RAPD技术在中药材鉴定中的应用进展

随机扩增多态性DNA（random amplified pclymorphic DNA，RAPD）技术是1990年由Williams等发展起来的一项DNA分子标记技术。RAPD技术是建立在PCR技术的基础上．用一系列（通常数百个）不同的随机排列碱基序列的寡核苷酸单链（一般为10bp）作为引物，对所研究的基因组DNA进行单引物扩增。     

红花种质的随机扩增多态性DNA分子鉴定

目的:从分子水平探讨红花(Carthamus tinctorius L.)的种内变异,为红花种质的分子鉴定提供依据.方法:用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA, RAPD)技术和统计学分析方法,对从我国新疆、甘肃、宁夏、河南、山东、山西、河北、安徽、浙江等9省采集的红花22个品种的遗传多样性进行分析.结果:根据RAPD特征图谱,通过在DNA分子水平上的聚类分析,将红花22个品种分为7个类型.RAPD聚类分析表明了品种间的亲缘关系:北方,特别是新疆地区的品种亲缘关系较近,PCR结果极为相似,而南方品种间遗传差异性较大.结论:红花种内存在一定的遗传变异,本研究结果为红花品种鉴定及亲缘关系的探讨提供一定依据.     

栀子及其近缘类群的随机扩增多态DNA分析

目的:探索栀子与其变种雀舌栀子、重瓣栀子及变型水栀子之间的亲缘关系。方法:从56个随机引物中筛选出12个引物对栀子及其近缘类群进行随机扩增多态DNA分析,应用SPSS10.0分析软件中的Jaccard方法计算任意两样品间的相似系数,用组内聚类方法计算得出聚类树状图。结果:共得到251个有效位点。聚类分析显示,栀子与重瓣栀子最先聚类,然后与水栀子聚类,最后与雀舌栀子聚类。结论:重瓣栀子与栀子亲缘关系最近,雀舌栀子与栀子的亲缘关系最远。     

RAPD技术中药材鉴定中的应用

RAPD技术是一种DNA分子标记技术,自90年代问世以来,人们即把它试用于中药材的鉴定,并在该领域取得可喜的研究进展。本文就RAPD技术的基本原理以及它应当用于中药格鉴定的 优缺点 、注意事项、目前国内外研究动态、可能发展前景等方面作了较详细的阐述。     

扩增片段长度多态性(AFLP)研究进展

扩增片段长度多态性（AFLP）是一种新的分子标记，被广泛应用于遗传结构、遗传距离测定、个体识别、纯度测定等领域，近年来其研究对象不断扩展，研究方法和检测技术不断改进，其在遗传多样性、种质鉴定、遗传图谱构建、基因定位和标记辅助育种等研究中也得到了广泛的应用。     

金华佛手遗传多态性的RAPD分析与品种的分子鉴定

目的 通过对佛手RAPD反应的优化，分析其遗传多态性，并对3个品种作出了分子水平上的鉴定。方法 PAPD反应在以下条件下进行：10－100ng/μL模板DNA，3．0－5．0mmol/LMgCl2,200μmol/LdNTP,0.2μmol/L10-mer Primer,lunit Taq Polymerase/25μL反应体积。结果 从38个引物中挑出12个有效稳定的引物。用距离系数UPGMA法聚类分析产生了树状图。根据PAPD分析及形态学观察，品种白花青皮与白花白皮的亲缘关系较近。不同的品种RAPD反应有各自独特的扩增带型。结论 本方法简单、高效，适宜用于中药佛手的遗传多态性和品种分子鉴定。     

胡萝卜与狭叶柴胡不对称体细胞杂种的分子鉴定

目的 对经同工酶初步确认的4个胡萝卜与狭叶柴胡体细胞杂种进一步从分子水平上证实他们的杂种性质。方法 随机扩增多态性DNA(RAPD)分析和5S rDNA间隔序列差异。结果 4个克隆均含有双亲特征谱带及新带。结论 从分子水平上证实了他们的杂种性质。为进一步分析杂种中柴胡药效成分的含量及筛选出高药效成分含量的细胞系奠定基础。     

浅析中药材的现代鉴定方法

本文查阅中药鉴定学、中药鉴定方法最新研究成果与历年文献,收集整理信息,并进行汇总分析,根据使用频次与引用频次,对中药材现代鉴定方法进行概括总结。中药材现代鉴定方法以DNA条形码、PCR、RFLP、AFLP、RAPD、ISSR等分子鉴定为主,中药材现代鉴定新技术与新方法的应用越来越普遍,数字化是未来发展趋向。     

癌组织中的遗传不稳定性的RAPD分析

目的　检测肿瘤发生发展过程中DNA和染色体的不稳定性及筛选与新的癌基因或抑癌基因相关的分子标志。方法　用 9个随机引物对 5种肿瘤共 12 8个样本进行RAPD分析 ,检测其DNA和染色体的不稳定性。不稳定性的扩增带被切割回收纯化 ,克隆 ,然后被标记为探针作Southern和Northern印迹杂交分析 ,再进一步测序分析。结果　在所有的癌组织标本中胃癌样本 5号和 3号显示出最高的遗传变异。这 5种癌组织中遗传不稳定性的平均检出率分别从 4 2 2 %到 4 9 4 %。每个随机引物的检测能力有极显著差异 ,分别从 2 7%到 6 8%不等。其中引物2最高达 6 8% ,引物 8最低 ,为 2 7%。图 2中的B带为一个单拷贝片段经RFLP分析后发现其在胃癌和结肠癌中是缺失突变 ,测序后 ,经查询是一个新的序列并被GeneBank收录 (登录号AF15 10 0 5 )。进一步研究显示它可能是一个新抑癌基因的调控元件部分 ,含有一个顺式作用的“CACA”启动子 ,一个“GATA”家族序列的增强子和一个转录起始密码子。结论　RAPD与其他方法结合使用能检测肿瘤发生过程中DNA和染色体的不稳定性 ,并筛选与新的癌基因或抑癌基因相关的分子标志。     

长江流域南方鲇（Silurus meridionalis）和鲇（Silurus asotus）分子遗传标记的建立

目的 为南方鲇和鲇的分类提供分子鉴定的依据。方法 随机扩增多态性DNA技术（RAPD）。结果 建立了南方鲇和鲇的分子遗传标记,即S449－1．0kb。结论 南方鲇和鲇的分子遗传标记可在遗传育种中用于物种的有效鉴定,应用随机扩增多态性DNA技术可以发现并建立两个种之间鉴别的分子遗传标记。     

显微鉴定在中药材鉴定中的研究进展

从显微鉴定发展史及常用中药材的显微鉴定2个方面对中药材的显微鉴定作一综述,旨在为显微鉴定技术与现代新技术紧密结合提供思路,使中药材的鉴定分析结果更准确、科学、合理。     

新疆柯尔克孜族pMCT118、apoB、p33.6三个位点的扩增片长段度多态性的研究

目的:通过对柯尔克孜族VNTR三个位点的调查研究,了解柯尔克孜族pMCT118、apoB、p33.6的扩增片段的长度多态性.方法:使用PCR技术分析检测,并对检测结果进行遗传学统计分析.结果:pMCT118检出23个等位基因,65个基因型;apoB检出13个等位基因,37个基因型;p33.6检出14个等位基因,32个基因型.结论:柯尔克孜族存在汉族没有的基因,所谓查的数据可作为个人识别和亲子鉴定的计算参数.     

应用pAW101 DNA探针作人流胚胎组织的亲权鉴定

用pAW1015kb的DNA片段为探针检测人流胚胎与其亲代的DNA限制性片段长度多态性(RFLPs)的遗传关系。同时测定他们的某些同工酶(葡萄糖磷酸变位酶、酯酶D、乙二醛酶Ⅰ)型。在不违反孟德尔遗传规律的前提下,按M(?)ller-Essen公式计算,其父权概率都已达到或超过可以确认亲生关系的标准。这一方法的建立,使过去棘手的早期妊娠的亲权鉴定之难题获得圆满解决。此外,本文还对这一方法的优越性进行了讨论。     

DNA分子标记技术在中药材品质鉴定中的应用进展

目的了解DNA分子标记技术在中药材品质鉴定中的应用进展。方法检索本领域国内外相关文献资料并进行分析、整理和总结。结果DNA分子标记技术在该领域中得到了广泛应用。结论DNA分子标记技术可以作为中药材品质鉴定的重要手段。     

中药辛夷及其近缘种的DNA条形码分子鉴定

目的 应用DNA条形码技术对中药辛夷及其近缘种进行分子鉴定,建立快速、准确、便捷的辛夷药材鉴定方法。方法 提取21份辛夷药材基原植物及其近缘种基因组DNA,扩增ITS、ITS2、psbA-trnH、matK和rbcL基因序列并进行双向测序;运用MEGA7.0软件进行序列比对,基于Kimura-2-Parameter(K2P)模型计算种内、种间的遗传距离以评估Barcoding gap,构建邻接(NJ)系统发育树反应鉴定结果。结果 5个引物序列中,psbA-trnH和matK序列的2个引物能正常扩增目的基因,测序成功率均大于98%,rbcL测序成功率较低,只有38.1%;其中matK具有最多的变异位点,psbA-trnH较matK和rbcL的Barcoding gap明显;NJ系统发育树显示,psbA-trnH+matK组合条形码序列能够准确鉴别9个品种,将辛夷药材及其近缘种很好地区分,并首次将其应用到玉兰嫁接砧木品种的分子鉴定。结论 应用psbA-trnH+matK的序列组合能够实现辛夷药材的准确鉴定,并且可以应用于玉兰嫁接砧木品种的快速鉴别。     

随机扩增多态性DNA鉴定酶母菌的初步探讨

目的：应用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术对临床上常见的酵母菌进行分析，以选择合适的引物和实验条件对酵母菌进行鉴定。方法：选用四条长度为１０个碱基的随机引物分别对酶母菌、丝状真菌及细菌进行扩增，并对扩增结果进行相似性分析。结果：所选三条引物可在种的水平上将所试图株有效地区分开来，但同一引物对不同菌种的扩增效果存在明显的差异。在扩增同种内不同菌株时，各菌株间也存在着一定的差异，但同一引物进行扩增     

粘质沙雷氏菌和红曲霉跨界原生质体融合子的分子鉴定

目的 应用分子生物学方法鉴定粘质沙雷氏菌和红曲霉原生质体跨界融合子.方法 采用随机扩增多态性分析和功能基因PCR扩增的方法对9个融合子进行分子鉴定.结果 筛选出的6条随机引物对2个亲本和9个融合子的DNA均能扩增出清晰的条带,除第5号融合子和粘质沙雷氏菌的相似指数略低,其余8个融合子和2个亲本的相似指数均大于2个亲本之...     

实验动物皮肤病原真菌核酸鉴定方法的建立

目的选择一种快速、敏感和特异的方法来检测实验动物皮肤病原真菌.方法选取真菌CHS1基因中一段序列设计皮肤真菌通用引物和选取一种随机引物FM1,利用聚合酶链反应（PCR）扩增三种动物皮肤病原真菌标准株：须毛癣菌、石膏样小孢子菌、犬小孢子菌.结果两种引物扩增产物片段大小在三种真菌之间有明显不同.结论本实验方法可快速特异性检测实验动物皮肤病原真菌.     

mtDNA基因多态性分析在母系遗传鉴定中应用的研究

目的:探讨线粒体DNA中的HV1?HV2基因的序列多态性,并讨论其在母系遗传鉴定中的应用价值?方法:针对线粒体HV1?HV2基因位点采用文献报道引物,PCR扩增后应用直接测序技术研究其等位基因分布及频率?结果:一代母系遗传中可能有1~2个点突变,而非母系遗传则突变点一定大于3个?结论:对于认定2个个体是否母子(女)关系或者是否有同一个母亲的案例具有很重要的意义?     

癌组织中的遗传不稳定性的RAPD分析

目的　检测肿瘤发生发展过程中DNA和染色体的不稳定性及筛选与新的癌基因或抑癌基因相关的分子标志.方法　用9个随机引物对5 种肿瘤共128个样本进行RAPD分析,检测其DNA和染色体的不稳定性.不稳定性的扩增带被切割回收纯化,克隆,然后被标记为探针作Southern和Northern印迹杂交分析,再进一步测序分析.结果　在所有的癌组织标本中胃癌样本5号和3号显示出最高的遗传变异.这5种癌组织中遗传不稳定性的平均检出率分别从42.2%到49.4%.每个随机引物的检测能力有极显著差异,分别从27%到68%不等.其中引物2最高达68%,引物8最低,为27%.图2中的B带为一个单拷贝片段经RFLP分析后发现其在胃癌和结肠癌中是缺失突变,测序后,经查询是一个新的序列并被Gene Bank收录（登录号AF151005）.进一步研究显示它可能是一个新抑癌基因的调控元件部分,含有一个顺式作用的"CACA"启动子,一个"GATA"家族序列的增强子和一个转录起始密码子.结论　RAPD与其他方法结合使用能检测肿瘤发生过程中DNA和染色体的不稳定性,并筛选与新的癌基因或抑癌基因相关的分子标志.