膀胱移行细胞癌组织基因的P14ARF、DAPK、RARβ甲基化变异分析

目的通过检测新鲜冰冻膀胱癌组织中P14ARF、DAPK、RARβ基因的启动子CpG岛基因的甲基化状态,探讨P14ARF、DAPK、RARβ在膀胱癌发生过程中的作用及诊断意义。方法采用甲基化特异性PCR技术检测48例手术切除的膀胱癌组织和其中13例相应癌旁组织标本、17例非肿瘤患者正常膀胱组织中DAPK、RARβ、P14ARF基因的甲基化情况。结果 48例膀胱癌组织中发现P14ARF基因异常甲基化13例(27.0%),DAPK基因异常甲基化13例(27.0%);RARβ基因异常甲基化44例(91.6%);17例腺性膀胱炎组织中发现P14ARF基因异常甲基化0例,DAPK基因异常甲基化2例(11.7%);RARβ基因异常甲基化3例(17.6%);13例正常膀胱组织中,仅有2例RARβ基因异常甲基化,P14ARF基因、RARβ基因异常甲基化膀胱癌组织与腺性膀胱炎组织差异有统计学意义(P<0.01;P<0.05)。结论 P14ARF、DAPK、RARβ基因异常甲基化与膀胱癌发病密切相关,RARβ基因可作为正常膀胱组织与癌组织鉴别诊断的标志物。     

维甲酸受体-β基因和死亡相关蛋白激酶基因启动子区甲基化与食管鳞状细胞癌关系研究

目的观察维甲酸受体-β（retinoic acid receptor β,RARp）基因、死亡相关蛋白激酶（death—associated protein kinase,DAPK）基因在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中启动子异常甲基化状况,探讨其在ESCC发生中的可能作用及早期诊断价值。方法95例ESCC患者的癌组织（ESCC组）、癌旁组织（癌旁组）及正常组织（对照组）,3组采用实时荧光定量甲基化特异性PCR法检测RAR—β及DAPK的甲基化状态。结果ESCC组、癌旁组、对照组RAR—β基因启动子区CpG岛甲基化发生率分别为46．3％、26．3％和11．6％,DAPK基因启动子区CpG岛甲基化发生率分别为47．3％、22．1％和12．6％,ESCC组RAR—β基因和DAPK甲基化发生率高于癌旁组与对照组（P〈0．05）;ESCC组RAR—β基因甲基化在年龄上差异有统计学意义（P〈0．05）,RAR—β基因和DAPK基因甲基化在肿瘤位置、分化程度、转移及浸润深度上差异无统计学意义（P〉0．05）。结论RAR—β和DAPK基因高度甲基化是ESCC组织的遗传学改变之一,可能参与了ESCC的发生、发展过程。     

p16、DAPK和ESRβ基因启动子甲基化与宫颈癌的关系

目的探讨p16、DAPK及ESRβ基因启动子区甲基化在宫颈癌发生、发展中的作用。方法利用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测宫颈癌组织及血清中p16、DAPK及ESRβ启动子区甲基化情况,分析三者与宫颈癌发生、发展及临床病理的关系。结果 100例宫颈癌组织中,p16和DAPK甲基化率分别为80%和35%,明显高于对照组(正常或慢性炎症的宫颈组织);p16和DAPK任意一个基因甲基化率为84%。30例宫颈癌患者血清中,p16和DAPK甲基化率分别为40%(12/30)和20%(6/30),而对照组中未检出甲基化;p16和DAPK任意一个基因甲基化率为46.7%(14/30)。宫颈癌组织和血清中均未检出ESRβ启动子区甲基化。进一步分析p16和DAPK基因甲基化与临床病理关系发现,二者甲基化与宫颈鳞状细胞癌关系更密切,鳞状细胞癌与腺癌比较差异显著(P<0.01)。结论 p16和DAPK基因启动子区甲基化与宫颈癌特别是宫颈鳞状细胞癌的发生、发展关系密切。ESRβ启动子区甲基化可能与宫颈癌的发生、发展无关。     

肝细胞癌中p14ARF基因启动子甲基化及蛋白表达的研究

目的 通过检测肝细胞癌中p14ARF基因启动子甲基化状态与蛋白表达的关系,探讨p14ARF基因启动子甲基化与肝细胞癌的关系.方法 通过甲基化特异性PCR(MSP)方法及免疫组化(IHC)法分别检测50例肝细胞癌组织和癌旁组织中p14ARF基因启动子甲基化状态和蛋白表达水平.结果 癌组织及癌旁组织中p14ARF基因启动子甲基化阳性率分别为28%(14150)和4%(2/50)(P<0.01).癌与癌旁组织p14ARF蛋白表达差异极显著(P<0.01).p14ARF基因启动子甲基化和蛋白表达与临床分期、门脉癌栓、术后复发、肝外转移、肿瘤大小、肿瘤个数及血清AFP值无关,而在肿瘤分化程度上p14ARF盯蛋白表达有显著差异,p14ARF基因启动子甲基化则无差异.p14ARF基因启动子甲基化与蛋白表达呈负相关.结论 启动子区甲基化是p14ARF基因失活的重要机制.p14ARF启动子区异常甲基化可能参与了肝癌的发生、发展,在肝癌的进展中起重要作用.     

皮肤鳞癌组织中p14ARF、E-cad、FOS和JUN基因甲基化状态的分析

目的通过检测皮肤鳞癌及正常皮肤组织中p14ARF、E-cad、FOS、JUN基因启动子区域CpG岛的甲基化状态,探讨p14ARF、E-cad、FOS、JUN在皮肤鳞癌发生过程中的作用及诊断意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测30例皮肤鳞癌组织和20例正常皮肤组织基因启动子区附近CpG岛的甲基化情况。结果 30例皮肤鳞癌组织中发现p14ARF、E-cad基因高甲基化例数分别为18例(60.0%)和11例(37.6%),而20例正常组织分别为1例(5.0%)和2例(10.0%);30例皮肤鳞癌FOS、JUN基因非甲基化分别为22例(73.3%)和25例(83.3%);20例正常组织非甲基化分别为6例(30.0%)和1例(5%)。采用χ2检验进行统计分析,存在统计学差异(P<0.05)。结论 p14ARF、E-cad、FOS、JUN基因启动子区域异常甲基化状态与皮肤鳞癌发病联系紧密。     

膀胱癌组织中上皮细胞钙依粘连蛋白基因启动子区CpG岛甲基化状态的分析

目的探讨膀胱癌中肿瘤抑制基因上皮细胞钙依粘连蛋白(E-cadherin)启动子区CpG岛的甲基化状态及其与mRNA表达的关系.方法收集30例新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织;采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)检测E-cadherin基因启动子区CpG岛的甲基化状态;采用逆转录PCR检测E-cadherin基因的mRNA表达.结果 E-cadherin基因在膀胱癌组织中的甲基化阳性率(43.3%)显著高于在癌周正常组织中的甲基化阳性率(6.7%,P＜0.01);在复发性膀胱癌中的甲基化阳性率(64.7%)显著高于在原发性膀胱癌中的甲基化阳性率(15.4%,P＜0.05);在不同分级、分期膀胱癌中的差异无显著性.13例异常甲基化的膀胱癌组织中有10例未检测到CDH1 mRNA的表达,而13例未甲基化膀胱癌组织中有2例未检测到,二者差异有显著性(P＜0.01).结论 E-cadherin在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化,但与膀胱癌的临床分期和病理分级无显著相关性,提示其可能参与了膀胱癌的发生;E-cadhenn基因CpG岛的过甲基化可能成为判断膀胱癌复发的指标之一;E-cadhenn基因CpG岛的过甲基化可能是造成E-cadherin mRNA不表达的原因之一.     

皮肤鳞癌组织中E-Cadherin,p14ARF,P16~(INK4a)基因启动子甲基化检测及其意义

目的通过检测皮肤鳞癌组织及正常皮肤组织中E-cadlherin,p14ARF,P16~(INK4a)基因启动子甲基化的发生情况,探讨E-cadherin,p14ARF和P16~(INK4a)基因启动子甲基化在皮肤鳞癌发生发展中的作用。方法采用酚-氯仿法提取30例皮肤鳞癌组织及正常皮肤组织的基因组DNA,应用甲基化特异性PCR对所提DNA进行E-cadherin,p14ARF和P16~(INK4a)基因甲基化检测。结果癌组织中E-cadherin,p14ARF和P16~(INK4a)基因启动子甲基化的阳性率分别为36.7%(11/30),60.0%(18/30)和53.3%(16/30),而正常皮肤组织中相应的3个基因的甲基化率分别为10.0%(3/30),6.7%(2/30)和6.7%(2/30),均显著低于癌组织。结论皮肤鳞癌中P16INK4a基因启动子甲基化与正常皮肤组织有明显差异,且在低分化癌中更多见;E-cadlherin基因启动子甲基化与正常皮肤比较有显著差异,并且有淋巴结转移多见的显著特征,皮肤鳞癌中p14ARF基因甲基化发生率明显高于正常皮肤,且与分化程度、淋巴结转移和临床分期有关系,同时p14ARF,E-Cadherin,p16~(INK4a)三种基因甲基化存在正相关关系,这3个基因的甲基化位点与皮肤鳞癌密切相关。     

膀胱癌组织中上皮细胞钙依粘连蛋白基因启动子区CpG岛甲基化状态的分析

目的　探讨膀胱癌中肿瘤抑制基因上皮细胞钙依粘连蛋白(E cadherin)启动子区CpG岛的甲基化状 态及其与mRNA表达的关系。方法　收集30例新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织;采用甲基化特异聚合酶 链反应(MSP)检测E cadherin基因启动子区CpG岛的甲基化状态;采用逆转录PCR检测E cadherin基因的mR NA表达。结果　E cadherin基因在膀胱癌组织中的甲基化阳性率(43.3%)显著高于在癌周正常组织中的甲基 化阳性率(6.7%,P<0.01);在复发性膀胱癌中的甲基化阳性率(64.7%)显著高于在原发性膀胱癌中的甲基化 阳性率(15.4%,P<0.05);在不同分级、分期膀胱癌中的差异无显著性。13例异常甲基化的膀胱癌组织中有10 例未检测到CDH1mRNA的表达,而13例未甲基化膀胱癌组织中有2例未检测到,二者差异有显著性(P< 0.01)。结论　E cadherin在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化,但与膀胱癌的临床分期和病理分级无显著相 关性,提示其可能参与了膀胱癌的发生;E cadherin基因CpG岛的过甲基化可能成为判断膀胱癌复发的指标之 一;E cadherin基因CpG岛的过甲基化可能是造成E cadherinmRNA不表达的原因之一。     

端粒酶催化亚基在腺性膀胱炎中表达意义的研究

目的探讨端粒酶催化亚基（hTERT）在腺性膀胱炎组织中的表达及意义。方法用RT-聚合酶链反应法分别对53例腺性膀胱炎组织、28例膀胱癌组织、25例正常膀胱组织及移行膀胱癌T24细胞株进行hTERT检测。结果腺性膀胱炎组织hTERT表达呈阳性33例（62．3%）;28例膀胱癌组织100%呈阳性表达;正常膀胱组织25例均无阳性表达。结论hTERT在腺性膀胱炎组织中的高度表达说明腺性膀胱炎与癌前病变有密切的相关性。     

腺性膀胱炎CK20、Ki67表达意义的研究

目的探讨20例腺性膀胱炎中细胞角蛋白20（CK20）、核增殖抗原表达基因（Ki67）的表达和意义。方法对20例腺性膀胱炎、20例低级别膀胱移行细胞癌（LTCC）、20例高级别膀胱移行细胞癌（HTCC）、25例正常膀胱组织的CK20和Ki67的表达采用免疫组织化学Envision二步法进行检测。结果腺性膀胱炎中CK20和K i67的表达与低级别膀胱移行细胞癌的表达差异性（P≤0.05）低于高级别膀胱移行细胞癌组（P（0.01）,且与正常膀胱组织比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论腺性膀胱炎为一具有一定恶性变趋向的良性病变。     

P53在腺性膀胱炎与膀胱癌中表达意义的研究

腺性膀胱炎（CG）是一种膀胱粘膜的增生性、化生性病变,近年来发病率有明显上升趋势。近几年来我们共收治152例腺性膀胱炎,发现7例最终癌变为膀胱移行细胞癌。为探讨腺性膀胱炎与膀胱癌的相互关系,本实验对18例单纯腺性膀胱炎、7例发生癌变腺性膀胱炎、9例腺性膀胱炎合并膀胱移行细胞癌（癌旁腺性膀胱炎）、17例膀胱腺癌和14例膀胱移行细胞癌（TCC）进行P53免疫组织化学研究,以期能够发现腺性膀胱炎高癌变倾向的有价值指标,指导临床的诊断和治疗。     

胃癌中多基因甲基化状态及其表达的研究

目的了解胃癌中p16、E-cadherin、Runx3、DAPK和CHFR基因启动子CpG岛的甲基化状态,并探讨基因异常甲基化与mRNA表达的关系及其意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测12例胃癌患者癌组织及其相应的癌旁正常组织中5种基因的甲基化状态,以12例胃镜活检的正常胃组织作为对照,采用RT-PCR方法相应检测了5种基因的mRNA表达水平。并分析每种基因甲基化程度与表达水平之间的关系。结果胃癌组织中,p16、E-cadherin、Runx3、DAPK和CHFR基因的甲基化率分别为41.7%、8.3%、58.3%、33.3%和58.3%,相应的癌旁正常组织中,p16、E-cadherin、Runx3、DAPK和CHFR基因的甲基化率分别为8.3%、0.0%、8.3%、8.3%和16.7%,且75%的胃癌组织中至少有一种基因甲基化,显著高于癌旁正常组织25%(P<0.05),而健康对照组织中无基因甲基化,在甲基化的胃癌组织中均无p16、E-cadherin和DAPKmRNA表达,而癌旁正常组织、非甲基化的癌组织中均有其表达。结论胃癌中多基因启动子CpG岛高甲基化是一个频繁的事件,并且基因启动子高甲基化与其mRNA表达缺失有关,这可能参与了胃癌的发生发展。     

死亡相关蛋白激酶1基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义

目的研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测宫颈癌癌组织和癌旁正常组织中DAPK1基因启动子甲基化,比较在二者间的差异及其与临床病理因素之间的关系。结果宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率为62.5%,癌旁组织中甲基化率为5.0%,宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率显著高于宫颈癌癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌癌组织DAPK1基因启动子甲基化率在组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、器官转移、FIGO分期中的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DAPK1基因启动子在宫颈癌中呈高甲基化状态,可作为宫颈癌的病情和预后评估的生物学标志物。     

膀胱癌和肾癌中RASSF1A和BLU的甲基化状态

目的探讨RASSF1A和BLU在膀胱癌和肾癌中启动子甲基化状态及其意义。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）技术分别在45例膀胱癌组织和相应癌周正常组织、12例肾癌组织及其相应癌周正常组织和3例非肿瘤患者正常膀胱组织中检测RASSF1A和BLU启动子区域的甲基化状态。结果膀胱癌组织中,RASSF1A和BLU甲基化率分别为55.6%和31.5%;肾癌组织中,两基因甲基化率为66.7%和33.3%。RASSF1A和BLU启动子甲基化状态与膀胱癌临床病理参数无明显相关性（P〉0.05）。在膀胱癌或肾癌中,RASSF1A和BLU启动子甲基化状态之间均无明显相关性（P〉0.05）。结论膀胱癌和肾癌中,RASSF1A和BLU频繁发生高甲基化,高甲基化可能参与膀胱癌和肾癌两类肿瘤的发生。     

前列腺癌组织中GSTP1和DAPK基因异常甲基化检测及临床意义

目的:检测前列腺癌组织中GSTP1和DAPK基因异常甲基化,探讨其甲基化与前列腺癌临床病理特征间的关系.方法:采用巢式甲基化特异性PCR(nested methylation specific polymerase chain reaction,NMSP)法对57例前列腺癌组织和35例良性前列腺增生组织进行甲基化检测,分析其甲基化的发生与前列腺癌临床病理特征间的关系.结果:前列腺癌组织中GSTP1和DAPK基因甲基化检出率显著高于良性前列腺增生组织(GSTP1:61.4%vs 2.9%;DAPK:43.9%vs 8.6%;均P＜0.01).GSTP1基因甲基化率在不同Gleason评分间具有明显差异(x2=11.53,P=0.001),而在不同年龄、前列腺特异性抗原(PSA)和临床分期之间差异却无显著性(x2=0.111,1.662和1.975,均P＞0.05);DAPK基因甲基化率在不同年龄、PSA、Gleason评分和不同临床分期之间均无明显差异(x2=0.071、0.002、1.290和2.309,P均＞0.05).结论:GSTP1和DAPK基因异常甲基化与前列腺癌的发生与发展相关,可有助于前列腺癌的诊断.     

彩色多普勒超声对腺性膀胱炎的鉴别诊断价值

目的 探讨彩色多普勒超声检查对腺性膀胱炎的鉴别诊断价值.方法 采用彩色多普勒超声检查39例腺性膀胱炎和192例膀胱癌患者,观察膀胱病变的位置、形态、边界、内部回声及其与膀胱壁的关系,并检查病变内部的血流分布,将其声像图表现进行对比分析.超声检查结果与膀胱镜活检或手术病理结果对照.结果 59.0%(23/39)腺性膀胱炎和52.9%(74/140)的单发膀胱癌病灶位于膀胱三角区及输尿管口周围;53.8%(21/39)的腺性膀胱炎表现为膀胱壁局限性增厚,72.9%(140/192)的膀胱癌为单发结节或团块,两者的病灶形态分布差异有统计学意义(P＜0.01);69.2%(27/39)的腺性膀胱炎病灶内部见囊状无回声区,而膀胱癌病变内均未见此声像改变;膀胱癌病灶边缘见点状强回声者占48.4%(93/192),而腺性膀胱炎仅为7.7%(3/39),二者差异有统计学意义(P＜0.01);彩色多普勒显示84.9%(163/192)膀胱癌病变内检出血流信号,其血流检出率明显高于腺性膀胱炎.彩色多普勒超声对腺性膀胱炎与膀胱癌的诊断准确率分别为84.6%(33/39)、95.3%(183/192).结论 彩色多普勒超声检查能清晰显示腺性膀胱炎的位置、边界、形态、内部回声及其与膀胱壁的关系,对腺性膀胱炎的鉴别诊断和临床随访有重要作用.     

胃癌DAPK基因甲基化的初步临床研究

目的：对胃癌、正常组织以及转移淋巴结的死亡相关蛋白激酶（DAPK）基因甲基化进行分析,探讨其与胃癌的关系。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）的方法对DAPK基因甲基化的情况进行检测。结果：检测的40例胃癌组织中有33例（82．5％）胃癌组织存在异常甲基化,而正常组织的甲基化17例（42．5％）和转移淋巴结中甲基化28例（70．0％）。癌组织和转移淋巴结中DAPK基因甲基化率都明显高于正常组织。结论：在胃癌组织中DAPK基因异常甲基化的频率十分高,在临床中若对胃黏膜组织以及转移淋巴结中蛋白激酶基因的甲基化情况进行检测,对胃癌的诊断以及判断淋巴结的微转移具有一定的临床参考价值,也有可能为胃癌的靶向治疗提供一个新型的靶点。     

微小染色体支持蛋白2在膀胱癌组织中的表达及其意义

目的:探讨微小染色体支持蛋白2 (minichromosome maintenance protein 2,MCM2)在膀胱癌中的表达及临床意义.方法:应用免疫组化SP法检测45例膀胱癌、20例腺性膀胱炎及10例正常膀胱黏膜组织中MCM2的表达.结果:正常膀胱黏膜中未见MCM2表达,膀胱癌组织中阳性表达率为100%,显著高于腺性膀胱炎(20%),3组之间差异有统计学意义(P＜0.01).MCM2表达与膀胱癌不同分化程度、复发差异有显著性(P＜0.05),且随恶化程度逐渐升高,但与临床分期及病理类型不相关.结论:MCM2表达是反映膀胱癌生物学行为有价值的指标.     

膀胱肿瘤中错配修复基因hMLH1启动子甲基化状态的研究

目的 探讨膀胱肿瘤中错配修复基因hMLH1启动子甲基化状态及其意义。方法 收集30对新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织；采用甲基化特异聚合酶链反应（methylation specific PCR，MSP）检测hMLH1基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果 30对膀胱癌组织、癌周正常组织中hMLH1基因的甲基化阳性率分别为10／30、1／30，二者差异有统计学意义（P〈0．叭）；hMLH1基因甲基化阳性率在Ta-T1期、T2-T3期膀胱癌中分别为7／19、3／11，二者差异无统计学意义（P〉0．05）；在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌中分别为7／18、2／9、1／3，三者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 错配修复基因hMLH1在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化，但与膀胱癌的临床病理特点无显著相关性，提示hMLH1的异常甲基化可能参与了膀胱肿瘤的发生。