冷冻卵巢组织移植研究进展

卵巢是人体重要的内分泌以及生育器官。妇科恶性肿瘤发病率近年来呈逐渐年轻化趋势,保留生育功能的年轻患者越来越多,进而有生育以及内分泌需求的患者逐年上升。卵巢移植不仅可以解决患者的生育问题,还可以改善其最重要的内分泌功能。本文对冷冻卵巢组织移植的研究进展,包括卵巢组织移植的类型、移植部位的选择、如何改善移植成功率、移植后的免疫抑制剂的应用等方面进行综述。     

人类卵巢组织条厚度对超低温冷冻效果影响的研究

目的 探索不同卵巢组织条厚度对超低温冷冻效果的影响,同时评估卵巢组织的凋亡情况.方法 卵巢组织取自10例手术的妇女.冷冻前行卵巢组织切片,按最小厚度随机分成1.0、0.5、0.25 mm 3组.采用二甲基亚砜（DMSO）为冷冻保护剂的程序慢速冷冻法进行超低温冷冻保存.冻融后进行卵泡计数及各组间正常卵泡形态学分析比较,使用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）进行组织细胞凋亡检测.上述结果与新鲜卵巢组织进行比较.结果新鲜卵巢组中97.6%原始卵泡保持形态学正常,切片厚度为1.0、0.5、0.25 mm三组形态正常率分别为71.1%、73.9%和72.7%,与新鲜组比较,三实验组下降明显,差别有统计学意义（χ2=15.66,P〈0.001）;而三冷冻组间相比差别无统计学意义（χ2=0.153,P=0.926）.TUNEL原位杂交显示窦前卵泡颗粒细胞中未见凋亡阳性信号,窦卵泡中可见散在阳性信号细胞,卵巢间质细胞亦有散在凋亡信号.结论 0.5～1.0 mm厚度卵巢组织为行超低温冷冻保存是较合理厚度,卵泡闭锁的机理值得进一步研究.     

大鼠卵巢组织移植的实验研究

为了探索治疗围绝经期综合征的新途径，将成年大鼠或新生大鼠的卵巢组织移植至同系成年已阉割２周的大鼠的皮下，结果表明，卵巢组织移植后易存活，术后３个月，移植物切片中仍发现有生长卵泡，阴道上皮细胞及子宫内膜有雌激素效应。     

促进自体冻存卵巢组织移植存活的方法研究进展

随着癌症治疗技术的发展,癌症患者的生存率显著提高。但化学药物治疗（化疗）和放射治疗（放疗）可能导致年轻女性癌症患者发生卵巢早衰和不孕,而自体冻存卵巢组织移植是这类患者保存生育能力的有效方法。目前,该技术最大的挑战是移植后卵泡大量丢失。本文综述了自体冻存卵巢组织移植存活的影响因素及改善方法。     

化疗后行冻存卵巢组织移植后的卵巢功能

对22名妇女肿瘤治疗后卵巢功能进行评估。这些妇女在进行化疗前对整个卵巢的皮层组织进行冷冻保存，以后再将冻存的卵巢组织进行移植。所有的妇女都给予了有诱导卵巢功能衰竭风险的化疗药治疗。这22名妇女中包括8名乳腺癌患者、6名何杰金氏淋巴瘤患者、2名非何杰金氏淋巴瘤患者、5名白血病患者和1名脑部肿瘤患者。所有受试者在卵巢冷冻保存后18个月进行临床检查。     

肢体移植研究进展

由于创伤、肿瘤切除或先天性原因所致的肢体缺失，往往使患者丧失劳动能力甚至丧失生活自理能力，给家庭和社会带来沉重的负担。目前多用假体来替代，但仍难以适应生活和工作的需要。为解决肢体缺失这一临床难题，同种异体肢体移植为我们展示了一个广阔的前景。本文从组织配型、冷冻保存、免疫抑制、免疫耐受等与肢体移植相关研究进展     

卵巢移植

卵巢移植韩献萍卵巢移植在上世纪末已应用于防治双卵巢切除或绝经期妇女的不良反应，大致到１９３５年，由于自体移植效果不理想，而异体移植效果更差，使得这一技术被长期遗弃。直至近２０余年，因为器官保存、显微外科及移植手术等技术的进步，使卵巢移植这一技术得到了...     

同种异体组织冷冻保存和移植的研究

冷冻保存可以长时间保存组织的活性和功能,并且调整同种异体组织的抗原表达,但也会造成组织和细胞的损伤。临床研究用冷冻技术能有效保存体外培养的细胞,但在冷冻保存用于同种异体移植的复合组织方面还存在问题,需要进一步研究,才能应用于临床。     

卵母细胞和卵巢组织的冷冻

精子冻存已取得了一定的成功 ,但是冻存的卵母细胞体外发育的成功率很低 ,因为卵母细胞冻存与许多因素有关 ,成熟的卵母细胞对冻存非常敏感 ,很容易出现非整倍体现象。为了提高卵母细胞的受精率 ,人们已着手研究不成熟卵母细胞及卵巢的冻存。要建立一个方法 ,使生长完全的生殖泡 ( germinal vesicle,GV)和MII卵母细胞暴露于与冻存有关的物理和化学逆境后 ,仍然具有很高的存活率、受精率和发育率。目前还没有一个简单可行的冻存方法 ,而且主要困难在于如何使原始卵泡中的未成熟卵母细胞发育为成熟的卵母细胞。成熟卵母细胞的冻存　　当细胞…     

不同卵巢组织冷冻方法对保存女性生育力的研究

目的比较程序化冷冻和玻璃化冷冻两种方法保存人卵巢组织,解冻后组织病理分析原始卵泡存活情况。方法卵巢组织取自15例卵巢畸胎瘤患者,卵巢皮质切割成10mm×1mm×1mm的组织条随机分配到玻璃化冷冻组（A组）、程序化冷冻组（B组）、新鲜对照组（C组）,组织病理分析比较三组原始卵泡形态的影响。结果三组共有572个原始卵泡,C组中96．9％的原始卵泡保持形态学正常,A和B组分别为85．6％与83．9％,差别有统计学意义（P〈0．01）;A与B组比较,差别没有统计学意义（P〉0．05）。结论尽管冻融后组织的原始卵泡存活率小于新鲜组织,玻璃化冷冻与程序化冷冻方法都能较好地保存人类卵巢组织,可用于人类卵巢组织的冷冻保存。     

冻融和移植过程对人胎儿卵巢组织及超微结构的影响

目的探讨冻融和移植过程对人胎儿卵巢组织超微结构的影响。方法6例23~34w引产的胎儿卵巢慢冻速融,并移植到裸鼠肾被膜下,分别于移植后48 h、7和28 d回收移植物。卵巢组织分为新鲜对照组、冻融组、移植后48 h、7 d及28 d组。电镜和光镜下观察各组形态学改变。结果胎儿卵巢组织冻融前后光镜下的卵泡密度(23.92±3.94)及(22.70±4.18)无显著差异,移植后48 h卵泡密度(16.70±3.98)与移植前比较显著下降(P<0.01)。各组卵泡超微结构整体上保存良好。冷冻对卵巢间质损伤较大且局部差异大,移植后48 h间质细胞稀疏,白细胞浸润;移植后7及28 d,间质内可见较多胶原纤维束,大量微小血管生长。结论人胎儿卵巢组织的冻融损伤主要表现在间质,而移植损伤在移植后48 h内最严重;结合光镜和电镜观察手段能更全面评价冻融过程和移植过程对胎儿卵巢组织的影响。     

冻融人胎儿卵巢组织异种移植的实验研究

目的探求冻融人胎儿卵巢组织异种移植后的生长发育能力。方法胎儿卵巢组织分为新鲜胎儿卵巢组织(新鲜组),慢冻-快融胎儿卵巢组织(冻融组),解冻的胎儿卵巢组织异种移植到8只裸鼠肾被膜下(移植组)三组。2个月后开始隔天注射孕马血清促性腺激素(PMSG),持续5个月。注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)36 h后裸鼠处死取得移植物。胎儿卵巢组织石蜡包埋后连续切片,进行组织学评价和增殖细胞核抗原(PCNA)的检测。结果冻融组和新鲜组中绝大多数是原始卵泡。与新鲜组相比,冻融组中正常及总的原始卵泡数虽有下降,异常原始卵泡数虽有升高,但均无显著性差异。移植组的原始卵泡数明显少于新鲜组和冻融组(7.2±1.64,20.4±5.68,17.2±4.27,P<0.05),但可见到数个形态正常的初级卵泡、次级卵泡和窦卵泡。三组的原始卵泡均未见有PCNA阳性表达,PCNA阳性表达见于移植组初级卵泡的颗粒细胞和卵母细胞、次级卵泡和窦卵泡的颗粒细胞。结论冻融人胎儿卵巢组织异种移植后能存活,卵泡能正常发育到窦卵泡。     

Modified cryopreservation and xenotransplantation of human parathyroid tissue

Introduction: A modified cryopreservation technique for human parathyroid tissue was compared with the standard method using a programmed freezer. Methods: Total parathyroidectomy was performed in three groups of 6-week-old Rowett nude rats. Group I (control) underwent no transplantation of parathyroid tissue (n=9). After 10 days, the rats of groups II (n=15) and III (n=15) underwent xenotransplantation of 20 mg cryopreserved human parathyroid tissue, which had been stored in liquid nitrogen at –196°C for 1–22 months prior to xenotransplantation. The parathyroid tissue was derived from 15 parathyroidectomized patients with renal hyperparathyroidism. Two tissue samples were obtained from every patient. One sample from every patient was cryopreserved by means of the technique of programmed cryopreservation: programmed freezing of human parathyroid tissue at a controlled rate of –1°C/min to –80°C prior to transfer to liquid nitrogen (group II). The second sample from every patient was cryopreserved by means of a modified cryopreservation technique: immediate placement of human parathyroid tissue in a freezer at –20°C and transfer to liquid nitrogen after 2 h (group III). Calcium and intact parathyroid hormone concentrations in serum were determined over a period of 60 days. Furthermore, individual differences in the calcium concentrations were assessed for each rat on the basis of the calcium levels recorded preoperatively and at day 60. Results: All animals in the control group developed hypocalcemia. Serum calcium concentrations returned to normal levels 60 days after xenotransplantation of parathyroid tissue, which had been cryopreserved using the modified technique (group III) in 12 of 15 rats (80%). At day 60, serum calcium had normalized in 10 of 15 rats (67%) after xenotransplantation of parathyroid tissue cryopreserved using programmed freezing (group II). After modified cryopreservation (group III), the median individual difference in the calcium concentrations was –0.16 mmol/l after programmed freezing (group II). At the end of the study, a median level of human intact parathyroid hormone of 3.5 pg/ml and 2.4 pg/ml was estimated for groups II and III, respectively. There was no statistical significant difference of the individual differences in the calcium concentrations or of the levels of human intact parathyroid hormone between groups II and III. Conclusion: Human parathyroid tissue was successfully xenografted in the present experimental study. The results obtained after cryopreservation using the described modified technique were equivalent to those recorded after controlled freezing in a programmed freezer. The simplified cryopreservation technique therefore appears to be suitable for human parathyroid tissue. Received: 8 July 1998 Accepted: 11 February 1999     

兔卵巢组织慢速冷冻和玻璃化冷冻保存方法的研究

目的比较不同冷冻方法对兔卵巢组织的保存效果。方法15只新西兰雌兔,取卵巢皮质切块后,随机分成5组：新鲜组（A组）、二甲亚砜慢速冷冻组（B组）、丙二醇慢速冷冻组（C组）、冷冻管玻璃化冷冻组（D组）及固相表面玻璃化冷冻组（E组）。比较各组卵巢组织的原始和初级卵泡形态正常率;通过体外培养测定培养液中雌二醇（E2）水平;比较冻融后卵巢组织的内分泌功能;通过TdT介导的dUTP缺口末端标记技术,检测细胞凋亡情况。结果原始卵泡正常形态率与A组相比,B、D组显著降低（P〈0.05）,C、E组无显著性差异;初级卵泡正常形态率5组间无显著性差异。培养14d后,各实验组原始卵泡形态正常率均低于A组（P〈0.001）,各实验组间无显著性差异;组间初级卵泡形态正常率无明显差异。体外培养过程中,培养液E水平不断增加（P〈0.001）,慢速冷冻和玻璃化冷冻的E2平均浓度有显著性差异（P〈0．05）。细胞凋亡检测显示,无论是原始卵泡还是初级卵泡,与A组相比,各实验组的卵泡凋亡率均无显著性差异。结论本实验中,慢速冷冻和固相表面玻璃化冷冻均能很好地保存兔卵巢组织,经过体外培养,能保持一定的内分泌功能。     

小鼠卵巢组织冷冻保存方法对组织内分泌功能的影响

目的比较不同的冷冻方法对小鼠卵巢组织的保存效果及对组织内分泌功能的影响。方法 25只6周龄ICR雌鼠,取卵巢皮质切块后,根据不同冷冻方法随机分成5组:新鲜对照组、二甲亚砜慢速冷冻组(A组)、丙二醇慢速冷冻组(B组)、冷冻管玻璃化冷冻5min组(C组)及冷冻管玻璃化冷冻8min组(D组)。分别进行卵巢组织冷冻复苏,复苏后体外培养2周以及复苏后同种移植饲养2周实验。比较各组体外培养液中以及复苏移植后小鼠静脉血中雌二醇(E2)水平。结果体外培养过程中,各组培养液中E2水平均随培养时间不断增加(F=14.146,P0.001);同一天的E2水平比较,A、B组显著高于对照组及C、D组(P0.05),C、D组与对照组无统计学差异(P0.05)。移植饲养2周后,DMSO慢速冷冻复苏移植组、PROH慢速冷冻复苏移植组的平均E2水平显著高于两组玻璃化复苏移植组、新鲜组织移植对照组、未处理自然对照组及去势未移植对照组(P0.05),新鲜移植对照组、两组玻璃化复苏移植组及去势未移植对照组的平均E2水平显著低于未处理的自然对照组(P0.05)。结论慢速冷冻及玻璃化冷冻的小鼠卵巢组织复苏后,经过体外培养及同种移植均能保持一定的内分泌功能;慢速冷冻效果可能优于冷冻管玻璃化冷冻。     

不同玻璃液冻存卵巢组织移植于鸡胚前后的氧化应激和细胞凋亡研究

目的研究不同玻璃液(VS)保护下冻存的卵巢组织移植于鸡胚前后的氧化应激和细胞凋亡情况,以评估不同玻璃液的冷冻保护效果。方法将卵巢组织分割成1~2mm×1mm×1mm的小块分别放入VS1、VS2、VS3、VS4 4种不同的玻璃液中,经过4种玻璃液平衡后冻存并复苏的卵巢组织称为冻存卵巢组织(FOT),分别将经4种玻璃液冻存的FOT移植到胚龄10d的鸡卵绒毛尿囊膜(CAM)上培养,于鸡卵胚龄16d取出移植于CAM的卵巢组织(TOT),以未经玻璃液平衡的新鲜卵巢组织为对照(COT),分析4种玻璃液保存的FOT、TOT、COT中线粒体活性、细胞内活性氧自由基(ROS)水平和间质细胞凋亡情况。结果线粒体活性:经过VS1、VS3和VS4冻存的FOT和TOT中的线粒体活性低于COT,差异有统计学意义(P0.05);经VS2冻存的TOT与COT中线粒体活性无显著性差异(P0.05)。细胞内ROS水平:经过VS1、VS3和VS4冻存的FOT和TOT细胞内ROS水平低于COT,有统计学差异(P0.05);经VS2冻存的FOT细胞内ROS水平与COT组比较无显著性差异(P0.05)。间质细胞凋亡情况:经过VS1、VS2、VS3和VS4平衡的FOT间质细胞凋亡率和COT组之间的差异无统计学意义(P0.05)。结论由玻璃液VS2保护冻存卵巢组织的冷冻损伤小、移植后缺血损伤轻,是本研究优化的卵巢冷冻保护玻璃液;玻璃化冷冻对间质细胞损伤小,适于人卵巢组织的冷冻保存。     

Laparoscopic unilateral oophorectomy for ovarian tissue cryopreservation in children

Background/Purpose

Many survivors of childhood cancer will experience premature gonadal insufficiency or infertility as a consequence of their medical treatments. Ovarian tissue cryopreservation (OTC) remains an experimental means of fertility preservation with few reports focused on the surgical technique and postoperative outcomes for OTC in children.