HL60 IL6单核细胞活化反应法在注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ热原检测中的应用研究

摘 要 目的：探讨HL60 IL6单核细胞活化反应法在注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ热原检测中的应用。 方法: 参照2015年版中国药典通则1193,确定注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ热原测定限值及最小有效稀释浓度。采用细胞增殖抑制试验、IL 6 ELISA 试剂盒干扰试验和热原干扰试验分别探讨对HL60细胞生长、对IL 6和热原测定无影响的供试品浓度,进而确定适用于注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ体外热原测定的HL60 IL6方法。用该方法对1个厂家7批注射用肝水解肽、1个厂家6批注射用辅酶Ⅰ进行热原测定。 结果: 注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ最小有效稀释浓度分别为0.003 mg·ml-1和0.000 2 mg·ml-1;对HL60细胞增殖无影响的最高浓度分别为1 mg·ml-1和10 mg·ml-1,对IL 6和热原测定无影响的最高浓度均为0.1 mg·ml-1。根据以上实验结果确定了适合该方法的注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ浓度均为0.1 mg·ml-1。用该方法对1个厂家7批注射用肝水解肽、1个厂家6批注射用辅酶Ⅰ供试品进行热原测定,结果均为阴性。 结论: HL60 IL6方法适用于注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ热原测定。     

HL60-pNL3.2报告基因法在注射用脑蛋白水解物热原检测中的应用研究

摘要：目的:探讨HL60-pNL3.2报告基因法在注射用脑蛋白水解物热原检测中的应用。方法:参照2020年版中国药典细菌内毒素检查法（通则1143）,确定注射用脑蛋白水解物最小有效浓度。参照中国药典《体外热原检查法（报告基因法）》公示稿,干扰实验探讨脑蛋白水解物对热原测定是否存在干扰,并用本实验室建立的HL60-pNL3.2报告基因法对8个厂家生产的16批脑蛋白水解物进行热原测定。结果:注射用脑蛋白水解物最小有效稀释浓度为0.25 mg·ml-1。1 mg·ml-1浓度的脑蛋白水解物溶液对热原测定无干扰。用建立的方法对8个厂家生产的16批注射用脑蛋白水解物进行热原测定,结果均符合规定。结论:HL60-pNL3.2报告基因法具有不使用动物、操作简单、快速、检测热原谱广,可对热原进行定量的优点,可用于注射用脑蛋白水解物热原检测。     

凝胶法检查注射用头孢噻吩钠中的细菌内毒素

目的:建立以凝胶法检查注射用头孢噻吩钠中细菌内毒素的方法。方法:将注射用头孢噻吩钠分别以细菌内毒素检查用水稀释成供试品阴性、阳性对照系列,以考察其最大不干扰浓度;再以细菌内毒素检查用水与样品制备成的供试液分别将细菌内毒素稀释成不同系列浓度的溶液,按鲎试剂灵敏度复核进行干扰性试验。结果:试验中注射用头孢噻吩钠的最大不干扰浓度为6·68mg/ml;另将其稀释至浓度为1·67mg/ml时对细菌内毒素检查无干扰。结论:本方法可代替热原检查中的家兔法以检查注射用头孢噻吩钠中的细菌内毒素。     

注射用奈达铂细菌内毒素检查法

目的：对注射用奈达铂进行凝胶法干扰试验,建立注射用奈达铂细菌内毒素检查的试验方法。方法：采用中国药典2005年版二部附录细菌内毒素检查法．结果：注射用奈达铂稀释至浓度为0．125mg·mL^-1时对细菌内毒素检查法无干扰作用。结论：使用细菌内毒素检查法检查注射用奈达铂中的细菌内毒素是可行的,可用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法。     

注射用红花黄色素细菌内毒素检查法

目的对注射用红花黄色素进行凝胶法干扰试验,建立注射用红花黄色素细菌内毒素检查法的试验方法。方法采用中国药典2005年版二部附录细菌内毒素检查法。结果注射用红花黄色素稀释300倍（0．167mg·mL^-1）时对细菌内毒素检查法无干扰作用。结论使用细菌内毒素检查法检查注射用红花黄色素中的细菌内毒素是可行的,可用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法。     

鲎试剂检测乳酸钠林格注射液中细菌内毒素的研究

本文研究了乳酸钠林格注射液对鲎试剂灵敏度的影响，寻找消除干扰的方法。方法：使用不同灵敏度的TAL，用供试品及其稀释液将细菌内毒素工作标准品制成一系列浓度稀释液，观察有供试品与无供试品测得的TAL灵敏度有否改变，选择合适的TAL灵敏度与供试品稀释度，并将检查结果与家兔法热原检查进行对照。结果：原液对灵敏度标示值为0．5、0.25、0．125Eu／ml的鲎试剂有抑制作用；稀释液无干扰作用；经本法检验合格的产品，家兔法热原检查呈阴性，临床应用未见有输液反应。结论：选用灵敏度为0.125Eu／ml的鲎试剂，并将样品稀释2倍，即可消除供试品对鲎试剂的干扰作用。     

注射用盐酸伊立替康细菌内毒素检查方法的建立

目的建立注射用盐酸伊立替康细菌内毒素的检查方法。方法用pH缓冲液调节注射用盐酸伊立替康的pH值,以排除干扰。结果用碱性调节剂稀释剂Ⅱ对供试品进行适当稀释,调节pH值至中性,可以排除细菌内毒素检查干扰因素。结论可以用细菌内毒素法代替原质量标准中的家兔热原测定法控制其热原。     

清开灵注射液的细菌内毒素检查法研究

目的建立清开灵注射液的细菌内毒素检查法。方法使用不同鲎试剂对清开灵注射液进行干扰试验。结果用稀释法进行稀释,证明供试品经过60倍稀释后无干扰作用。结论清开灵注射液可以采用细菌内毒素检查法控制热原。     

凝胶法测定脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素

目的 探讨凝胶法测定人脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素的可行性。方法 收集人脐带间充质干细胞培养72 h的上清为供试品。参照《中国药典》2020年版第三部通则1143细菌内毒素检查法中凝胶法的具体要求和步骤对鲎试剂进行灵敏度复核,对供试品进行干扰初筛试验、干扰试验和供试品细菌内毒素的测定。结果 鲎试剂灵敏度测定值为0.125EU/mL,在0.5λ～2.0λ符合规定,可用于后续试验。供试品1、2、4倍稀释对鲎试剂均无干扰;干扰试验验证2倍稀释供试品对细菌内毒素凝胶法检测无干扰作用;采用凝胶法测定2倍稀释供试品的细菌内毒素含量均≤0.5 EU/mL,判定供试品中细菌内毒素含量合格。结论 凝胶法可用于人脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素的检测。     

注射用盐酸克林霉素细菌内毒素检查方法

目的建立注射用盐酸克林霉素的细菌内毒素检查方法。方法按2005年版《中国药典(二部)》附录ⅪE进行试验并判定结果。结果供试品溶液质量浓度为3 g/L时,对细菌内毒素检查无干扰。结论注射用盐酸克林霉素用细菌内毒素检查法代替热原检查法可行。     

盐酸尼卡地平葡萄糖注射液细菌内毒素检查

目的:建立盐酸尼卡地平葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法。方法:根据2005年版《中国药典》(二部)附录细菌内毒素检查法进行试验。结果:当水为溶剂时,样品对细菌内毒素检查法有干扰作用;改用稀释剂Ⅰ作为溶剂,干扰预试验和干扰试验结果表明,样品在4倍以上稀释浓度时可排除干扰。结论:盐酸尼卡地平葡萄糖注射液按限值L=0.5EU.mL-1进行细菌内毒素检查是可行的,可以用细菌内毒素检查法取代热原检查法检测盐酸尼卡地平葡萄糖注射液。     

薄芝糖肽注射液细菌内毒素检查法可行性研究

目的研究薄芝糖肽注射液细菌内毒素检查法的可行性。方法用不同厂家生产的鲎试剂对薄芝糖肽注射液进行细菌内毒素检查法干扰试验。结果薄芝糖肽注射液在稀释120倍后对灵敏度为0.25EU.mL^-1的鲎试剂无干扰作用。结论薄芝糖肽注射液可以用内毒素检查法取代热原检查法。     

新型纳豆激酶-γ-聚谷氨酸复合物注射液的制备和毒性评价

目的制备一种低毒性的纳豆激酶(nattokinase,NK)注射液。方法在NK注射液中加入γ-聚谷氨酸(γ-polyglutamic acid,γ-PGA),制备NK-γ-PGA复合物注射液。采用急性毒性试验,以小鼠给药后的生存时间、生存状态和注射后48h存活小鼠尾部的状态作为毒性评价的指标,分别考察pH和γ-PGA浓度对NK与γ-PGA复合情况的影响。利用体外溶栓试验对NK-γ-PGA注射液毒性降低的原因进行分析。结果当以120 kU·kg^-1的剂量单次尾静脉注射NK-γ-PGA复合物注射液(NK 10 kU·mL^-1,γ-PGA 0.924 mg·mL^-1,pH 6.0)时,48 h后小鼠的死亡率为0,且尾部无红肿及坏死,说明在pH 6.0和γ-PGA的浓度为0.924mg·mL^-1时,NK与γ-PGA复合得最好。体外溶栓试验结果表明,γ-PGA的加入未降低NK活性,毒性的降低主要是因为NK与γ-PGA形成了复合物,起到了缓释作用。结论本研究中制备的NK-γ-PGA复合物注射液(NK 10 kU·mL^-1,γ-PGA 0.924 mg·mL^-1,pH 6.0)在不改变NK活性的前提下,降低了NK注射液毒性。     

卡络磺钠注射液细菌内毒素检查方法研究

目的 探讨卡络磺钠注射液细菌内毒素检查方法替代家兔热原检查法的可行性.方法 采用凝胶法,进行干扰预试验及干扰试验,其中干扰试验采用2个厂家生产的鲎试剂;用灵敏度为0.25 EU·mL-1鲎试剂和卡络磺钠注射液31.25倍稀释液进行细菌内毒素检查.结果 卡络磺钠注射液稀释倍数为31.25倍时对鲎试剂与内毒素的凝集反应无干扰作用.结论 卡络磺钠注射液可用细菌内毒素检查法替代原有的家兔热原检查法.     

生长抑素与乌司他丁联合肠内营养治疗重症急性胰腺炎患者的临床研究

目的观察生长抑素与乌司他丁联合肠内营养对重症急性胰腺炎(SAP)患者血管内皮功能及肠黏膜屏障的影响。方法将102例SAP患者,随机分为对照组和试验组,各51例。2组均予生长抑素6 mg,用微量泵进行24 h持续静脉滴注,乌司他丁起始剂量每次10万单位,溶于5%葡萄糖注射液或0.9%NaCl注射液500 mL中静脉滴注,每次1~2 h,每天1~3次,根据患者状况改善情况逐渐减量。对照组给予常规静脉营养支持;试验组给予肠内营养支持。2组均治疗2周。比较2组患者治疗前后炎性因子、血管内皮功能、肠黏膜屏障指标、白蛋白、淀粉酶及急性生理与慢性健康评分(APACHE-Ⅱ)。结果治疗后,试验组白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血栓素B2(TXB2)、血管性血友病因子(vWF)、内皮素(ET)、D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)、果糖/甘露醇(L/M)、淀粉酶及APACHE-Ⅱ、白蛋白(ALB)和一氧化氮(NO)水平分别为(18.94±4.05)pg·mL^-1,(22.73±4.29)pg·mL^-1,(15.53±3.31)pg·mL^-1,(211.52±11.24)pg·mL^-1,(103.73±14.83)%,(102.51±11.06)pg·mL^-1,(5.27±6.51)μg·mL^-1,(2.05±0.96)U·mL^-1,0.13±0.05,(428.59±52.35)U·L^-1,6.63±2.11,(4.24±1.18)g·L^-1,(10.71±3.94)U·mL^-1。对照组的上述指标分别为(27.51±6.27)pg·mL^-1,(36.58±5.61)pg·mL^-1,(19.15±4.08)pg·mL^-1,(274.94±13.08)pg·mL^-1,(151.62±14.85)%,(122.82±12.59)pg·mL^-1,(8.14±7.29)μg·mL^-1,(3.41±1.02)U·mL^-1,0.22±0.09,(861.81±74.83)U·L^-1,8.54±2.28,(2.65±1.09)g·L^-1,(5.62±2.08)U·mL^-1,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组和试验组的药物不良反应发生率分别为3.92%和0,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论生长抑素与乌司他丁联合肠内营养可以有效抑制SAP患者体内炎症反应,促进血管内皮功能的恢复和肠黏膜屏障的修复。     

大蒜素的提取及体外抗菌活性观察

目的：了解大蒜素的体外抗菌活性。方法采用溶剂提取法提取大蒜素,滤纸片法测定抑菌效果,二倍稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）。结果大蒜素对所试验的9种细菌和真菌均有抗菌作用;最小抑菌浓度：金黄色葡萄球菌12.5mg· mL^-1,大肠杆菌25mg· mL^-1,痢疾志贺菌25mg· mL^-1,肺炎克雷伯杆菌50mg· mL^-1,产气肠杆菌50mg· mL^-1,普通变形杆菌50mg· mL^-1,枯草芽胞杆菌25mg· mL^-1,铜绿假单胞菌50mg· mL^-1,白色念珠菌12.5mg· mL^-1。结论大蒜素具有广谱的抗菌活性,对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌都具有一定的抗菌效果。     

灯盏花素注射液细菌内毒素检查法的研究

目的:建立灯盏花素注射液的细菌内毒素检查方法。方法:按《中国药典》2005年版二部附录ⅪE进行实验和结果判断。用所建立的细菌内毒素检查法与家兔法同时对148批样品进行比较试验。结果:灯盏花素注射液的浓度最大不干扰浓度为0.3 mg.mL-1;家兔法与细菌内毒素检查法的结果具有一致性;灯盏花素注射液对细菌内毒素的致热活性有一定的抑制作用。结论:用细菌内毒素检查法替代家兔法检查热原是可行的,其限度拟订为1 EU.mg-1。     

三磷酸腺苷二钠注射液细菌内毒素检查法的初步实验研究

目的建立三磷酸腺苷二钠注射液细菌内毒素检查法。方法按《中国药典》2005年版（二部）附录收载的细菌内毒素检查方法进行实验。结果在3．33mg·mL^-1稀释浓度时对细菌内毒素检查法无干扰作用。用细菌内毒素检查法检查三磷酸腺苷二钠注射液的细菌内毒素是可行的。结论可以用细菌内毒素检查法代替家兔法来控制三磷酸腺苷二钠注射液的质量。     

注射用泮托拉唑钠的细菌内毒素检查

目的建立注射用泮托拉唑钠细菌内毒素的检查方法。方法按《中国药典》2005年版(二部)附录ⅪE进行实验和结果判断。结果用标示量灵敏度0.25EU.mL-1的鲎试剂,注射用泮托拉唑钠的有效检测浓度为0.13mg.L-1,3批注射用泮托拉唑钠内毒素均小于1.88EU.mL-1。结论本品可以用细菌内毒素检查法代替家兔热源检查法。