高糖对大鼠主动脉血管平滑肌细胞产生一氧化氮及其合酶活性的影响

目的：研究高糖对主动脉血管平滑肌细胞产生一氧化氮（ＮＯ）及其合酶（ＮＯＳ）活性的影响。方法：应用ＮＯ及ＮＯＳ试剂盒测定大鼠主动脉血管平滑肌细胞ＮＯ的含量及ＮＯＳ的活性。结果：高糖能显著抑制培养的平滑肌细胞ＮＯ的产生，并能明显降低ＮＯＳ的活性，具有浓度和时间效应。结论：高糖对平滑肌细胞产生ＮＯ的抑制可能是通过抑制其ＮＯＳ的活性而起作用的。     

一氧化氮对大鼠主动脉血管平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响

目的 观察一氧化氮(NO)对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响.方法 用含10%小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,随机分为对照组和不同浓度NO供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(0.5、1、2、5mmol/L)干预组,应用反转录一聚合酶链反应及Western blot技术结合光密度扫描分析,观察NO对血管平滑肌细胞的骨桥蛋白表达的影响.结果 不同浓度NO供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺均明显抑制血管平滑肌细胞的骨桥蛋白mRNA和蛋白的表达,且具有剂量依赖性促进作用.结论 NO能抑制血管平滑肌细胞骨桥蛋白的表达.     

大鼠血管平滑肌细胞分离培养的探讨

目的：培养大鼠血管平滑肌细胞。方法：手术显微镜下分离主动脉和肺动脉，再用翻转干涸法进行操作。结果：显微镜下分离组织，岢基本除净动脉纤维脂肪层和外膜，再用刀片轻刮内膜，可保证所贴组织块为地动脉中膜。传至第三代时，用台盼蓝检查细胞传代成活率９５％，光镜、电镜和免疫组化鉴定培养细胞，培养细胞纯度９６％。结论：贴块片简便易行、经济、又可以防止膜损伤，可为血管病理变化研究提供适宜的细胞。     

高血压病患者血管平滑肌细胞一氧化氮合酶活性变化和精氨酸 …

目的 探讨高血压病患者动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）一氧化氮合酶（ＮＯＳ）和一氧化氮（ＮＯ）的变化特点和精氨酸加压素（ＡＶＰ）和ＮＯ合成的影响及其在高血压发病中的意义。方法 采用复合胶原酶法分离培养１０例血压正常人动脉ＶＳＭＣｓ,检测细胞培养的ＮＯ含量和ＶＳＭＣｓ的ＮＯＳ活性,以及ＡＶＰ对其活性的影响。结果 （１）高血压病患者ＶＳＭＣｓ的ＮＯ含量和ＶＳＭＣｓ的ＮＯＳ活性,以及ＡＶＰ对其活性的影响     

一氧化氮对血管平滑肌细胞的作用

<正>一氧化氮(No)是生物体内一种结构最简单的多功能生物信号分子.它广泛分布于多种组织中,且在诸多疾病发生和人体正常功能调节中起着十分重要的作用.因此,No被称为20世纪90年代医学生物学领域最重要的“明星分子”,也是当今世界医学研究中的一个热点问题.No本身不带电荷,可以自由地通过膜性结构,又因其带有一个未配对电子(自由基),故而具有很高活性.它的半衰期仅为3分钟～5分钟,因此能被很快地     

贴块法培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞条件的优化

血管平滑肌细胞是构成血管壁组织结构及维持其功能的主要细胞成分,其结构和功能的改变是导致高血压、动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等多种心血管疾病的细胞病理学基础［1-3］。为了更好地研究这些疾病及筛选相关治疗药物,体外培养血管平滑肌细胞是必不可少的一个环节。而国内最常用的贴块法培养血管平滑肌细胞一直受其培养周期较长的制约,为了更快获得大量平滑肌细胞,为相关研究提供实验材料支持,本研究以传统贴块法为基础,从多个方面优化培养条件以达到缩短培养周期的目的。     

组织贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞的探讨

目的：探讨分离、培养大鼠主动脉平滑肌细胞（VSMC）的方法,为研究损伤性血管疾病提供有用的体外研究模型。方法：用组织贴壁、反转干涸的方法分离、培养大鼠主动脉平滑肌细胞并进行传代培养。采用形态学和抗α－SM－actin免疫组织化学鉴定证实为SVMC。结果：细胞呈VSMC特征性“峰”“谷”状生长,历次原代培养经鉴定均为高纯度的VSMC。经传代培养至20代,细胞维持原有生长性状,细胞活力未见减低。结论：组织贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞具有简便、易行、细胞损伤小、活力及纯度高的优点,是研究损伤性血管疾病良好的体外研究模型。     

高糖对大鼠平滑肌细胞表型转变的影响

目的 通过复制高糖血症大鼠模型，观察长期高糖对血管内皮细胞及平滑肌细胞的影响，研究高糖致平滑肌细胞表型转变的作用机制。方法 采用血管功能检测，组织培养及免法。结果（１）高糖组血管乙酰胆碱依赖性舒张反应较对照组明显降低（Ｐ〈０．０１）；（２）高糖组血浆一氧化氮（ＮＯ）含量、血管壁ＮＯ合酶（ＮＯＳ）活性及ｃＧＭＰ含量均明显少于对照组（Ｐ〈０．０５）。结论 长期高糖血症可引起血管内皮ＥＤＲＦ／ＮＯ系统严     

大鼠血管平滑肌细胞的培养和鉴定

目的:建立一种方便快捷的培养大量大鼠血管平滑肌细胞的方法,为心血管疾病的体外实验研究提供实验材料。方法:采用改良的组织块贴壁法进行原代培养,差异贴壁法纯化细胞,常规胰酶消化法传代,使用倒置相差显微镜进行形态学观察,通过检测平滑肌肌动蛋白对细胞进行免疫组化鉴定。结果:培养4代的平滑肌细胞纯度达96%以上。镜下可见培养细胞呈典型的"峰-谷"样生长,免疫组化染色显示胞质内平滑肌肌动蛋白阳性表达。结论:本研究所介绍的组织贴块培养法较为成熟,可为心血管疾病病因、机制的研究和防治提供一个理想的实验材料。     

一氧化氮合酶抑制剂L-NAME抗大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

许多血管性疾病的产生与一氧化氮(NO)生成不足有关,如:高血压、动脉硬化、PTCA术后再狭窄及与感染性休克相关的血管反应性降低等。NO是由细胞内的左旋精氨酸(L-arginine,L-Arg)经一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)作用而生成的。NO的合成可以被酶抑制剂NG-硝基L-精氨酸甲酯(L-NG-nitro-arginine methyl ester,L-NAME)、氨基胍(aminoguanidine)等抑制。 研究[1,2]发现,L-NAME可以升高大鼠的血压,但不伴心室肥大。因而推测L-NAME可能具有抑制细胞增殖的作用。Mabrouk等[3]在体外试验中证明,L-NAME可以抑制肠动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的     

缓激肽对血小板源性生长因子诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖中一氧化氮及其合酶基因表达的影响祆

目的 探讨缓激肽在对血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）诱导的培养的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）增殖的影响中一氧化氮（ＮＯ）含量与诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达的变化。方法 取ＳＤ大鼠胸主动脉平没肌细胞进行培养,传至４～６代,分成以下几组：１．对照组;２．ＰＤＧＦ组（５０ｎｇ／ｍｌ）;３．ＰＤＧＦ＋缓激肽（１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ组;４．ＰＤＧＦ＋缓激肽＋Ｈｏｅ１４０（１０＾－４ｍｏ     

高糖激活WNT信号通路促进血管平滑肌细胞钙化

目的探讨高糖导致血管钙化机制是否与WNT信号通路有关。方法采用体外血管钙化模型,高糖诱导血管平滑肌细胞
钙化,检测WNT信号分子和骨相关蛋白Cbfa1,Osx,OCN,BMP2的表达以及细胞钙化程度。观察WNT信号抑制剂Dkk1对高
糖诱导的血管平滑肌细胞钙化和Cbfa1,Osx,OCN,BMP2表达的影响。结果高糖能上调血管平滑肌细胞WNT信号通路分子
包括Wnt3a,Wnt7a,Fzd4,Wisp1 mRNA的表达（1.86±0.15, 1.68±0.13, 2.10±0.17, 2.30±0.20, P<0.05）,促进WNT信号通路关键
分子β-catenin的磷酸化（2.70±0.22, P<0.05）,激活WNT信号通路。使用WNT信号抑制剂Dkk1能减轻血管平滑肌细胞钙化,
下调骨相关蛋白Cbfa1,Osx,OCN,BMP2 mRNA的表达［（51±9）%,（58±11）%,（56±10）%,（62±10）%,P<0.01）］。结论WNT
信号通路参与了高糖诱导的血管平滑肌细胞钙化。
     

糖尿病大鼠血管平滑肌细胞体外培养方法的探讨

目的:对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞体外培养方法进行探讨,建立糖尿病大鼠血管平滑肌细胞模型,为糖尿病慢性血管并发症研究奠定基础。方法:建立糖尿病大鼠模型,用组织贴壁法体外培养胸主动脉血管平滑肌细胞。结果:糖尿病大鼠造模成功。用贴壁法培养糖尿病大鼠血管平滑肌细胞,3d后相差显微镜下可见细胞游出,培养7～10d左右细胞重叠生长达多层,高低起伏呈“峰—谷”状。平滑肌细胞actin免疫组织化学染色鉴定为平滑肌细胞。结论:糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖速度快,培养条件要求严格,在形态学上与正常大鼠平滑肌细胞相同。     

脂多糖对血管平滑肌细胞一化氮合酶基因表达的影响

探讨脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ,ＬＰＳ）对大鼠血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ,ＶＳＭＣ）诱导型一氧化氮合酶基因表达及一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ,ＮＯ）合成的影响。方法细胞培养,ＲＮＳ迹分布和亚硝酸盐含量。结果ＬＰＳ是ｉＮＯＳ的强效诱导物,可在转录水平上诱导ＶＳＭＣｉＮＯＳｍＲＮＡ表达,促进ＮＯ的合成,其作用强度与ＬＰＳ剂量呈正相关;刺激     

改良组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞及鉴定

目的以简捷、高效的方法获取原代和传代的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),为进一步的科学研究提供实验材料。方法采用改良的组织块贴壁法培养原代大鼠VSMC,2.5 g.L-1胰蛋白酶消化传代,并用相差显微镜、电镜、荧光显微镜及激光共聚焦显微镜对细胞进行鉴定。结果95%的组织块接种成活,相差显微镜下细胞呈典型的"峰-谷"状生长,胞体长梭形;电镜下可见粗、细肌丝沿细胞长轴平行排列;荧光显微镜及激光共聚焦显微镜检测α-肌动蛋白可见细胞胞浆内呈阳性显色,细胞核不显色。结论本方法培养VSMC简便、易操作,获得的细胞纯度和成活率较高。     

改良大鼠血管平滑肌细胞的原代培养

目的探讨提高大鼠血管平滑肌细胞原代培养效率的方法。方法采取组织块贴壁法进行原代培养,高糖DMEM培养基中加入血小板源性生长因子-B(platelet-derived growth factor-b,PDGF-B),用细胞形态学及免疫组织化学法对血管平滑肌细胞鉴定。结果原代培养,4～6天可见细胞长出,2周可以传代;传代培养,1周可以传代1次。镜下可见细胞以梭形为主,呈"峰-谷"状生长,免疫组化染色可见细胞浆内有大量染成棕黄色的肌丝。结论在采用组织块贴壁法进行培养时,加入PDGF-B培养,可获得纯度高、活性好的血管平滑肌细胞,并缩短了培养周期。     

大鼠血管平滑肌细胞的培养与鉴定

目的:改进大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的培养方法。方法:采用机械刮除、差异贴壁等手段进行组织贴块法原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SABC免疫组化染色试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果:镜下培养细胞呈典型的"谷-峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内-αactin阳性表达,锥虫蓝染色检测细胞传代成活率95%。结论:本法可获纯度高、结构和功能良好的VSMCs。     

脂多糖对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达的影响

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)诱导型一氧化氮合酶( iNOS)基因表达及一氧化氮(nitric oxide,NO)合成的影响.方法细胞培养、RNA印迹分析和亚硝酸盐含量测定.结果 LPS是iNOS的强效诱导物,可在转录水平上诱导VSMC iNOS mRNA表达,促进NO的合成,其作用强度与LPS剂量呈正相关;刺激12 h后,VSMC iNOS的表达活性最高,24 h开始下降.结论 LPS对iNOS表达的诱导作用与其浓度和作用时间有关.     

高胰岛素水平对血管平滑肌细胞NO生成的影响

培养大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）,检测高胰岛素（HI）对VSMC膜蛋白激酶C（PKC）活性的影响,并采用硝酸还原酶法和免疫印迹法检测HI加或不加PKC抑制剂－H7对脂多糖（LPS）＋γ－干扰素（γ－IFN）诱导NO生成和一氧化氮合酶（iNOS) 表达的影响。结果：HI预处理的VSMC,膜PKC活性明显高于对照（P＜0．05）,LPS＋γ－IFN诱导NO生成显著低于对照（P＜0．01）,加H7培育,NO的生成量较HI处理组明显提高,但低于对照（P＜0．01）。免疫印迹示HI处理的VSMC,iNOS表达下降,提示：高胰岛素血症可能通过激活VSMC膜PKC,部分抑制iNOS表达,减少NO产生。     

内质网应激在高糖所致血管平滑肌细胞钙化中的作用与机制

目的：探讨内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激在高糖引起的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化中的作用与机制。方法35 mmol/L D-葡萄糖(高糖)处理 VSMCs,模拟糖尿病状态,观察高糖能否引起 VSMCs 的 ER 应激和 VSMCs 表型转化(收缩型转变为成骨样细胞),观察 ER 应激的抑制剂对VSMCs 钙化的效应,采用比色法、o-cresolphthalein 法和 western blot 观察碱性磷酸酶活性、钙沉积和骨分化转录因子(Runx2)等指标。结果应用35 mmol/L D-葡萄糖分别处理 VSMCs 3 d 或7 d,可引起 VSMCs 的 ER 应激蛋白表达上调、碱性磷酸酶活性增加、钙沉积和骨分化标志蛋白增多;苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)预处理在抑制 VSMCs 的 ER 应激的同时,能阻断高糖所致 VSMCs 钙化(表现为碱性磷酸酶活性、钙沉积和骨分化标志蛋白下降)。结论高糖能激活 VSMCs 的 ER 应激,继而引起 VSMCs 凋亡和钙化,提示 ER 应激在高糖引起的VSMCs 钙化中起着重要作用。