合物（MHC）Ⅱ^ 95%,CD80^ 98%,CD86^ 93%,CD83是DC的成熟标记。结论：该方法是一种可靠的诱导和培养DC的方法，对于乳腺癌患者还可通过动员等措施进一步提高DC的分离率。     

维甲酸对正常造血祖细胞集落形成的影响

用细胞培养方法观察了不同浓度（１０－９～１０－５ｍｏｌ／Ｌ）的全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）对正常造血祖细胞集落形成的影响。结果表明，随着浓度的增加，ＡＴＲＡ对红系祖细胞集落形成单位（ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ）的抑制作用增加，但在１０－８～１０－６ｍｏｌ／Ｌ内对粒单系祖细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）的形成有促进作用，１０－６ｍｏｌ／Ｌ的ＡＴＲＡ对巨核系祖细胞集落形成单位（ＣＦＵ－Ｍｅｇ）生长也有促进作用，提示在急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）用ＡＴＲＡ治疗过程中，ＡＴＲＡ参与了其正常造血功能的恢复。     

EphB4在三羟异黄酮抑制红系祖细胞分化中的作用研究

目的：探讨三羟异黄酮抑制红系祖细胞分化的机制。方法：选择三羟异黄酮处理脐血CD34^ 细胞，采用红系爆式集落计数、免疫表型分析等实验方法，观察：三羟异黄酮对红系祖细胞分化的抑制作用。同时用Western blot分析检测EphB4酪氨酸磷酸化变化。结果：10～90μmol／L三羟异黄酮作用7～14d可抑制红系爆式集落形成和glycophorin A蛋白表达，同时红系祖细胞EphB4酪氨酸磷酸化水平降低，并且三羟异黄酮抑制红系祖细胞分化与剂量呈正相关。结论：三羟异黄酮可通过抑制EphB4酪氨酸磷酸化而抑制红系祖细胞分化。     

系统性红斑狼疮伴贫血患儿血清TNF-α、IFN-γ水平的研究

目的研究系统性红斑狼疮（SLE）伴贫血患儿体内的血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）水平。方法对SLE患儿和正常儿童体内的TNF-α和IFN-γ水平进行检测,并观察TNF-α和IFN-γ水平对红系造血祖细胞CFU-E与BFU-E集落形成的影响。结果正常儿童体内的TNF-α和IFN-γ水平明显低于SLE伴贫血患儿。TNF-α和IFN-γ会对正常骨髓CFU-E与BFU-E集落的形成产生较为明显的抑制作用,且抑制作用会随着浓度的增加而增强。结论 SLE患儿血清中存在着能对造血干细胞产生抑制的物质;TNF-α和IFN-γ可能是引发SLE患儿贫血的因素。     

树突状细胞体外培养体系的优化

目的：探讨无血清专用培养基从人外周血单个核细胞（DC）分离培养树突状细胞的优化方法。方法：取正常成人新鲜血液，经密度梯度离心法，利用连续贴壁的方法获得单个核细胞，采用无血清培养基经人重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白介素-4（rhIL-4）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）诱导产生成熟DC，倒置显微镜观察树突状细胞结构，流式细胞仪检测DC表面标志物表达水平。结果：连续贴壁法无血清专用培养基体外分离培养人外周血DC，所获得DC数量和纯度均都多于以往一次贴壁分离含10％胎牛血清RPMI培养基培养的DC。培养1周的DC高表达CD83、HLA-DR、CD80、CD86、CD83^＋HLA—DR^＋及CD80^＋CD86^＋。结论：采用无血清专用培养基连续贴壁法可分离培养数量较大、纯度较高的人外周血来源的DC。     

人外周血诱导DC1 DC2方法的初步探讨

目的：探讨人外周血单个核细胞(PBMC)体外诱导DCl、DC2的条件。方法：体外用细胞因子GM-CSF IL-4/ TNF-α及IL-3 G-CSF／ TNF-α来分别诱导DC。结果：用GM-CSF IL-4／ TNF-α诱导出CDl23^ DC2和CDl23^-DCl细胞，而采用G-CSF IL-3／ TNF-α未能诱导出CDl23^ 的DC2细胞。结论：用人的外周血单个核细胞，在体外用细胞因子组合GM-CSF IL-4／ TNF-α可以诱导出CDl23^ DC2和CDl23^-DCl细胞。     

正常人骨髓基质祖细胞体外传代培养的实验研究

研究正常人骨髓基质祖细胞在体外传代培养过程中的功能变化,方法：采用体外液体单层和半固体培养法。结果：Ｆ１传代细胞对骨髓红系祖细胞集落形成单位和粒系祖细胞集落形成单位支持能力最显著,Ｆ２代对有核细胞粘附能力最显著。     

血管紧张素Ⅱ对造血祖细胞优势扩增的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其受体拮抗剂氯沙坦对不同系别造血祖细胞分化的影响. 方法 悬浮培养的单个核细胞分为5组:促红细胞生成素(EP0)组(Ⅰ组),EFO AngⅡ组(Ⅱ组),EPO AngⅡ 氯沙坦组(Ⅲ组),AngⅡ组(Ⅳ组)及对照组(Ⅴ组).巢式逆转录聚合酶链反应(nested-RT-PCR)检测血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)基因的mRNA表达.计数红系爆式集落形成单位(BFU-E)和粒一单系集落形成单位(CFU-GM). 结果 ①EPO组及EPO AngⅡ组于第6,9天可检测到AT1R mRNA表达;在相同时间点EPO AngⅡ组较EPO组AT1R的mRNA表达量增多.②EPO AngⅡ组较其余各组红系集落明显增多,粒系集落明显减少.AngⅡ组及对照组均未检测到红系集落. 结论 AngⅡ在EPO存在下与AT1受体结合促使红系祖细胞向红系优势分化.氯沙坦通过抑制AngⅡ与AT1受体结合,抑制红系分化.     

造血干细胞移植后免疫重建及其意义的研究进展

本文对造血干细胞移植后的免疫重建及其意义的研究进展作一综述,着重介绍移植后宿主体内T细胞、自然杀伤(NK)细胞及树突细胞(DC)数量和功能的变化。     

细胞培养技术的研究进展

随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现。本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述。     

EPCs在MSCs向肝样细胞转化中作用的初步探讨

目的：探讨内皮前体细胞(endothelial precursor cells, EPCs)在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肝样细胞转化中的作用。方法：分离培养SD大鼠MSCs和EPCs,取第3代MSCs向肝样细胞转化培养,培养过EPCs的无血清及因子的培养基(endothelial progenitor cell-conditioned medium, EPCs-CM)、无血清的α-最低必需培养基(alpha minimal essential medium, α-MEM)分别与肝细胞转化培养基按1∶1比例配置,作为实验组和模型对照组,正常α-MEM培养基为空白对照组,分别观察细胞形态及数量变化;在培养3、5、7、9 d时应用免疫荧光检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)、清蛋白(albumin, ALB)的表达。结果：空白对照组MSCs形态无明显变化;实验组与模型对照组细胞均出现肝样细胞形态。空白对照组未见AFP、ALB表达,模型对照组和实验组在3、5、7、9 d AFP、ALB表达水平均增高,其中实验组比模型对照组AFP、ALB水平增高明显。结论：EPCs在MSCs向肝样细胞转化中可能起一定的促进作用。     

Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells

Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells （hAMSCs）. Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞，并进行传代培养，采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力，并表达神经巢蛋白，分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原，为中枢神经系统的干细胞。     

人成纤维细胞产生的抑制因子对肿瘤和转化细胞增殖与分化的影响

对人成纤维细胞产生的抑制因子(HFDI)的细胞生长抑制效应进行研究,发现HFDI对肿瘤细胞~3H—TdR掺入抑制是由于使细胞变性坏死或促使细胞有限分化所致;并证明HFDI对PHA刺激的淋巴细胞转化的抑制,也是由于使转化细胞变性坏死或促使细胞向成熟方向发展所致。     

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。     

新生豚鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记

目的 从新生豚鼠海马中分离培养神经干细胞，为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件。方法 分离新生豚鼠海马组织，用含碱性成纤维生长因子（bFGF）和表皮生长因子（EGF）无血清培养技术培养神经干细胞，免疫组化技术检测其巢蛋白（Nestin）的表达。采用荧光染料DAPI标记神经干细胞。结果 从新生豚鼠海马组织分离出的细胞中可获得呈集落样生长的神经干细胞团，并能表达Nestin；荧光染料的标记效率可达93．4％，细胞传代8次后荧光亮度仍无明显衰减。结论 从新生豚鼠海马分离的细胞具有明显的增殖能力，荧光染料的标记可获得较高的标记效率，可作为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋实验研究的供体细胞。     

睾丸支持细胞与骨髓间充质干细胞共培养的初步研究

目的 观察睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)共培养时SCs对MSCs扩增的影响. 方法 取雄性SD大鼠睾丸,分离出SCs,取SD大鼠,分离出骨髓MSCs,将两种细胞用"三明治"式的方法共培养7 d. 结果 共培养组的MSCs前四天生长较对照组快,第5天无明显差异,第6和第7天细胞数量迅速减少. 结论 在体外共培养的早期,SCs可以显著促进MSCs的生长,但在后期则反而抑制MSCs的生长,具体原因有待进一步研究.     

大鼠胃壁细胞的分离及培养

目的　完成胃壁细胞分离及纯化 ,建立原代培养胃壁细胞的方法 .方法　制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育 ,并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞 ,Percoll梯度离心富集胃壁细胞 ,用含10 0 m L· L- 1 血清的 PBS或培养液 ,时差贴壁去除成纤维细胞 ,然后 ,将壁细胞接种于培养板中 ,培养液用无血清的 1∶ 1Harm's F- 12 / DMEM培养 ,内含胰岛素 5 mg· L- 1 ,氢化可地松 4μg· L- 1 ,转铁蛋白 5 mg· L- 1 ,硒酸钠 5μg· L- 1 ,牛血清白蛋白 2 g· L- 1 ,表皮生长因子 2 5 μg· L- 1 ,葡萄糖 1.98g· L- 1持续培养可达 1wk以上 .结果　获得的壁细胞经吖啶橙 (acridine orange,AO)鉴定纯度达 80 %以上 ,原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长 ,且生长状态良好 .结论　此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养 ,为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础 .