肺癌组织CD44和TSP-1基因表达与肿瘤进展的关系

研究肺癌组织中ＣＤ４４和ＴＳＰ－１的表达并分析其与患者临床预后的关系。方法应用免疫组化法检测１１２例肺癌组织中ＣＤ４４和ＴＳＰ－１表达,其中２５例标本同时用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＴＳＰ－１表达。结果ＴＳＰ－１在肺腺癌中的表达（７４．３６％）明显高于鳞癌和小细胞癌（４７．１７％,Ｐ＝０．０３;３５．７１％,Ｐ＝０．０２）,ＣＤ４４Ｈ及ＣＤ４４ｖ６在小细胞肺癌中均表达极低;ＣＤ４４Ｈ在肺腺癌中的表达（６１     

粘附分子CD44v6在乳腺癌组织表达的研究

目的：探讨ＣＤ４４ｖ６基因在不同乳腺组织的表达及其与乳腺癌淋巴结转移的关系。方法：采用免疫组化Ｓ－Ｐ法对１１３例不同乳腺组织进行ＣＤ４４ｖ６表达的研究。结果：ＣＤ４４ｖ６阳性表达率在乳腺癌组织（９６．７％）明显高于乳腺良性肿瘤（５０．０％）和正常乳腺组织（１３．３％）（Ｐ〈０．０５）,但淋巴结转移灶（２２．２％）明显低于原发癌灶（１００％）（Ｐ〈０．０５）。结论：ＣＤ４４ｖ６基因高表达可作为判断乳     

胃癌p16,p53和CD44V6的表达特点及其意义

目的 探讨ｐ１６、ｐ５３和ＣＤ４４Ｖ６在胃癌发生、发展及淋巴结转移的作用机理和意义。方法 用免疫组化ＡＢＣ法检测ｐ１６、ｐ５３和ＣＤ４４Ｖ６在９３例胃癌组织中的表达。结果 ９３例胃癌中ｐ１６、ｐ５３和ＣＤ４４Ｖ６的阳性表达率分别为３９．８％、５０．５％、４１．９％。ｐ１６蛋白在淋巴结转移阳性表达率３０．８％,显著低于淋巴结转移阴性的阳性表达率６０．７％（Ｐ〈０．０１）。ｐ５３在进展期胃癌、淋巴结转     

31例乳腺癌CD44v6和CD44intron 9检测

［目的］探讨 ＣＤ ４４ ｍＲＮＡ异常表达和拼接与乳腺癌的相关意义。［方法］采用 ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测了３１例乳腺癌组织、１７例乳腺癌周组织中ＣＤ ４４ｖ６和ＣＤ ４４ ｉｎｔｒｏｎ ９的表达。［结果］乳腺癌患者癌组织、癌周组织中ＣＤ４４ｖ６的表达率均为１００％（３１／３１,１７／１７）,ＣＤ４４ ｉｎｔｒｏｎ９的表达率分别为８３．８７％（２６／３１）,９４．１２％（１６／１７）,经ｘ２检验,ＣＤ ４４ｖ６、 ＣＤ ４４ ｉｎｔｒｏｎ ９在乳腺癌及癌周组织中的表达差异无显著性。［结论］ ＣＤ ４４ｖ６、 ＣＤ ４４ ｉｎｔｒｏｎ ９在乳腺癌患者中的表达具有普遍性,其表达与乳腺癌的转移无显著相关性。     

转移相关基因CD44v6在胃癌中的表达意义

目的：探讨转移相关基因ＣＤ４４ｖ６与胃癌某些生物学行为的关系。方法：采用免疫组化ＳＰ法对４２例进展期胃癌进行标记分析。结果：ＣＤ４４ｖ６阳性表达率肠型胃癌（７０．８３％）明显高于弥漫型胃癌（３３．３３％）（Ｐ〈０．０５）;淋巴结转移组（８２．３５％）明显高于无淋巴结转移组（３６．０％）（Ｐ〈０．０１）;ＣＤ４４ｖ６阳性率与肿瘤大小无关（Ｐ〉０．０５）;ＣＤ４４ｖ６阳性表达的不同病理分型的胃癌中淋巴     

CD44V6基因蛋白在乳腺癌中的表达及其意义

目的 探讨ＣＤ４４Ｖ６在乳腺癌中的表达及其意义。方法 应用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法检测５４例乳腺癌组织中ＣＤ４４Ｖ６基因蛋白表达变化。结果 乳腺癌ＣＤ４４Ｖ６阳性率为５９．３％（３２／５４）,良性肿瘤的阳性率为２７．３％（３／１１）,Ｐ〈０．０５。有淋巴结转移者ＣＤ４４Ｖ６高表达者的阳性率为６９．２％（１８／２６）。在无淋巴结转移者中,浸润性癌高表达生率为５４．５％（１２／２２）,低表达阳性率为１３．     

结直肠癌中CD44v6、MMP-2、nm23-H1表达与临床病理的相关性研究

 目的 探讨结直肠癌中ＣＤ４４ｖ６、ＭＭＰ－２和ｎｍ２３－Ｈ１的表达与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化 ＳＡＢＣ法结合计算机图像分析技术检测 ＣＤ４４ｖ６、ＭＭＰ－２、ｎｍ２３－Ｈ１蛋白在 ２４例结直肠癌患者癌及癌旁组织中的表达。结果 ２４例结直肠癌组织中 ＣＤ４４ｖ６、ＭＭＰ－２的阳性单位（ＰＵ值）高于癌旁和正常组织（Ｐ＜０．０５），而 ｎｍ２３－Ｈ１的 ＰＵ值则低于癌旁和正常组织（Ｐ＜０．０５）。它们的异常表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小及部位无相关性，而与浸润深度、淋巴结转移、远处转移、Ｄｕｋｅ’ｓ分期密切相关（Ｐ＜０．０５）。结论 ＣＤ４４ｖ６、ＭＭＰ－２、ｎｍ２３－Ｈ１与结直肠癌的病理特征密切相关。它们的异常表达在肿瘤的侵袭转移中可能具有正、负协同作用，联合检测 ＣＤ４４ｖ６、ＭＭＰ－２、ｎｍ２３－Ｈ１蛋白可作为预测结直肠癌侵袭转移及客观评价患者预后的生物学指标。     

非小细胞肺癌nm23-H1和CD_(44)v_6表达及淋巴结转移

［目的］探讨ｎｍ２３－Ｈ１及ＣＤ４４ｖ６在非小细胞肺癌中表达的意义及与预后的联系。［方法］用免疫组织化学ＬＳＡＢ染色法,研究８４例非小细胞肺癌中ｎｍ２３－Ｈ１及ＣＤ４４ｖ６的表达及与淋巴结转移的关系。［结果］５９．６％的腺癌和５４．１％的鳞癌有ｎｍ２３－Ｈ１的表达;在有淋巴结转移的肺癌中ｎｍ２３－Ｈ１表达的阳性率为２１．９％,而无淋巴结转移的肺癌中其表达率高达７８．８％,两者差异具非常显著性。５３．２％的腺癌和５６．７％的鳞癌有ＣＤ４４ｖ６的表达;在有淋巴结转移的肺癌中ＣＤ４４ｖ６表达的阳性率为９６．９％,而无淋巴结转移的肺癌中其表达率仅为２８．８％,两者差异具非常显著性。［结论］ｎｍ２３－Ｈ１的表达与非小细胞肺癌的淋巴结转移呈负相关,ＣＤ４４ｖ６的表达与非小细胞肺癌的淋巴结转移呈正相关,参与和调节淋巴结的转移过程,是观察预后的重要指标,对于非小细胞肺癌的预后有重要意义。     

非小细胞肺癌nm23—H1和CD44v6表达及淋巴结转移

（目的）探讨ｎｍ２３－Ｈ１及ＣＤ４４ｖ６在非小细胞肺癌中表达的意义及与预后的联系。（方法）用免疫组织化学ＬＳＡＢ染色法研究８４例非小细胞肺癌中ｎｍ２３－Ｈ１及ＣＤ４４ｖ６的表达及与淋巴细胞转移的关系，（结果）５９．６％的腺癌和５４．１％的鳞癌有ｎｍ２３－Ｈ１的表达，在有淋巴结转移的肺癌中，ｎｍ２３－Ｈ１表达的阳性率为２１．９％，而无淋巴结转移的肺癌中其表达率达７８．８％，两者差异具非常显著性。５３     

CD44V3和CD44V6在非小细胞肺癌组织中的表达及预后意义的研究

目的　为了探讨ＣＤ４４Ｖ３和ＣＤ４４Ｖ６ 在非小细胞肺癌组织中的表达及预后意义。方法应用免疫组织化学链菌素抗生物素蛋白过氧化物酶连接法（Ｓ－ Ｐ法），对６２ 例有５ 年随访资料的非小细胞肺癌组织进行了ＣＤ４４Ｖ３ 和ＣＤ４４Ｖ６ 蛋白的检测。结果　非小细胞肺癌的ＣＤ４４Ｖ３ 和ＣＤ４４Ｖ６ 阳性表达率分别为６６．１％ 和６７．７％ ，皆与肿瘤病理分级及组织学类型无明显相关性；ＣＤ４４Ｖ３ 和ＣＤ４４Ｖ６阳性表达与非小细胞肺癌临床分期、淋巴结转移有显著相关性；非小细胞肺癌的ＣＤ４４Ｖ３ 和ＣＤ４４Ｖ６ 阳性表达在１ 年、３ 年术后生存率分别与５ 年比较有显著意义；结果还表明ＣＤ４４Ｖ３ 和ＣＤ４４Ｖ６ 阳性表达率与肿瘤大小有关，肿瘤直径＞ ３ｃｍ 者明显高于肿瘤直径≤３ｃｍ 者（Ｐ＜ ０．００５）。结论　在非小细胞肺癌中，ＣＤ４４Ｖ３ 和ＣＤ４４Ｖ６阳性表达提示容易发生淋巴结转移，多见于晚期肺癌，预后较差。ＣＤ４４Ｖ３和ＣＤ４４Ｖ６可作为临床评估非小细胞肺癌进展的辅助指标之一。     

RON、Hepsin和C-Met在浸润性乳腺癌中的表达及其意义

目的探讨浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C—Met的免疫表达及其意义。方法采用免疫组化PV-6000法检测了87例浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C—Met基因的表达情况。结果Hepsin、C—Met、RON在87例浸润性乳腺癌组织中的阳性表达率分别为70．1％、64．4％、65．5％,三者的阳性表达两两呈正相关（P〈0．01）,同时与浸润性乳腺癌的病理学分级、淋巴结转移亦呈正相关性（P〈0．01）。结论Hepsin、C-Met、RON与浸润性乳腺癌的预后因素有相关性,联合检测可以更好地提示患者的预后。     

亚硒酸钠抗氧化作用与抑瘤效应的实验观察

人ｐ１６基因是最近发现的一种肿瘤抑制基因。ｐ１６蛋白作为一种细胞增殖的负调控因子，在恶性肿瘤发生发展中起重要作用。为了进一步探讨ｐ１６基因的抗肿瘤特性，我们通过运用分子克隆技术构建重组人ｐ１６基因表达载体（ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６），并通过电穿孔方法将ｐ１６基因导入到人肺腺癌ＮＣＩ－Ｈ４６０细胞中，经Ｃ４１８筛选获得可稳定表达ｐ１６的人肺腺癌细胞，观察ｐ１６基因对人肺腺癌细胞周期的影响和细胞增殖的作用     

肿瘤基因治疗阳离子载体应用中的问题与策略

采用阳离子载体将肿瘤治疗基因送入靶细胞中表达 ,须经历体内传递、穿过细胞膜、细胞内传递、细胞内表达等多个步骤。当前研究表明 ,阳离子载体在此过程中面临一系列独特的问题 ,对这些问题的研究与解决大大推动了对阳离子载体的认识与应用。     

基因突变与胰腺癌

胰腺癌的发病率在我国呈逐年上升趋势 ,由于其起病隐匿 ,恶性程度高 ,早期诊断困难 ,出现临床症状时多属晚期 ,因此患者的预后较差。近年来随着分子生物学技术的发展 ,对胰腺癌发生机制的研究已进入基因水平 ,研究表明胰腺癌的发生是多基因异常改变的结果。就 p16基因 ,p5 3基因 ,DPC4基因 ,Ras基因及MMR基因与胰腺癌的关系作一综述。     

鼻咽癌患者HER-2/neu基因扩增和表达及其临床意义

目的：研究鼻咽癌HER-2／neu基因扩增、表达及其临床意义。方法：采用原位荧光杂交、逆转录多聚链式反应和免疫组化技术检测鼻咽癌组织HER-2／neu基因扩增、表达。结果：HER-2／neu基因在鼻咽癌中无扩增，但有过表达，其原因是由于mRNA高表达所致；这种过表达与鼻咽癌预后之间未显示有相关性。结论：HER-2／neu基因在鼻咽癌无扩增，有过表达，这种过表达未显示预后意义。     

RFP标记的 YCD 基因在 HeLa 细胞中的表达及其介导的细胞毒性

背景与目的 :探讨红色荧光蛋白标记的酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶(YCD)基因在人宫颈癌细胞(HeLa细胞)中的表达及其功能。材料与方法 :采用基因重组技术构建含有CMV启动子和RFP、YCD基因开放阅读框(ORF)的真核表达载体pIRES_YCD ,脂质体法转染HeLa细胞。荧光显微镜下观察转染细胞中红色荧光蛋白的表达 ,流式细胞术分析转染效率及荧光强度并筛选荧光阳性细胞 ,命名为HeLa_Y。以不同浓度的前药5_FC处理HeLa_Y细胞 ,MTT法检测细胞存活率。 结果 :荧光显微镜下可见红色荧光蛋白在HeLa_Y细胞中表达 ,流式细胞术成功筛选出HeLa_Y细胞。前药5_FC能明显杀伤HeLa_Y细胞 ,5_FC浓度与HeLa_Y之间存在对数曲线关系。结论 :RFP可作为报告基因快速筛选YCD表达载体转染的细胞 ,YCD/5_FC自杀基因系统可以进一步用于肿瘤的基因治疗研究     

肿瘤双自杀基因治疗系统pTRKH2-PsT/CD,pTRKH2-PsT/UPRT在厌氧婴儿双歧杆菌中的构建

Objective: We recombine the suicide gene CD, UPRT into plasmid pTRKH2 and clone the recombinant dual suicide gene therapy system into tumor-hypoxia-targeting vector Bifidobacterium infantis and characterize its function. Methods: CD gene, UPRT gene and lactic acid bacteria expression plasmid pTRKH2 were digested by restriction endonuclease BamH I and Sal I, and constructed recombinant plasmids pTRKH2/CD and pTRKH2/UPRT in E. coll. The recombinant plasmids were then transfected into Bifidobacterium Infantis by electroporation. Identification of pTRKH2/CD and pTRKH2/UPRT was processed by dual restriction endonuclease digesting and sequencing. RT-PCR and SDS-PAGE were used to examine the expression of CD and UPRT genes at RNA and protein levels. The killing effects on Melanoma B16-F10 cells by pTRKH2/CD and pTRKH2/UPRT suicide gene therapy system with 5-FC were examined by MTT assay. Results: The CD gene and UPRT gene was successfully recombined into lactic acid bacteria expression plasmid pTRKH2. After dual endonuclease digestion of plasmid purified from the positively transfected E. co/i, two fragments of 6.9 Kb and 1.3 Kb were found for CD gene and two fragments of 6.9 Kb and 620 bp were found for UPRT gene. The sequencing of CD gene and UPRT gene proved consistent sequences with Genebank published data. A fragment of 1.3 Kb for CD gene and fragment of 620 bp for UPRT gene was found in recombinant Bifidobac- terium by RT-PCR. A 52 KDa protein for CD gene was identified in whole-cell protein of recombinant Bifidobacterium and a 26 KDa protein for UPRT gene was identified in supernatant fluid of recombinant Bifidobacterium. The survival rate of tumor cells treated by extracts from culture of recombinant Bifidobacterium with 5-FC showed a strong killing effects of pTRKH2/CD and pTRKH2/UPRT dual suicide gene therapy system on Melanoma B16-F10 cells. Conclusion: CD gene and UPRT gene are suc- cessfully inserted into pTRKH2 and transfected into tumor-hypoxia-targeting vector Bifldobacterium Infantis. This dual suicide gene therapy system shows a high efficiency for tumor cells killing.     

肺癌患者FLK-1、LRP和MDR1的表达与临床研究

目的:探讨血管内皮生长因子受体 (Flk 1),肺耐药蛋白 (LRP)基因以及多药耐药基因 (MDR1)蛋白与肺癌患者临床及病理指标的关系。方法:用免疫组化技术(ABC法)对原发性肺癌组织中三种基因的表达进行检测。结果: 70例肺癌中,非小细胞肺癌MDR1阳性率 49. 2% (29 /59),明显高于小细胞肺癌 (SCLC) 18. 2% (2 /11)(P<0. 05);非小细胞肺癌LRP阳性率 69. 5% (41 /59),明显高于小细胞肺癌 27. 3% (3 /11) (P<0. 05)。腺癌中MDR1与LRP的表达明显高于鳞癌(P<0. 05)。LRP与Flk 1在NSCLCs中共同表达 49. 2% (29 /59),LRP的表达与肺癌的组织学分级相关,MDR1和LRP的表达与肺癌的组织学类型有关,Flk 1与TNM分期相关,均有统计学意义(P<0. 05)。Flk 1 LRP均阳性、FLK 1 LRP MDR1均阳性、中药治疗、复发与患者的生存率有关(P<0. 05)。结论:FLK 1、LRP和MDR1基因蛋白产物的检测对肺癌患者的诊治和预后评估有积极意义。     

探讨HBV X、TGF-alpha,c-myc及beta-catenin基因与高发区肝癌的相关性

目的　研究HBVX基因、TGF alhpa、c myc、beta catenin等癌变相关基因及 2 49密码子突变的p5 3蛋白在高发区肝细胞癌癌变发生及其恶性表型维持所发挥的作用。方法　以肝癌高发区启东的肝癌细胞株 770 1和 770 3标本作为研究对象 ,以PCR及DNA测序分析方法确定HBVX基因在细胞DNA水平的整合。以RT PCR及Western blot检测HBVX基因的转录与表达。用PCR RFLP方法确定 p5 3基因 2 49密码子的错义突变。应用免疫组织化学法分析TGF alhpa ,c myc ,beta catenin的表达。结果　 2株细胞在DNA水平都存在HBVX基因片断的整合 ,但未见完整的转录和蛋白水平表达。序列分析显示 2株细胞的HBVX基因的序列各有特异性 ,并存在 13 0、13 1密码子的热点突变。PCR RFLP分析说明 2个细胞株中p5 3基因 2 49密码子均属野生型。免疫组化显示 2株细胞中TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白均有显著的积累。 结论　本实验的结果显示HBVX基因对这 2株细胞恶性表型的维持并不存在必然的关联 ,而是 1种HBV感染的遗传标志。未见HBVX基因蛋白表达 ,可能由于X基因 3′端缺失变异所致。免疫组化的结果显示TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白的显著积累 ,说明多种癌基因的相互协同 ,可能与肝癌的发生、发展及恶性表型的维持相关联     

人白细胞介素2重组逆转录病毒载体的构建与表达

通过RT-PCR克隆到含有全部编码序列的人IL-2 cDNA,并经核苷酸测序加以证实。将其克隆至逆转录病毒载体pLXSN,构建成人IL-2的重组逆转录病毒表达载体pLXSN-hIL2,体外经CRIP细胞包装后病毒滴度达7.6×10~5CFU/ml。NIH3T3小鼠成纤维细胞感染hIL-2重组逆转录病毒后,分泌IL-2水平达118.2U/ml;PCR从其基因组DNA中扩增到NeoR基因片段,提示重组逆转录病毒载体己整合至宿主细胞的基因组DNA中。本研究为开展人IL-2基因治疗奠定了基础。