稀土元素镧、铈对铁皮石斛组培苗生长影响的研究

目的 探讨添加稀土元素镧、铈对铁皮石斛组培苗以及移栽后铁皮石斛苗的生长的影响,寻找能显著促进铁皮石斛生长发育的稀土元素,以获得品质优良的铁皮石斛苗.方法 以铁皮石斛小苗为外植体,通过添加不同浓度硝酸镧、硝酸铈的培养基上进行培养,并对其性状特征、生理活性、移栽后生长状况等进行统计比较研究.结果 通过90 d的培养后,添加稀土元素组别的铁皮石斛的鲜质量、根数、株高、叶绿素含量均高于空白组,分蘖数低于空白组,而且随着硝酸镧和硝酸铈浓度的增高,铁皮石斛组培苗的鲜质量、株高、根数、叶绿素含量基本呈递增的趋势,分蘖数呈递减的趋势,硝酸铈浓度为40 mg/L时,其鲜质量、根数、株高最大,分蘖数最少;铁皮石斛移栽培养30 d后,稀土元素组比空白组中的存活率和抽芽率高,硝酸铈为40 mg/L时其生长情况最佳;一定浓度的稀土元素La 、Ce能增强铁皮石斛组培苗的T-SOD酶、CAT酶活性和根系活力,添加10.0～40.0 mg/L La3+,SOD酶活性和CAT酶活性均呈现先增后降的趋势;添加10.0～40.0 mg/L Ce3+,SOD酶活性逐渐增强,但CAT酶活性在Ce3+10～ 30.0 mg/L时逐渐增强,40.0 mg/L时又稍下降;添加10.0～40.0 mg/L La3+,根系活力呈先增后降的趋势,10～ 30.0mg/L时根系活力逐渐上升,40.0 mg/L时略有下降;添加10.0～40.0 mg/L Ce3+,根系活力逐渐上升,40.0mg/L时最高.结论 稀土元素镧、铈对铁皮石斛组培苗的生长及T-SOD酶、CAT酶活性和根系活力均有较显著的影响,本文结果为铁皮石斛组培苗的壮苗以及品质的提高提供了依据.     

铁皮石斛通过GLUT4和HK2对肺癌及肺癌细胞糖酵解的影响机制

目的 研究铁皮石斛通过葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)和己糖激酶2(HK2)对肺癌及肺癌细胞糖酵解的影响机制。方法 采用MTT法检测铁皮石斛提取物对人肺癌细胞A549活力的影响,并分析A549细胞中葡萄糖消耗量和乳酸生成量;建立LLC肺癌细胞荷瘤小鼠模型,设立对照组、灌胃铁皮石斛提取物低剂量组及高剂量组,观察各组小鼠体重变化和肿瘤生长,通过免疫印迹法(Western blot)检测铁皮石斛提取物对A549细胞、肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织中GLUT4、HK2和PKM2蛋白表达水平的影响。结果 与空白对照组相比,25.0～800.0 mg/L铁皮石斛提取物作用于A549细胞的活力呈剂量依赖性降低(P<0.05),且能够明显降低A549细胞中葡萄糖消耗量和乳酸生成量(P<0.05);肺癌荷瘤小鼠体内实验结果表明,200.0 mg/kg和400.0 mg/kg铁皮石斛提取物能够抑制肺癌荷瘤小鼠体内肿瘤生长,并且不引起小鼠体重变化,表现出良好的药物安全性;铁皮石斛提取物能够下调A549细胞和肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织中GLUT4和HK2蛋白表达,对PKM2表达影响不明显。结论 铁皮石斛提取物治疗肿...     

PEG诱导金钗石斛原生质体融合

【立论依据】 金钗石斛(Dendrobium nobile)在治疗心血管疾病、提高机体免疫功能、抗疲劳等方面具有显著功效,在国内外具有广阔的市场前景。然而由于生长缓慢、繁殖率低等生物学特性,以及生态环境的破坏和长期过度采挖等因素,金钗石斛野生资源日渐枯竭,严重制约了市场需求。利用现代生物技术选育出优良种苗,拓展金钗石斛种质资源,为金钗石斛的产业化生产奠定基础。 【设计思路】 本研究拟采用原生质体培养结合细胞融合的方法,将含有不同优良性状的两个品系进行原生质体制备和PEG诱导细胞融合,从杂种细胞中筛选出兼具二者优良性状的异源四倍体细胞株。 【实验内容】 本研究以金钗石斛种子为外植体进行组培,诱导产生愈伤组织,进而通过酶解的方法已经获得两个品系高密度、高纯度和高活力的原生质体,进一步研究不同条件下PEG对金钗石斛细胞融合的影响,筛选出最适宜金钗石斛同核体和异核体细胞融合的条件,最后综合显微观察、核型分析和PCR检测的结果,鉴定出融合两个品系原生质体、细胞生长旺盛的细胞系。 【材料】 本研究采用两个金钗石斛研究材料:一个为指标性成分含量高、药用品质优良、源自于贵州赤水的品系,另一个为植株生长力旺盛、茎粗大、抗逆性强、农艺性状优良的云南瑞丽品系。 【可行性】 米尔斯坦和科勒用细胞融合技术制备单克隆抗体成功,1984年获诺贝尔医学与生理学奖后,该技术被广泛应用于生物、医药、农业研究领域,并成功获得白菜、甘蓝、番茄和马铃薯的融合杂种细胞。若获得四倍体金钗石斛,可以拓展它的野生资源,成为解决金钗石斛现面临问题的重要方法之一。 【创新性】 通过本研究有望培育出药用品质优良、生物量高、产业应用潜力大的异源四倍体细胞株,拓展金钗石斛的种质资源,有望进一步将该细胞株系诱导成再生苗,直接应用于生产实践,有助于贵州金钗石斛产业健康可持续的发展。     

广藿香悬浮细胞原生质体的分离与纯化研究

目的 探讨广藿香悬浮细胞原生质体分离与纯化过程中的影响因素.方法 以广藿香悬浮细胞为材料,采用酶解法分离原生质体,结合过滤法和离心沉降法进行纯化,测定原生质体产量和活力,考察酶液组合、酶解时间、渗透压调节剂甘露醇浓度、悬浮细胞继代培养时间、不同孔径滤网和离心条件的影响.结果 将继代培养9～14d的悬浮细胞在质量浓度分别为1.5％纤维素酶、0.8％果胶酶、0.5％半纤维素酶,渗透压调节剂甘露醇浓度为0.4 mol/L条件下,避光振荡酶解12h,可分离出大量原生质体,依次经40→100→200目滤网过滤,600 r/min离心5 min,得到杂质少、形态正常的广藿香悬浮细胞原生质体,产量为13.05x 105个/g,活力达到80.98％.结论 建立了广藿香悬浮细胞原生质体的分离及纯化方法,获得高产量高活力的原生质体,可用于培养、原生质体融合等进一步研究.     

铁皮石斛快繁技术体系研究

目的 以铁皮石斛Dendrobium officinale带芽茎段为材料,对铁皮石斛的组织培养进行系统研究,以期建立铁皮石斛的快繁技术体系。方法 采用植物组织培养的方法对铁皮石斛外植体的消毒方法、原球茎的诱导、增殖、分化、幼苗生根及瓶苗移栽等进行研究。结果 铁皮石斛外植体最佳的消毒方式为75%乙醇消毒30 s,再用0.1% HgCl₂消毒10 min;铁皮石斛带芽茎段原球茎诱导的最佳培养基为MS＋1.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA＋2 g/L AC,诱导率达到34.98%;原球茎增殖的最佳培养基为MS＋0.5 mg/L 6-BA＋0.8 mg/L 2, 4-D＋2 g/L AC,增殖率达到89.6%;原球茎分化的最佳培养基为MS＋1.2 mg/L 6-BA＋0.2 mg/L IBA＋2 g/L AC,分化率达到89.6%;幼苗生根的最佳培养基配方为1/2 MS＋2.5 mg/L NAA＋15%土豆汁＋2 g/L AC,生根率达到90.4%～92.8%;瓶苗移栽最佳方式为大苗、树皮块苔藓草做基质、基质中添加0.03 mg/L赤霉素,并接种适量菌根真菌Epulorhiza sp.。结论 建立了铁皮石斛的快繁技术体系,为铁皮石斛的工业化生产奠定技术基础。     

用东北红豆杉培养细胞的原生质体高效生产紫杉醇

作者首次测定了从东北红豆杉 Taxuscuspidata 培养细胞中大量分离有活力的原生质体的适宜条件,通过原生质体的分离培养,定量分析了细胞中紫杉醇的分布,并评价了用原生质体生产紫杉醇的潜力。从该植物种子诱生培养细胞,使用的WP 培养液含2mg/L α-萘乙酸(NAA)、20g/L 葡萄糖,固体培养基除含上述成分外增加200mg/L 琼脂糖凝胶。液、固培养基的传     

铁皮石斛复方制剂的抗氧化和延缓衰老作用研究

目的 研究铁皮石斛复方制剂的抗氧化和延缓衰老作用.方法 通过二苯代苦味酰基自由基(DPPH)和羟自由基清除实验检测铁皮石斛复方制剂的体外抗氧化活性.利用秀丽线虫氧化应激模型,验证铁皮石斛复方制剂的体内抗氧化活性,同时在正常条件下检测铁皮石斛复方制剂对寿命的影响.在氧化应激条件下,测定铁皮石斛复方制剂对秀丽线虫活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力以及丙二醛(MDA)含量的影响.结果 铁皮石斛复方制剂对DPPH和羟自由基均有较好的清除作用,在16.0 mg/mL质量浓度下对DPPH和羟自由基清除率均达到60%.铁皮石斛复方制剂能提高秀丽线虫在高浓度百草枯(50 mmol/L)氧化胁迫条件下的存活率,同时也能延长其在正常条件下的寿命.在低浓度百草枯(2 mmol/L)氧化胁迫下,铁皮石斛复方制剂能显著降低秀丽线虫ROS含量并增强SOD活力,但对CAT活力和MDA含量没有明显影响.结论 铁皮石斛复方制剂具有抗氧化活性,能提高秀丽线虫在氧化胁迫条件下的存活率并延长寿命,其机制可能与提高秀丽线虫SOD活力有关.     

铁皮石斛组培快繁技术研究

目的 通过研究铁皮石斛种子萌发、小苗增殖和生根的适宜培养基,建立一套铁皮石斛组织培养的快速繁殖体系.方法 以铁皮石斛种子为外植体,研究激素（6-benzylaminopurine和1-naphthleetic acid）不同质量浓度配比、天然添加物（马铃薯汁和香蕉汁）对铁皮石斛种子萌发、小苗增殖和壮苗生根的影响.结果 铁皮石斛种子萌发最适培养基为1/2MS ＋0.2 mg/L NAA＋ 100 g/L马铃薯汁＋25 g/L蔗糖汁,小苗增殖最适培养基为1/2MS ＋0.2 mg/L NAA＋ 100 g/L马铃薯汁（或香蕉汁）＋25g/L蔗糖汁＋0.5g/L活性炭,壮苗与生根最适培养基为1/2MS＋ 0.2 mg/L NAA＋ 100 g/L香蕉汁＋25 g/L蔗糖汁＋0.5g/L活性炭.结论 建立了一套铁皮石斛组培快繁体系,可用于大规模生产铁皮石斛组培苗.     

珍稀濒危药材铁皮石斛组培快繁关键技术研究

目的研究珍稀濒危药材铁皮石斛组织培养快速繁殖技术。方法以铁皮石斛茎段为试材,比较植物激素浓度配比、人工光源、炼苗驯化方法等对铁皮石斛组培快繁的影响,摸索出一套可进行组培快繁工厂化生产的技术体系,优选出铁皮石斛组培快繁的最适条件。结果 (1)组培各阶段最佳培养基:原球茎诱导:MS+BA 2.5 mg/L+IBA0.2 mg/L;原球茎分化:MS+BA1.5 mg/L+NAA1.2 mg/L+5%香蕉汁;壮苗生根:MS+NAA 0.15 mg/L+5%香蕉汁、MS+NAA 0.20 mg/L+7.5%香蕉汁、MS+NAA 0.25 mg/L+10%香蕉汁(分阶段补加);(2)人工光源:组培特定光谱节能灯;(3)炼苗方法:水培驯化炼苗。结论通过上述技术的应用,缩短了种苗组培育苗周期,解决了从组培苗到大量栽培的技术,该方法简便易用,且降低了生产成本。     

铁皮石斛多糖对慢性萎缩性胃炎大鼠的作用及其分子机制研究

目的探讨铁皮石斛多糖对亚硝基胍(N-methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)诱发的大鼠慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)的作用及其分子机制。方法 120只大鼠随机分为正常组,模型组,养胃舒组,铁皮石斛多糖高、中、低剂量组,每组20只。模型组,养胃舒组,铁皮石斛多糖高、中、低剂量组给予167μg/mL MNNG饮用液,正常组自由饮用蒸馏水,共造模8周。造模成功后,铁皮石斛多糖高剂量组每日灌胃给予铁皮石斛多糖提取物生药量1.34 g/kg;中剂量组0.67 g/kg;低剂量组0.335 g/kg。养胃舒组每日灌胃给予养胃舒颗粒4.0 g/kg。模型组给予生理盐水灌胃,正常组不予干预。给药12周后,取出胃组织,进行病理组织学、胃泌素(gastrin,Gas)、白介素-6(IL-6)、增殖细胞核抗原(proliferatingCellNuclearAntigen,PCNA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-αmRNA)、Janus激酶2(JAK2)、激活因子-3/酪氨酸磷酸化3(p-STAT3/STAT3)的检测。结果治疗第12周后,正常组,铁皮石斛多糖高、中、低剂量组、养胃舒组的体重均高于模型组(P0.05)。铁皮石斛多糖高、中剂量组体重高于养胃舒组(P0.05);②模型组炎症等级高于正常组(P0.01),而腺体数量、腺体厚度、主细胞数量、壁细胞数量低于模型组(P0.05)。铁皮石斛多糖高、中、低剂量组,养胃舒组的炎症等级、腺体数量、腺体厚度、主细胞数量、壁细胞数量较模型组均有恢复(P0.05)。与养胃舒组比较,铁皮石斛多糖高、中剂量组的主细胞数量增长(P0.05);铁皮石斛多糖高剂量组的壁细胞数量增长(P0.05);③正常组,铁皮石斛多糖高、中、低剂量组,养胃舒组的血清GAS含量高于模型组(P0.05)。正常组,铁皮石斛多糖高剂量组的血清IL-6含量低于模型组(P0.05);④正常组,铁皮石斛多糖高、中剂量组的PCNA、TNF-αmRNA低于模型组(P0.05);⑤正常组,铁皮石斛多糖高、中剂量组JAK2、p-STAT3/STAT3的蛋白表达均低于模型组(P0.05)。结论铁皮石斛多糖对CAG大鼠有良好的保护及逆转作用,能有效恢复体重,缓解胃粘膜萎缩,其作用机制可能是通过抑制JAK2/p-STAT3信号通路的活化来改善胃粘膜病理状态。     

新生隐球菌原生质体形成条件的研究

目的：研究新生隐球原生质体形成的条件。方法：应用不同的酶（溶壁酶和NovoZyme234）、在不同的酶浓度（1、3、5mg/ml）、pH值（4、5、6、7、8）以及加入不同的渗透压稳定剂（蔗糖、甘露醇和山梨醇）的条件下,分别制备原生质体并计算原生质体形成率。结果：对数生长早期的细胞较易形成原生质体,原生质体形成的最佳条件是以0.8mol/L的山梨醇为渗透压稳定剂,pH6.0,加入5mmol/L DTT和3mg/ml NovoZyme234,孵育75min,在此条件下,原生质体形成率是98.1%。溶壁酶与NovoZyme234的结果相似。结论：原生质体分离的关键因素是合适的溶菌酶、pH值和渗透压稳定剂。     

抗氧化中药的毒性试验

对抗氧化中药进行毒性试验研究。结果表明：急性试验小鼠和大鼠的ＬＤ５０分别为３６６９ｍｇ／ｋｇ,３８６９ｍｇ／ｋｇ（Ｂ．Ｗ＿均大于人每日口服剂量的２０倍以上,提示本品毒性甚微。长期毒性试验在相当于人每日每量２０倍,连续９０ｄ后出现中毒症状,如全重增长延迟, 血,肟肾实质变性等,但用一般治疗剂量,则无明显储积毒性作用。     

野牡丹提取物对实验动物血栓形成的影响

目的:研究野牡丹提取物(Melastoma candidum P.E,M.candidum P.E)对小鼠和大鼠血栓形成的影响。方法:(1)将40只昆明小鼠随机分成生理盐水组(10 ml.kg-1)、M.candidum P.E低剂量组(5 mg.kg-1)、M.candidum P.E高剂量组(10 mg.kg-1)和血栓通组(30 mg.kg-1),每组10只,通过小鼠腹腔分别注射生理盐水、M.candidum P.E或血栓通。各组用药后30 min,采用剪尾法和玻片法测定小鼠出血时间(BT)和凝血时间(CT)。(2)将32只SD大鼠随机分成生理盐水组(10 ml.kg-1)、M.candidum P.E低剂量组(10 mg.kg-1)、M.candidum P.E高剂量组(20 mg.kg-1)和血栓通组(30 mg.kg-1),每组8只,通过大鼠颈外静脉分别注射生理盐水、M.candidum P.E或血栓通。各组用药5 min后,用血栓生成仪测定大鼠5 min内的颈总动脉的平均阻塞率。结果:(1)小鼠M.candidum P.E低剂量组的BT[(3.25±0.45)min]和CT[(0.95±0.16)min]明显短于小鼠生理盐水组的BT[(7.17±1.80)min]和CT[(1.50±0.15)min],两组间差异均有统计学意义(P<0.05);与生理盐水组比较,小鼠M.candidum P.E高剂量组的BT[(11.55±1.11)min]和CT[(2.30±0.24)min]、血栓通组的BT[(13.75±1.64)min]和CT[(2.10±0.31)min]均有延长,差异有统计学意义(P<0.05);与血栓通组比较,小鼠M.candidum P.E高剂量组的BT和CT差异无统计学意义(P>0.05);(2)大鼠M.candidum P.E低剂量组的颈总动脉平均阻塞率[(86.56±1.54)%]明显高于生理盐水组[(63.15±9.74)%](P<0.05);大鼠M.candidum P.E高剂量组的颈总动脉平均阻塞率[(49.35±13.23)%]、血栓通组的颈总动脉平均阻塞率[(8.00±9.00)%]均较生理盐水组降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:低剂量M.candidum P.E有促凝血作用,高剂量M.candidum P.E有抗凝血作用。     

内生真菌菌丝及代谢物对铁皮石斛及金线莲生长的影响

目的 研究开唇兰小菇、石斛小菇和兰小菇3种小菇属内生真菌菌丝体及代谢物对兰科药用植物铁皮石斛及金线莲生长的促进作用。方法 在植物试管苗培养基中分别加入20%（V/V）真菌菌丝及10mg/L发酵液的乙酸乙酯提取物,观察对细胞增殖及苗生长的影响。结果 3种菌的菌丝体及兰小菇的乙酸乙酯提取物能显著提高铁皮石斛原球茎的增殖率;石斛小菇的菌丝体对金线莲的生长和侧芽增殖有显著促进作用;开唇兰小菇和兰小菇的乙酸乙酯提取物分别对增加金线莲侧芽发生数及生长有显著促进作用。结论 3种内生真菌对铁皮石斛、金线莲的促生长作用与菌丝内及分泌到菌丝外的代谢产物有关。     

绞股蓝对D-半乳糖所致亚急性衰老大鼠下丘脑的抗衰老作用及其机制研究

目的:观察绞股蓝对衰老大鼠下丘脑的保护作用,并探讨其作用机制。方法:40只SD雄性大鼠,按体重随机分为4组,每组10只:正常对照组、衰老模型组、生理盐水灌胃组、绞股蓝治疗组(100mg.kg-1.d-1)。分别称量大鼠脾脏、胸腺指数,检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮合酶(nitric ox-ide synthase,NOS)、一氧化氮(nitric oxide,NO)的活性变化。结果:衰老模型组大鼠下丘脑匀浆中SOD活性明显降低,MDA,NO活性明显增高,同正常对照组比较有显著性差异(P<0.01)。给予绞股蓝后可明显提高SOD活性,同时MDA,NO活性降低明显(P<0.01)。与衰老模型组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:绞股蓝能提高抗氧化物酶的活性,有效抑制衰老大鼠下丘脑氧自由基的形成,增加免疫器官重量,并可拮抗下丘脑NO引起的神经毒性,从而延缓D-半乳糖所致的大鼠衰老。     

绞股蓝总黄酮提取工艺的研究

目的优化绞股蓝总黄酮的提取工艺。方法采用L9(34)正交试验法,以总黄酮的得率为评价指标,考察乙醇体积分数、料液比、提取温度以及提取时间对绞股蓝总黄酮提取的影响。结果绞股蓝总黄酮提取的最佳工艺条件为:乙醇体积分数60%,料液比1∶60,提取温度90℃,提取时间2 h。结论该提取工艺稳定可行,适用于绞股蓝中总黄酮的提取。     

稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响

目的研究稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响。方法通过正交试验,以石斛小苗为外植体,培养在附加了3种不同稀土元素组合的1/2MS 20%的香蕉提取物的培养基上进行培养。结果3种稀土元素中的镧(La)对试管苗增质量、叶绿素b、总叶绿素和石斛多糖的量都有显著的影响;3种稀土元素都对试管苗的叶片数、根数、分蘖数以及叶绿素a的量影响不显著。结论为铁皮石斛试管苗的壮苗以及品质的提高提供了科学的依据。     

双叶抗栓素抗血栓形成作用的研究

本文报道了五叶参、桑叶抗血栓形成的新作用。通过体外实验研究证实,五叶参、桑叶水煮制备液能明显抑制ADP、复合诱聚剂诱导的血小板1分、5分、最大聚集率,并促进解聚发生(P均<0.05):二种药物还对体外血栓形成具有显著的抑制作用(P均<0.05;五叶参、桑叶与PPP混合后,尚能抑制多种凝血因子活性.使KPTT、PT、TT、AT、RVV-RT、RVV-CT等凝血试验时间延长(P均<0.05);此外.二种药物皆可加速红细胞电泳速度。上述结果表明,五叶参、桑叶是二种具有抑制血小板功能、凝血象及红细胞聚集性等多个环节的抗血栓形成药物,值得进一步研究探讨。     

兔脊柱融合术后邻近节段退变的组织学观察

目的：研究兔脊柱融合术后邻近椎间盘软骨终板组织结构和形态学改变。方法：54只体重相当的12月龄日本大耳兔随机等分为2组,一组为实验组,使用椎弓根螺钉和钢丝内固定的方法融合L 5/6节段,另一组作为对照组,仅做相同部位皮肤切口后缝合。分别于术后3、6、9mo每组取8只动物处死并取出L 2/3、L 4/5及L 6/7软骨终板进行HE染色及Markin评分。结果：融合术后3、6及9mo时实验组L 4/5、L 6/7（邻近节段）软骨终板Mankin评分较对照组高,差异有统计学意义（P〈0.05）。实验组L 4/5（融合平面以上邻近节段）与L 6/7（融合平面以下邻近节段）软骨终板Mankin评分6、9mo时较对照组高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：脊柱融合内固定术后邻近节段软骨终板较未融合固定者易发生退变,并且融合平面以上邻近节段较融合平面以下邻近节段更易发生退变。