冰冻切片快速免疫组织化学染色

在冰冻切片快速病理理诊断过程中，对微小病灶或少量转移癌细胞仅靠形态学诊断有时非常困难，容易造成漏诊或误诊。应用特异性抗体标记，免疫组织化学染色方法能够鉴别微小病灶或转移癌，但常规的免疫组织化学染色方法时间比较长，一般需要24～48h，故对手术中冰冻切片的快速病理诊断不合适。本     

冰冻切片抗体在石蜡切片免疫组化中的应用

目的：探讨经抗原系列修复后冰冻切片抗体应用于石蜡切片的免疫组化技术。方法：在常规免疫组化的基础上,于Triton X-100处理后,用0．1mol／L的甘氨酸4℃过夜或0．2mol／L的甘氨酸室温2h。0．01mol／L枸橼酸缓冲液pH6．095--98℃微波10min进行组织抗原修复。观察比较GDNF,Caspase-3和：XRCC1冰冻切片抗体在石蜡切片中的免疫反应性(IR)。结果：经过上述条件处理后,石蜡切片中均出现3种冰冻抗体的IR阳性。其中GDNF IR反应性优于Caspase-3和XRCC1-IR,但3种冰冻抗体在冰冻切片或滴片中的IR均高于石蜡切片。结论：石蜡切片经系列抗原修复后免疫反应有一定改善,但与应用的抗体类型有关。     

防止冰冻切片在抗原修复过程中脱片的实验技术改进

一般冰冻切片比石蜡切片更能有效的保存组织抗原性，而不需要抗原修复．但是，如果组织是经福尔马林固定后冰冻切片，许多抗原决定簇难免被醛基交联封闭，而减低抗原敏感性．采用高温高压处理这些组织，可破坏醛基交联，更有效的暴露抗原与抗体结合．但是，在高温高压处理组织切片时常发生脱片，影响了其后步骤的进行．为克服这一缺点，作者通过技术改进，防止了脱片现象．[第一段]     

抗原修复技术在脱钙组织冰冻切片免疫组化染色中的应用

目的　探讨抗原修复技术在脱钙组织冰冻切片免疫组织化学染色中的作用 ,并寻找最佳的抗原修复方法。方法　将“低温微波 硝酸快速脱钙方法”处理的骨及其软组织冰冻切片分为 4组 :Ⅰ对照组 (不处理 )、Ⅱ组(胰蛋白酶 )、Ⅲ组 (微波 枸椽酸 )、Ⅳ组 (微波 TritonX 1 0 0 )。应用LSAB技术检测ANP、5 HT、S 1 0 0、NF、GFAP、Vimen tin、CD31、CD34、FⅧ和VEGF和 1 0种抗体在I～Ⅳ组中的表达 ,图像分析各组阳性细胞的平均吸光度 (A)值 ,结果进行统计处理。结果　Ⅱ～Ⅳ组的吸光度值 (分别为 0 87± 0 4 1、2 .4 3± 0 35、和 2 .4 9± 0 4 3)明显高于I组 (0 4 1±0 37) ;Ⅲ～Ⅳ组明显高于Ⅱ组 ,差异有非常显著性 (P <0 0 1 ) ;Ⅲ、Ⅳ组间差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　用微波 TritonX 1 0 0或微波 枸椽酸缓冲液对脱钙组织冰冻切片进行微波抗原修复是必要的 ,能明显提高免疫组化染色的敏感性。     

冰冻切片制作技术的改进

冰冻切片是利用低温使组织迅速冻结达到一定的硬度进行切片的一种方法.具有快速、方便的特点,因其不经过脱水和透明步骤,组织没有收缩,易保持生活的原有形态,尤其在免疫组织化学染色中,能较好的保存细胞抗原的免疫性,所以是保存脂肪组织、神经组织特别是酶的活性十分理想的切片方法,因此它在现代免疫荧光诊断和免疫组织化学中也很重要.但由于制片过程中,许多因素影响切片的质量,并进一步影响实验的观察和分析.现将在冰冻切片技术过程中的几点体会总结如下.     

冰冻切片快速免疫组化染色的体会

对于一些软组织肿瘤和一些交界性或肿瘤成分少的上皮性肿瘤在冰冻切片中依靠形态学诊断有时非常困难,免疫组化能有所帮助.但常规免疫组化染色需时较长,不适用于冰冻诊断,我们用的是Enhanced polymerone-step staining(EPOS)法,它是目前国际上用得比较多的方法,文献报告上重复性和稳定性好,对确定和排除肿瘤有明确的辅助诊断作用.     

免疫组化染色中防脱片的技术改进

应用抗原修复技术暴露被封闭的组织抗原决定簇，是免疫组织化学技术中的关键步骤。微波抗原修复技术是一种有效的抗原修复方法，目前该技术已广泛应用于病理切片的免疫组织化学染色操作中。它利用高温效应和微波的直接作用，打开蛋白间的交联键，暴露组织固定时被封闭的抗原决定簇。但是在微波加热处理组织切片的过程中，常发生脱片现象而导致实验失败。为了克服这个缺点，我们经反复实践摸索，使用简单的材料设计了一种可行的方法，较好地防止了脱片现象的发生。     

采用高压法对免疫组织化学染色切片进行抗原修复

为了恢复组织的抗原性和提高抗原抗体的敏感程度 ,我们采用高压锅法和微波法对 10多种组织抗原进行修复比较。1　方　　法1 1　微波炉加热　将已脱蜡的组织切片放入立式玻璃染色缸中 ,加入适量的 ｐＨ =6 0的柠檬酸盐缓冲液 ,置于微波炉中加热至微沸后 ,分别于 4、 6、 8、 10ｍｉｎ后取出容器 ,置于室温 ,冷却后用ＰＢＳ缓冲液洗 3次 ,每次 2ｍｉｎ ,下接Ｓ -Ｐ免疫组织化学染色步骤。1 2　高压锅加热　锅内加水 15 0 0～ 2 0 0 0ｍｌ,将已脱蜡的组织切片插入 2 2片装金属染色架上 ,再放入 12ｃｍ不锈缸内 ,缸内加入适量的ｐＨ6 0柠檬酸…     

冰冻切片联合快速免疫组织化学检测在乳腺癌前哨淋巴结诊断中的价值

目的：探讨冰冻切片联合快速免疫组织化学检测在乳腺癌前哨淋巴结诊断中的临床价值。方法：选择2011年10月-2013年10月期间我院收治的临床确诊为乳腺癌的患者56例,分别采取冰冻切片、冰冻切片与快速免疫组织化学法进行前哨淋巴结活检,并对检测结果进行对比分析。结果：单纯冰冻切片法检测前哨淋巴结癌的转移率为8.93%,冰冻切片联合快速免疫组织化学法前检测哨淋巴结癌的转移率为32.21%,联合法的检出率较单纯法显著升高（P<0.05）。结论：在乳腺癌前哨淋巴结转移的诊断中,冰冻切片联合快速免疫组织化学可有效提高诊断率,值得临床关注。     

表皮生长因子在人胎儿内耳中免疫组织化学定位

利用免疫组织化学技术对１１例９．５￣３２周龄的人胎儿内耳中表皮生长因子（ＥＧＦ）的表达进行定位研究。结果显示：耳蜗Ｃｏｒｔｉ’ｓ器、血管纹、位觉斑及壳腹嵴等内耳重要结构均有阳性表达；支持细胞染色深而发育的毛细胞染色浅，说明支持细胞表达较强而发育的毛细胞表达较弱，结果提示：ＥＧＦ参与内耳听觉和位觉感受器的发育过程。     

表皮生长因子在人胎儿内耳中免疫组织化学定位

利用免疫组织化学技术对１１例９．５～３２周龄的人胎儿内耳中表皮生长因子（ＥＧＦ）的表达进行定位研究。结果显示：耳蜗Ｃｏｒｔｉ＇ｓ器、血管纹、位觉斑及壶腹嵴等内耳重要结构均有阳性表达；支持细胞染色深而发育的毛细胞染色浅，说明支持细胞表达较强而发育的毛细胞表达较弱，结果提示：ＥＧＦ参与内耳听觉和位觉感受器的发育过程。     

人胎内耳中碱性成纤维细胞生长因子的定位表达

目的：研究人胎内耳中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)的定位表达情况。方法：合法水囊引产胎儿10个，制备火棉胶包埋颞骨切片，采用免疫组织化学技术观察bFGF在内耳中表达情况。结果：耳蜗毛细胞，支持细胞，螺旋神经节细胞，神经纤维均有bFGF表达，成熟毛细胞表达很弱；前庭毛细胞，支持细胞，上皮下组织和神经纤维均有bFGF表达。结论：bFGF参与人内耳发育，主要起促分化作用。     

消除小鼠肝脏冰冻切片自发荧光4种封闭方法的比较

目的 通过对小鼠肝脏冰冻切片进行不同的封闭处理,探寻消除小鼠肝脏自发荧光的最佳方法,以降低对免疫荧光阳性信号的干扰,提高免疫荧光结果的准确性。方法 （1）经脾静脉注射肝脏荷瘤裸小鼠：将Hepa1-6-GFP细胞通过脾脏注射方法使其在雄性无胸腺BALB/c裸小鼠肝脏定植,并将肝脏进行冰冻连续切片,对切片分别进行AB液（内源性生物素封闭液）、blocking、AB液+blocking、丙酮+AB液+blocking封闭处理,然后检测小鼠肝脏冰冻切片自发荧光。（2）C57BL/6小鼠：对C57BL/6小鼠肝脏进行冰冻连续切片,对切片分别进行上述4种封闭处理,用F4/80标记肝巨噬细胞（Kupffer细胞）,然后检测小鼠肝脏冰冻切片自发荧光。结果 肝脏组织冰冻切片免疫荧光染色时,4种封闭处理都可以减弱肝脏切片的自发荧光,但丙酮+AB液+blocking封闭处理效果最佳。结论 丙酮+AB液+blocking联合应用对小鼠肝脏组织冰冻切片自发荧光的消除效果最好。     

抗原修复液pH值对淋巴组织免疫组化染色的影响

目的：研究抗原修复液pH值对免疫组化染色结果的影响.方法：选用CD3、CD5、CD10、CD20、CD43、CD45RO、CD79α、CyclinD1、κ、γ为一抗,Elivision二步法免疫组化染色.染色时分别用pH5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0的抗原修复液作微波抗原修复.结果：不同条件可造成阳性细胞数量及染色强度变化.结论：本实验选用淋巴组织,抗原修复液选择pH7.0,8.0柠檬酸盐缓冲液均优于其它pH值,其中pH8.0染色效果最佳.修复液pH＞8.0影响切片附着,造成脱片.     

应用多种免疫酶组化技术对人胃癌结肠癌切片及脱落细胞CEA反应性研究

在多种免疫酶组化方法对比下,主要采用HRP-SPA(金葡菌蛋白A标记辣根过氧化酶)法,观察62例胃癌,33例结肠癌石蜡切片和94例胃涂片,80例结肠涂片Carcinoembryonic Antigen(简称CEA)反应。见到CEA阳性物质存在于胃、结肠癌细胞及癌旁粘膜上皮细胞内,可具有极性分布特征;以细胞分光光度计检测,癌灶CEA相对含量显著高于癌旁组织,且与腺癌组织学类型有关;胃、结肠涂片CEA阳性率均高于胃癌,结肠癌的病理细胞学检出率,且确诊率较高。提示:切片、涂片CEA免疫组化检测可辅助胃、结肠癌病理细胞学诊断及分型,尤其是早期癌诊断。文中并讨论CEA可能具有不同功能。     

钻井井场噪声所致豚鼠内耳毛细胞损伤的观察

本文对油田井扬的特定部位进行声强测定及频谱分析，发现其噪声强度均已超过国家标准。选健康、耳廓反射正常豚鼠３０只，分别置于柴油机旁（８只）、钻井平台上（８只）和值班房（８只），余６只为正常对照组。每天暴露６ｈ，连续２１ｄ。断头后观察透射电镜下耳蜗毛细胞的改变，结果发现：Ｈｅｎｓｅｎ氏小体增生、蜕变及线粒体改变。     

侧脑室穿刺对豚鼠听觉脑干诱发电位及内耳病理形态的影响

目的：观察侧脑室穿刺对豚鼠听觉脑干诱发电位（ABR）及内耳病理形态的影响。方法：健康成年豚鼠随机分为手术对照组（只暴露硬脑膜）、侧脑室穿刺Ⅰ组（暴露硬脑膜,右侧脑室穿刺,收集流出的脑脊液约0．1ml）、穿刺Ⅱ组（将穿刺流出的脑脊液即刻缓慢注入侧脑室）、穿刺Ⅲ组（向侧脑室中缓慢注入0．1ml生理盐水）,每组10只动物。分别于术前、术后1h、24h行ABR测试,记录各组豚鼠双耳听力阈值及70dB时各波潜伏期和Ⅰ～Ⅲ波间期,取耳蜗组织做病理检查。以不施加任何处理因素的6只豚鼠为正常对照。结果：术前各组豚鼠ABR各波潜伏期、Ⅰ～Ⅲ波间期及阈值差异均无统计学意义（P〉0．05）;术后1h,侧脑室穿刺Ⅰ组ABR各波潜伏期、Ⅰ～Ⅲ波间期较术前延长,阈值升高,术后24h各指标恢复正常;其余各组动物上述各指标术前、术后1h、24h差异均无统计学意义（P〉0．05）。手术对照组动物术后1h和24h耳蜗病理切片未见异常。侧脑室穿刺组动物术后1h时,耳蜗底转鼓阶出现红细胞沉积现象;24h后各阶和前庭阶中均可有红细胞出现。结论：一定量脑脊液丧失会引起豚鼠短暂、可逆性听力下降,而脑脊液体积或压力适量增加对豚鼠ABR无明显影响。侧脑室穿刺后,脑脊液中红细胞可经耳蜗导管到达外淋巴,并随外淋巴纵行流动广泛分布到各转鼓阶和前庭阶。     

复方鱼油对糖尿病大鼠内耳病变的预防作用

目的：观察复方鱼油对大鼠糖尿病内耳病变的预防作用及其机制。 方法：50只雄性Wistar大鼠随机分成3组,A组为正常对照组共16只,B组为糖尿病对照组18只,C组为复方鱼油治疗组16只。B、C两组静脉内注射链脲佐菌素(STZ)55 mg•kg^-1体重,3周后C组动物每日灌饲复方鱼油持续9周。测试血中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)和极低密度脂蛋白-胆固醇(VLDL-C)水平,记录动物听觉脑干诱发电位。 结果：C组动物TC、TG、LDL和VLDL较B组明显降低(P<0.05);C组动物听觉脑干诱发电位Ⅲ波潜伏期较B组缩短(P<0.05),Ⅲ波阈值降低(P<0.05);透射电镜下B组动物内耳毛细胞内大量脂滴聚集,线粒体、高尔基体空泡样变性,微血管壁内皮细胞肥大增生,基底膜增厚,C组则无明显变化。 结论：复方鱼油能明显降低血脂,并能有效减轻糖尿病引起的内耳病变。     

人胎舌内NOS阳性神经元发育的免疫组化观察

目的:探讨人胎舌内NOS阳性神经元的发育规律。方法:免疫组织化学方法。结果:第3~4个月龄时,在舌肌和舌粘膜固有层可见到胞体较小,淡染的NOS阳性神经元,分布稀疏。第6~8个月龄时,舌肌组织中NOS阳性神经元数目明显增多,胞体略大,核大,胞质极少。第9~10个月龄时,舌粘膜固有层和舌肌组织内NOS阳性神经元胞体明显增大,细胞质也相应增多,舌肌组织中可见小的NOS阳性神经节分布。结论:舌内NOS阳性神经元的发育与舌粘膜和舌肌的发育密切相关。