乌拉尔甘草优良品系选育研究(Ⅰ)——4个来源甘草遗传基础的AFLP分析

目的研究4个来源甘草属植物的遗传基础,初步探讨扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术在甘草品系选育中的应用。方法采用AFLP标记技术对乌拉尔甘草栽培新品系"民勤1号"、"喀什1号"、"阿克苏1号"和常规栽培品系内蒙古乌拉尔甘草进行基因组DNA多态性、指纹图谱和UPGMA聚类分析。结果从64对引物组合中筛选出了8对引物组合进行多态性分析,以多态位点百分率最高的E-AAC/M-CAG组合构建4个来源甘草的指纹图谱。UPGMA聚类分析将4个来源甘草分为4组,表现出不同的亲缘关系。结论"民勤1号"、"喀什1号"、"阿克苏1号"形成了独特的基因构成,可以作为乌拉尔甘草优良栽培新品系选育目标进行深入研究。     

半夏栽培品遗传差异的AFLP分析

目的构建不同地区来源半夏栽培品的DNA指纹图谱,探讨利用AFLP分子标记在半夏遗传多样性、亲缘关系及种质鉴别上的可行性。方法运用扩增片段长度多态性技术(AFLP),对我国17个地区的51份半夏栽培品和4份掌叶半夏样品(外群)进行基因组DNA多态性分析。结果从64对引物组合中筛选出8对多态性丰富、鉴别效率高的AFLP引物组合,构建了51份半夏栽培品的AFLP指纹图谱。聚类分析结果表明:所有半夏栽培品完全被区分开,来源地相同的种质表现出相对密切的亲缘关系,浙江等华东地区的栽培半夏同其他地区半夏有着明显遗传差异,聚类分析结果获得了Bootstrap校验的支持。结论AFLP分子标记可用于半夏遗传多样性、亲缘关系及种质鉴别分析,浙江、江苏等华东地区栽培半夏的遗传特性相对独立。     

金钗石斛及其相似种RAPD优化和DNA多态性分析

目的:以金钗石斛为材料,建立石斛的RAPD优化条件,应用于石斛相似种的DNA多态性分析.方法:分别设置模板DNA,Mg2 ,Taq DNA聚合酶,dNTPs,引物的浓度梯度,优化RAPD反应体系.结果:在25 μl总反应体系中,以上反应物的用量分别为100 ng,3.0 mmol/L,1.0 U,0.2 mmol/L,0.4 μmol/L时所获得的石斛属DNA指纹图谱谱带型清晰、重复性好.其中用S48 扩增的DNA指纹图谱具有更大的相似性,适合于石斛真伪鉴别;而S90 扩增的片段具有明显的多态性,适合于石斛遗传分化研究.结论:优化后的RAPD方法可作为研究石斛属植物的遗传多样性及真伪鉴别的有效方法.     

石斛属植物的RAPD指纹图谱聚类分析

目的建立石斛属植物RAPD指纹图谱,探讨RAPD分子标记技术在石斛属种类鉴别上的应用。方法用RAPD方法构建石斛属内7种石斛及一种石仙桃植物RAPD指纹图谱,对其扩增条带进行分析。结果共扩增出53条带,分布在0.25～1.3kb之间,其中39个条带有遗传多样性,约占总数的73.6℅。经聚类分析不同石斛间的遗传距离分布在0.04762～0.68421,平均遗传距离为0.44380,而石仙桃与石斛属植物的平均遗传距离为0.71734。结论石斛属植物的遗传多态性丰富,与种外植物遗传距离较大,RAPD技术可作为石斛属植物鉴别的有效方法。     

甘肃省半夏种质资源遗传多样性分析

运用荧光标记引物的扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术,对50份甘肃半夏样品进行了DNA指纹图谱构建和遗传差异分析。选出的8对AFLP引物共扩增出517条带,其中396条具有多态性,多态性位点百分率为75．8％,平均每对引物扩增出64．6条带和49．5个多态性条带。系统聚类分析结果表明所有半夏AFLP指纹均不相同,来源地相同的半夏表现出相对密切的亲缘关系,甘肃省西和县的半夏同天水市的半夏遗传差异明显。聚类分析结果获得了Bootstrap校验的支持。甘肃省半夏遗传多样性十分丰富,AFLP分子标记可有效应用于半夏种质资源鉴别和遗传多样性分析。     

ISSR-PCR在石斛种间鉴别中的应用

目的 采用ISSR-PCR方法对石斛属9种植物进行鉴别,探讨不同种石斛在DNA分子水平上的差异。方法 选取10条由SSR组成的引物,对9种石斛进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析。结果 10条引物中有7条扩增出多态性条带。每条引物可检测的多态性位点最少7个,最多14个,扩增片段大小为220-1260 bp。其中,引物UBC-807和UBC-864具有较高的多态性条带比率,均可以独立将所有被测种区分开来。结论ISSR-PCR作为一种简便、可靠的分子标记鉴定技术,可以作为石斛属种间鉴别的方法之一。     

甘肃产秦艽的DNA指纹图谱鉴别

目的 对产于我国甘肃省的中药秦艽的3种基源植物秦艽、麻花秦艽与小秦艽进行RAPD分析,建立具有鉴别意义的DNA指纹图谱.方法 采用RAPD分子标记对秦艽的基因组DNA进行PCR扩增,利用NTSYSpc 2.1和Popgene 3.2软件分析3种秦艽间的亲缘关系,构建树系图.结果 从80条RAPD引物中筛选出4条具有鉴别意义的多态性引物,在3种秦艽中共得到39个DNA条带,其中共有条带2条,多态条带37条.据此获得了能有效区别3种秦艽的多态性RAPD指纹谱.结论 甘肃产秦艽的3种基源植物遗传分化明显,RAPD方法能有效地将它们区分鉴别.     

利用RAPD分析13种石斛属植物的遗传多样性和亲缘关系

目的通过对13种石斛属植物进行遗传多样性和亲缘关系分析,为更好地开发利用石斛资源奠定基础。方法随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析遗传多样性,U PGM A类平均法进行聚类分析。结果利用筛选出的10个随机引物对供试材料DNA进行随机扩增,共得到188条带,其中多态性带有180条,多态性百分率为95.74%。采用U PGM A类平均法对扩增出的谱带进行遗传聚类分析,得出反映各种间亲缘关系的树状图。在遗传距离(D)=0.63处,可将供试材料分为3类,RAPD对基因组的分析结果与传统分类学的结果差异不大。结论该标记技术对石斛属植物的遗传多样性和分类研究是可行的。     

淋球菌RAPD分型的引物筛选与应用

目的为了研究不同淋球菌菌株的基因多态性,了解不同菌株之间的亲缘关系,选择适当的随机引物。方法以淋球菌基因组DNA为模板,对淋球菌进行RAPD扩增,选择多态性好、重复性好、稳定性强的随机引物,并用S38号引物对不同淋球菌基因组DNA进行指纹图谱区分。结果从Sagon公司50条RAPD随机引物中筛选出8条扩增效果良好的引物,经RAPD扩增出的淋球菌指纹图谱间有明显不同的DNA多态性,可对不同菌株进行聚类分析。结论利用RAPD技术对淋球菌进行随机引物的筛选,可为今后淋球菌的分子流行病学研究奠定基础。     

珍稀中草药金线莲的RAPD研究

为了鉴别金线莲的品种,探索同属植物之间的亲缘关系及同种植物不同产地的遗传变异,并制定正品金线莲的DNA指纹图谱,采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对兰科开唇兰属植物花叶开唇兰Anoectochilus roxburghii(Wall．)．Lindl．、台湾开唇兰A.formosanus Hay．进行了鉴定,结果选择的7个引物对3个品种共扩增出98个位点,其中3个引物为高特异性引物。结论 RAPD技术不仅能鉴别种间差异,而且能揭示同种不同产地植物的遗传变异。     

石斛属几种植物遗传关系的SRAP和RAPD 比较分析

目的 利用 SRAP 和 RAPD 两种分子标记技术对9份石斛种质进行遗传多样性研究。方法 用 40 对 SRAP 引物组合和 36 个 RAPD 引物分别对供试石斛的基因组 DNA 进行扩增。结果 SRAP 引物组合共扩增条带 1 977 条,多态性比率为 90.2%,遗传相似系数 GS 值变化范围为 0.330 2～0.789 2。RAPD 引物共扩增出 281 条带,多态性比率为 87.1%,GS 值变化范围为 0.494 2～0.773 1。利用两种标记得到的聚类结果存在一定的差异,SRAP 聚类结果与传统的基于形态特征建立的分类结果比较一致,较好地体现了供试品种的亲缘关系、地域特性。在 9 个石斛供试种间,SRAP 的标记指数 MI 值 (16.46) 是 RAPD 标记 MI 值 (3.67) 的 4.5 倍,表明 SRAP 具有更大的标记效率。结论 两种标记皆可有效应用于该属植物种质资源的遗传多样性分析。而 SRAP 标记在石斛的遗传多样性与亲缘关系的研究中,则表现出了极大的优越性。     

益母草种质资源遗传多样性的 AFLP 分析

目的 通过对 9 份益母草种质资源的 AFLP 分析,探求各种质间的遗传多样性。方法 采用扩增片段长度多态性 (AFLP) 标记,在 DNA 水平上进行遗传多样性研究,筛选了32对选择性扩增引物,将扩增出的条带作为原始矩阵,用 NTSYS-PC 软件计算并分析了益母草种质间的相似度,构建了遗传系统进化树。结果 SDS 法提取的益母草基因组 DNA 质量较佳,能够满足 AFLP 分析的要求;从 32 对选择性扩增引物中,筛选出 10 对多态性较强、带型较好、分辨率较高的组合;构建了益母草 AFLP 指纹图谱,将 9 个益母草种质全部区分开来;通过构建进化树,把 9 个种质分成2类。结论 益母草种质资源有丰富的遗传多样性,某些形态特征差异和基因型存在相关性。     

一种中药鉴定gDNA芯片的制备与展望

中药鉴定是中药质量控制系统的首要环节,中药鉴定技术的不断发展提高了药材品质评价水平。至今,中药鉴定技术经历着从传统生药鉴定学的细胞和亚细胞水平向遗传物质DNA分子水平发展的历程,运用DNA芯片技术进行中药鉴定成为中药鉴定发展的方向之一。介绍了筛选gDNA种特异性探针的抑制性差减微阵列“SSH-ar-ray”新技术,该技术是将抑制性差减杂交与基于尼龙膜微阵列杂交相结合。以名贵中药材石斛5个品种作为实验材料,首先是用抑制性差减杂交获得2个品种之间的gDNA差异片段,然后用这些gDNA差异片段与由所有研究品种的gDNA制备成的微阵列杂交筛选到某一个品种的种特异性gDNA片段。这些种特异性gDNA探针作为种特异性探针进行物种鉴定。在此基础上建立中药鉴定gDNA芯片的方法并对其应用进行了展望探讨。     

河南地方野生小鼠与近交系小鼠的扩增片段长度多态性分析

目的 从分子水平上阐明河南省兰考地区捕获的野生小鼠(LK)与4个小鼠品系(B6,BALB/c,DDK,PWK)之间的遗传差异及遗传关系,从而进一步确定该种野生小鼠的种属及培育野生来源近交系小鼠品系.方法 利用25对引物,对野生小鼠及4个小鼠品系进行扩增片段长度多态性(AFLP)分析.结果 检测到2035条扩增条带,多态性条带有507条,占总条带的24.91%,并且LK小鼠与PWK、DDK、BALB/c、C57BL/6J的遗传距离指数分别为0.01696、0.02790、0.02729、0.02759.结论 LK小鼠与PWK小鼠品系遗传关系最近,遗传距离指数最小;同时也证明了AFLP技术能够在物种鉴定、遗传背景分析及预测亲本杂交效果等方面具有明显的优越性.     

线粒体nad 1内含子2序列在石斛属植物分子鉴定中的应用

目的在兰科石斛属药用植物鉴定中应用新的分子标记。方法扩增并测定9种石斛属植物线粒体中NADH脱氢酶亚基1编码基因(nad 1)内含子2(in tron 2)的全长序列。结果比对后的nad 1 in tron 2序列长872bp,其中有17个变异位点,可以鉴别除粉花石斛D end robium lodd ig esii以外的8种植物。结论线粒体nad 1 in tron2序列可以作为一种新的分子标记用于石斛属植物的鉴定。