灵芝体外抗肿瘤成分的提取与分离

灵芝作为一种重要的传统滋补中药，现代医学对其有效化学成分的分析、药理及临床应用研究已经取得了较大进展［１～３］。动物实验表明，灵芝多糖可明显提高机体免疫功能，从而抑制Ｓ－１８０肉瘤、Ｌｅｗｉｓ肺癌和结肠癌等多种肿瘤生长［４，５］。最近，我们发现灵芝孢子醇提物能够抑制体外培养的人子宫癌ＨｅＬａ细胞的生长［６］，灵芝子实体醇提物亦有相似的作用（待发表资料），表明灵芝中含有体外抗肿瘤成分。笔者报道这些抗肿瘤成分的提取及初步分离。１　材料与方法１．工材料：灵芝子实体由北京同仁堂饮片厂生产，干燥捣碎成粉。…     

脑胶质瘤浸润淋巴细胞的分离、培养与表型及体外抗肿瘤活性测定

经重组白细胞介素2(rIL-2)和胸腺因子D(TFD)培养前后的人脑胶质瘤侵润琳巴细胞(GIL)的表型及抗自体瘤细胞活性变化。(1)GIL可被分离，培养后可增值；(2)新鲜GIL主要为T淋巴细胞，其中CD8^ 细胞多于CD4^ 细胞，随培养时间延长呈相反变化；(3)新鲜GIL活性很弱，培养后很强；(4)TFD可能具有增强rIL-2的激活作用。提示G1L可望作为理想的效应细胞用于脑腔质瘤的治疗。     

湖州铁线莲多糖的分离纯化及体外抗肿瘤活性研究

[目的]分离纯化湖州铁线莲粗多糖(CHTP)并测定其体外抗肿瘤活性。[方法]采用DEAE-cellulose 52离子交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析分离纯化CHTP;采用MTT法测定CHTP及经纯化后多糖(CHTPII-1)对体外培养的人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞MGC8-03和人白血病细胞K562等三种肿瘤细胞的抑制作用。[结果]经分离纯化获得多糖组分CHT-PII-1;在CHTP浓度为250～1000mg.L-1或CHTPII-1浓度为125～500mg.L-1的检测范围内,CHTP和CHTPII-1对HepG2、MGC8-03和K562三种细胞的抑制率均随着多糖浓度的增大而增大。除了MGC8-03细胞62.5mg.L-1 CHTPII-1处理组和K562细胞125mg.L-1 CHTP处理组的MTT检测OD值与阴性对照组间无显著差异外,其余各组的MTT检测OD值均显著或极显著低于阴性对照组。[结论]CHTP和CHTPII-1对HepG2、MGC8-03和K562等三种肿瘤细胞均有较强的抑制作用,且其抑制率与多糖浓度呈良好的量效关系。     

银杏叶总黄酮提取分离工艺研究

用正交试验对银杏叶总黄酮的提取工艺进行研究,考察了溶剂、用量、提取时间、提取次数4因素对其提取率的影响。结果表明以8倍量70％乙醇回流提取3次,每次2小时,可提高银杏叶总黄酮的提取率。并对分离工艺进行了初步探讨。     

山楂中总黄酮几种提取分离方法的考察及含量测定

目的 考察几种提取方法对山楂果中总黄酮含量的影响。方法 采用不同的提取方法获得山楂浸膏,经大孔吸附树脂分离提取有效成分。结果 以甲醇为溶剂,用索氏提取器提取经大孔吸附树脂分离,提取效率最高（2.00%）;以60％乙醇为溶剂,超声提取经大孔吸附树脂分离,提取效率较高（1.96%）。结论 以60％乙醇为溶剂,超声提取,经大孔吸附树脂分离,提取效率较高,且方法简便易行,适于大规模生产。     

熊果酸衍生物的合成及其体外抗肿瘤活性评价

目的 通过合成系列熊果酸衍生物,测试其抑制肿瘤细胞增殖活性,探讨熊果酸衍生物抑制肿瘤细胞增殖的构效关系,获得抗肿瘤活性更好的熊果酸衍生物.方法 通过乙酰化反应对熊果酸的3-位羟基进行保护后,再将其28-位羧基制备成酰氯并与氨基酸酯反应,最后再在碱性条件下水解制备得28-位羧基被修饰的熊果酸衍生物.所有熊果酸衍生物的结构通过核磁共振氢谱(1HNMR)、核磁共振碳谱(13CNMR)和高分辨质谱(HRMS)进行确认.采用MTT法测试熊果酸衍生物抑制U937、HL-60、Jurkat、K562、DU145、EC109、MDA231和SMMC7721肿瘤细胞的增殖活性.结果 仪器分析结果表明所制备的熊果酸衍生物均为设计的目标化合物.对抑制U937肿瘤细胞增殖结果表明熊果酸28-位羧基被对4-氨甲基苯甲酸、7-氨基己酸和8-氨基辛酸修饰后,在给药浓度为5.0×10-6 mol/L时对U937细胞增殖的抑制率分别达到(18.84 ±2.58)％、(43.17±4.52)％和(68.38±7.95)％,明显优于母体熊果酸母体(10.06 ±2.35)％ (P ＜0.05).对Jurkat细胞增殖的抑制率则分别达到(68.42±8.19)％、(58.36±7.99)％和(61.08±5.77)％,远高于熊果酸的(6.89±2.31)％(P＜0.05).结论 对熊果酸28-位羧基进行延长修饰,有利于提高熊果酸的抗肿瘤活性,当延长7～8个碳原子,抗肿瘤效果最好.     

中药提取物9901的体外抗肿瘤活性研究

目的 用体外培养法研究中药提取物9901对肿瘤HeLa细胞生长的抑制作用和作用机制。方法 采用MTT法和激光扫描共聚焦显微镜进行研究。结果 HeLa细胞在9901处理3天后,测得该药的IC50为5.12μg/ml。用不同浓度的9901处理HeLa细胞48h后,用PI染色,HeLa细胞的生长,通过影响细胞的DNA而发挥作用。     

新型酰胺类鬼臼毒素衍生物的合成及体外抗肿瘤活性

目的:通过对鬼臼毒素母核进行结构改造,以获得高效、低毒、抗多药耐药的新型鬼臼毒素衍生物。方法:将4β-氨基-4-脱氧表鬼臼毒素的C-4位经酰胺化分别引入对位取代的苯甲酸和对位取代的肉桂酸化合物,得到4-甲酰基苯甲酸及4-甲酰基肉桂酸的鬼臼毒素类衍生物,通过MTT法筛选,并对K562和Hela细胞进行药理活性评价。结果:合成得到两个系列共8个化合物,所有化合物都经过HR-ESI-MS和¹HNMR验证,其中化合物1d、2b具有较强的体外抗肿瘤活性。结论:在C-4位引入4-甲酰基苯甲酸以及4-甲酰基肉桂酸基团可增加鬼臼毒素类衍生物的抗肿瘤活性。     

菊三七不同提取部位体外抗肿瘤实验研究

菊三七为菊科土三七，属多年生草本植物，别名土三七、破血丹、紫三七等，具有止痛消肿、活血化瘀、抗癌防癌、抗疟痹症、治妇科诸病的功效。本研究以体外培养的人宫颈癌细胞（Hela）为模型，考察了菊三七兰各个提取部位体外抗肿瘤活性，旨在寻找菊三七活性部位及作用机制。     

超声下白凤菜总黄酮的优化提取及其体外抑菌活性研究

目的优化白凤菜总黄酮的提取工艺,并研究白凤菜总黄酮的体外抑菌活性。方法以70%乙醇溶液浸提,再用200 W超声波辅助,通过L9(33)正交试验研究白凤菜总黄酮的最佳提取工艺。采用纸片琼脂扩散法和二倍稀释法观察白凤菜总黄酮对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷白杆菌和铜绿假单胞菌的抑制作用。结果总黄酮提取的最佳工艺条件为:预浸泡时间12h、超声温度70℃、超声时间30min。此工艺下白凤菜干粉总黄酮的含量为30.952mg/g。白凤菜总黄酮对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷白杆菌、铜绿假单胞菌均有一定抑菌作用;对表皮葡萄球菌和肺炎克雷白杆菌的最低抑菌浓度均为0.84mg/ml,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度均为0.42mg/ml。结论白凤菜总黄酮含量高,且具有广谱的抗菌作用,值得进一步研究。     

香椿叶提取物的体外抗肿瘤活性

目的 研究香椿叶不同提取部位的体外抗肿瘤作用.方法 用乙醇对香椿叶进行提取,再用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇依次对乙醇提取部位进行分段萃取,设鬼针草提取物各萃取部位的不同浓度组、抗癌药顺铂为阳性组和空白对照组,采用四甲基偶氯哇盐(MTT法)比色法,现察香椿叶提取物的各萃取部位对人胃腺癌SGC-7901细胞和白血病细胞...     

枫桦抗肿瘤活性化学成分的追踪分离研究

目的 研究枫桦Betula costata的抗肿瘤活性化学成分。方法 采用硅胶柱色谱和Sephadex LH-20凝胶柱色谱法分离枫桦树皮中的抗肿瘤活性化学成分,通过现代波谱技术进行结构鉴定。结果 氯仿萃取相是枫桦活性部分,从中分离获得5个五环三萜类化合物,分别鉴定为反式咖啡酸白桦醇酯(Ⅰ)、白桦脂醇(Ⅱ)、羽扇豆醇(Ⅲ)、白桦脂酸(Ⅳ)、白桦酮酸(Ⅴ)。这些化合物对Bel-7402、B16和A549肿瘤细胞显示不同程度的细胞毒活性。结论 化合物Ⅰ～Ⅴ均为首次从该植物中分离得到。     

口虾蛄乙酸乙酯提取物分离及体外抗肿瘤活性研究

目的分离口虾蛄乙酸乙酯提取物并对其组分进行体外抗肿瘤生物活性追踪。方法采用MTT比色法,细胞集落形成实验及生长曲线测定对分离得到的提取物进行抗癌生物活性筛选。结果MTT法发现乙酸乙酯提取物中E成分对HO-8910PM细胞生长抑制作用最强,MTT法、细胞集落形成实验及生长曲线测定均显示成分E对HO-8910PM细胞生长有显著抑制作用,且有明显的时效-量效关系。结论口虾蛄乙酸乙酯提取物中的组分E能明显抑制肿瘤细胞生长。     

溪黄草抗乙肝及抗肿瘤活性成分的体外筛选

目的 对溪黄草抗乙肝抗肿瘤活性部位进行初步筛选,为进一步分离活性成分奠定基础.方法 首先在HepG2.2.15细胞模型上对三种不同方法萃取所得的溪黄草提取物进行抗乙肝活性筛选,以用于进一步分析提纯.用MTT实验检测细胞毒性,ELISA和实时定量PCR检测细胞上清液中HBsAg、HBeAg的分泌及乙肝病毒DNA含量.然后,用硅胶柱色谱法进一步提取分离活性最大的提取物,用MTT和ELISA检测所分离各组分的抗乙肝活性.最后,在MCF-7,BGC-823和HepG2细胞中检测细胞毒性最大的三个组分的抗肿瘤活性.结果 乙酸乙酯萃取分离所得的提取物抗乙肝活性最大,可显著降低HepG2.2.15细胞的HBsAg、HBeAg抗原的分泌,并抑制乙肝病毒DNA的复制,被用来进一步分离提纯.从乙酸乙酯提取物中分离出14个组分,其中A3和A5组分对HBsAg有较好的抑制作用,A9组分对HBeAg有较好的抑制作用,并均存在明显的量效关系,且治疗指数均比乙酸乙酯提取物的要高.A6,A7和A11组分细胞毒性大,对不同的肿瘤细胞有不同的抑制活性.结论 溪黄草的乙酸乙酯提取物及其分离成分具有很强的抑制乙肝病毒复制的作用,从而具有很好的抗乙肝病毒活性,进一步提取分离有利于有效成分的纯化而具更强的活性.此外,一些分离成分对不同的肿瘤细胞还有很高的细胞毒性,具一定的抗肿瘤作用.本实验为溪黄草在临床的使用及其作为潜在的高效抗乙肝和肿瘤药物的进一步研究开发工作提供了理论基础.     

人参多糖的提取分离及其体外抗肿瘤作用

目的：从人参中提取分离人参多糖,对其进行初步鉴定分析,观察人参多糖的体外抗肿瘤活性。方法：采用水提醇沉法和Sevage法提取人参多糖,应用红外光谱对其结构进行初步的鉴定分析;小鼠前列腺癌RM-1细胞株和人宫颈癌HeLa细胞株分为对照组和不同浓度（50、100、200、300、400和500 mg/L）人参多糖组,MTT法检测各组细胞的生长抑制情况,通过细胞毒性T细胞（CTL）实验检测不同浓度人参多糖对肿瘤细胞的间接杀伤作用,即细胞毒性乳酸脱氢酶（LDH）释放率。结果：人参多糖的提取率为8.76%,经鉴定成分为多糖。MTT实验,不同浓度人参多糖处理RM-1和HeLa细胞24 h后,与对照组比较,各浓度人参多糖组细胞存活率差异均无统计学意义(P>0.05)。CTL实验,与对照组比较,不同浓度人参多糖组细胞毒性LDH释放率显著升高(P<0.05);随着人参多糖浓度的增加,细胞毒性LDH释放率先升高后降低,人参多糖浓度为100 mg/L时,细胞毒性LDH释放率最大。 结论：人参多糖可以通过激活T细胞来间接抑制肿瘤细胞生长,起到抗肿瘤的作用。     

黄芪总黄酮对BEL-7402细胞的体外抑制作用

目的：探讨黄芪总黄酮（total flavonoids of Astragalus,TFA）在体外实验条件下对人肝癌细胞（BEL-7402）生长、繁殖的影响。方法：以BEL-7402细胞为实验对象,5-氟尿嘧啶（5-FU）为阳性对照,比较观察了不同浓度的TFA与BEL-7402细胞共同培养不同时间后,TFA对BEL-7402细胞的形态学、细胞存活曲线、细胞生长曲线和细胞有丝分裂指数的影响。结果：数据表明TFA处理48h半数抑制浓度（IC50）为40μg／ml,5-FU为0．3μg／ml;TFA浓度达80μg／ml时可使BEL-7402细胞生长明显受挫（P〈0．05）,有丝分裂指数下降;与对照比较细胞形态主要表现为胞浆中颗粒明显增多,胞浆出现大量空泡,核固缩。结论：TFA对BEL-7402细胞生长繁殖具有抑制作用。     

芭蕉花活性成分提取及其体外生物活性研究

目的 研究芭蕉花的活性成分及其体外生物活性.方法 通过硅胶柱色谱、大孔树脂、TLC分离等对芭蕉花提取物进行分离,并用高效液相色谱,结合质谱分析等方法,进行成分鉴定;采用体外MTT法进行芭蕉花活性组分对抑制肝癌BEL-7402细胞增殖作用的筛选,对抑制AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖作用进行活性筛选.结果 通过液-质分析,从芭蕉花乙酸乙酯提取物和石油醚提取物中发现其中有一种化合物可能为豆甾醇.MTT筛选发现芭蕉花石油醚提取物的4种萃取物组分中,乙酸乙酯相和石油醚相对肝癌BEL-7402细胞具有显著的增殖抑制作用(P<0.01),且呈一定的剂量和时间依赖性;芭蕉花的3种提取物组分中,乙酸乙酯相和石油醚相对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖具有显著的抑制作用(P<0.01),且其抑制作用呈一定的剂量和时间依赖性.结论 芭蕉花石油醚提取物的石油醚萃取部位和乙酸乙酯萃取部位对肝癌BEL-7402细胞具有显著的增殖抑制作用,72 h的IC50分别为67.4μg/mL和34.5μg/mL,且石油醚提取物和乙酸乙酯提取物对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖有抑制作用,72 h的IC50为55.5μg/mL.从芭蕉花提取物中分离出单体豆甾醇,为芭蕉花活性成分的深入研究提供了参考.     

藤黄酸提取分离及其抗肿瘤活性

[目的]优化中药藤黄中总藤黄酸的提取分离方法,对藤黄酸抗肿瘤活性进行初步研究。[方法]利用回流法进行提取,通过单因素考察实验,研究不同因素对总藤黄酸提取率的影响,并通过正交实验对提取工艺进行优化。再将总藤黄酸粗品进一步分离纯化得到藤黄酸,并进行表征;采用四氮唑蓝(MTT)比色法考察藤黄酸对两种癌细胞的体外抗肿瘤活性。[结果]总藤黄酸最佳的提取工艺为:提取溶剂为乙酸乙酯,料液比为1∶6(g/m L),提取次数为2次,提取时间为3 h,提取温度为80℃,提取率约为57.0%。通过表征确定纯化后所得是藤黄酸。且藤黄酸对癌细胞具有一定的抑制作用。[结论]正交试验优选的总藤黄酸提取工艺简便、稳定、可行,藤黄酸有较强的抗癌作用。     

干苔多糖的分离纯化及抗肿瘤活性研究

干苔经冷水，热水，热酸水三步提取多糖。配位吸附动力学研究表明，与钙型，铝型树脂相比，铜型树脂对干苔多糖吸附最快，吸附量最多。pH值配位沉淀反应研究进一步显示干苔多糖与Cu^2 的沉淀能力比Al^3 好。采用三种pH值铜盐络合沉淀，得到初步提纯五种多糖（冷提糖Ⅰ，热提糖Ⅱ、Ⅲ酸糖Ⅳ、Ⅴ），用离子交换（静态，动态）法除去铜离子，得到纯度为98．4％的干苔多糖，回收率达97．8％。离子条件下，几种多糖在对人胰腺癌SW1990细胞的无血清培养中，热提糖Ⅲ表现出较好的抑制活性。该多糖还与固定化藻蓝蛋白表现出一定协同抑制肿瘤细胞生长的作用。红外光谱分析证明热水抽提多糖Ⅲ是一种酸性多糖。