耐碳青霉烯铜绿假单胞菌耐药机制和传播机制研究

目的阐明南方医科大学南方医院耐碳青霉烯铜绿假单胞菌的耐药机制和传播机制。方法采用聚合酶链反应(PCR)-限制性核酸片段长度多态性分析分型和测序技术对临床分离的59株耐碳青霉烯铜绿假单胞菌进行整合子Ⅰ、插入序列共同区(ISCR1)和常见碳青霉烯酶基因研究,采用肠杆菌科间重复一致性序列(ERIC)-PCR技术研究传播机制。结果 59株菌株中20株(34%)整合子Ⅰ阳性,17株(29%)整合子Ⅰ可变区阳性;9株(15%)ISCR1阳性,5株(8%)ISCR1可变区阳性且均携带qnrA1和ampR耐药基因盒。1株检出复杂性整合子Ⅰ,3株检出VIM-2基因,2株检出IMP-1基因。ERIC-PCR聚类分析在80%相似水平上聚为52个类群。结论整合子Ⅰ、ISCR1和碳青霉烯酶在铜绿假单胞菌介导多重耐药方面有重要作用,ERIC-PCR是进行铜绿假单胞菌同源性分析的有效方法。     

天津地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌整合子的检测及其耐药机制研究

目的 调查天津地区临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌(imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,IRPA)的整合子流行情况,探讨耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药机制.方法 收集天津地区60株临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌,检测其耐药情况.应用PCR限制片段长度多态性(PCR-RFLP)初筛整合子并分型,用PCR扩增整合子的可变区并测序.结果 60株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中有11株检出整合子(18.3%);PCR-RFLP结果显示均为Ⅰ类整合子,未检出Ⅰ类和Ⅱ类整合子.IRPA对多数药物均有较高的耐药率.结论 Ⅰ类整合子为天津地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌携带的主要类型,整合子中包括多种耐药基因.     

广东地区医院分离铜绿假单胞菌整合子及其携带耐药基因的研究

目的研究广东地区医院分离铜绿假单胞菌整合子携带现状及其耐药基因与菌株耐药的关系。方法采用基因扩增法,对广东省5所医院临床分离的铜绿假单胞菌三类整合子及耐药基因进行了检测,并检测阳性菌株整合子可变区。结果在30株铜绿假单胞菌中检出23株携带Ⅰ类整合子,有7株携带Ⅱ类整合子,有1株携带Ⅲ类整合子的基因。随机选取三类整合子携带菌各1株进行测序及序列分析,Ⅰ类整合子得到aac-3+aad2的组合形式;Ⅱ类整合子得到CmlA耐药基因盒;Ⅲ类整合子得到bla-MAP耐药基因盒。结论广东地区医院分离铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子的检出率最高,检出1株携带Ⅲ类整合子基因。     

铜绿假单胞菌亚胺培南及消毒剂耐药相关基因研究

目的了解临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中金属β内酰胺酶基因(blaIMP和blaVIM)、外膜孔蛋白D2(OprD2)基因(oprD)、消毒剂-磺胺耐药相关基因(qacE△1-sulⅠ)存在状况。方法采用ATB PSE5药敏试验条板微量肉汤法测定28株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的敏感性．采用聚合酶链反应(PCR)技术及序列分析的方法检测耐药基因。结果该28株铜绿假单胞菌对亚胺培南、氨苄西林／舒巴坦、庆大霉素、妥布霉素和复方新诺明均完全耐药．对哌拉西林／他唑巴坦的敏感率最高为64-3％，其余的耐药率在57．1％．92．9％之间。28株Pa中blaIMP和blaVIM基因均阴性．25株(89．3％)oprD基因缺失．24株(85．7％)qacE△1-sulⅠ基因阳性。结论浙江湖州解放军第98医院临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌多重耐药严重，oprD基因缺失是其对亚胺培南耐药的重要原因．qacE△1-sulⅠ基因携带率很高。     

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的整合子检测及其与多重耐药相关性的研究

目的调查亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌携带整合子情况,了解其与多重耐药的相关性。方法采用Mi—croWlkway-96全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和药敏试验,PCR法对临床分离的120株亚胺培南耐药和80株亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌进行整合子检测。结果120株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中I类整合子的检出率为81．7％（98／120）、Ⅲ类整合子检出率为1．7％（2／120）,未检出Ⅱ类整合子;80株亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌中I类整合子的检出率为21．3％（17／80）,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子。整合子阳性的铜绿假单胞菌对临床常用抗菌药物的耐药率明显高于整合子阴性的铜绿假单胞菌,并且前者多重耐药现象较为严重。结论I类整合子广泛存在于亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中,并与其多重耐药性密切相关。     

Ⅰ类整合子对铜绿假单胞菌亚胺培南耐药诊断价值的Meta分析

目的通过Meta分析探讨Ⅰ类整合子与铜绿假单胞菌亚胺培南耐药的相关性,以及Ⅰ类整合子检测在诊断铜绿假单胞菌亚胺培南耐药中的临床价值。方法通过计算机检索中国生物医学文献数据库(CBM)、中国知网(CNKI)、万方数据库、维普数据库(VIP)以及英文Pub Med、Embase数据库,检索国内外关于Ⅰ类整合子与铜绿假单胞菌亚胺培南耐药相关性的文献,检索时间均为建库至2015年12月,按纳入、排除标准由2位人员独立进行文献筛选、资料提取和质量评价,采用Rev Man 5.2和Meta-Disc 1.4软件进行Meta分析。结果符合纳入标准的文献共24篇,包含2 101株临床分离的铜绿假单胞菌,其中Ⅰ类整合子阳性1 134株(54.0%),亚胺培南耐药929株(44.2%)。Meta分析结果显示,Ⅰ类整合子在铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株中的检出率明显高于敏感株[比值比(OR)为4.82,95%可信区间(CI)为2.68~8.66];Ⅰ类整合子检测诊断铜绿假单胞菌亚胺培南耐药的合并敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比分别为0.73(95%CI为0.70~0.76)、0.64(95%CI为0.61~0.66)、1.90(95%CI为1.47~2.45)、0.47(95%CI为0.35~0.64),拟合综合受试者工作特征(SROC)曲线下面积(AUC)为0.749 5。结论Ⅰ类整合子与铜绿假单胞菌亚胺培南耐药相关,Ⅰ类整合子检测对诊断铜绿假单胞菌亚胺培南耐药具有一定价值,建议临床将Ⅰ类整合子检测与其他方法联合使用,以提高其检验效能。     

西安地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药现状及碳青霉烯酶基因研究

目的：调查西安地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药现状及碳青霉烯酶耐药基因携带情况,指导临床合理使用抗菌药。方法连续收集2012年8月至2013年7月西安地区四所医院临床标本中分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌共151株,通过药物敏感试验了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征,并采用聚合酶链反应技术（PCR）检测碳青霉烯酶耐药基因在耐亚胺培南铜绿假单胞菌中的携带情况。结果151株耐亚胺培南铜绿假单胞菌主要分布在神经外科 ICU （37．1％）、神经内科 ICU （27．1％）及烧伤科（19．9％）;所检菌株对多黏菌素 B 敏感,对其余9种抗菌药物均不同程度耐药;94株携带 VIM 基因,32株携带IMP 基因,5株携带 SPM 基因,3株携带 SIM 基因。结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌多药耐药及泛耐药现象严重,其原因可能与产碳青霉烯酶耐药基因表达有关,耐药基因以 VIM、IMP 为主,临床应加强细菌耐药性监测,合理有效使用抗菌药物,防止耐亚胺培南铜绿假单胞菌的蔓延。     

铜绿假单胞菌亚胺培南及消毒剂耐药相关基因研究

目的了解临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中金属β内酰胺酶基因(blaIMP和blaVIM)、外膜孔蛋白D2(OprD2)基因(oprD)、消毒剂-磺胺耐药相关基因(qacE△1-sulⅠ)存在状况.方法采用ATB′PSE 5药敏试验条板微量肉汤法测定28株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)技术及序列分析的方法检测耐药基因.结果该28株铜绿假单胞菌对亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、妥布霉素和复方新诺明均完全耐药,对哌拉西林/他唑巴坦的敏感率最高为64.3%,其余的耐药率在57.1%～92.9%之间.28株Pa中blaIMP和blaVIM基因均阴性,25株(89.3%)oprD基因缺失,24株(85.7%)qacE△1-sulI基因阳性.结论浙江湖州解放军第98医院临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌多重耐药严重,oprD基因缺失是其对亚胺培南耐药的重要原因,qacE△1-sulI基因携带率很高.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌整合子的鉴定与分析

目的 鉴定并分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPa)中整合子及其携带耐药基因盒的特点。 方法 收集2003～2007年临床分离IRPa共74株,用PCR-RFLP筛查携带整合酶的菌株,并对整合子进行分类。整合酶阳性菌株用普通PCR扩增检测整合子的qacE△1sul1基因、整合子可变区及膜微孔蛋白基因oprD2,并对整合子可变区扩增产物测序分析。 结果 74株菌中有16株菌（21.6%）携带整合酶基因,均为Ⅰ类整合子;有14株检出整合子可变区,经测序共得到7种整合子耐药基因盒的组合形式,其中有4种为首次发现,在GenBank上的登录号分别为FJ917747、FJ817422、FJ655384和FJ817423;另携带IMP-9基因2株。16株IRPa中有8株oprD2基因检测为阳性,其余为阴性。 结论 在本地区临床分离的IRPa中,仅2株菌的Ⅰ类整合子中携带的IMP-9与亚胺培南的耐药有关,其他菌株的整合子中携带的基因盒主要是介导对氨基糖苷类与β内酰胺类抗生素的耐药。金属酶的产生并不是其对亚胺培南耐药的主要原因。     

Ⅰ类整合子在多重耐药铜绿假单胞菌中的分布与结构分析

目的 了解分离于镇江地区的铜绿假单胞菌对13种常用抗生素的耐药率;明确Ⅰ类整合子基因盒结构及其在耐药基因播散中的作用.方法 采用K-B纸片法检测71株铜绿假单胞菌的耐药率;煮沸法提取71株铜绿假单胞菌基因组DNA;PCR扩增Ⅰ类整合子基因,并通过测序分析其所携带耐药基因盒.结果 71株铜绿假单胞菌对临床常用的13种抗生素的耐药率在18.3%～77.5%不等;Ⅰ类整合子检出率为38%,包括aadB、aac(6')-Ⅱ、PSE-Ⅰ、dfrA17和aadA5 5种基因盒,其中最常见者为dfrA17和aadA5.Ⅰ类整合子阳性菌株对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、头孢吡肟、头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、左氧氟沙星、环丙沙星等10种抗生素的耐药率明显高于整合子阴性菌株.结论 不同铜绿假单胞菌临床株对13种常用抗生素的耐药率各不相同,整合子阳性菌株耐药率明显高于整合子阴性菌株,提示Ⅰ类整合子是铜绿假单胞菌多重耐药的重要因素.     

多重耐药铜绿假单胞菌整合子中发现2种新基因盒组合形式

目的研究多重耐药铜绿假单胞菌携带整合子的类型及耐药基因组合。方法 PCR检测多重耐药铜绿假单胞菌整合酶基因intI 1、intI 2、intI 3,Ⅰ类整合子恒定区基因qacEΔ1-sul1及可变区基因,扩增产物经胶回收、限制性片段长度多态性(RFLP)分析及基因测序分析。结果 30株临床分离铜绿假单胞菌中16株(53.3%)Ⅰ类整合酶基因及恒定区qacEΔ1-sul1基因扩增阳性,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因。Ⅰ类整合子可变区共检出5种不同的耐药基因组合形式,含有对氨基糖苷类、β-内酰胺类和喹诺酮类抗菌药耐药的基因,其中有2种为新型基因盒组合形式,包括aacA4-VIM2和aadA2-OXA10-aacA4-blaIMP-9-aatI1,GenBank登录号分别为GQ890658和GU122165,另外3种与GenBank登录号分别为FJ917747、FJ817423、GU367339的序列基本吻合。结论多重耐药铜绿假单胞菌携带的整合子主要为Ⅰ类整合子,在Ⅰ类整合子上首次发现2种新型基因盒组合形式。     

铜绿假单胞菌整合子分布及基因盒携带情况分析

目的 了解烟台地区临床分离铜绿假单胞菌整合子的分布及耐药基因盒携带情况,探讨整合子与菌株耐药的相关性.方法 菌株鉴定及药敏试验采用VITEK 2全自动细菌分析仪.整合子及可变区检测采用PCR法,并采用限制性片段长度多态性分析和测序分析进一步确定可变区耐药基因盒类型.结果 在100株铜绿假单胞菌中38株(38%)检出Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子.Ⅰ类整合子常见基因盒类型为aac(6′)Ⅱ-aadA13-clmA8-oxA10a和aac(6′)Ⅱ-aadA13-oxA10a,其中aac(6′)Ⅱ-aadA13-oxA10a基因盒为首次出现的新基因盒排列方式,并已登录Genbank:JN118546.结论 烟台地区铜绿假单胞菌整合子类型分布为Ⅰ类整合子,整合子携带菌株与铜绿假单胞菌耐药密切相关.     

bla(VIM-2) cassette-containing novel integrons in metallo-beta-lactamase-producing Pseudomonas aeruginosa and Pseudomonas putida isolates disseminated in a Korean hospital

We investigated the phenotypic and genetic properties of metallo-beta-lactamase-producing Pseudomonas isolates collected at a tertiary-care hospital in Korea since 1995. The prevalence of imipenem resistance among Pseudomonas aeruginosa isolates reached 16% in 1997, when 9% of the resistant organisms were found to produce VIM-2 beta-lactamase, a class B enzyme previously found only in P. aeruginosa isolates from Europe. VIM-2-producing isolates of Pseudomonas putida were also detected. Resistance was transferable from both these species to P. aeruginosa PAO4089Rp by filter mating, although the resistance determinant could not be found on any detectable plasmid. Serotyping showed that many of the VIM-2-producing P. aeruginosa isolates belonged to serotypes O:11 and O:12, and pulsed-field gel electrophoresis of XbaI-digested genomic DNA revealed that many had identical profiles, whereas the P. putida isolates were diverse. Sequencing showed that the bla(VIM-2) genes resided as cassettes in class 1 integrons. In contrast to previous VIM-encoding integrons, the integron sequenced from a P. aeruginosa isolate had bla(VIM) located downstream of a variant of aacA4. bla(VIM) also lay in a class 1 integron in a representative P. putida strain, but the organization of this integron was different from that sequenced from the P. aeruginosa strain. In conclusion, the metallo-beta-lactamase produced by these imipenem-resistant Pseudomonas isolates was VIM-2, and the accumulation of producers reflected clonal dissemination as well as horizontal spread. Strict measures are required in order to control a further spread of resistance.     

Genetic environment of 16S rRNA methylase gene rmtD

The genetic environment of the 16S rRNA methylase gene rmtD was investigated. rmtD was flanked by a novel ISCR motif located downstream of class I integron In163 in the original Pseudomonas aeruginosa strain. rmtD found in Klebsiella pneumoniae appeared to have been mobilized from P. aeruginosa by an IS26-mediated event.     

鲍曼不动杆菌整合子流行现状与多重耐药相关性研究

[目的]了解我院鲍曼不动杆菌整合子流行情况,并探讨整合子与鲍曼不动杆菌多重耐药的关系。[方法]收集我院2009年9月至2010年1月临床分离的鲍曼不动杆菌共56株,用纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌对19种抗生素的敏感性,用整合酶PCR方法检测I类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子基因。[结果]鲍曼不动杆菌耐药现象十分严重。56株菌株中有41株检出I类整合子,阳性率73．2％,其中8株为I类和Ⅱ类杂交整合子,2株为I类和Ⅲ类杂交整合子。I类整合子阳性株对多种药物的耐药率均高于阴性株,且I类整合子阳性株多重耐药率（90．2％）明显高于阴性株（30％）（P〈0．0L）。[结论]I类整合子在我院鲍曼不动杆菌中检出率很高并与其多重耐药性关系密切。     

铜绿假单胞菌整合子基因盒的相关研究

目的对北京大学人民医院不同年度临床分离的铜绿假单胞菌进行整合子基因盒检测,分析其变化趋势及其与细菌耐药性的相关性。方法应用PCR对2006—2008年临床分离的420株铜绿假单胞菌进行整合子检测,对阳性PCR产物采用HinfⅠ内切酶作限制片段多态性(RFLP)分析进行整合子分类,并对整合子阳性株进行耐药基因盒的扩增与测序。结果 420株铜绿假单胞菌中116株(27.6%)检出Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子。对2006年及2008年的整合子阳性菌株可变区基因盒扩增得到7种不同的基因盒图谱,片段大小在710～2526bp,基因盒为介导氨基糖苷类抗生素耐药的aadB、aadA族和介导甲氧苄啶耐药的dfrA1和dhfrXVB。结论该院铜绿假单胞菌中整合子检出率随年度呈上升趋势,携带的基因盒与其耐药表型有相关性。     

烟台地区产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的耐药性分析及基因型检测

目的研究烟台地区产金属伊内酰胺酶铜绿假单胞菌的耐药性,基因型及菌株的同源性,为监控产酶菌株的流行及指导临床合理选择抗生素提供依据。方法EDTA纸片复合法和E—test法分别筛选产金属β-内酰胺酶菌株,PCR扩增耐药基因imp、vim、spm和gim,用MIC法测定产金属G内酰胺酶菌株对8种常用抗菌药物的敏感度,用肠杆菌科基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应（ERICPCR方法）确定菌株之间的同源性。结果42株耐亚胺培南和头胞他啶铜绿假单胞菌EDTA纸片复合法筛选出18株金属酶菌株、E—test法15株、PCR法12株;PCR法检测到imp阳性菌株4株,vim阳性菌株8株;产金属β-内酰胺酶菌株呈多重耐药,且PCR法阳性产金属酶菌株呈现为高水平耐药;ERIC—PCR结果显示,18株产金属伊内酰胺酶菌株呈现7种基因模型,其中10株为同一基因模型。结论经济简便快捷的EDTA纸片复合法可作为首选方法来对产金属酶铜绿假单胞菌进行筛选,烟台地区临床分离的铜绿假单胞菌所产金属β-内酰胺酶基因型以vim型为主,阿米卡星、环丙沙星具有较好的抗菌活性,某医院在一定时期曾出现爆发流行。