黄连细胞二步法悬浮培养生产黄连生物碱类成分的探索

为提高用植物细胞培养生产镒生代谢产物的单位产量，作者对黄连细胞采用二步法悬浮培养生产黄连生物碱进行了探索。结果显示：黄连细胞采用一步法悬浮培养６周，细胞干，鲜重产率分别为２０．９６ｇ／Ｌ和１７４．９２ｇ／Ｌ，增重约７００％，细胞中总生物碱含量为１４．７９ｍｇ／ｇ．ｃｅｌｌ ｄｗ，培养基中生物碱量为１２．９６ｍｇ／Ｌ，每升培养液共可收获生物碱３２３ｍｇ。采用先在生长培养基中培养３周，在合成碱量为１２     

不同培养条件对隔山消悬浮培养细胞生长和萝摩米宁合成的影响

隔山消Cynanchum wilfordii(Maxim．)Hemsley的根在韩国民间用于防治老年病，其所含的萝摩米宁(gagaminine，一种甾类生     

在长春花细胞悬浮培养中细胞分裂素和乙烯通过甲基赤藓醇磷酸盐或萜类途径调控吲哚生物碱的产生

长春花Catharanthus roseus（L）G．Don中的萜吲哚生物碱（TIAs）共同的母体化合物是异胡豆苷（strictosidine），而异胡豆苷由色胺和断马钱子苷（secologanin）立体定向缩合而成。由色氨酸脱羧酶（TDC）形成的1-色氨酸经过脱羧形成色胺；而断马钱子苷通过萜类途径由异戊烯基二磷酸（IPP）衍生而来。在IPP存在情况下，TIA主要是通过（选择的）甲基赤藓醇磷酸盐（MEP）途径，在质体中合成，而不是通过经典的甲羟戊酸途径在胞液中合成。作者研究了在长春花细胞悬浮培养中MEP和乙烯对TIA合成的调节作用。     

巫山淫羊藿悬浮培养细胞的生长特性研究

目的 考察巫山淫羊藿悬浮培养细胞的生长特性,为巫山淫羊藿资源利用提供参考。方法 选用悬浮培养所获得的均匀悬浮培养细胞为研究对象,在光照条件下进行悬浮培养,每隔3 d取样,测定相关的生理生化指标。结果 巫山淫羊藿悬浮细胞的生长曲线呈“S”型,培养基中蔗糖、磷酸盐、硝酸盐、铵盐量均呈急剧下降趋势,最后变化趋于平缓,细胞合成黄酮最佳光照时间为每天12 h,黄酮合成量为27.854 82 mg/L。结论 巫山淫羊藿细胞生长特性的研究为其大规模悬浮培养生产天然活性成分奠定了基础。     

人参细胞悬浮培养物与栽培人参药理活性的比较

人参(Panax ginseng C.A.Mey)为名贵中药,其生长缓慢,价格昂贵。国内外药学工作者在开发新药源方面进行了一系列研究,其中人参组织培养物的研究颇受人们重视。本文旨在对人参悬浮培养物进行药理活性研究,以进一步比较人参悬浮培养物与栽培人参的药理活性。     

桔梗细胞悬浮培养体系对斑蝥素的生物转化研究

目的 研究桔梗细胞悬浮培养体系对抗癌天然活性成分斑蝥素的生物转化，以获得具有新颖结构的斑蝥素衍生物。方法 往桔梗悬浮培养体系中加入斑蝥素并培养6d，培养液经萃取后采用色谱方法进行分离纯化，产物的结构根据光谱数据予以鉴定。结果分离得到了以2：1比例混合存在的两个转化产物。经光谱分析，两个产物鉴定为羰基还原为羟基的一对差向异构体1β-羟基斑蝥素(Ⅱa)及1a-羟基斑蝥素(Ⅱb)。结论 Ⅱa和Ⅱb均为未见报道的新化合物。桔梗细胞培养体系对斑蝥素具有较强的选择性还原作用，此转化反应可用于斑蝥素衍生物的制备。     

高产绿原酸杜仲细胞悬浮培养体系优化研究

目的 优化杜仲细胞悬浮培养及其产绿原酸的条件。方法 研究基本培养基种类、激素质量浓度、碳源种类及质量浓度、pH值、接种量和摇床转速等因素对杜仲细胞生长和绿原酸产量的影响,建立了高产绿原酸的悬浮细胞培养体系。结果 B5培养基+0.5 mg/L NAA+0.6 mg/L 6-BA、蔗糖30 g/L、初始pH 5.0～5.5、接种量20 g?FW/L以及摇床转速110 r/min为杜仲细胞悬浮培养的适合条件。结论 优化后的培养条件为杜仲细胞大规模悬浮培养生产天然活性成分奠定了基础。     

黄连细胞二步法悬浮培养生产黄连生物碱类成分的探索

为提高用植物细胞培养生产次生代谢产物的单位产量，作者对黄连细胞采用二步法悬浮培养生产黄连生物碱进行了探索。结果显示：黄连细胞采用一步法悬浮培养６周，细胞干、鲜重产率分别为２０．９６ｇ／Ｌ和１７４．９２ｇ／Ｌ，增重约７００％；细胞中总生物碱含量为１４．７９ｍｇ／ｇ．ｃｅｌｄｗ，培养基中生物碱量为１２．９６ｍｇ／Ｌ，每升培养液共可收获生物碱３２３ｍｇ。采用先在生长培养基中培养３周，然后在合成培养基中培养３周的二步法培养，６周后收获细胞干、鲜重分别为１６．７２ｇ／Ｌ和１２７．４４ｇ／Ｌ，其生物量低于一步法，但总碱含量达３１．７６ｍｇ／ｇ．ｃｅｌｄｗ，培养基中生物碱量为２５．３１ｍｇ／Ｌ，每升培养液共可获生物碱５５６ｍｇ。二步法培养生物碱产率为一步法培养的１．７２倍。以上结果表明：二步培养法能够较好地解决黄连培养物生物量增长与次生代谢产物积累之间的矛盾，大大提高目的产物的产率，具有一定的实用价值。     

非冻存低温下维持悬浮培养细胞

目的建立非冻存低温条件下维持悬浮培养细胞的细胞保存技术。方法常规培养悬浮生长的人白血病细胞Jurkat,分别正常培养、室温和4℃冰箱条件下保存,间隔10天进行细胞形态观察和细胞存活率分析,然后室温和4℃冰箱保存的细胞再加入新鲜培养剂转入正常培养。结果两种非冻存低温条件下细胞存活率降低,与正常培养组有显著性统计学差异（P〈0.01）,并且在细胞形态上具有相应的改变,10天后存活率分别为81%和79%,没有差异（P〉0.05）,20天后室温条件下细胞仍然保持81%存活率,与前10天没有差异（P〉0.05）,并在转入正常培养条件下恢复生长繁殖。结论非冻存低温条件下可以短期维持悬浮培养细胞,该方法丰富了细胞培养技术。     

霍山石斛细胞悬浮培养及条件优化

目的 利用细胞悬浮培养技术生产霍山石斛单细胞,解决石斛药用植物资源短缺问题。方法 以霍山石斛叶片等外植体为实验材料,通过不同的制备方法获得霍山石斛单细胞,研究霍山石斛细胞培养的多种影响因素,应用正交设计优化霍山石斛细胞悬浮培养的条件。结果 在蔗糖35 g/L,NH₄NO₃ 1.3 g/L,pH 5.6,激素IAA 0.4 mg/L,6-BA 1.0 mg/L,培养时间14～18 d,在此条件下培养的霍山石斛细胞数为9.42×10⁵个/mL。结论 经过4次继代培养后石斛细胞多为圆状或椭圆状,细胞碎片减少。应用优化的细胞悬浮培养条件,能获得较大量的霍山石斛细胞。     

壳聚糖对地钱细胞生长和酚类次生代谢的影响

目的：探讨壳聚糖诱导子对地钱细胞生长和酚类次生代谢的影响。方法:对壳聚糖-地钱细胞诱导体系的细胞生物量、叶绿素、活性氧（H₂O₂和O^-₂）、细胞膜通透性和膜脂过氧化产物（MDA）以及酚类次生代谢物苯丙氨酸解氨酶（PAL）和多酚等生化指标进行测定。结果:细胞生长下降(P<0.05),叶绿素含量明显低于对照组(P<0.01),胞外pH趋向碱性化(P<0.01),活性氧含量急剧增加和膜脂过氧化增强(P<0.01),次生代谢PAL活性和多酚含量均显著增加(P<0.01)。结论:壳聚糖通过降低地钱细胞还原能力而增强其氧化能力,从而有利于酚类次生代谢的生物合成。     

Retarded hippocampal development following prenatal exposure to ethanolic leaves extract of Datura metel in wistar rats

Background:

Datura metel contains atropine alkaloids and has been used to treat complication like asthma and, bronchitis, because of its anticholinergic properties.

Aim:

This study aimed to determine the prenatal effects of ethanolic extract of D. metel leaves exposure on the development of hippocampus.

Materials and Methods:

Twenty rats (12 females and 8 males) were purchased. The females were grouped into four groups (A_D). Group A were given 500 mg/kg body weight of the extract on the first day of fertilization to the end of gestation period, Group B were given 500 mg/kg body weight on the 8^th day of fertilization to the end of gestation period, Group C were given 500 mg/kg body weight on 15^th day of fertilization to the end of gestation period and Group D were given normal saline throughout the gestation period.

Results:

Rats in Group A showed no implantation, rats in Group B had abortion on the 7^th day after administration, and rats in Group C gave birth with their litters showing retarded hippocampus development and neural degeneration and rats in Group D (control) showed normal development.

Conclusion:

Ethanolic extract of D. metel leaf is teratogenic in the late stage of pregnancy, is abortificient and can serve as a contraceptive.     

甲基茉莉酮酸对悬浮培养南方红豆杉细胞代谢的影响

目的 探讨甲基茉莉酮酸作用下悬浮培养南方红豆杉细胞的系列生理生化反应。方法 TTC92，3，5-triphenyltetrazolium chloride)和蛋白含量测定方法以及酶活分析技术。结果 甲基茉莉酮酸不仅强烈抑制细胞活力，使细胞初生代谢受到显著抑制，并且还诱导PAL（苯丙氨酸解氨酶）活性增强，在一定程度上抑制了PPO（多酚氧化酶）的活性，使胞外酚含量增加且极大峰比对照提前约3d出现。结论 甲基茉莉酮酸不仅促进细胞由初生代谢提前向次生代谢转化，并且能够增强细胞的次生代谢，有利于细胞相关次生代谢产物的合成。     

植物悬浮细胞培养体系对大黄素的生物转化

目的利用植物悬浮细胞培养体系对大黄素进行生物转化生成大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷。方法利用4种植物悬浮细胞培养体系转化外源大黄素生成大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷,应用薄层色谱法进行检识。结果一叶萩、长春花和何首乌悬浮细胞培养体系均可使大黄素生物转化为大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷。结论首次利用植物悬浮细胞培养体系生物转化生成大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷。     

喜树胚轴细胞悬浮培养的优化和喜树碱的积累

目的优化喜树胚轴细胞悬浮培养体系生产喜树碱。方法将由喜树种子下胚轴诱导的愈伤组织进行悬浮培养,研究了基本培养基、激素和培养条件对培养物生长的影响,测定了培养细胞生长和喜树碱积累的动态变化。结果悬浮培养细胞在M S培养基中细胞生长良好,细胞分散性和喜树碱积累优于在其他培养基中。最佳激素组合为2,4-D 0.2 m g/L NAA 0.5 m g/L 6-BA 0.5 m g/L,细胞继代周期以12 d左右为宜,悬浮细胞适合在22~26℃,120 r/m in下生长。悬浮培养细胞在第4~20天为对数生长期,细胞倍增时间为t(d)=3.92-d 1,细胞干重至第20天达到最大,为27.44 g/L。在细胞对数生长期内,喜树碱积累与细胞生长呈线形正相关性,第20天喜树碱质量分数达到最大值9.319×10-5,喜树碱产量为2.56 m g/L。结论M S基本培养基适合喜树胚轴细胞悬浮培养,细胞生长前20天内,培养体系中喜树碱积累与细胞生长呈正线形相关性。     

烟草悬浮培养细胞对呋喃橐吾酮的生物转化研究

目的 研究烟草悬浮培养细胞对呋喃橐吾酮(I)的生物转化.方法 将外源底物呋喃橐吾酮乙醇溶液投入预培养10 d的烟草悬浮培养细胞中,共培养4 d后终止转化,通过HPLC检测方法,并利用各种色谱技术分离纯化转化产物,最后根据其理化性质和光谱数据进行结构鉴定.此外,实验还考察了共培养时间对转化率的影响.结果 呋喃橐吾酮(Ⅰ)在烟草细胞中发生了转化,分离鉴定出两个转化产物:3-oxo-eremophila-1,7(11)-dien-12,8-olide(Ⅱ)和3-oxo-8-hydroxyeremophila-1,7(11)-dien-12,8-olide(Ⅲ).转化的最佳共培养时间为5 d,此时总的摩尔转化率最高(53.1%).结论 首次利用烟草悬浮培养细胞转化倍半萜类化合物呋喃橐吾酮并获得成功.     

长春花及银杏植物细胞悬浮培养对青蒿素的生物转化研究

目的：对抗疟药物青蒿素（Ⅰ）进行了生物转化研究。方法：利用长春花及银杏植物细胞悬浮培养细胞进行生物转化。用硅胶柱色谱进行产物的分离，波谱方法鉴定产物的结构。结果：此两种植物悬浮细胞体系均能将青蒿素转化成3α-羟基去氧青蒿素（Ⅱ）。结论：此两种植物悬浮细胞体系均有有效转化青蒿素。     

野葛幼叶细胞悬浮培养生产葛根素等异黄酮类化合物的研究

目的 建立野葛幼叶细胞悬浮培养体系。方法 将由野葛幼叶外植体诱导的愈伤组织进行悬浮培养，研究了悬浮培养物生长的动态和葛根素及总异黄酮类化合物产量积累的动态。结果 细胞在培养的第1～5天为对数生长期，第8天时细胞干重达最大值。葛根素的合成与细胞生长呈紧密偶联型，在第8天时葛根素产量达最大值。总异黄酮类化合物的积累与葛根素积累存在一定差异，异黄酮类化合物的总产量在第10天最大值。结论 野葛幼叶细胞悬浮培养体系中总异黄酮类化合物的产量高于野生原植株，葛根素产量低于野生原植株。     

手性紫罗兰酮生物碱衍生物Ion-31a的制备方法优化

目的:新型手性紫罗兰酮生物碱衍生物Ion-31a对MDA-MB-231乳腺癌细胞具有抗转移作用,原有文献报道该化合物的产率很低。该文旨在对Ion-31a合成路线进行优化,以提高产率为深入进行新药研究提供大量化合物。方法:以洋葱假单胞菌中获取的脂肪酶为酶促拆分剂,通过酶-化学拆分法代替原路线的结晶拆分法获得光学纯中间体8,通过优化α-β不饱和酰胺的还原方法提高关键中间体11收率。通过优化反应条件减少最后一步副产物的生成提高Ion-31a的产率。结果:用酶促拆分法代替结晶拆分法使中间体8的光学纯度和产率显著提高;中间体11经雷尼镍催化氢化和四氢铝锂两步还原产率明显提高,最后一步制备Ion-31a时通过减少副产物提高其产率。结论:通过建立新的合成路线提高了中间体8和11的产率,结合优化后的反应条件将抗肿瘤转移先导化合物Ion-31a的合成工艺进行了优化,其收率大幅提高。